三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征
干细胞向成骨细胞诱导分化染色及鉴别方法
干细胞向成骨细胞诱导分化染色及鉴别方法碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶之一。
1 Gomori钙钴法【染色原理】ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。
【孵育液配制】3%β-甘油磷酸钠5ml2%巴比妥钠5ml蒸馏水10ml2% CaCl2 10ml2% MgSO4 1ml【步骤】（1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。
（2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。
（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。
自来水冲洗数次。
（4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。
（5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。
【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。
2 偶氮偶联法：【孵育液配制】萘酚AS-BI磷酸盐20mgDMSO 0.5ml0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml六偶氮副品红0.5ml1mol/L NaOH调PH 9-10，混合后过滤使用。
（六偶氮副品红：副品红400mg，浓盐酸2ml，双蒸水8ml混合过滤；临用前与等体积4%亚硝酸钠混合）【步骤】（1）细胞爬片成功后，PBS冲洗后，置入4℃10%甲醛固定10min。
（2）蒸馏水冲洗。
（3）将过滤孵液直接滴加于玻片上，室温下作用45min。
（4）流水冲洗，晾干。
（5）甘油明胶封固。
【结果】成骨细胞胞质中可见红色ALP阳性颗粒。
3 碱性磷酸酶染色试剂盒法：【作用原理】细胞内碱性磷酸酶在Ph9.4-9.6条件下水解磷酸萘酚AS-MX产生萘酚，后者被重氮盐捕获，生成不溶性有色沉淀。
【作用液配制】取2号储备液10ml，加3号液200ul，再加4号粉剂10mg，振摇速溶，立即过滤到细胞爬片上。
【步骤】（1）细胞爬片滴加数滴1号液，室温固定一分钟（不可以延长），流水漂洗2分，晾干。
皮肤伤口组织he染色结果解读
皮肤伤口组织he染色结果解读
HE染色，全称为苏木精-伊红染色法，是一种常用的组织学染色技术。
在皮肤伤口组织的HE染色结果中，可以观察到以下的元素：
1. 细胞核：呈现深紫色，代表细胞核的染色质。
2. 细胞质：呈现红色或粉红色，代表细胞质和细胞外基质。
3. 胶原纤维：呈现深蓝色或紫色，特别是在苏木精染色的阶段着色明显。
4. 炎症细胞：如白细胞和巨噬细胞，可能在某些情况下呈现深紫色或蓝色。
5. 纤维细胞和成纤维细胞：呈现深紫色或蓝色，特别是在苏木精染色的阶段着色明显。
6. 新生血管：呈现红色或粉红色，代表血管内皮细胞。
通过观察这些元素，可以了解皮肤伤口愈合的情况。
例如，如果观察到大量的炎症细胞浸润，可能表明伤口存在感染或炎症反应；如果观察到大量的新生血管，可能表明伤口处于愈合过程中；如果观察到大量的纤维细胞和成纤维细胞，可能表明伤口正在进行纤维化修复。
需要注意的是，HE染色只是一种基本的病理学染色方法，对于某些特殊的病理情况或疾病类型，可能需要采用其他的染色方法和技术来进行诊断。
因此，在解读HE染色结果时，需要结合临床病史和病理学知识进行综合分析。
组织细胞特殊染色
2.醛品红法
褐脂素呈深紫色，背景呈淡黄色
用完不能保存
淀粉样物
刚果红染色法
淀粉样物质呈红色，胞核呈蓝色
真菌
高碘酸复红染色法
真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色
细菌
1.Gram碱性复红结晶紫染色
革兰阳性菌呈蓝色，阴性菌呈红色，胞核呈红色
2.Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法
抗酸杆菌呈红色，背景呈灰蓝色
2.Bielschowsky：神经纤维呈黑色，背景呈紫色
3.Von Braunmubl老年斑染色：神经纤维和扣结呈黑色，老年斑呈黑色，背景浅灰色
4.Eager退变神经纤维：退变神经纤维呈黑色，背景浅棕色
3.神经髓鞘染色
1.Weigert-Pal：髓鞘呈黑色，背景淡灰色
2.Weil：髓鞘呈蓝黑色，背景淡灰色
1.De Grandi改良硝酸银反应：嗜银细胞颗粒呈棕黑色，胞核呈红色
2.碱性重氮反应：嗜银细胞颗粒呈橘红色至红色，胞核呈蓝色，胞质呈黄色。显示小肠和类癌颗粒
嗜铬细胞染色
1.Giemsa改良染色
嗜铬细胞呈红色至紫红色，皮质细胞呈蓝色，红细胞呈粉红色
2.Wiesel染色法
嗜铬细胞呈黄绿色，胞核呈红色，其他均染成蓝色。
结缔组织染色
（1）Mallory三色染色
胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、黏液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红细胞呈橘红色
中性甲醛固定
（2）Masson三色染色
胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色，胞核呈蓝褐色
中性甲醛固定
（3）显示胶原、网状纤维和弹性纤维的三联染色法
胶原纤维呈红色、网状纤维呈黑色，弹性纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
法医学在骨骼鉴定中的技术与方法
法医学在骨骼鉴定中的技术与方法现如今，法医学在刑事侦查中扮演着重要的角色。
尤其是在骨骼残骸的鉴定方面，法医学的技术与方法越发成熟。
本文将介绍法医学在骨骼鉴定中所采用的技术与方法，以帮助读者了解骨骼鉴定的重要性以及相关的专业知识。
一、人体骨骼特征的识别与比对在骨骼鉴定中，首先需要进行的是人体骨骼特征的识别与比对。
法医学家会通过观察骨骼上的特征，如骨骼的形状、大小、颜色、质地等来判断其所属人体部位。
在这一过程中，使用显微镜、放大镜等工具有助于观察细微的特征。
同时，通过与失踪人员的骨骼特征进行比对，可以确定是否是同一人。
二、骨骼鉴定的年龄与性别推断通过骨骼的生理特征，法医学家可以推断出骨骼的年龄与性别。
年龄推断主要依据骨骼的生长和退化情况，例如骨骼的长短、骨骺的闭合情况等。
性别推断则根据骨骼的形态差异进行，如骨盆形状、头骨的大小等。
通过这些推断，可以进一步缩小失踪人员的范围，提供线索给警方。
三、骨骼鉴定的身高与体重估算身高与体重是骨骼鉴定中另一个重要的推断指标。
法医学家通过测量骨骼的长度和宽度，并结合已有的统计数据，可以大致估算出被鉴定者的身高。
而通过测量骨骼的密度与大小，也能够推断出被鉴定者的体重范围。
这些推断有助于进一步确定失踪人员的特征以及可能的身份。
四、骨骼鉴定中的病理学特征在骨骼上的病理学特征也是骨骼鉴定中的重要参考。
通过观察骨骼上是否存在疾病或创伤的痕迹，法医学家可以推断死者在生前是否有特定的疾病，以及可能的死因。
例如，骨折的特征可能与死者生前的外伤有关，骨骼的发育异常可能与遗传性疾病相关。
这些病理学特征为法医学家提供了重要的线索，有助于解开案件的谜团。
五、DNA分析在骨骼鉴定中的应用DNA分析已经成为现代骨骼鉴定中的重要技术。
通过提取骨骼上的DNA样本，并与潜在的亲属进行比对，可以确定失踪人员的身份。
这种方法尤其适用于无法通过其他特征来识别的情况，如在大规模灾难中残骸的识别等。
然而，DNA分析需要专业实验室和设备的支持，因此在骨骼鉴定中的应用还相对较少。
番红固绿染色(骨组织)染色步骤
番红固绿染色(骨组织)染色步骤下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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规培考试笔记｜特殊染色技术总结
规培考试笔记｜特殊染色技术总结【常用染色方法】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色：Masson三色染色法。
2、胶原纤维染色：Van Gieson苦味酸酸性品红染色法。
3、网状纤维染色：醋酸氨银染色法。
4、弹力纤维染色：Verhoeff铁苏木素染色法。
5、横纹肌染色：Mallory磷钨酸-苏木素（PTAH）染色法。
•神经组织染色1、尼氏小体染色：硫堇染色法。
2、神经元和神经纤维染色：Bielschowsky改良法。
3、神经髓鞘染色：Weil染色法。
4、神经胶质细胞染色：Cajal神经胶质细胞染色。
5、能同时显示髓鞘和尼氏小体的染色方法是Luxolfastblue染色法。
•各类聚集物质染色1、脂类物质染色：苏丹Ⅲ染色法。
2、黏液物质染色：过碘酸雪夫染色（PAS染色），又称糖原染色。
3、黑色素染色：氨银染色法（Masson-Fontana染色法）。
4、淀粉样物质染色：刚果红特殊染色法。
•病原菌染色1、抗酸杆菌染色：改良的Ziehl-Neelsen染色法。
2、真菌染色：Grocott六胺银染色法。
3、螺旋体染色：Warthin-Starry染色法。
【染色结果及用途】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色用苯胺蓝复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈蓝色；用亮绿色复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈绿色。
肌纤维、红细胞、神经胶质呈红色，胞核呈清晰的蓝黑色。
主要用于肝脏和肾脏穿刺病理的诊断和鉴别。
2、胶原纤维染色镜下胶原纤维呈鲜红色，肌纤维胞质、神经胶质及红细胞呈黄色。
主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别诊断。
3、网状纤维染色镜下网状纤维呈黑色。
在免疫组化开展前用于癌与肉瘤、血管内皮肿瘤与血管外皮肿瘤的鉴别诊断，目前用于观察病变组织纤维化程度。
4、弹力纤维染色镜下弹力纤维呈黑蓝色。
用于显示真皮弹力纤维增生和变性等多种皮肤疾病，观察心内膜和血管壁中弹力纤维增生程度，显示肿瘤组织中的弹力纤维等。
5、横纹肌染色横纹肌纤维呈紫蓝色，胶原纤维和网状纤维呈棕红色。
软骨染色液(番红O法)
软骨染色液(番红O法)简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。
软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。
软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。
软骨染色液(番红O法)染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。
番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。
当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。
通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，番红O分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。
组成：编号名称DB00712×100mlStorage试剂(A): Safranin O stain 100ml RT 避光试剂(B): Safranin分化液100ml RT使用说明书1份自备材料：1、10%福尔马林固定液2、脱钙液3、蒸馏水4、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、标本的处理：福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。
2、常规脱蜡至水。
3、蒸馏水洗。
4、入Safranin O stain内浸染，蒸馏水洗。
5、用Safranin分化液洗涤切片，蒸馏水洗。
6、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。
7、二甲苯透明，光学树脂封固。
染色结果：软骨基质红色注意事项：1、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。
2、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。
3、Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。
4、95%乙醇脱水时间不宜过长。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称DC0032Masson三色染色液TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
免疫组化及网染在骨髓活检病理中的应用
免疫组化及网染在骨髓活检病理中的应用骨髓活检病理诊断在血液疾病的诊治中起着极其重要的作用，而免疫组化及网染为骨髓病理诊断提供了更可靠的诊断依据。
现统计2009-2012年骨髓免疫组化及网染共46例，以便更好地探讨其诊断可靠性及实用价值。
一.方法1.1 网状纤维染色：用高锰酸钾氧化，草酸漂白，硫酸铁胺媒染，滴加胺性银染色，20%甲醛还原，入氯化金液调色，海波处理，常规无水乙醇脱水，二甲苯透明后即可观察。
1.2 免疫组化：采用EnVision二步法，试剂由中杉金桥生物技术有限公司及福州迈新生物技术开发有限公司提供。
二.结果单做网状纤维染色共33例，其中Ag染纤维组织轻度增生（+）共27例，Ag2+—3+共2例，提示骨髓纤维化，4例银染为阴性。
单做免疫组化共11例，其中慢性淋巴细胞性白血病/ 小B淋巴细胞性淋巴瘤5例，多发性骨髓瘤2例，浆细胞白血病1例，急性淋巴细胞白血病/ B-淋巴母细胞淋巴瘤2例，慢粒急淋变1例；网染与免疫组化同时标记者2例，结果为T细胞性恶性淋巴瘤合并骨髓纤维化1例，另一例为骨髓纤维化。
三.讨论网状纤维染色在骨髓活检病理诊断中必不可少。
骨髓纤维化前期造血细胞，尤其是巨核细胞增生活跃，随着纤维化逐渐加重，骨髓往往“干抽”，需做骨髓病理切片证实诊断，而网染可帮助网状纤维增生的分级。
根据骨髓纤维增生程度分为三期；1）细胞期，网染“3+”；2）胶原形成期，纤维细胞及胶原纤维呈弥漫或斑块状增生，红、粒系细胞显著减少，网状纤维增多，网染可达“3+—4+”；3）硬化期，胶原纤维广泛增生，呈束状或不规则状，造血细胞显著减少甚至消失，偶见裸核巨细核胞，网染为4+。
其它血液疾病也可继发骨髓纤维化，如白血病晚期可伴发骨髓纤维化，网染“3+—4+”。
淋巴瘤在骨髓中间质性或结节性浸润时，诊断较为困难，尤其是在石蜡包埋切片中，有时很难与反应性淋巴细胞增生相区别，需做免疫组化进一步鉴别。
一般来说，浸润性的淋巴细胞表达T细胞或B细胞抗原，淋巴细胞呈混合增生，则是良性反应性淋巴细胞增生；若浸润性的淋巴细胞只表达T细胞抗原或表达B细胞抗原，则支持单克隆性T细胞或B细胞增生，是肿瘤性的。
医学影像诊断学的复习知识点(骨关节)
1.X线的发现时间在1895年伦琴，德国物理学家2.X线的特性：.穿透性（是X 成像的基础）：X线波长短具有较高能量，物质对它吸收弱，因此具有很强的穿透本领；荧光效应（是进行透视检查的基础）：某些物质被X线照射后，能激发出可见荧光；.感光效应（是X线胶片摄影的基础）：X线和可见光一样，同样具有光化学作用，可使胶片乳剂感光能使很多物质发生光化学作用；电离效应（是进行X线检查时需要注意丰厚的的原因）：具有足够能量的X线光子能够撞击原子中的轨道电子，使之脱离原子产生一次电离。
被击脱的电子仍有足够能量去电离更多的原子。
3.X线的应用：X线透视，X线摄影，特殊检查（体层摄影，软X线摄影，高电压摄影），造影检查4.X线机的构造：X线管装置，高压发生装置，控制装置，透视用影像装置，机械辅助装置。
5.X线透视与摄片的优缺点：透视的主要优点是可转动患者体位，改变方向进行观察。
检查费用较低。
透视的主要缺点有：荧屏亮度较低，影像对比度及清晰度较差，难于观察密度与厚度差别较少的器官以及密度与厚度较大的部位。
X线摄影：与透视的优缺点正好相反，其优点是：能使人体较厚、较薄的部位清晰地显示在X线照片上；病人所受的X线辐射剂量要小于透视、低于CT检查。
X线摄影的缺点是：不能动态观察，检查费用高于透视。
6.CR与DR优缺点（CR是数字X线摄影DR是计算机X线摄影）：CR优点是可与床边机配合进行诊室床边摄影；缺点是工作效率低，增加摄影成本，对影像的分辨力及清晰度提高不多。
DR优点是成像速度快，有高的空间分辨力及密度分辨力；缺点是部分产品相对较贵。
7.摄片基本要求：骨盆正位片，一侧桡、尺骨正位片及同侧胫、腓骨正、侧位片；必要时加摄胸部和腰椎正位片。
摄片质量要求：摄片位置准确，对比度良好，直接曝光区呈黑色，软组织是灰色，层次分明，皮质和骨小梁显示清晰。
8.儿童的骨骼特点：骨骼最初以软骨的形式出现，软骨必须经过钙化才能成为坚硬的骨骼：长骨骨端有骨垢，为了生长发育，一个是红骨髓含量高，处于造血活跃期9.儿童骨折包括：靑枝骨折，肱骨髁上骨折。
骨的各种染色方法
骨的各种染色方法骨骼是人类身体中最为坚硬的组织之一，它不仅能够支撑人体，还能够保护内脏器官，同时也是血液细胞的产生和储存的地方。
为了更好地了解骨骼的结构和功能，科学家们研究出了各种各样的骨骼染色方法，这些方法不仅可以使骨骼的结构更加清晰，还可以帮助科学家们更好地研究骨骼的生理和病理变化。
一、苏木精-伊红染色法苏木精-伊红染色法是一种常用的骨骼染色方法，它可以使骨骼的结构更加清晰。
该方法的原理是利用苏木精染色骨骼的有机基质，然后用伊红染色骨骼的无机基质，使骨骼的结构更加清晰明了。
苏木精-伊红染色法能够染色骨骼的有机基质和无机基质，使得骨骼的结构更加清晰，同时也可以观察到骨骼的细胞形态和排列方式。
二、茜素红-天蓝染色法茜素红-天蓝染色法是一种常用的骨骼染色方法，它可以染色骨骼的有机基质和细胞核。
该方法的原理是利用茜素红染色骨骼的有机基质，然后用天蓝染色骨骼的细胞核，使得骨骼的有机基质和细胞核都能够染色。
茜素红-天蓝染色法能够染色骨骼的有机基质和细胞核，使得骨骼的结构更加清晰，同时也可以观察到骨骼的细胞形态和排列方式。
三、银染色法银染色法是一种常用的骨骼染色方法，它可以染色骨骼的胶原纤维和胶质细胞。
该方法的原理是利用银盐的还原作用，染色骨骼的胶原纤维和胶质细胞，使得骨骼的胶原纤维和胶质细胞都能够染色。
银染色法能够染色骨骼的胶原纤维和胶质细胞，使得骨骼的结构更加清晰，同时也可以观察到骨骼的细胞形态和排列方式。
四、伊红-光学显微镜法伊红-光学显微镜法是一种常用的骨骼染色方法，它可以染色骨骼的无机基质和有机基质。
该方法的原理是利用伊红染色骨骼的无机基质，然后用光学显微镜观察骨骼的有机基质，使得骨骼的无机基质和有机基质都能够观察到。
伊红-光学显微镜法能够染色骨骼的无机基质和有机基质，使得骨骼的结构更加清晰，同时也可以观察到骨骼的细胞形态和排列方式。
五、荧光染色法荧光染色法是一种新型的骨骼染色方法，它可以染色骨骼的蛋白质和DNA。
最新小儿骨骺损伤PPT课件-PPT文档
• 旋后内翻 I 度多由足卡入自行车辐 条所致，可表现为腓骨远端 S－H
I 或 II 型损伤诊断并不困难。也可 表现为Ogden VI 或 VII 型损伤。
• 旋后内翻 II度多由内翻暴力持续作 用，距骨撞击内踝所致。表现为胫 骨远端 S－H III 或 IV 型损伤。骺 板的生发层在此力的作用下可受到 挤压，故畸形的发生率较高。
肱骨外髁骨折 II度
术 前
术 后
肱骨外髁骨折 III度
全骺分离与肱骨外髁骨折 合并肘关节脱位的鉴别
鉴别全骺分离的意义
• 肱骨外髁骨折需切开复位,而全骺分离可 闭合复位。若发生误诊将延误治疗。
• 全骺分离肘内翻的发生率是30％－70％， 多由于复位或固定不佳而引起。陈旧外 髁骨折多为肘外翻畸形。
没有达到解剖复位预后：病历3：
A：未达到解剖复位外髁骨折
B：14年后鱼尾畸形
鱼尾畸形
全骺分离易损伤从后方进入滑车外侧的 血管，而造成滑车颈部继发性鱼尾畸形。 肱骨外髁骨折可由于骨块外移，内外髁 距离远(局限性骨不愈合)或骺软骨吸收， 滑车沟附近软骨生长障碍导致鱼尾畸形。
全骺分离与肱骨外髁骨折难鉴别病例
Salter-Harris
1963 儿童骨骺损伤
分型
Salter-Harris
VI
1994
加第VI型
1981年 Ogden 分型
9 型，16 种亚型，共 20 种分型 前 5 型 ＝ Salter-harris I－V 型 VI 型 Ranvier 区损伤 VII 型 骺骨折(胫骨棘、内外踝撕脱骨折) VIII型 干骺端生长和再塑形结构的损伤 IX 型 骨干骨折→骨膜损伤→生长塑形障
Triplane fracture
骨小梁染色方法
骨小梁染色是一种常用的组织学技术，用于观察和分析骨骼组织的结构和特征。
以下是常见的几种骨小梁染色方法：
1.基本的酸性染色方法：经典的酸性染色方法包括贝尔马红（Carmine）染色、赖氏银染
色和邦纳金（Van Gieson）染色。
这些染色方法可以突出骨小梁的形态和颜色对比。
2.钙盐染色：钙盐染色是一种特殊的染色方法，用于显示骨小梁中的钙盐沉积。
一种常用
的方法是使用茜素红（Alizarin Red）或农夫黑（Von Kossa）染色来标记骨小梁中的钙盐。
3.免疫染色：免疫染色是利用特定抗体与骨组织中的目标蛋白结合，以显示其位置和表达
水平。
例如，可以使用抗体来标记骨基质蛋白、骨特异性蛋白等，并通过免疫组化染色方法进行可视化。
4.特殊染色方法：还有一些特殊的染色方法可用于观察骨小梁中的细胞和结构。
例如，使
用TRAP（酸性磷酸酶）染色来标记破骨细胞、用塔姆氏蓝（Toluidine Blue）染色来显示骨质基质等。
这些骨小梁染色方法可以根据需要和研究目的选择使用，并与其他组织学技术结合，如显微镜观察和图像分析等，以获取更详细的骨骼组织信息。
具体的实验步骤和条件会因染色方法的不同而有所变化，建议参考相关文献或专业实验室的指导进行操作。
儿童骨骼生长及损伤特点_OK
骨膜内成骨和软骨内成骨
骨骼的生长发育分为:
骨膜内成骨 软骨内成骨
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骨膜内成骨
– 骨膜生发层内有丰富的骨祖细胞，是骨膜内成骨的基础。 – 骨祖细胞不断增殖和分化，形成成骨细胞，后者不断的合成骨基质，再
经钙盐沉积，从而形成骨组织。 – 是颅骨、躯干骨等中轴骨的主要发育方式。
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软骨内成骨
• 指在预先形成的软骨雏形的基础上，将软骨逐渐替换为骨。人体的大多数骨， 如四肢长骨、部分颅底骨等，都以这种方式发生。
• 维生素C：主要是影响中胚层起源的组织，它能影响 骨祖细胞的分裂增殖，并与成骨细胞合成胶原和 有机基质的功能直接有关。
• 维生素D：能促进小肠对钙、磷的吸收，提高血钙和 血磷水平，有利于类骨质的矿化。维生素D缺乏， 儿童易患佝偻症。成人可发生骨软化症。
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• 生长激素和甲状腺激素 • 甲状旁腺激素 • 降钙素 • 性激素 • 糖皮质激素
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增粗： 骨外膜内层骨祖细胞分化为成骨细胞，以膜内成骨的方式，在骨干表面添加骨 组织，使骨干变粗。而在骨干的内表面，破骨细胞吸收骨小梁，使骨髓腔横向扩 大。 骨干外表面的新骨形成速度略快于骨干的吸收速度，这样骨干的密质骨适当增 厚。到30岁左右，长骨不再增粗。
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骨的改建
骨改建是局部旧骨的吸收并代以新骨形成的过程。 Parfitt将其分为五期：
破骨性谱系细胞来源于生血性干细胞，成骨性 谱系细胞来源于间充质干细胞。
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骨骼生成分期
一般将骨骼形成分为三个阶段： 胚胎第四周：间充质细胞开始聚集，形成骨骼的雏形。 胚胎第六周：间充质开始软骨化，形成骨骼的软骨原基。 最后阶段：经过骨膜内成骨和软骨内成骨，使软骨转变为骨骼组织。
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观察长骨和关节的结构-解金辉讲解
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实验材料选择：新鲜的带肉的羊腿骨
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操作：将胫骨肌肉的肌腱剪断，用镊子夹住肌 腱，向肌腹方向翻转掀开。用解剖刀轻轻剥离 血管。
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血管的分支
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第三种方法：实体显微镜下观察 操作：撕取部分骨膜，至于培养皿中，实体显微镜下进行 观察。优势：弥补了肉眼观察的不足，降低了对标本薄厚 的要求。
4.如何更好地观察到关节滑液？ 在解剖开关节囊前，可先将关节活动几下， 便于观察关节滑液。
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5.血管与其他组织有何区别？ 由于动物死亡时间较长或某些因素导致部分血管 内没有血液，学生容易将血管与筋膜混淆，可将 找到的物质剪断，若中间为空心，则为血管。
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谢谢大家！
北京市初中生物学教师实验技能培训与展示活动
实验15 观察长骨、关节的基本结构
北京市第二中学分校 解金辉
一、课标中位置
1.课标要求
具体内容
第六个一级主题“动 物的运动和行为”下 的第一个二级主题 “动物的运动”。
活动建议
通过观察某种脊椎动 物的肌肉、骨骼、关 节的基本结构，说明 动物的运动依赖于一 定的结构。
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8分钟左右用镊子夹取鱼刺，用清水冲洗。 一小时后用镊子夹取鸡骨，用清水冲洗。
鱼骨
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鸡骨
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煅烧实验： 实验材料：浸泡后的鱼刺、未浸泡的鱼刺， 酒精灯
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2.观察关节的结构 （1）教学目标 知识目标：描述出关节的结构 能力目标：使用解剖工具，进行关节的解剖 情感态度价值观：认同结构与功能相适应的生 物学原理。 （2）实验材料及用具：放大镜，解剖刀，镊子， 骨锯。牛或羊的膝（髋）关节。 （3）实验过程：
骨髓细胞化学染色
酸性磷酸酶(ACP)染色
在酸性条件下(pH值4.9)，磷酸 酶将作用液中的基质(甘油磷酸钠) 水解，产生磷酸，进而与铅作用生 成磷酸铅沉淀于细胞酶活性存在处， 然后与硫化铵作用，生成黑色硫化 铅沉淀。
[原理]
[临床意义]
1.网状细胞、吞噬细胞、组织细胞、粒 细胞和单核细胞此酶呈阳性反应。 2.毛细胞白血病时，毛细胞呈阳性反应， 且不为L-酒石酸所抑制。 3.戈谢细胞ACP染色阳性，而尼曼-匹克 细胞呈阴性。
中性粒细胞碱性磷酸酶 (NAP)染色(钙-钴法）
[原理] 当细胞内的NAP活性存在时，在pH 为9.2～9.5的碱性条件下，它可将作用 液中的基质β-甘油磷酸钠水解，释出磷 酸，进而与作用液中的钙离子结合，成 为磷酸钙沉淀，再经过硝酸钴和硫化胺 的作用，生成不溶性硫化钴，呈黑色沉 淀定位于胞浆。
2.急性白血病类型的鉴别：急性 粒细胞白血病时，原始粒细胞和 早幼粒细胞的SE活性显著增强； 急性单核细胞白血病、急性淋巴 细胞白血病、急性巨核细胞白血 病时，其原始、幼稚细胞均呈阴 性反应。
非特异性酯酶(NSE)染色 [原理]
α-醋酸萘酚酯酶存在于单核细 胞粒细胞及淋巴细胞中，故称为非 特异性酯酶。NSE水解基质液中 α-醋酸萘酯而产生α-萘酚，后者 与重氮盐偶联生成不溶性有色沉淀 定位于胞质中。
[注意事项]
1.标本宜新鲜，若不能及时测定可先用 固定液处理后，可保存数天。 2.基质液配制后要及时应用，以免失效 或降低阳性强度。 3.基质液为一次性使用，配制后不能反 复应用。
[临床意义]
1.各种急、慢性粒细胞性白血病，其NAP积分 可降低甚至为零。 2.各种炎症（细菌性），手术后，灼伤等NAP 积分均可升高。 3. NAP活性对下列疾病有鉴别诊断价值： 1）.慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别 2 ）.慢性粒细胞白血病与其他骨髓增生性疾病 的鉴别
两种染色法判定左前臂骨缺损修复骨组织的成熟度
两种染色法判定左前臂骨缺损修复骨组织的成熟度陶云霞;王根林;袁鹏;施琴;杨惠林【摘要】10.3969/j.issn.2095-4344.2012.37.001% 背景：苏木精-伊红染色和Masson染色是常用的两种评价骨组织修复程度的方法,但上述两种方法能否有效地评价骨缺损修复过程中骨组织成熟度,目前尚缺乏相关研究.目的：比较Masson染色和苏木精-伊红染色两种方法判定骨组织成熟度的敏感性.方法：构建新西兰白兔15 mm桡骨缺损的动物模型,植入丝素蛋白/羟基磷灰石/骨髓基质干细胞的组织工程化骨,分别于术后第4,8,12周随机选取6只动物摄X射线平片,随后处死取材,进行大体标本观察、Masson染色及苏木精-伊红染色组织学观察.结果与结论：X射线片与大体标本可见兔桡骨缺损逐渐修复,新生骨走向成熟骨.术后4周,苏木精-伊红染色在材料与骨的结合部及中间的材料上均形成大量新生软骨,有类骨样组织形成及有少量编织骨出现；Masson 染色主要表现为绿色,可见到少许红染.术后8周,苏木精-伊红染色出现更多的新生骨组织,并更趋于成熟,出现了成熟的骨细胞及大量编织骨,有血管形成；Masson染色主要表现为红-绿相间.12周时,苏木精-伊红染色新生骨逐渐改建,形成髓腔,有大量板层骨相互融合成片；Masson染色主要表现为红色.说明Masson染色结合苏木精-伊红染色能较好判定新生骨走向成熟骨的过程,但在判定骨质成熟度时Masson染色较苏木精-伊红染色更直观.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(000)037【总页数】6页(P6841-6846)【关键词】苏木精-伊红染色;Masson染色;骨缺损;骨髓基质干细胞;丝素蛋白;羟基磷灰石;骨组织;成熟度【作者】陶云霞;王根林;袁鹏;施琴;杨惠林【作者单位】苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市215006;苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市215006;苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市215006;苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市215006;苏州大学附属第一医院骨科,江苏省苏州市215006【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言骨组织工程能模拟自体骨移植的骨形成过程，是修复骨缺损的理想方法[1-5]。
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三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征潘源城;张信照;陈顺有【摘要】背景:国内外的研究表明,多种染色法联合应用有利于探究骨与软骨组织疾病的形态学表现.目前对于多种染色法探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现研究较少.目的:通过苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色3种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态表现.方法:SD大鼠40只由福建中医药大学实验动物中心提供,实验方案经福建中医药大学动物实验伦理委员会批准.随机将40只SD大鼠分为2组:对照组不做处理;模型组建立胫骨近端骨骺损伤模型.分别于造模后1,7,28 d拍摄X射线片和7,28 d行MRI扫描;于造模后1,7,14,28 d麻醉大鼠后取胫骨损伤区组织,行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色,观察术后不同时间点生长板损伤区的组织形态表现.结果与结论:①X射线片显示:造模后1 d,胫骨干骺端骨骺损伤,软骨膜周围生长板间隙增宽;第7天,骨骺损伤处骨膜反应明显;第28天,骨膜反应消失,干骺端与生长板间隙关系基本恢复正常;MRI显示:造模后第28天MRI T2WI示骺板模糊,并可见一黑色线条形低信号影,提示骨桥形成;②造模后第1天,3种染色均可显示入侵的血管,Masson染色更为清晰;第7天:苏木精-伊红染色较番红固绿染色及Masson染色显示了损伤区软骨细胞的形态变化更加明显;第14天,番红O-固绿染色生长板与骨桥对比鲜明,Masson染色可观察到骨桥内尚未骨化的纤维血管组织;第28天,苏木精-伊红染色软骨细胞的周期性形态变化较明显,番红O-固绿染色骨桥和生长板形态分明,可清晰的表现损伤区生长板的压缩性改变;③结果说明,3种染色方法的联合应用能够全面、客观地探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)023【总页数】5页(P3649-3653)【关键词】染色方法;骨骺损伤;骨桥;骨膜;组织学;苏木精-伊红染色;翻红O-固绿染色;Masson染色【作者】潘源城;张信照;陈顺有【作者单位】厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007;厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007;厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007【正文语种】中文【中图分类】R446;R3180 引言 Introduction生长板是长骨内最薄弱的区域，也是最容易受损的区域，损伤的生长板常被骨组织修复而导致肢体的骨生长障碍和成角畸形[1-2]。
临床上常用Salter-Harris分型来推测和判断骨骺损伤的严重程度和预后，Salter-HarrisⅠ、Ⅱ型的骨骺损伤通常预后良好，而Ⅲ、Ⅳ骨骺损伤则容易造成生长板早闭、骨生长障碍[3]。
Basener等[4]对于儿童不同Salter-Harris分型的骨骺损伤进行了Meta分析，研究显示Salter-HarrisⅣ型骨骺损伤后更容易造成生长板早闭。
由于Salter-HarrisⅣ型的骨骺损伤累及了干骺端、生长板及骨骺，导致了垮生长板区域的骨桥形成，对生长板形成了纵向机械应力，抑制了骨的纵向生长。
关于骨桥形成的原因，相关的研究表明骨桥的发生与生长板损伤区的直接(膜内化骨)和间接的(软骨内化骨)骨形成机制有关，而新生血管的侵袭则是骨桥形成的先决条件[5-6]。
为了进一步探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现，实验通过建立SD大鼠胫骨近端骨骺损伤模型，以3种染色方法来观察胫骨近端骨骺损伤后不同时间点生长板损伤区形态学表现。
1 材料和方法 Materials and methods1.1 设计形态学实验观察。
1.2 时间及地点实验于2018年7至12月在福建中医药大学完成。
1.3 材料1.3.1 实验动物清洁级雄性4周龄SD大鼠40只，体质量(120±5)g，由福建中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK(闽)2014-0005。
1.3.2 实验材料及试剂克氏针(直径1.0 mm，上海强生医疗器材有限公司)、X光机(西门子医疗系统有限公司)、7.0T小动物磁共振仪(Pharmascan，micro MRI，Bruker，Germany)、苏木精(G1080，北京索莱宝科技有限公司)、伊红(G1100，北京索莱宝科技有限公司)、番红O-固绿染色液(DB0082，北京雷根生物技术有限公司)、Masson三色法染色液(G1340，北京索莱宝科技有限公司)。
1.4 实验方法1.4.1 大鼠胫骨近端骨骺损伤模型建立 4周龄SD大鼠40只，随机分成模型组(n=20)和对照组(n=20)，对照组不做处理，模型组采用异氟烷吸入麻醉，取右侧胫骨，常规碘伏消毒手术区皮肤，沿胫骨前内侧取5 mm竖直皮肤切口，切开皮下肌肉组织，注意避免损伤膝内侧副韧带，暴露胫骨近端，用直径1.0 mm克氏针插入生长板，造成骨骺损伤[7-8]。
分别于术后1，7，14，28 d从2组大鼠各随机选取5只麻醉取材，以40 g/L多聚甲醛固定48 h后于10% EDTA(pH 7.2)中脱钙，每48 h更换1次脱钙液，脱钙完全后常规脱水，石蜡包埋。
1.4.2 损伤后生长板修复的影像学观察大鼠损伤侧胫骨在造模后第1，7，28天拍摄X射线片，造模后第7，28天行MRI扫描，观察损伤后生长板的修复情况。
1.4.3 组织学染色(1)苏木精-伊红染色：取大鼠胫骨损伤区的组织，行4 μm厚度切片，60 ℃烤1 h；脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15 min；体积分数100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5 min；超纯水Ⅰ、Ⅱ各5 min；苏木精1 min，稍水洗；流水反蓝5 min伊红30 s，稍水洗；晾干，中性树脂封固。
(2)番红O-固绿染色：取大鼠胫骨损伤区的组织，行4 μm厚度切片，60 ℃烤1 h；脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15 min；体积分数100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5 min；超纯水Ⅰ、Ⅱ各5 min；A液(A1∶A2=1∶1)4 min；酸性乙醇15 s，蒸馏水洗1 min；固绿90 s，蒸馏水洗1 min；番红2 min，蒸馏水洗1 min；乙酸1 min，蒸馏水洗1 min；晾干，中性树脂封固。
(3)Masson三色法染色：取大鼠胫骨损伤区的组织，行4 μm厚度切片，60 ℃烤1 h；脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各15 min；体积分数100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5 min；超纯水Ⅰ、Ⅱ各5 min；铁苏木素(A1∶A2=1∶1)7 min，稍水洗；酸性乙醇15 s，稍水洗；Masson蓝化液3 min；蒸馏水洗1 min；丽春红品红染色液5 min；弱酸工作液洗1 min(超纯水∶弱酸=2：1)；磷钼酸溶液洗2 min；弱酸工作液洗1 min；苯胺蓝染色液90 s；弱酸工作液洗1 min；晾干，中性树脂封固。
1.5 主要观察指标①损伤后生长板修复的影像学表现；②损伤后生长板修复的形态学表现。
2 结果 Results2.1 实验动物数量分析实验选用SD大鼠40只，分为2组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 损伤后生长板修复的影像学表现见图1。
2.2.1 X射线造模后1天，X射线片示胫骨干骺端骨骺损伤，软骨膜周围生长板间隙增宽；造模后第7天，X射线片示骨骺损伤处骨膜反应明显；术后第28天，X射线片示骨膜反应消失，干骺端与生长板间隙关系基本恢复正常。
2.2.2 MRI 造模后第7天MRI，T2WI示生长板稍高信号影，生长板内侧间隙增宽；造模后第28天MRI，T2WI示骺板模糊，并可见一黑色线条形低信号影，提示骨桥形成。
2.3 损伤后生长板修复的形态学表现造模后第1天：生长板损伤区两侧血管侵入吻合，可见大量炎性细胞及红细胞增生，见图2。
3种染色均可显示入侵的血管，但Masson染色更为清晰的显示了入侵的血管形态。
造模后第7天：纤维血管桥形成，损伤侧生长板增宽并向下延伸侵入干骺端，损伤区新生的生长板软骨细胞排列紊乱，见图3。
苏木精-伊红染色较番红固绿染色及Masson染色而言，更为明显的显示了损伤区软骨细胞的形态变化。
造模后第14天：损伤侧生长板持续性增宽，生长板损伤区骨质浸润明显，骨桥形成，见图4。
番红O-固绿染色下生长板与骨桥对比鲜明，而通过Masson染色则可观察到骨桥内尚未骨化的纤维血管组织。
造模后第28天：骨桥重塑，损伤区主要由新生骨构成，骨髓和骨小梁形成良好，见图5。
苏木精-伊红染色对软骨细胞的周期性形态变化显示较为明显，番红O-固绿染色使骨桥和生长板形态分明，清晰的表现了损伤区生长板的压缩性改变。
3 讨论 Discussion生长板又称骺板，位于长骨的干骺端与骨骺之间，它通过严格调控生长板软骨细胞的增殖、成熟和细胞外基质的分泌，负责长骨的纵向生长[9-10]。
生长板是长骨内最脆弱的部位，也是最容易受损伤的部位，且生长板软骨再生能力有限，损伤后易导致肢体的生长障碍。
研究表明，大鼠胫骨近端骨骺损伤后生长板的修复机制与骨折愈合过程的骨形成机制相似，均经历了4个损伤反应阶段，分别是发生在第1-3天，第3-7天，第7-14天，第10-25天的炎症反应、纤维化反应、成骨反应、骨桥成熟重构反应[1，11]。
这种骨折愈合机制是相当复杂的，涉及到一种结缔组织到另一种结缔组织的顺序变化[12]，软骨形成于骨折间隙，骨折间隙钙化，未成熟骨取代，然后被重塑成成熟的骨骼。
以克氏针钻孔损伤生长板建立骨骺损伤模型，虽然仅类似于Salter-Harris Ⅳ型骨骺损伤，无法真正模拟外伤性骨骺损伤，但能够通过组织学染色方法，良好的呈现骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现。
图1 大鼠胫骨骨骺损伤后生长板修复的影像学表现(箭头指损伤区) Figure 1 Imaging manifestations of growth plate repair after tibial epiphyseal injury in rats (arrows indicate injury site) 图注：图A-C为造模后第1，7，28天X射线片；D，E为造模后第7，28天MRI。
X射线片显示：造模后第1天，胫骨干骺端骨骺损伤，软骨膜周围生长板间隙增宽；第7天，骨骺损伤处骨膜反应明显；第28天，骨膜反应消失，干骺端与生长板间隙关系基本恢复正常；MRI显示：造模后第28天T2WI示骺板模糊，并可见一黑色线条形低信号影，提示骨桥形成。
图2 大鼠造模后第1天损伤区组织3种染色结果(×100) Figure 2 Histological results in the damage area in rats by three staining methods at 1 day after modeling (×100) 图注：3种染色均可显示入侵的血管，Masson染色更为清晰。