--第二十章 生物制品分析2
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pSV-hyg质粒转入NS0宿主细胞构建而成
2.细胞库 （1）细胞库建立、传代及保存 （2）主细胞库及工作细胞库的检定
1）支原体检查 2）抗体表达量测定
3.原液 （1）细胞的复苏与扩增 （2）生产用细胞培养液 （3）细胞培养 （4）分离纯化
三、检定
1.原液检定 （1）鉴别实验：等电点（等电聚焦电泳法）、 肽图（ 胰
生物制品检查内容
（一）物理性状的检查
• 外观 • 真空度及溶解速率 • 装量
（二）蛋白质含量测定
• 凯氏定氮法（钨酸沉淀法） （三氯醋酸沉淀法）
• 酚试剂法（Lowry法） • 双缩脲法（紫外-可见分光光度法）
（三）防腐剂和灭活剂含量测定
• 苯酚、甲醛、三氯甲烷、汞制剂等
（四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定 （六）其他
蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法）、N端氨基酸序 列（氨基酸序列分析仪或质谱法） （2）pH
（3）纯度和杂质 1）分子排阻色谱法 2）弱阳离子色谱法 3）毛细管凝胶电泳法：CE-SDS还原电泳和CE-SDS非 还原电泳 4）蛋白质A残留量（酶联免疫法）
生物制品的质量要求
安全性
有效性
可接 受性
鉴别试验
• 免疫双扩散法 • 免疫电泳法 • 免疫印迹法 • 免疫斑点法 • 酶联免疫法
免疫双扩散法
• 系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的 两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应， 浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间 形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行 检查。
免疫印迹法
• 系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特 异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异 性进行检查。
• 重组人促红素注射液（CHO细胞）、注射用重组人干扰 素1b
• 免疫斑点法：注射用重组人干扰素2a等 • 酶联免疫法：抗毒素和抗血清制品 。如冻干乙型脑炎灭
活疫苗（Vero细胞）、人用狂犬疫苗（Vero细胞）和重 组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）等。
重组DNA蛋白制品
• 系采用遗传修饰，将所需制品的编码DNA通过一种质粒 或病毒载体，引入适宜的微生物或细胞系，DNA经过表 达和翻译后成为蛋白质，再经提取和纯化而回收所需制 品而得。
• 细胞因子类：IFN-1b、EPO • 生长因子类：重组人表皮生长因子 • 激素类：重组人生长激素 • 酶类：重组链激酶 • 疫苗类：重组乙型肝炎疫苗 • 单克隆抗体类：尼妥珠单抗 • 生物类似药：符合审评要求的重组蛋白质制品 • 诊断制品：体外诊断、体内诊断
尼妥珠单抗注射液
• 本品系由含有高效表达抗人表皮生长因子受体单克隆抗体 基因的小鼠骨髓瘤（NS0）细胞，经细胞培养、分离和高 度纯化后获得的重组人表皮生长因子受体单克隆抗体制成。
一、基本要求
• 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等 应符合“凡例”的有关要求
二、制造
1. 工程细胞 • 系由编码尼妥珠单抗重链的pSV2-gpt质粒和编码轻链的
（七）安全检查
检查对象
• 菌毒种和主 要原材料
• 半成品 • 成品
检查内容
• 过敏物质的检查 • 杀菌、灭活和脱毒检查 • 残余毒力和毒性物质的检查 • 外源性污染的检查
（八）生物制品的效力测定
免疫力试验 • 定量免疫定量攻击法 • 变量免疫定量攻击法 • 定量免疫变量攻击法 • 被动保护力测定
药物分析
第二十章 生物制品分析
主要内容
1
生物制品的分类
Baidu Nhomakorabea
2
生物制品的质量要求
3
鉴别试验
4
生物制品检查内容
5
生物制品质量控制实例
学习要求
掌握
分类、质量特点和要求
熟悉
鉴别方法、质量检查主要内容
了解
质量控制的主要手段
生物制品（Biological products）
• 定义：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为 起始原材料，用生物学技术制成，用于预防、治疗和诊 断人类疾病的制剂，如疫苗、血液制品、生物技术药物、 微生态制剂、免疫调节剂、诊断制品等。 – ChP2015三部凡例
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
抗毒素及抗血清类药物
• 凡用细菌类毒素或毒素免疫马 或其他大动物所取得的免疫血 清叫抗毒素（或抗毒血清）。
• 凡用细菌或病毒本身免疫马或 其他大动物所取得的免疫血清 叫抗菌或抗病毒血清。
血液制品
• 指源自人类血液或血浆的治疗产品。是由健康人的血液 或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技 术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。
• 伤寒Vi多糖疫苗、狂犬病人免疫球蛋白和人血白蛋白
免疫电泳法
• 系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应 的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见 的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀 弧的位置和性状进行比较，即可分析供试品中的成分及 其性质。
• 人血白蛋白、冻干人免疫球蛋白
1. 原料血浆 2. 原液 （1）双缩脲法测定蛋白质含量 （2）电泳法测定蛋白质纯度 （3）pH （4）残余乙醇含量
3. 半成品检定 （1）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （2）热原检查：家兔
4. 成品检定 （1）鉴别试验：免疫双扩散、免疫电泳 （2）热稳定试验：（57±0.5)℃ （3）化学检定：pH、蛋白质含量 （4）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （5）异常毒性检查：ChP2015三部通则1141 （6）热原检查： ChP2015三部通则1142
活菌数和活病毒 滴度测定
血清学试验
（九）杂质检查
宿主细胞（菌)蛋 白残留量的检查
外源DNA残留 量的检查
残余抗生素的 检查
产品相关杂质 的检查
生物制品质量控制实例
• ChP人血白蛋白质量控制规程 • ChP尼妥珠单抗注射液质量控制规程
人血白蛋白
• 人血白蛋白由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经 批准的其他分离法分离纯化，并经60℃ 10小时加温灭活 病毒后制成。
生物制品的分类
• 预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗 • 治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子、DNA
重组制品、单克隆抗体 • 诊断类：体内诊断、体外诊断
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
疫苗类药物
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
2.细胞库 （1）细胞库建立、传代及保存 （2）主细胞库及工作细胞库的检定
1）支原体检查 2）抗体表达量测定
3.原液 （1）细胞的复苏与扩增 （2）生产用细胞培养液 （3）细胞培养 （4）分离纯化
三、检定
1.原液检定 （1）鉴别实验：等电点（等电聚焦电泳法）、 肽图（ 胰
生物制品检查内容
（一）物理性状的检查
• 外观 • 真空度及溶解速率 • 装量
（二）蛋白质含量测定
• 凯氏定氮法（钨酸沉淀法） （三氯醋酸沉淀法）
• 酚试剂法（Lowry法） • 双缩脲法（紫外-可见分光光度法）
（三）防腐剂和灭活剂含量测定
• 苯酚、甲醛、三氯甲烷、汞制剂等
（四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定 （六）其他
蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法）、N端氨基酸序 列（氨基酸序列分析仪或质谱法） （2）pH
（3）纯度和杂质 1）分子排阻色谱法 2）弱阳离子色谱法 3）毛细管凝胶电泳法：CE-SDS还原电泳和CE-SDS非 还原电泳 4）蛋白质A残留量（酶联免疫法）
生物制品的质量要求
安全性
有效性
可接 受性
鉴别试验
• 免疫双扩散法 • 免疫电泳法 • 免疫印迹法 • 免疫斑点法 • 酶联免疫法
免疫双扩散法
• 系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的 两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应， 浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间 形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行 检查。
免疫印迹法
• 系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特 异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异 性进行检查。
• 重组人促红素注射液（CHO细胞）、注射用重组人干扰 素1b
• 免疫斑点法：注射用重组人干扰素2a等 • 酶联免疫法：抗毒素和抗血清制品 。如冻干乙型脑炎灭
活疫苗（Vero细胞）、人用狂犬疫苗（Vero细胞）和重 组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）等。
重组DNA蛋白制品
• 系采用遗传修饰，将所需制品的编码DNA通过一种质粒 或病毒载体，引入适宜的微生物或细胞系，DNA经过表 达和翻译后成为蛋白质，再经提取和纯化而回收所需制 品而得。
• 细胞因子类：IFN-1b、EPO • 生长因子类：重组人表皮生长因子 • 激素类：重组人生长激素 • 酶类：重组链激酶 • 疫苗类：重组乙型肝炎疫苗 • 单克隆抗体类：尼妥珠单抗 • 生物类似药：符合审评要求的重组蛋白质制品 • 诊断制品：体外诊断、体内诊断
尼妥珠单抗注射液
• 本品系由含有高效表达抗人表皮生长因子受体单克隆抗体 基因的小鼠骨髓瘤（NS0）细胞，经细胞培养、分离和高 度纯化后获得的重组人表皮生长因子受体单克隆抗体制成。
一、基本要求
• 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等 应符合“凡例”的有关要求
二、制造
1. 工程细胞 • 系由编码尼妥珠单抗重链的pSV2-gpt质粒和编码轻链的
（七）安全检查
检查对象
• 菌毒种和主 要原材料
• 半成品 • 成品
检查内容
• 过敏物质的检查 • 杀菌、灭活和脱毒检查 • 残余毒力和毒性物质的检查 • 外源性污染的检查
（八）生物制品的效力测定
免疫力试验 • 定量免疫定量攻击法 • 变量免疫定量攻击法 • 定量免疫变量攻击法 • 被动保护力测定
药物分析
第二十章 生物制品分析
主要内容
1
生物制品的分类
Baidu Nhomakorabea
2
生物制品的质量要求
3
鉴别试验
4
生物制品检查内容
5
生物制品质量控制实例
学习要求
掌握
分类、质量特点和要求
熟悉
鉴别方法、质量检查主要内容
了解
质量控制的主要手段
生物制品（Biological products）
• 定义：是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为 起始原材料，用生物学技术制成，用于预防、治疗和诊 断人类疾病的制剂，如疫苗、血液制品、生物技术药物、 微生态制剂、免疫调节剂、诊断制品等。 – ChP2015三部凡例
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
抗毒素及抗血清类药物
• 凡用细菌类毒素或毒素免疫马 或其他大动物所取得的免疫血 清叫抗毒素（或抗毒血清）。
• 凡用细菌或病毒本身免疫马或 其他大动物所取得的免疫血清 叫抗菌或抗病毒血清。
血液制品
• 指源自人类血液或血浆的治疗产品。是由健康人的血液 或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技 术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。
• 伤寒Vi多糖疫苗、狂犬病人免疫球蛋白和人血白蛋白
免疫电泳法
• 系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应 的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见 的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀 弧的位置和性状进行比较，即可分析供试品中的成分及 其性质。
• 人血白蛋白、冻干人免疫球蛋白
1. 原料血浆 2. 原液 （1）双缩脲法测定蛋白质含量 （2）电泳法测定蛋白质纯度 （3）pH （4）残余乙醇含量
3. 半成品检定 （1）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （2）热原检查：家兔
4. 成品检定 （1）鉴别试验：免疫双扩散、免疫电泳 （2）热稳定试验：（57±0.5)℃ （3）化学检定：pH、蛋白质含量 （4）无菌检查：ChP2015三部通则1101 （5）异常毒性检查：ChP2015三部通则1141 （6）热原检查： ChP2015三部通则1142
活菌数和活病毒 滴度测定
血清学试验
（九）杂质检查
宿主细胞（菌)蛋 白残留量的检查
外源DNA残留 量的检查
残余抗生素的 检查
产品相关杂质 的检查
生物制品质量控制实例
• ChP人血白蛋白质量控制规程 • ChP尼妥珠单抗注射液质量控制规程
人血白蛋白
• 人血白蛋白由健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经 批准的其他分离法分离纯化，并经60℃ 10小时加温灭活 病毒后制成。
生物制品的分类
• 预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗 • 治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子、DNA
重组制品、单克隆抗体 • 诊断类：体内诊断、体外诊断
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
疫苗类药物
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗
细菌类疫苗 病毒类疫苗 联合疫苗 多价疫苗