细菌鉴定流程 PPT课件

受试菌
抑菌长度
1
（cm）
2
1.80
3.70（？）
3.78
2.70
——Hale Waihona Puke Baidu
2.10
2.90
2.60
大 肠 杆 菌
葡 萄 球 菌
芽 孢 杆 菌
受 试 菌
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
1.试剂条接种和培养
a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株） b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度） c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌） 中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用 同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG 试剂管（120µL/管）。 d)将剩余的200µL生理盐水菌悬液加至APIAUX 培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管 （250µL/管）。 e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖 f)将API 20E STRIP放入盒中，盖上盒盖，在 30℃培养24h。
建议新的模式菌株： CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665.
结果与分析
分析
比较项目 菌形态 革兰氏染色 葡萄糖分解 运动性 菌落特征 有无鞭毛
藤黄微球菌 球状
阳性
不分解 不运动 金黄色
无
受试菌
球状
阳性 不产酸不产气 不运动 金黄色
无
由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据 16sRNA的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征， 发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。
2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和 乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂 开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发 酵均不产酸不产气
形态及理化特征
理化特征
氨苄青霉素抗性实验
1、步骤 氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始 位置的距离
2、结果 受试菌对青霉素敏感
平板编号
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
环境微生物的检测
——受试菌初步鉴定报告
Group members:
CONTENTS
分离环境 形态及理化特征
16sRNA基因PCR结果及 网上比对结果 结论与讨论
参考文献
分离环境
时间
分离基物
采集地
2015年
手指表面
生科院2019室
受试菌的采集步骤： 在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。
2.试剂条的结果观察
a)培养后，将一滴NIT 1和NIT 2试剂进入到NO3 中，5min后，红色表示阳性反应；阴性反应的， 为排除N2的影响，加入锌粉5min，无色表示阳 性反应。 b)将JAMES试剂加入TRP，立即显现粉红色为阳 性反应 c)其他见实验结果判定表
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
形态及理化特征
形态特征：菌落特征
菌落形态
在培养基上呈黄色菌 落。菌落圆形，凸起， 光滑且有光泽，边缘
整齐。
形态及理化特征
形态特征
显微特征 圆球状，无鞭毛且不可运动
鞭毛染色
1、步骤 制片：滴菌液→倾斜玻片→室温干燥 染色：A液3-5min→水洗→B液冲残水，覆盖染色 →出现明显褐色时轻轻水洗→晾干
通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括 乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧 化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是 可变的，不能氧化卫矛醇。
结果与分析
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
网上比对结果
最相似菌种名Micrococcus luteus 最高相似度99.00%
结果与分析
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcus luteus 最高相似度99.00% 从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为： 球菌，直径为1.0-2.0微生，细胞单生，对生和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规 则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌 落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种 能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘 液状的沉淀。
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有 丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基 酸更复杂的培养基。
专性好氧，最适生长温度约为35℃。大多数菌株可在10℃生长，有些在45℃生长。能在5%NaCl 生长，但不常在10%或15% NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。 对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。
Group 2
THANKS
14生基一班 第二小组
2、结果 受试菌无鞭毛不可运动
形态及理化特征
形态特征
革兰氏染色
G+（金黄色葡萄球菌）
受试菌
G-（大肠杆菌）
1、步骤 制片：载玻片：火烧去脂→水滴： 小→菌：少(薄而均匀) 染色：滴加结晶紫染液初染 2min→水洗→冲残水后滴加卢戈 氏碘液媒染1min→水洗→吸残水 后滴加95%乙醇脱色约30s→滴 加沙黄染液复染1-2min→水洗→ 吸干水，镜检
参考文献
•NCBI Blast •百度百科 •Wikipedia •中国科技资源共享网 •伯杰氏系统细菌学手册 •沈萍 陈向东主编《微生物学实验（第4版）》 •Peter Ka¨ mpfer, Holger C. Scholz, Birgit Huber, Enevold Falsen and Hans-Ju¨ rgen Busse. Ochrobactrum haematophilum sp. nov. and Ochrobactrum pseudogrignonense sp. nov., isolated from human clinical specimens. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2007), 57, 2513–2518
乳
萄 糖
糖
受试菌 大肠杆菌 变形杆菌
变形杆菌 大肠杆菌
受试菌
糖发酵实验
1、步骤 葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂 溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴 甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡
API
20NE β- 半 乳糖
苷酶 活
阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阳性 阴性
API 20NE 可以同化的碳源 葡萄糖，麦芽糖， 苯乙酸
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
“0050202”
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
16sRNA 基因PCR结果
GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGC GCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGAC TGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAA GTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGG GGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAAC TGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTG GGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACG GTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGAC TGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTC TCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGA AGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG
（24h，30℃）
（48h，30℃）
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
结果
API20 NE 硝
酸盐 还原
API 20NE 产生 吲哚
API 20NE 酸化 葡萄 糖
API 20NE 精氨 酸双 水介 酶活
API 20NE 脲酶 活
API
20NE β- 葡 萄糖
甙酶 活
API 20NE 明胶 蛋白 酶活
2、结果 受试菌为革兰氏染色阳性菌
形态及理化特征
理化特征
大肠杆菌
TITLE TITEXT
淀粉水解实验
受试菌 枯草芽孢杆菌
1、步骤： 固体淀粉培养基→划线接种→37℃培 养24h→滴加碘液（均匀铺满平板） →观察
2、结果： 受试菌周围未出现无色透明圈 说明不能分泌胞外淀粉酶
形态及理化特征
理化特征
葡