细菌鉴定流程 PPT课件
合集下载
细菌学检验ppt课件
2、标本的直接检查： ★ 直接显微镜检查：
革兰阴性小杆菌或多形态杆菌，结合临床 症状，可做出初步诊断。
★ 抗原检测
荚膜肿胀试验等
★ 核酸检测
3、分离培养与鉴定 （1) 分离培养
★ ★ ★ ★ 营养要求：高，生长中需要X、V因子。 气体环境：生长时需要5%～10%的CO2环境。 温度：35℃ 培养基：兔血或马血最好
方法：密集划线接种待测菌，再点种金葡菌，培养后观察。
流感嗜血杆菌
流感嗜血杆菌（兔血+X、V因子）
流感粘液型菌落
大菌落为奈瑟菌
小菌落为嗜血杆菌
咽拭子培养（未加万古霉素）
咽拭子培养（加万古霉素）
标本接种后点种金葡菌
卫星现象
琼脂卫星试验（脑心琼脂）
X、V因子需求试验→又称纸片法卫星试验
① 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或0.5麦 氏单位菌悬液涂抹接种。 ②将X、V、X+V因子三种纸片贴在接种细菌的平板上 纸片间相距5cm以上，（因为V因子分子量小，扩散 距离远），否则会出现X因子假阳性结果。 ③培养后观察结果 ④ （X+V）因子结果阴性的几种可能原因
一、分类
根据伯杰细菌分类手册，嗜血杆菌属隶属于 巴斯德菌科。本菌属共包括17个菌种，其中与临 床有关的有9种，分别是流感嗜血杆菌、副流感 嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜 克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、 副嗜沫嗜血杆菌和迟缓嗜血杆菌。后三者现划归 “凝聚杆菌属”。
二、临床意义
1、致病因子：细菌结构成分、毒素和酶类。
2、在假单胞菌属细菌引起的临床感染中占70%。 3、可引起机体各个系统的感染。 4、眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜 穿孔而失明。
微生物细菌鉴定试验汇总ppt课件
精品ppt
19
硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜 面上，35℃培养18~24小时，然后依次 加入含α-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂 各1mL，30s后观察结果。
精品ppt
20
应用：
有助于鉴别肠杆菌科、奈瑟菌属、布 兰汉菌属、假单胞菌属等
精品ppt
21
氧化酶试验
原理：
某些细菌具有细胞色素氧化 酶，能将二甲基对苯二胺或四 甲基对苯二胺试剂氧化成紫红 色醌类化合物
精品ppt
34
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底 层穿刺，上层斜面划线），35ºC，24h，观察。
【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和 底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不 发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层 变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁 沉淀。
30
3.甲基红试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一 步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下， 加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄 糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH 在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨 水培养基中，35ºC18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察 结果。
应用：
用于鉴定B群链球菌。
精品ppt
11
3）CAMP试验
• 无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄 球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本 法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验
标本
涂片：G+C
微生物的鉴定ppt课件
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
微生物的鉴定（identification）:
借助于现有的微生物分类系统，通过特 征测定，确定未知的、或新发现的、或未 明确分类地位的微生物所应归属分类群的 过程。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
该法常用于肠道菌、噬菌体和病毒的分类鉴定。 利用此法，已将伤寒杆菌、肺炎双球菌等菌分成数 十种菌型。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
4．生态学特征
生态学特征主要包括它与其它生物之间的关系（是 寄生还是共生？寄主范围以及致病的情况）、在自然界 的分布情况（pH情况、水分程度等）、渗透压情况（是 否耐高渗、是否有嗜盐性等）。
在具体鉴定时，可参看中国科学院微生物研究所 细菌分类组编著的《一般细菌常用鉴定方法》一书。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
3．要有合适的鉴定方法
微生物种类繁多，特征各异，性状有主次之分。 因此，在鉴定某种微生物时，要选用合适的鉴定方法， 确定主要的测试项目。
微生物的鉴定（identification）:
借助于现有的微生物分类系统，通过特 征测定，确定未知的、或新发现的、或未 明确分类地位的微生物所应归属分类群的 过程。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
该法常用于肠道菌、噬菌体和病毒的分类鉴定。 利用此法，已将伤寒杆菌、肺炎双球菌等菌分成数 十种菌型。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
4．生态学特征
生态学特征主要包括它与其它生物之间的关系（是 寄生还是共生？寄主范围以及致病的情况）、在自然界 的分布情况（pH情况、水分程度等）、渗透压情况（是 否耐高渗、是否有嗜盐性等）。
在具体鉴定时，可参看中国科学院微生物研究所 细菌分类组编著的《一般细菌常用鉴定方法》一书。
烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的 健康皮 肤进行 自体移 植，但 对于大 面积烧 伤病人 来讲， 健康皮 肤很有 限，请 同学们 想一想 如何来 治疗该 病人
3．要有合适的鉴定方法
微生物种类繁多，特征各异，性状有主次之分。 因此，在鉴定某种微生物时，要选用合适的鉴定方法， 确定主要的测试项目。
细菌的培养及鉴定 ppt课件
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
《细菌鉴定》PPT课件
特殊气味等
形态学观察
* 营养需求（血琼脂、巧克力、营养琼脂生长 情况）
* 胆盐耐受（麦康凯生长情况） * 万古霉素耐受（含万古霉素巧克力生长情况） * 液体培养基生长现象（菌膜、上半部生长、
均匀浑浊、下半部生长、沉淀） * 半固体动力现象（清晰、毛刷样、倒伞状）
生化反应
* OF试验 * 各种糖发酵试验、糖氧化试验 * 糖衍生物发酵（α/β-甲基葡萄糖、β-葡萄糖胺、
不同种群的细菌根据培养的难易以及实际操作 时的难度而采用不同的鉴定手段
* 目前技术能培养的细菌采用传统手段
* 难培养细菌采用分子生物学手段（如麻风分支杆菌、 肺炎支原体、肺炎衣原体等）
* 而传统手段难以进一步鉴定的细菌则采用抗原抗体 血清学分类（如军团菌、沙门菌、志贺菌等）、细 胞壁脂肪酸结构和组成分类（如棒状杆菌相关属）、 挥发性代谢产物（如厌氧菌挥发性脂肪酸）指纹分 析
血清学试验（不常用）
* 铜绿假单胞菌生物分型血清 * 脑膜炎奈瑟菌分型血清 * 隐球菌可溶血抗原血清 * 脑膜炎5种可溶性抗原复合乳胶
* b型流感嗜血杆菌乳胶 * 肺炎链球菌乳胶（含83个血清型的多价血清） * A群脑膜炎奈瑟菌乳胶 * B群脑膜炎奈瑟菌/大肠埃希菌K1乳胶 * C群脑膜炎奈瑟菌乳胶
然耐药反证法鉴定
形态学试验
G+菌 BA生长、Choc不生长、MecK不生长，——Gram染色： 分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）
G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形 态区分:
▲葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则 圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外， 一般不具有临床意义；
血清学试验（不常用）
形态学观察
* 营养需求（血琼脂、巧克力、营养琼脂生长 情况）
* 胆盐耐受（麦康凯生长情况） * 万古霉素耐受（含万古霉素巧克力生长情况） * 液体培养基生长现象（菌膜、上半部生长、
均匀浑浊、下半部生长、沉淀） * 半固体动力现象（清晰、毛刷样、倒伞状）
生化反应
* OF试验 * 各种糖发酵试验、糖氧化试验 * 糖衍生物发酵（α/β-甲基葡萄糖、β-葡萄糖胺、
不同种群的细菌根据培养的难易以及实际操作 时的难度而采用不同的鉴定手段
* 目前技术能培养的细菌采用传统手段
* 难培养细菌采用分子生物学手段（如麻风分支杆菌、 肺炎支原体、肺炎衣原体等）
* 而传统手段难以进一步鉴定的细菌则采用抗原抗体 血清学分类（如军团菌、沙门菌、志贺菌等）、细 胞壁脂肪酸结构和组成分类（如棒状杆菌相关属）、 挥发性代谢产物（如厌氧菌挥发性脂肪酸）指纹分 析
血清学试验（不常用）
* 铜绿假单胞菌生物分型血清 * 脑膜炎奈瑟菌分型血清 * 隐球菌可溶血抗原血清 * 脑膜炎5种可溶性抗原复合乳胶
* b型流感嗜血杆菌乳胶 * 肺炎链球菌乳胶（含83个血清型的多价血清） * A群脑膜炎奈瑟菌乳胶 * B群脑膜炎奈瑟菌/大肠埃希菌K1乳胶 * C群脑膜炎奈瑟菌乳胶
然耐药反证法鉴定
形态学试验
G+菌 BA生长、Choc不生长、MecK不生长，——Gram染色： 分G+co（革兰阳性球菌） ,G+ b（革兰阳性杆菌）
G+co—依靠溶血特征，菌落形态、菌落颜色、菌体形 态区分:
▲葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则 圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外， 一般不具有临床意义；
血清学试验（不常用）
细菌学检验ppt课件
·
8
二、染色标本
（一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
11.12.2020
·
9
革兰染色（gram stain） 方法：
（二）常用的染色方法
1、结晶紫初染
1 min
2、卢戈氏碘液媒染 1 min
革兰阳性球菌
3、95％酒精脱色 30sec～1 min
4、稀释石炭酸复红复染 1 min
原理：
G+等电点低，带正电荷的碱性燃 料作色牢固
G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁 脂质含量高
G+含有多量核糖核酸镁盐与结晶 紫、碘结合成大分子复合物
革兰阴性杆菌
11.12.2020
·
16
(一)培养基的组成成分
1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂 胆盐、蔷薇酸等，酚红、中性红、溴甲酚紫等
11.12.2020
·
17
（二）培养基种类
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（differential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
11.12.2020
·
18
1．基础培养基（based medium）
含有大所属细菌生长所需 的基本营养成分，最常用的是 肉浸液，俗称肉汤（broth）， 主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 用于培养一般细菌
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有 丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基 酸更复杂的培养基。
专性好氧，最适生长温度约为35℃。大多数菌株可在10℃生长，有些在45℃生长。能在5%NaCl 生长，但不常在10%或15% NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。 对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。
环境微生物的检测
——受试菌初步鉴定报告
Group members:
CONTENTS
分离环境 形态及理化特征
16sRNA基因PCR结果及 网上比对结果 结论与讨论
参考文献
分离环境
时间
分离基物
采集地
2015年
手指表面
生科院2019室
受试菌的采集步骤： 在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。
API
20NE β- 半 乳糖
苷酶 活
阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阳性 阴性
API 20NE 可以同化的碳源 葡萄糖，麦芽糖， 苯乙酸
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
“0050202”
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
16sRNA 基因PCR结果
GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGC GCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGAC TGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAA GTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGG GGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAAC TGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTG GGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACG GTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGAC TGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTC TCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGA AGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG
2、结果 受试菌为革兰氏染色阳性菌
形态及理化特征
理化特征
大肠ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ菌
TITLE TITEXT
淀粉水解实验
受试菌 枯草芽孢杆菌
1、步骤： 固体淀粉培养基→划线接种→37℃培 养24h→滴加碘液（均匀铺满平板） →观察
2、结果： 受试菌周围未出现无色透明圈 说明不能分泌胞外淀粉酶
形态及理化特征
理化特征
葡
通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括 乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧 化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是 可变的，不能氧化卫矛醇。
结果与分析
2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和 乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂 开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发 酵均不产酸不产气
形态及理化特征
理化特征
氨苄青霉素抗性实验
1、步骤 氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始 位置的距离
2、结果 受试菌对青霉素敏感
平板编号
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
乳
萄 糖
糖
受试菌 大肠杆菌 变形杆菌
变形杆菌 大肠杆菌
受试菌
糖发酵实验
1、步骤 葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂 溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴 甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡
2、结果 受试菌无鞭毛不可运动
形态及理化特征
形态特征
革兰氏染色
G+（金黄色葡萄球菌）
受试菌
G-（大肠杆菌）
1、步骤 制片：载玻片：火烧去脂→水滴： 小→菌：少(薄而均匀) 染色：滴加结晶紫染液初染 2min→水洗→冲残水后滴加卢戈 氏碘液媒染1min→水洗→吸残水 后滴加95%乙醇脱色约30s→滴 加沙黄染液复染1-2min→水洗→ 吸干水，镜检
建议新的模式菌株： CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665.
结果与分析
分析
比较项目 菌形态 革兰氏染色 葡萄糖分解 运动性 菌落特征 有无鞭毛
藤黄微球菌 球状
阳性
不分解 不运动 金黄色
无
受试菌
球状
阳性 不产酸不产气 不运动 金黄色
无
由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据 16sRNA的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征， 发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。
受试菌
抑菌长度
1
（cm）
2
1.80
3.70（？）
3.78
2.70
——
2.10
2.90
2.60
大 肠 杆 菌
葡 萄 球 菌
芽 孢 杆 菌
受 试 菌
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
1.试剂条接种和培养
a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株） b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度） c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌） 中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用 同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG 试剂管（120µL/管）。 d)将剩余的200µL生理盐水菌悬液加至APIAUX 培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管 （250µL/管）。 e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖 f)将API 20E STRIP放入盒中，盖上盒盖，在 30℃培养24h。
（24h，30℃）
（48h，30℃）
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
结果
API20 NE 硝
酸盐 还原
API 20NE 产生 吲哚
API 20NE 酸化 葡萄 糖
API 20NE 精氨 酸双 水介 酶活
API 20NE 脲酶 活
API
20NE β- 葡 萄糖
甙酶 活
API 20NE 明胶 蛋白 酶活
形态及理化特征
形态特征：菌落特征
菌落形态
在培养基上呈黄色菌 落。菌落圆形，凸起， 光滑且有光泽，边缘
整齐。
形态及理化特征
形态特征
显微特征 圆球状，无鞭毛且不可运动
鞭毛染色
1、步骤 制片：滴菌液→倾斜玻片→室温干燥 染色：A液3-5min→水洗→B液冲残水，覆盖染色 →出现明显褐色时轻轻水洗→晾干
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
网上比对结果
最相似菌种名Micrococcus luteus 最高相似度99.00%
结果与分析
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcus luteus 最高相似度99.00% 从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为： 球菌，直径为1.0-2.0微生，细胞单生，对生和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规 则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌 落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种 能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘 液状的沉淀。
可以水解蛋白质、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不还原硝酸盐。有些菌株能生长在含有 丙酮酸（作为碳源和能源）、谷氨酸、生物素和无机盐的培养基上。另一些菌株需要含某些氨基 酸更复杂的培养基。
专性好氧，最适生长温度约为35℃。大多数菌株可在10℃生长，有些在45℃生长。能在5%NaCl 生长，但不常在10%或15% NaCl中生长。大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感。 对植物和动物不致病。通常存在于土壤、灰尘、水、人和其他动物皮肤上。
环境微生物的检测
——受试菌初步鉴定报告
Group members:
CONTENTS
分离环境 形态及理化特征
16sRNA基因PCR结果及 网上比对结果 结论与讨论
参考文献
分离环境
时间
分离基物
采集地
2015年
手指表面
生科院2019室
受试菌的采集步骤： 在酒精灯火焰旁，半开皿盖，用手指（洗手前）在平板上轻轻按一下，迅速盖上皿盖。
API
20NE β- 半 乳糖
苷酶 活
阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阳性 阴性
API 20NE 可以同化的碳源 葡萄糖，麦芽糖， 苯乙酸
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
“0050202”
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
16sRNA 基因PCR结果
GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGC GCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGAC TGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAA GTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGG GGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAAC TGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTG GGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACG GTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGAC TGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTC TCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGA AGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG
2、结果 受试菌为革兰氏染色阳性菌
形态及理化特征
理化特征
大肠ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ菌
TITLE TITEXT
淀粉水解实验
受试菌 枯草芽孢杆菌
1、步骤： 固体淀粉培养基→划线接种→37℃培 养24h→滴加碘液（均匀铺满平板） →观察
2、结果： 受试菌周围未出现无色透明圈 说明不能分泌胞外淀粉酶
形态及理化特征
理化特征
葡
通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸，在葡萄糖培养液中最终PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括 乙酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、琥珀酸盐、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麦芽糖、蔗糖，都可氧 化为水和二氧化碳。对甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是 可变的，不能氧化卫矛醇。
结果与分析
2、结果 受试菌在培养基中生长，但葡萄糖和 乳糖半固体培养基均为紫色，且未裂 开，说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发 酵均不产酸不产气
形态及理化特征
理化特征
氨苄青霉素抗性实验
1、步骤 氨苄青霉素滤纸条→垂直接种→培养→观察、测量滤纸条距菌起始 位置的距离
2、结果 受试菌对青霉素敏感
平板编号
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
乳
萄 糖
糖
受试菌 大肠杆菌 变形杆菌
变形杆菌 大肠杆菌
受试菌
糖发酵实验
1、步骤 葡萄糖发酵半固体培养基（含指示剂 溴甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡 乳糖发酵半固体培养基（含指示剂溴 甲酚紫）→穿刺接种→37℃培养 24~48h→观察培养基颜色和是否产 生气泡
2、结果 受试菌无鞭毛不可运动
形态及理化特征
形态特征
革兰氏染色
G+（金黄色葡萄球菌）
受试菌
G-（大肠杆菌）
1、步骤 制片：载玻片：火烧去脂→水滴： 小→菌：少(薄而均匀) 染色：滴加结晶紫染液初染 2min→水洗→冲残水后滴加卢戈 氏碘液媒染1min→水洗→吸残水 后滴加95%乙醇脱色约30s→滴 加沙黄染液复染1-2min→水洗→ 吸干水，镜检
建议新的模式菌株： CCM 169;ATCC 44698;NCTC 2665.
结果与分析
分析
比较项目 菌形态 革兰氏染色 葡萄糖分解 运动性 菌落特征 有无鞭毛
藤黄微球菌 球状
阳性
不分解 不运动 金黄色
无
受试菌
球状
阳性 不产酸不产气 不运动 金黄色
无
由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果，根据 16sRNA的查询结果，对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征， 发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌。
受试菌
抑菌长度
1
（cm）
2
1.80
3.70（？）
3.78
2.70
——
2.10
2.90
2.60
大 肠 杆 菌
葡 萄 球 菌
芽 孢 杆 菌
受 试 菌
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
1.试剂条接种和培养
a)选择菌落（先确定是否为单一纯菌株） b)向培养盒中加入少许无菌水（保持湿度） c)挑取单菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已灭菌） 中，使菌浓度达到0.5个麦氏单位标准浊度。用 同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG 试剂管（120µL/管）。 d)将剩余的200µL生理盐水菌悬液加至APIAUX 培养基，仔细混匀，注满由GLU至PAC管 （250µL/管）。 e)GLU,ADH,URE三个管用矿物油覆盖 f)将API 20E STRIP放入盒中，盖上盒盖，在 30℃培养24h。
（24h，30℃）
（48h，30℃）
形态及理化特征
理化特征
API20NE试剂条检测
结果
API20 NE 硝
酸盐 还原
API 20NE 产生 吲哚
API 20NE 酸化 葡萄 糖
API 20NE 精氨 酸双 水介 酶活
API 20NE 脲酶 活
API
20NE β- 葡 萄糖
甙酶 活
API 20NE 明胶 蛋白 酶活
形态及理化特征
形态特征：菌落特征
菌落形态
在培养基上呈黄色菌 落。菌落圆形，凸起， 光滑且有光泽，边缘
整齐。
形态及理化特征
形态特征
显微特征 圆球状，无鞭毛且不可运动
鞭毛染色
1、步骤 制片：滴菌液→倾斜玻片→室温干燥 染色：A液3-5min→水洗→B液冲残水，覆盖染色 →出现明显褐色时轻轻水洗→晾干
16sRNA基因PCR结果及网上比对结果
网上比对结果
最相似菌种名Micrococcus luteus 最高相似度99.00%
结果与分析
藤黄微球菌 Micrococcus luteus
由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcus luteus 最高相似度99.00% 从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为： 球菌，直径为1.0-2.0微生，细胞单生，对生和向几个方向分裂而形成四联体、不规则的堆团或规 则的立方堆形。不运动。生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑、凸起并具有整齐边缘的菌 落。形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽。菌落黄色、黄绿色或橙色，有些菌株形成一种 能扩散到培养基内的紫色素。在液体培养基中浑浊均匀，随之变清，产生一些细的像颗粒状或粘 液状的沉淀。