细菌的分离与鉴定ppt课件
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微生物菌种分离(共61张PPT)
平板划线法
斜线法 曲线法 方格法 放射法 四格法
平板划线法
斜线法：
用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板 培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培 养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却 后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用 同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线 和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。
琼脂固体 培养基
(1882年)
很多细菌不能
在土豆上生长
明胶高温易溶化
不能37°C培养
一直沿用至今
微生物纯培养分离技术
纯培养物分离方法
固体培养基分离
涂布平板法 平板划线法 平板倾注法 稀释摇管法
液体培养基分离
单细胞（孢子）分离 选择培养分离
涂布平板法
1、少量样品加到平板中央（1mL） 2、玻璃三角涂棒浸入酒精 3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼烧后使其冷却 4、无菌涂棒将样品均匀涂布琼脂培养基表面，适当条件下培养
Technology
Erko Stackebrandt, DSMZ, Braunschweig, Germany
微生物菌种鉴定技术
1923(1)、1925(2)、1930(3)、1934(4)、1939(5)、1948(6)、1957(7)、1974(8)、 1994(9)
伯杰氏鉴定细菌学手册
Bergey's Manogy
产生新的问题：将有越来越多的分类单元不能只以表型 特征进行鉴别，必须结合基因型测定才能鉴定。
微生物菌种鉴定技术
表征（表型）特征
形态特征 生理和代谢特征 生态特征
遗传（基因型）特征
蛋白质比较 核酸碱基组成 核酸序列
分子标尺
多相鉴定技术
章十 微生物的分类和鉴定ppt(共71张PPT)
（2）细胞壁成分独特而多样有的以蛋白质为主，有的含杂多糖，有的类似于 肽聚糖（“假肽聚糖”），但不论是何种成分，它们都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸
。 （3）核糖体的16SrRNA其核苷酸顺序独特，既不同于真细菌，也不同于真核生物。 （4）tRNA成分其核苷酸顺序也很特殊，且不存在胸腺嘧啶。
（5）蛋白质合成的起始密码始于甲硫氨酸，与真核生物相同。 （6）对抗生素等的敏感性对那些作用于真细菌细胞壁的抗生素如青霉素、头 孢霉素和D-环丝氨酸等不敏感；对真细菌的转译有抑制作用的氯霉素不敏感；对真 核生物的转译有抑制作用的白喉毒素却十分敏感。 （7）生态条件独特有的是严格厌氧菌，如产甲烷菌（metnanogens）；有的 是极端嗜盐菌（extremehalophiles）；有的则是嗜热嗜酸菌
（用菌物代替以往的真菌）
目前广为接受Ainsworth第7版的分类系统及第八版
菌物界
Ainsworth等人的菌物分类系统纲要
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第四节 微生物分类鉴定的方法
一、微生物分类鉴定的经典方法 二、微生物分类鉴定中的现代方法
微生物的鉴定
▪ 主要步骤：纯化、测定一系列必要的指标、查找权威性鉴 定手册
▪ 鉴定方法分四个水平：
▪ 菌株的确定：实验室可以自己命名。 1963年，Able等首次通过细胞脂肪酸的分析来对细菌进行分类，同时，Oyama等又提出了用裂解气相色谱法（Pyrolysisgaschromatography，
PGC，是一种热裂解法与色谱技术相结合的方法）来鉴定细菌。 Enterotube 系统
▪ Escherichia coli K12, O-157：H7
三域学说及其生物进化谱系树
促使人们提出三原界学说的最重要原因是具有一系列独特性状的曾称作“第三生物 ”的古细菌的发现。与真细菌相比，古细菌有以下几个特点：
。 （3）核糖体的16SrRNA其核苷酸顺序独特，既不同于真细菌，也不同于真核生物。 （4）tRNA成分其核苷酸顺序也很特殊，且不存在胸腺嘧啶。
（5）蛋白质合成的起始密码始于甲硫氨酸，与真核生物相同。 （6）对抗生素等的敏感性对那些作用于真细菌细胞壁的抗生素如青霉素、头 孢霉素和D-环丝氨酸等不敏感；对真细菌的转译有抑制作用的氯霉素不敏感；对真 核生物的转译有抑制作用的白喉毒素却十分敏感。 （7）生态条件独特有的是严格厌氧菌，如产甲烷菌（metnanogens）；有的 是极端嗜盐菌（extremehalophiles）；有的则是嗜热嗜酸菌
（用菌物代替以往的真菌）
目前广为接受Ainsworth第7版的分类系统及第八版
菌物界
Ainsworth等人的菌物分类系统纲要
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第四节 微生物分类鉴定的方法
一、微生物分类鉴定的经典方法 二、微生物分类鉴定中的现代方法
微生物的鉴定
▪ 主要步骤：纯化、测定一系列必要的指标、查找权威性鉴 定手册
▪ 鉴定方法分四个水平：
▪ 菌株的确定：实验室可以自己命名。 1963年，Able等首次通过细胞脂肪酸的分析来对细菌进行分类，同时，Oyama等又提出了用裂解气相色谱法（Pyrolysisgaschromatography，
PGC，是一种热裂解法与色谱技术相结合的方法）来鉴定细菌。 Enterotube 系统
▪ Escherichia coli K12, O-157：H7
三域学说及其生物进化谱系树
促使人们提出三原界学说的最重要原因是具有一系列独特性状的曾称作“第三生物 ”的古细菌的发现。与真细菌相比，古细菌有以下几个特点：
肠道菌的分离培养与鉴定PPT课件
21
3．结果 产酸产气时，可使培养基的指示 剂变色，并可在发酵管内顶端出现气泡； 只产酸时仅见发酵管内培养基颜色改变， 不见气泡；不分解者无反应。如大肠杆菌 分解乳糖产酸产气；用“㈩”表示，金黄 色葡萄球菌虽能分解乳糖，但产酸不产气， 用“+”表示；马流产沙门氏杆菌不能分解 乳糖，用“一”表示。
22
实验三 肠道菌的分离培养与鉴定
目的要求： 1．熟悉选择和鉴别培养基的原理； 2．了解大肠杆菌的主要培养特性； 3．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌的常规鉴定方
法；
1
基本原理
肠道菌大多为革兰氏阴性小杆菌，
采用一般染色和分离培养难以鉴别，故须
采用鉴别和生化试验培养方能鉴定。不同
种类的肠道菌，产生的酶类及活性不同。
培养方法，其原则在于使被检材料充分分 散，以便经过培养后得到单个菌落，并可 对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观 察。
5
术式
右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处， 将接种环伸人酒精灯火焰中烧至通红，再 缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼， 准备蘸取材料；左手取琼脂平板，琼脂面 与水平面成45°角，接种环同培养基平面 也成45°角。靠近酒精灯火焰操作。
10
2．方法
将需要鉴别的肠道菌（大肠杆菌和沙门氏 菌）或含肠道菌的病料，在康凯琼脂培养 基上划线分离，37℃培养24h观察。使之得 到单个菌落。
3．结果 大肠杆菌在此培养基上形成红色 菌落，沙门氏菌形成无色或浅黄色菌落。
11
（二）SS琼脂培养基分离培养
1．原理 此培养以中性红作批示剂，其中 还有胆盐硫代硫酸钠，构椽酸钠，煌绿等 等抑制G+的生长，对大肠杆菌了有一定的 抑制作用，只有少数生长。培养基中含有 乳糖，在大肠杆菌能分解乳糖，产酸，指 示剂显红色（5.0-7.4 红—黄），故大肠杆 菌呈红色菌落，而沙门氏菌不能分解乳糖， 没能使培养基变酸呈黄色菌落。
3．结果 产酸产气时，可使培养基的指示 剂变色，并可在发酵管内顶端出现气泡； 只产酸时仅见发酵管内培养基颜色改变， 不见气泡；不分解者无反应。如大肠杆菌 分解乳糖产酸产气；用“㈩”表示，金黄 色葡萄球菌虽能分解乳糖，但产酸不产气， 用“+”表示；马流产沙门氏杆菌不能分解 乳糖，用“一”表示。
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实验三 肠道菌的分离培养与鉴定
目的要求： 1．熟悉选择和鉴别培养基的原理； 2．了解大肠杆菌的主要培养特性； 3．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌的常规鉴定方
法；
1
基本原理
肠道菌大多为革兰氏阴性小杆菌，
采用一般染色和分离培养难以鉴别，故须
采用鉴别和生化试验培养方能鉴定。不同
种类的肠道菌，产生的酶类及活性不同。
培养方法，其原则在于使被检材料充分分 散，以便经过培养后得到单个菌落，并可 对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观 察。
5
术式
右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处， 将接种环伸人酒精灯火焰中烧至通红，再 缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼， 准备蘸取材料；左手取琼脂平板，琼脂面 与水平面成45°角，接种环同培养基平面 也成45°角。靠近酒精灯火焰操作。
10
2．方法
将需要鉴别的肠道菌（大肠杆菌和沙门氏 菌）或含肠道菌的病料，在康凯琼脂培养 基上划线分离，37℃培养24h观察。使之得 到单个菌落。
3．结果 大肠杆菌在此培养基上形成红色 菌落，沙门氏菌形成无色或浅黄色菌落。
11
（二）SS琼脂培养基分离培养
1．原理 此培养以中性红作批示剂，其中 还有胆盐硫代硫酸钠，构椽酸钠，煌绿等 等抑制G+的生长，对大肠杆菌了有一定的 抑制作用，只有少数生长。培养基中含有 乳糖，在大肠杆菌能分解乳糖，产酸，指 示剂显红色（5.0-7.4 红—黄），故大肠杆 菌呈红色菌落，而沙门氏菌不能分解乳糖， 没能使培养基变酸呈黄色菌落。
细菌的分离、培养和鉴定ppt课件
请大家自觉维持实验室的卫生和秩序！
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
Hale Waihona Puke 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
细菌的分离、培养与鉴定
王欣欣
一、细菌的分离
1、从混杂微生物中获得单一菌株纯培养的 方法称为分离。 2、分离的目的在于从被检材料中、或者从 污染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。
1)病料采集
病料：疑似细菌性疾病的水产养殖动物 以鱼为例，常见症状：体色发黑，体表溃 烂、充血、粘液增多，鳃、鳍破损，内脏 红肿，腹水，眼球凸出或浑浊，肛门红肿 等等。 活体病料→应考虑病原在疾病发展过程中 的部位（上述症状） 病料死后→应立即采集，越早越好
生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
ATB Expression：自动化微生物鉴 定和药敏分析系统
分子生物学技术
分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核 酸检测技术, 包括基因测序、指纹图谱技术、 基因探针技术、聚合酶链反应( PCR)、GC 含量测定等。
培养基的种类 ① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物
质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂） ② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质
（如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E） ③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】 ④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养 基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物， 能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应； 从而达到区分不同的微生物。（TCBS）
《细菌的培养与分离》课件
是用于培养微生物的物质，通常由水 、碳源、氮源、无机盐等组成，根据 不同微生物的需求，培养基的成分和 配比也会有所不同。
细菌培养的重要性
细菌培养是研究微生物的基础实验之一，通过细菌培养可以 了解微生物的生理生化特性、代谢途径、遗传特征等，为微 生物资源的开发利用提供基础数据。
细菌培养在医学、农业、工业等领域具有广泛的应用价值， 例如在医学上用于病原菌的分离、鉴定和药敏试验，在农业 上用于土壤微生物的调查和生物防治等。
02
细菌培养技术
液体培养基培养
液体培养基是一种均匀的、呈 液态的培养基，适合细菌的生 长繁殖。
液体培养基通常含有必要的营 养物质，如碳源、氮源、水、 无机盐等，以支持细菌的生长 。
在液体培养基中，细菌可以自 由悬浮，并且生长速度较快， 适用于大规模工业生产。
固体培养基培养
固体培养基是一种呈固态的培养 基，适合细菌的分离和纯化。
固体培养基通常含有琼脂等凝固 剂，将培养基凝固成固体状态。
在固体培养基上，细菌可以形成 可见的菌落，通过菌落的特征可
以对细菌进行鉴别和分类。
特殊培养基培养
特殊培养基是根据特定细菌的特殊需求而设计的培养基。
特殊培养基可以提供特殊的营养物质、生长因子或环境条件，以支持特定细菌的生 长。
特殊培养基在研究细菌的生理特性、致病机制等方面具有重要作用。
在食品工业中，细菌培养 与分离用于检测食品中的 病原菌，保证食品的安全 性和卫生质量。
生物能源
通过培养和分离厌氧菌， 可以生产生物沼气等可再 生能源，满足能源需求并 减少对化石燃料的依赖。
生物制药
通过培养和分离微生物， 可以生产各种生物药物， 如抗生素、酶制剂等。
在环保领域的应用
细菌培养的重要性
细菌培养是研究微生物的基础实验之一，通过细菌培养可以 了解微生物的生理生化特性、代谢途径、遗传特征等，为微 生物资源的开发利用提供基础数据。
细菌培养在医学、农业、工业等领域具有广泛的应用价值， 例如在医学上用于病原菌的分离、鉴定和药敏试验，在农业 上用于土壤微生物的调查和生物防治等。
02
细菌培养技术
液体培养基培养
液体培养基是一种均匀的、呈 液态的培养基，适合细菌的生 长繁殖。
液体培养基通常含有必要的营 养物质，如碳源、氮源、水、 无机盐等，以支持细菌的生长 。
在液体培养基中，细菌可以自 由悬浮，并且生长速度较快， 适用于大规模工业生产。
固体培养基培养
固体培养基是一种呈固态的培养 基，适合细菌的分离和纯化。
固体培养基通常含有琼脂等凝固 剂，将培养基凝固成固体状态。
在固体培养基上，细菌可以形成 可见的菌落，通过菌落的特征可
以对细菌进行鉴别和分类。
特殊培养基培养
特殊培养基是根据特定细菌的特殊需求而设计的培养基。
特殊培养基可以提供特殊的营养物质、生长因子或环境条件，以支持特定细菌的生 长。
特殊培养基在研究细菌的生理特性、致病机制等方面具有重要作用。
在食品工业中，细菌培养 与分离用于检测食品中的 病原菌，保证食品的安全 性和卫生质量。
生物能源
通过培养和分离厌氧菌， 可以生产生物沼气等可再 生能源，满足能源需求并 减少对化石燃料的依赖。
生物制药
通过培养和分离微生物， 可以生产各种生物药物， 如抗生素、酶制剂等。
在环保领域的应用
粪便病原菌分离与鉴定PPT课件
吲哚试验
用于检测细菌是否产生吲哚及其衍生物，有 助6S rRNA基因测序
通过对细菌16S rRNA基因进行测序，可以确定细菌的 种属关系。
2 DNA指纹技术
利用细菌基因组的DNA指纹图谱进行鉴定，具有高分辨 率和高特异性。
3 实时荧光定量PCR
通过特异性引物和探针，快速、准确地检测和鉴定病原 菌。
加强手卫生
医护人员应经常洗手，并 使用消毒液对接触患者前 后进行手部消毒。
严格隔离感染患者
将感染病原菌的患者与其 他患者分开，以防止交叉 感染。
提高患者免疫力
鼓励患者保持健康的生活 方式，包括均衡饮食、适 量运动和充足的睡眠，以 提高免疫力。
06
总结与展望
研究成果总结
标准化与推广
分离方法优化
我们成功地优化了粪便病原菌 的分离方法，提高了分离效率 和准确性。通过改进培养基成 分和分离程序，我们能够更有 效地从粪便样本中筛选出目标 病原菌。
抗酸染色
用于鉴别结核分枝杆菌等抗酸 菌，具有特殊染色特性。
鞭毛染色
用于鉴定具有鞭毛的细菌，如 霍乱弧菌。
芽孢染色
用于观察细菌的芽孢，有助于 鉴别厌氧菌。
生化鉴定
糖发酵试验
通过检测细菌对糖类的发酵能力，可以初步 确定细菌的属和种。
酶试验
用于鉴别肠道细菌中的大肠杆菌、沙门氏菌 等。
甲基红试验
通过检测细菌产生的酶，如氧化酶、触酶等 ，有助于鉴别细菌种类。
耐药性的防控措施
01
合理使用抗生素
严格控制抗生素的使用，避免 滥用和过度使用，降低病原菌 耐药性的产生。
02
加强耐药性监测
建立和完善耐药性监测体系， 及时发现和报告耐药性病例， 采取有效措施控制传播。
用于检测细菌是否产生吲哚及其衍生物，有 助6S rRNA基因测序
通过对细菌16S rRNA基因进行测序，可以确定细菌的 种属关系。
2 DNA指纹技术
利用细菌基因组的DNA指纹图谱进行鉴定，具有高分辨 率和高特异性。
3 实时荧光定量PCR
通过特异性引物和探针，快速、准确地检测和鉴定病原 菌。
加强手卫生
医护人员应经常洗手，并 使用消毒液对接触患者前 后进行手部消毒。
严格隔离感染患者
将感染病原菌的患者与其 他患者分开，以防止交叉 感染。
提高患者免疫力
鼓励患者保持健康的生活 方式，包括均衡饮食、适 量运动和充足的睡眠，以 提高免疫力。
06
总结与展望
研究成果总结
标准化与推广
分离方法优化
我们成功地优化了粪便病原菌 的分离方法，提高了分离效率 和准确性。通过改进培养基成 分和分离程序，我们能够更有 效地从粪便样本中筛选出目标 病原菌。
抗酸染色
用于鉴别结核分枝杆菌等抗酸 菌，具有特殊染色特性。
鞭毛染色
用于鉴定具有鞭毛的细菌，如 霍乱弧菌。
芽孢染色
用于观察细菌的芽孢，有助于 鉴别厌氧菌。
生化鉴定
糖发酵试验
通过检测细菌对糖类的发酵能力，可以初步 确定细菌的属和种。
酶试验
用于鉴别肠道细菌中的大肠杆菌、沙门氏菌 等。
甲基红试验
通过检测细菌产生的酶，如氧化酶、触酶等 ，有助于鉴别细菌种类。
耐药性的防控措施
01
合理使用抗生素
严格控制抗生素的使用，避免 滥用和过度使用，降低病原菌 耐药性的产生。
02
加强耐药性监测
建立和完善耐药性监测体系， 及时发现和报告耐药性病例， 采取有效措施控制传播。
细菌的分离与鉴定
合成脲酶的微生物才能分解尿素，以 尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由 于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长 发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养 基就能够选择出分解尿素的微生物。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属 于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
• 抑制非目的微生物生长
• 从混杂微生物中分离目的微生物
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
细菌的分离培养与鉴定PPT课件
精品ppt
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硫化氢产生试验(Production of H2S)
将细菌穿刺接种于醋酸铅培养基中， 37℃培养24h后观察结果。有些细菌能分解 培养基中的含硫氨基酸，生成硫化氢，穿刺 部位呈黑褐色，是为反应阳性。培养基颜色 无变化，则为阴性。
精品ppt
23
尿素分解试验(Splitting of urea)
➢ 相邻两区要有重叠区域。 ➢ 结果观察：观察各区的生长情况，并看是
否有单一菌落长出；菌落的形态、颜色、 大小、边缘、透明度都需记录。
精品ppt
8
平皿送37℃温箱培养24小时 结果(要求)
两种单个菌 落
分四区 无杂菌 琼脂不破
精品ppt
9
℃
精品ppt
10
3.2 细菌的接种
斜面接种法 该法主要用于单个菌落的纯培养、 保存菌种或观察细菌的某些特性。
将细菌接种于尿素培养基中，37℃培养 18～24h。变形杆菌能迅速(2～4h)分解尿素 产生大量的氨，使培养基变碱而呈紫红色， 是为阳性反应。
精品ppt
24
实验后处理
将接种针和接种环放入原位，摆放整齐！ 将所有的原菌种管放入自己组的红框试管架
中ห้องสมุดไป่ตู้ 将自己接种的培养物集中在试管架中统一放
入培养箱中37度培养！ 关照明和电扇开关，请勿关实验室总电
精品ppt
17
糖发酵试验
不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。 例如大肠杆菌能发酵葡萄糖和乳糖；而痢疾 杆菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。即使 两种细菌均可发酵同一糖类，其结果也不尽 相同，如大肠杆菌有甲酸脱氢酶，能将葡萄 糖发酵生成的甲酸进一步分解为CO2和H2， 故产酸并产气；而痢疾杆菌缺乏该酶，发酵 葡萄糖仅产酸不产气。
细菌的培养及鉴定PPT课件
送检标本应注明来源和检验目的咳痰方法病人先漱口清洁口腔去除表面的菌群病人深咳收集从下呼吸道咳出的痰液无痰可用35nacl5ml雾吸约5min导痰以清晨第二口痰为佳标本采集后放置时间不超过2小时清洁中段尿液尽量取早晨第一次尿液嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水女性病人嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水女性病人?收集标本前用肥皂水冲洗外阴再以灭菌清水冲洗尿道口收集标本前用肥皂水冲洗外阴再以灭菌清水冲洗尿道口?排出几毫升后不停止尿流采集中段尿男性病人?翻转包皮清洗尿道口?排出几毫升后不停止尿流采集中段尿采集标本后立即送检
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革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
.
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
.
革兰染色程序
初染 媒染 脱色 复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 1’
冲洗
碘液 1’
95%乙醇 30” 复红
滤纸干燥
.
油镜观察
.
观察细菌在平板上的生长现象
血平板：大小、形状、边缘、颜色、表 面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 mac平板：大小、形状、颜色、透明度、 湿润度、黏度 巧克力平板：大小、形状、Leabharlann 色、透明 度、湿润度、黏度.
革兰阴性菌
葡萄球菌
2017/7/30
.
37
细菌的初步分类
细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株
细菌培养及鉴定
.
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作
4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂
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革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
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固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
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革兰染色程序
初染 媒染 脱色 复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 1’
冲洗
碘液 1’
95%乙醇 30” 复红
滤纸干燥
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油镜观察
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观察细菌在平板上的生长现象
血平板：大小、形状、边缘、颜色、表 面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 mac平板：大小、形状、颜色、透明度、 湿润度、黏度 巧克力平板：大小、形状、Leabharlann 色、透明 度、湿润度、黏度.
革兰阴性菌
葡萄球菌
2017/7/30
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37
细菌的初步分类
细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株
细菌培养及鉴定
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标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作
4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂
《细菌分离培养》课件
在工业领域的应用
食品工业
在食品工业中，细菌分离培养用 于检测食品中的病原菌，保障食
品安全。
生物能源
利用细菌发酵产生生物燃料，如乙 醇、生物柴油等，替代化石燃料。
生物降解
某些细菌能够降解污染物，对环境 保护和治理具有重要意义。
06
展与未来发展方向
新技术的开发与应用
基因编辑技术
人工智能与机器学习
《细菌分离培养》 PPT课件
• 细菌分离培养概述 • 细菌分离技术 • 细菌培养技术 • 细菌的鉴定与分类 • 细菌分离培养的应用 • 展望与未来发展方向
目录
01
细菌分离培养概述
细菌分离培养的定义
细菌分离培养是指从混合菌群中分离 出单一菌种的过程，通过选择性培养 基和特定的培养条件，使目的菌种得 以繁殖并从其他微生物中分离出来。
高了分离效率。
03
细菌培养技术
培养基的种类与制备
固体培养基
用于细菌分离和纯化， 制备时需添加琼脂作为
凝固剂。
液体培养基
用于大量繁殖细菌，制 备相对简单。
选择性培养基
加入特定成分抑制某些 细菌生长，突出所需分
离的细菌。
鉴别培养基
根据细菌代谢产物不同 ，通过指示剂变化鉴别
不同细菌。
培养方法
01
02
05
04
菌种分离
将样品中的微生物接种到选择好的培 养基上，通过培养得到单一菌落。
02
细菌分离技术
划线分离法
总结词
通过在固体培养基上划线，使细菌分散生长的方法。
详细描述
划线分离法是最早的细菌分离技术之一，通过在固体培养基表面划线，使细菌 在划线区域内生长繁殖，形成单个菌落。该方法适用于细菌的纯培养分离。
细菌学检验ppt课件
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8
二、染色标本
（一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
11.12.2020
·
9
革兰染色（gram stain） 方法：
（二）常用的染色方法
1、结晶紫初染
1 min
2、卢戈氏碘液媒染 1 min
革兰阳性球菌
3、95％酒精脱色 30sec～1 min
4、稀释石炭酸复红复染 1 min
原理：
G+等电点低，带正电荷的碱性燃 料作色牢固
G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁 脂质含量高
G+含有多量核糖核酸镁盐与结晶 紫、碘结合成大分子复合物
革兰阴性杆菌
11.12.2020
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16
(一)培养基的组成成分
1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子
2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白
3．抑制剂和指示剂 胆盐、蔷薇酸等，酚红、中性红、溴甲酚紫等
11.12.2020
·
17
（二）培养基种类
1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（differential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
11.12.2020
·
18
1．基础培养基（based medium）
含有大所属细菌生长所需 的基本营养成分，最常用的是 肉浸液，俗称肉汤（broth）， 主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 用于培养一般细菌
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4
一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落
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5
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
.
6
.
7
菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、 光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种 细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。 不同种或同种在不同的培养条件下，菌落 特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴 定有一定意义。
第二节 分离特定的微生物并测定 其数量
.
1
• 用固体培养基分离、培养
微
• 用液体培养基分离、培养
生
• 单孢子分离
物
• 选择培养分离
分
• 二元培养物分离、培养
离 方
法
要分离微生物，必须根据它的特点，包括营养、生
理、生长条件等，采用选择培养的方法，经过一定
时间的培养后，使这种微生物在群落中的数量不断
增加，在通过平板稀释法等进行纯培养分离
2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pour plate method)
3、平板划线法（streak plate method）
分区划线法（蛇形线法）操作图
第一区划线 灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环
第三区划线
灭菌接种环
.
14
分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品
.
15
连续划线法操作图
连续划线法适用范围： 适用于浓度较小的样品
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16
二、选择培养分离
原理
• 创造适于目的微生物生长条件 • 促使目的微生物快速生长呈优势菌 • 抑制非目的微生物生长 • 从混杂微生物中分离目的微生物
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17
1、利用选择培养基进行直接分离
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
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18
选择培养基
可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分
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10
纯化细菌
微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。
1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌 种逐步稀释分散到培养基的表面。
2.稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂
布到琼脂固体培养基的表面进行培养。
在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细
①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属
于哪类培养基？
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
.
22
1、显微镜直接计数：利用血
球计数板，在显微镜下计算一定容积里样 品中微生物的数量
缺点
➢不能区分死菌与活菌；
➢不适于对运动细菌的计数
.
23
计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个
槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，
其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，
中央的一大格作为计数用，称为计数室。
.
24
血球计数板计数室有两种刻度
1大格=16中格
1大格=25中格
25×16=400小格
16 ×25 =400小格
.
25
3.计算公式
(1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= 100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数
.
2
微生物纯种分离
• 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
• 在适宜条件下培养纯种获得的培养物 （群体）
.
3
菌落
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内 部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可 见的、有一定形态结构的子细胞群体，称 为菌落(colony)。
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶
CO(NH2)2 +H2O
NH3 + CO2
.
20
原理：培养基的氮源为尿素，只有能
合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿
(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml= 80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数
.
26
血球计数板的使用
以计数酵母菌为例
(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小 方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加 盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻 片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取, 捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.
胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平
.
11
板操作。
（二）、纯种平板分离的不同方法
104/ml
103/ml
102/ml
101/ml
从土壤中分离纯微生物
.
12
1、涂布平板法（spread plate method)
涂布平板法
稀释倒平板法
.
13
肽聚糖的合成
其细胞壁是由纤 维素、几丁质、
葡聚糖组成
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基:
分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌 不加含碳ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ机物的无碳培养基:
分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:
分离导入了目的基因的受体细胞
.
19
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
.
27
(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按 对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个 小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板, 除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数. (6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方 格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左 方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计 算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.
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8
（一）、微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
平板
每个菌落为纯种（纯培养）
单菌落转接培养
纯种（纯培养）
.
9
一、用固体培养基（营养琼脂平板） 分离纯种
平板分离法：将单个微生物分离和固定在固 体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物 体经过生长、繁殖均可形成单个菌落
素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不
能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就
能够选择出分解尿素的微生物。
.
21
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：
KH2PO4
NaH2PO4
MgSO4`7H2O 葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g