流感病毒实验室检测 PPT
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流行性感冒诊疗指南(课件PPT)
4.本病需与其他病毒引起的呼吸道感染、钩端螺旋体病、 支原体肺炎、流行性脑膜炎等鉴别。
5.常见的并发症是细菌感染，表现为急性支气管炎和(或) 肺炎。
入院标准
有高热或并发症者。
检查项目
1.血、尿常规。1日内完成。 2.病毒分离，X线胸片，心电图。3日内完成。 3.痰培养及药物敏感试验。1周内完成。 4.血清学检查。1周内完成。
2.抗病毒治疗①利巴韦林注射液：10~15mg/(kg·d)，加 入10%葡萄糖注射液250~500mL内，分2次静脉滴注， 连用3~5日。或利巴韦林片：每次100~200mg，口服， 每日3次。②金刚烷胺片：每次100mg，口服，每日2次， 疗程2~3日。③吗啉胍片：每次0.1~0.2g，饭后口服， 每日3次。
3.合并细菌感染的治疗根据痰培养及药物敏感试验结果选 择药物，在培养结果出来前，可首先选用抗革效标准
症状消失，实验室检查各项指标恢复正常，体温正常3日， 为治愈。
出院标准
症状消失、体温正常3日，方可出院。
出院指导
1.在流感流行期间，避免大型集会和集体活动，接触病人 者应戴口罩。 2.中药烧熏、食醋熏闻。 3.接种流感疫苗。
(三)西医治疗 1.发热及全身疼痛的治疗①阿司匹林片：每次0.3~0.6g， 饭后口服，每日3次。②扑热息痛片：每次0.25~0.5g， 口服，每日3~4次，1日量不超过2g，疗程10日。③阿司 匹林赖氨酸粉针剂：每次1支，每瓶用4mL灭菌注射用水 或0.9%氯化钠注射液溶解后，肌内注射，每日1~2次。
流行性感冒 诊疗指南(课件PPT)
主讲：XX
20XX年X月X日
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传 染病，为我国法定管理的丙类传染病。流感病毒分为甲、 乙、丙3型，甲型流感病毒极易变异，故常引起暴发流行。 传染源主要是病人和隐性感染者，通过空气和飞沫传染。 小儿、老年人、体弱者易并发肺炎。本病属中医“时行感 冒”范畴，乃时令疫病之邪侵及肺卫，使肺卫失宣，肺气 壅闭而出现的疫病类疾病。
流感病毒 PPT课件
呼吸道感染病毒
包括正粘病毒科 流行性感冒病毒 副粘病毒科 呼吸道合胞病毒、麻疹病毒 其他呼吸道病毒 腺病毒
主要以呼吸道为侵入门户
对粘蛋白具有特殊亲和力的 一类RNA病毒
1
（一）流行性感冒病毒 influenza virus
流行性感冒flu
与普通感 冒的区别
Common cold
It used to be thought that the disease was caused by a bad influence from the heavens.
M1 protein
type A, B, C : NP, M1 protein sub-types: HA or NA protein
8
神经氨酸酶NA
12
14
一、生物学性状
（一）形态与结构 （二）抗原性与分型 （三）抗原性变异与流行
17
生物学性状
（二）抗原性与分型
• 1、内部抗原（核蛋白和内膜蛋白） • 抗原性稳定，分甲A、乙B、丙C三型 • 2、表面抗原： HA、NA
达非是由瑞士罗氏制药研制的抗病毒药。它主 要通过抑制流感病毒的基本表层结构-----神经氨酸酶 来治疗流感。
达非不仅适用于各型流感的治疗，如果能在出 现流感症状前及早服用，还可以预防流感，由于达 菲的副作用少，耐受性良好，与其他药物相互作用 的可能性也很小，所以非常安全。
45
罗氏揭秘达菲配方：八角+炸药
5
流感病毒
生物学性状 致病性
预防与治疗
6
生物学性状
问题？？？
H5N1
7
病毒
核心
RNA 分节段 核蛋白
RNA多聚酶
衣壳 M1蛋白
包括正粘病毒科 流行性感冒病毒 副粘病毒科 呼吸道合胞病毒、麻疹病毒 其他呼吸道病毒 腺病毒
主要以呼吸道为侵入门户
对粘蛋白具有特殊亲和力的 一类RNA病毒
1
（一）流行性感冒病毒 influenza virus
流行性感冒flu
与普通感 冒的区别
Common cold
It used to be thought that the disease was caused by a bad influence from the heavens.
M1 protein
type A, B, C : NP, M1 protein sub-types: HA or NA protein
8
神经氨酸酶NA
12
14
一、生物学性状
（一）形态与结构 （二）抗原性与分型 （三）抗原性变异与流行
17
生物学性状
（二）抗原性与分型
• 1、内部抗原（核蛋白和内膜蛋白） • 抗原性稳定，分甲A、乙B、丙C三型 • 2、表面抗原： HA、NA
达非是由瑞士罗氏制药研制的抗病毒药。它主 要通过抑制流感病毒的基本表层结构-----神经氨酸酶 来治疗流感。
达非不仅适用于各型流感的治疗，如果能在出 现流感症状前及早服用，还可以预防流感，由于达 菲的副作用少，耐受性良好，与其他药物相互作用 的可能性也很小，所以非常安全。
45
罗氏揭秘达菲配方：八角+炸药
5
流感病毒
生物学性状 致病性
预防与治疗
6
生物学性状
问题？？？
H5N1
7
病毒
核心
RNA 分节段 核蛋白
RNA多聚酶
衣壳 M1蛋白
微生物实验十 流感病毒的分离培养 PPT课件
• （二）、接种样本 • 将标记好的鸡胚的气室朝上放置在照蛋器上。 • （2）用75％酒精消毒鸡胚，用无菌镊子在气室 端钻孔，再无菌眼科剪剪开10x6mm窗口。 • (3)用注射器吸800µl标本。 • (4)从窗口中滴入无菌的液体石蜡，轻轻晃动鸡胚， 让液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯 下即可清楚的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺 入胚胎的鄂下胸前，用针头轻轻拨动下颚及腿， 当进入羊膜腔时，能看到鸡胚随着针头的拨动而 动，即可注射200µl标本。将针头退出至½ 寸，将 另外200µl标本注入鸡胚尿囊腔。每个样本接种2全装置中 • (6)用消毒过的医用胶布封口 • (7)33～35oC 温箱培养鸡胚2～3 天。临床 采样标本通常培养3天，病毒传代通常培养 2天。 • 注意：鸡胚进行病毒分离培养时，每天检 查鸡胚生长情况，24小时内死亡的鸡胚， 认为是非特异死亡应弃去
+++”：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不
二、流感病毒分离之鸡胚培养法
• （一）、检视标记鸡胚 • （1）用照蛋灯检视鸡胚，判断鸡胚状态 • 血管：活胚血管清晰；死胚模糊，成淤血带 或淤血块 • 胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动 • 绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊 膜与鸡胚 • 胎的另一面形成明显的界限 • （2）标记出鸡胚的气室与尿囊的界限 • （3）如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发 育不全、或表面有好多渗水孔，应弃掉
• • • • •
6、牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液 7、临床样品0.5mL 8、1mL无菌移液管 9、10mL无菌移液管 10、15mL无菌离心管
• • • • •
（三）实验步骤 1、准备病毒生长液 （1）细胞维持液准备 500mL D-MEM液中加入 ①青、链霉素母液 5mL（终浓度达： 100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素） • ②牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL（终浓度： 0.2%） • ③HEPES缓冲液 12.5mL（终浓度： 25mM）
流行性感冒ppt课件 (6)全
29
第五节 人感染高致病性禽流感
二、流行概况
全球概况 1997年5月 香港3个农场发生家禽H5N1流感，该 月在当地从3岁男孩体内分离到H5N1病毒 2003年2月 H5N1病毒开始在部分东南亚国家禽 类中广泛循环，数月内迅速波及8个国家 截至2006年8月23日 全球共报道241例确诊人 禽流感病例，死亡141例
第 二 十 二 章
流行性感冒是一个古老的、第一个实行全球 性监测的、病毒性急性呼吸道传染病。
今后相当长一段时期仍然无法完全控制它的 传播和流行。
随着近年来禽流感疫情的爆发和蔓延，流行 性感冒已越来越成为人们关注的焦点。
2
第一节 病原学 第二节 流行特征 第三节 流行过程 第四节 预防策略与措施 第五节 人感染高致病性禽流感
3
第一节 病原学
流感病毒的基本结构 抗原变异 分类 致病力 免疫力
4
第一节 病原学
一、流感病毒的基本结构
流感病毒属正粘病毒
科，是多形性有包膜病
毒，多为球形，直径80 ～120nm
核糖包膜 : 核糖蛋白 (NP) -RNA (7 or 8 片 断 ) 基质蛋白 (M)
脂质双分子层 血凝素 (HA) 神经氨酸酶 (NA)
21
第四节 预防策略与措施
一、流感的流行病学调查
调查原则 注意研究样本
对从不同地区不同研究样本得来的资料进行综合分析时应特 别注意，差异较大时应分别描述，研究单位宜小不宜大。
临床病例的确诊
无论在平时对流感的监测，还是对流感流行的诊断均须注意 要有明确的诊断依据。
减少错误分类
22
第四节 预防策略与措施
病原上表现出乙型病毒株活动增强，而甲型病 毒株活力相对减弱的趋势
第五节 人感染高致病性禽流感
二、流行概况
全球概况 1997年5月 香港3个农场发生家禽H5N1流感，该 月在当地从3岁男孩体内分离到H5N1病毒 2003年2月 H5N1病毒开始在部分东南亚国家禽 类中广泛循环，数月内迅速波及8个国家 截至2006年8月23日 全球共报道241例确诊人 禽流感病例，死亡141例
第 二 十 二 章
流行性感冒是一个古老的、第一个实行全球 性监测的、病毒性急性呼吸道传染病。
今后相当长一段时期仍然无法完全控制它的 传播和流行。
随着近年来禽流感疫情的爆发和蔓延，流行 性感冒已越来越成为人们关注的焦点。
2
第一节 病原学 第二节 流行特征 第三节 流行过程 第四节 预防策略与措施 第五节 人感染高致病性禽流感
3
第一节 病原学
流感病毒的基本结构 抗原变异 分类 致病力 免疫力
4
第一节 病原学
一、流感病毒的基本结构
流感病毒属正粘病毒
科，是多形性有包膜病
毒，多为球形，直径80 ～120nm
核糖包膜 : 核糖蛋白 (NP) -RNA (7 or 8 片 断 ) 基质蛋白 (M)
脂质双分子层 血凝素 (HA) 神经氨酸酶 (NA)
21
第四节 预防策略与措施
一、流感的流行病学调查
调查原则 注意研究样本
对从不同地区不同研究样本得来的资料进行综合分析时应特 别注意，差异较大时应分别描述，研究单位宜小不宜大。
临床病例的确诊
无论在平时对流感的监测，还是对流感流行的诊断均须注意 要有明确的诊断依据。
减少错误分类
22
第四节 预防策略与措施
病原上表现出乙型病毒株活动增强，而甲型病 毒株活力相对减弱的趋势
流感ppt课件
17
流感的易感人群
• 流感病毒极易变异，感
染后免疫保护维持的时间
不长；
而且，流感病毒的三个
型别之间、以及同型病毒
的亚型之间均无交叉免疫；
所以，人群对流感病毒
普遍易感。
18
发病机制与病理解剖
流感病毒致病的主要机 理是病毒复制引起的细胞 损伤及死亡。
此外，甲、乙型流感病 毒还可以诱导受感染的细 胞发生凋亡。
19
流感病毒可感染呼吸道的所 有各类细胞，并能在内复制。 呼吸道分泌物中的病毒量与疾 病严重程度有关。
外周血白细胞亦可感染流感 病毒，导致趋化性、吞噬作用、 及增殖能力的缺陷，使流感患 者继发细菌感染；继发感染的 细菌又进一步增强病毒的复制。
20
单纯型急性流感病人的喉、 气管、支气管存在广泛的炎症 病变、粘膜损伤和水肿、纤毛 细胞脱落。甚至支气管粘膜上 皮广泛脱落，深及基底层细胞。 病变累及气道越远端，组织的 病理反应就越显著。
流行性感冒
Influenza
1
流行性感冒（influenza）简 称流感，是一种由流感有高度传染 性，几乎每年都会在世界某个 地区爆发流行。
临床特点为起病急，病程短， 有高热、头痛、乏力等显著的 全身中毒症状，但呼吸道症状 相对较轻。
2
流感是一种 古老的呼吸道 传染病。早在 公元前412年， 希波克拉底就 在医学典籍中 记述了与流感 临床特点颇为 类似的呼吸道 疫病流行。 3
10
流感病毒的变异
流感病毒很容易变异，基因组自 发的点突变聚集到一定程度时，即 引起HA和NA抗原漂移（Antigenic drift）。这种在较小程度上发生的 基因变异，每年或每几年频繁发生。
若两种不同亚型毒株感染细胞， 使其基因组发生重组，则可引起抗 原位移（Antigenic shift），导致新 血清型的出现。
流感的易感人群
• 流感病毒极易变异，感
染后免疫保护维持的时间
不长；
而且，流感病毒的三个
型别之间、以及同型病毒
的亚型之间均无交叉免疫；
所以，人群对流感病毒
普遍易感。
18
发病机制与病理解剖
流感病毒致病的主要机 理是病毒复制引起的细胞 损伤及死亡。
此外，甲、乙型流感病 毒还可以诱导受感染的细 胞发生凋亡。
19
流感病毒可感染呼吸道的所 有各类细胞，并能在内复制。 呼吸道分泌物中的病毒量与疾 病严重程度有关。
外周血白细胞亦可感染流感 病毒，导致趋化性、吞噬作用、 及增殖能力的缺陷，使流感患 者继发细菌感染；继发感染的 细菌又进一步增强病毒的复制。
20
单纯型急性流感病人的喉、 气管、支气管存在广泛的炎症 病变、粘膜损伤和水肿、纤毛 细胞脱落。甚至支气管粘膜上 皮广泛脱落，深及基底层细胞。 病变累及气道越远端，组织的 病理反应就越显著。
流行性感冒
Influenza
1
流行性感冒（influenza）简 称流感，是一种由流感有高度传染 性，几乎每年都会在世界某个 地区爆发流行。
临床特点为起病急，病程短， 有高热、头痛、乏力等显著的 全身中毒症状，但呼吸道症状 相对较轻。
2
流感是一种 古老的呼吸道 传染病。早在 公元前412年， 希波克拉底就 在医学典籍中 记述了与流感 临床特点颇为 类似的呼吸道 疫病流行。 3
10
流感病毒的变异
流感病毒很容易变异，基因组自 发的点突变聚集到一定程度时，即 引起HA和NA抗原漂移（Antigenic drift）。这种在较小程度上发生的 基因变异，每年或每几年频繁发生。
若两种不同亚型毒株感染细胞， 使其基因组发生重组，则可引起抗 原位移（Antigenic shift），导致新 血清型的出现。
2024版流感PPT模板
流感病毒变异监测和预警系统建设
全球流感病毒监测网络
建立全球性的流感病毒监测网络，实 时跟踪病毒变异情况，为疫苗研发和 防控策略提供科学依据。
生物信息学分析
利用生物信息学方法对流感病毒基因 组数据进行分析，预测病毒变异对疫 苗和药物效果的影响。
高通量测序技术
应用高通量测序技术对流感病毒基因 组进行快速、准确的测序，揭示病毒 变异规律和趋势。
潜伏期
一般为1-7天，多数为2-4 天。
典型症状
突发高热、头痛、全身酸 痛、乏力及呼吸道炎症症 状，如咳嗽、咽痛等。
特殊人群症状
老年人、儿童、孕妇及慢 性病患者可能表现为更为 严重的症状。
并发症与重症患者识别
并发症
流感可能并发肺炎、中耳炎、心肌炎、脑膜炎等。
重症患者识别
持续高热、呼吸困难、神志改变、严重呕吐与腹泻等，需警惕发展为重症。
02
03
深入分析了流感病毒的特点和传 播途径，提出了有效的预防措施 和应对策略。
04
当前存在问题和挑战分析
流感病毒变异能力强，疫苗研发和生产面临巨 大挑战。
流感病毒的跨物种传播和重组可能引发新的疫 情。
公众对流感的认知不足，预防措施的执行力度 不够。
医疗卫生系统应对流感大流行的能力有待提高。
未来发展趋势预测及建议
抗病毒药物研发进展
神经氨酸酶抑剂，阻止病毒复制和传播，
降低病毒载量。
RNA聚合酶抑制剂
02
开发针对流感病毒RNA聚合酶的抑制剂，干扰病毒基因组的转
录和复制过程。
中药抗病毒研究
03
挖掘中药中具有抗病毒活性的成分，研究其在流感治疗中的应
用前景和机制。
免疫疗法在流感治疗中应用前景
2024流行性感冒ppt医学课件
流行性感冒ppt医学课件•流行性感冒概述•流行性感冒病毒学•流行性感冒预防与控制策略•流行性感冒临床治疗与护理目录•流行性感冒疫情监测与报告制度•流行性感冒科普知识宣传与教育01流行性感冒概述定义与特点定义流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有高度的传染性和快速的传播速度。
特点流感病毒的遗传特点决定了其易发生变异，人群普遍易感，且病后免疫力不持久，使得流感成为重要的公共卫生问题。
流感患者和隐性感染者是主要的传染源，从潜伏期末到急性期都有传染性。
传染源主要通过空气传播，如咳嗽、打喷嚏等方式将病毒传播给周围人群。
传播途径人群普遍易感，但老年人、儿童、孕产妇及患有慢性基础疾病的人群更易感染。
易感人群流感具有季节性，北半球通常在冬季流行，而南半球则在夏季。
此外，流感的流行还具有一定的周期性。
流行特征流行病学特征临床表现与分型临床表现流感潜伏期一般为1-7天，多为2-4天。
主要表现为高热、头痛、乏力、全身肌肉酸痛等中毒症状，而呼吸道症状相对较轻。
临床分型根据临床表现，流感可分为单纯型、胃肠型、肺炎型和中毒型。
其中，单纯型最为常见，表现为急性起病、高热、头痛、乏力等；胃肠型以恶心、呕吐、腹泻等症状为主；肺炎型多见于老年人、儿童或原有心肺疾病的人群，主要表现为高热持续不退、咳嗽、气促等症状；中毒型则表现为高热、休克、呼吸衰竭等严重症状。
诊断标准及鉴别诊断诊断标准根据流行病学史、临床表现及实验室检查结果进行诊断。
具体标准包括：近期内有流感流行地区居住或旅行史；出现流感样症状；实验室检查如病毒分离、血清学检测等结果阳性。
鉴别诊断流感需要与普通感冒、上呼吸道感染、肺炎等疾病进行鉴别。
其中，普通感冒症状较轻，无明显的季节性；上呼吸道感染则以局部症状为主，如鼻塞、流涕等；肺炎则可出现咳嗽、咳痰等呼吸道症状及肺部实变体征。
通过详细的病史询问、体格检查和实验室检查，可以对这些疾病进行有效的鉴别。
02流行性感冒病毒学呈球形或丝状，直径约80-120nm ，有包膜。
流感课件分享-医学PPT
流感的临床诊治
流感的临床诊治包括病情评估、病史询问、实验室检查和影像学检查等，以确定病情严重程度和制定相应治疗 方案。
流感疫苗的种类及接种方法
流感疫苗种类
包括全病毒疫苗、亚单位疫苗和重组疫苗，每年根 据流行病学数据进行选取。Fra bibliotek接种方法
可通过皮下注射或鼻腔喷雾来接种流感疫苗。接种 疫苗是预防流感的重要措施。
流感课件分享-医学PPT
流感（也称为季节性流行性感冒）是一种高度传染的呼吸疾病，由流感病毒 引起。本课件将全面介绍流感的各个方面，包括病毒种类、传播途径、症状、 诊治、防治措施等。
什么是流感？
流感是一种高度传染的呼吸道疾病，由流感病毒引起。其症状包括发热、咳 嗽、喉咙痛、鼻塞、乏力和肌肉疼痛。严重的流感可能导致死亡。
紧急响应
建立应急响应机制，及时监测病情，组织救治 和应对紧急情况。
信息通报
加强疫情信息公开与交流，提供及时准确的防 控指导和指示。
社区控制
实施社区隔离、医学观察和封控措施，限制疫 情扩散。
资源调配
合理配置医疗资源，确保医疗救治能力和物资 供应。
流感在世界范围内的流行情况及趋势
流感在全球范围内广泛流行，季节变化和病毒变异会影响流感的传播和疫情严重程度。持续监测和预测流感的 流行情况对全球公共卫生具有重要意义。
流感的防治与预防措施
1
公共卫生措施
2
加强流感监测、提高大众防治意识，推
行集中隔离和健康教育，加强医疗服务
和紧急响应能力。
3
个人防护
勤洗手、戴口罩、避免人群拥挤，注意 健康饮食和充足睡眠，加强体育锻炼提 升免疫力。
疫苗接种
推广流感疫苗接种，特别是对易感人群， 以减少感染人数和疾病的严重程度。
流感病毒及实验室检测
流感病毒及实验室检测
汇报人： 日期:
目录
• 流感病毒概述 • 流感病毒的实验室检测方法 • 实验室检测流程与规范 • 流感病毒的变异与进化 • 流感病毒的防治与未来展望 • 相关案例分析
01
流感病毒概述
Chapter
病毒类型与特点
流感病毒属于正粘病毒科，具有包膜、分节段和基因组 等特点。
根据病毒核蛋白和基质蛋白的不同，流感病毒可分为甲 、乙、丙三型，每型又根据病毒的抗原性不同分为若干 亚型。 流感病毒的遗传物质为RNA，具有高变异性，易引起病 毒株的变异和流行。
03
对于流感患者，应 及时隔离和治疗， 以减少病毒的传播 。
04
针对易感人群和高 危人群，可采取抗 病毒药物预防和治 疗。
02
流感病毒的实验室检测方法
Chapter
抗原检测
01
02
03
直接免疫荧光法
利用特异性抗体标记荧光 素，直接检测样本中的流 感病毒抗原。
间接免疫荧光法
将样本与特异性抗体结合 ，再与荧光素标记的抗抗 体结合，检测流感病毒抗 原。
规范操作
实验操作应严格按照实验室规范进行 ，防止因操作不当导致的病毒感染或 实验室事故。
04
流感病毒的变异与进化
Chapter
病毒变异类型与特点
抗原性变异
导致病毒的表面抗原结构发生变 化，从而产生新的病毒株。这种 变异是随机的、不定向的，并可 能导致病毒逃逸免疫系统的识别
和攻击。
宿主适应性变异
使病毒能够在不同的宿主环境中 生存和传播。这种变异通常涉及 到病毒的基因组中的多个位点， 并可能导致病毒对特定宿主产生
更强的致病性。
耐药性变异
使病毒对特定的抗病毒药物产生 抵抗力。这种变异通常是由于病 毒基因组中的突变积累所致，并 可能导致病毒对多种药物产生耐
汇报人： 日期:
目录
• 流感病毒概述 • 流感病毒的实验室检测方法 • 实验室检测流程与规范 • 流感病毒的变异与进化 • 流感病毒的防治与未来展望 • 相关案例分析
01
流感病毒概述
Chapter
病毒类型与特点
流感病毒属于正粘病毒科，具有包膜、分节段和基因组 等特点。
根据病毒核蛋白和基质蛋白的不同，流感病毒可分为甲 、乙、丙三型，每型又根据病毒的抗原性不同分为若干 亚型。 流感病毒的遗传物质为RNA，具有高变异性，易引起病 毒株的变异和流行。
03
对于流感患者，应 及时隔离和治疗， 以减少病毒的传播 。
04
针对易感人群和高 危人群，可采取抗 病毒药物预防和治 疗。
02
流感病毒的实验室检测方法
Chapter
抗原检测
01
02
03
直接免疫荧光法
利用特异性抗体标记荧光 素，直接检测样本中的流 感病毒抗原。
间接免疫荧光法
将样本与特异性抗体结合 ，再与荧光素标记的抗抗 体结合，检测流感病毒抗 原。
规范操作
实验操作应严格按照实验室规范进行 ，防止因操作不当导致的病毒感染或 实验室事故。
04
流感病毒的变异与进化
Chapter
病毒变异类型与特点
抗原性变异
导致病毒的表面抗原结构发生变 化，从而产生新的病毒株。这种 变异是随机的、不定向的，并可 能导致病毒逃逸免疫系统的识别
和攻击。
宿主适应性变异
使病毒能够在不同的宿主环境中 生存和传播。这种变异通常涉及 到病毒的基因组中的多个位点， 并可能导致病毒对特定宿主产生
更强的致病性。
耐药性变异
使病毒对特定的抗病毒药物产生 抵抗力。这种变异通常是由于病 毒基因组中的突变积累所致，并 可能导致病毒对多种药物产生耐
流感的病毒分离和鉴定知识培训课件
分离后病毒的保存与运
低温保存
将分离到的病毒保存在低温环境 下，如-70℃或液氮中，以保持病 毒的活性。
包装与运输
根据国家相关规定，对病毒样本 进行包装和运输，确保安全可靠 。
分离技术的优缺点
细胞培养法的优点是操作简便、敏感性高，缺点是细胞株的来源和质量可能影响实 验结果。
鸡胚接种法的优点是操作简便、成本低，缺点是鸡胚的来源和质量可能影响实验结 果。
碎片。
病毒分离
将处理后的样本接种到敏感细胞 或鸡胚中，进行病毒的分离培养
。
病毒鉴定
通过病毒形态观察、免疫学检测 、核酸检测等方法对分离的病毒
进行鉴定。
实验操作中的常见问题与处理
样本污染
在实验操作过程中，要严格控制样本 的采集、运输和预处理，避免交叉污 染。如发生样本污染，应立即停止实 验，重新采集样本。
病毒鉴定的应用场景与选择
总结词
根据不同的应用场景选择合适的鉴定方法。
详细描述
在流感病毒的分离与鉴定过程中，应根据实际需求和应用场景选择合适的鉴定方法。形态学鉴定方法简单、快速 ，适用于初步筛选；免疫学鉴定方法特异性强、灵敏度高，适用于病毒抗原和抗体的检测；分子生物学鉴定方法 准确度高、分型能力强，适用于病毒核酸序列的分析。
免疫学方法的优点是灵敏度高、特异性强，缺点是抗体试剂的质量和实验操作可能 影响实验结果。
03
流感病毒鉴定技术
形态学鉴定
总结词
通过观察病毒形态、大小、染色特性 等指标，对病毒进行初步鉴定。
详细描述
形态学鉴定通常采用显微镜观察病毒 粒子，了解其形状、大小、染色特性 等特征，从而对病毒进行初步分类和 鉴定。
的竞争力。
法律法规要求
流行性感冒ppt课件 (9)全
21
三.实验室检查 1.WBC正常或↓， LC ↑ 2.从病人鼻咽分泌物中分离到流感病毒 3.恢复期血清抗体效价4倍以上↑ 4.呼吸道上皮细胞病毒抗原检查阳性 5.呼吸道分泌物检测病毒核酸阳性
22
诊断分类
疑似病例 流行病学+临床症状
确诊病例 流行病学+临床症状+实验室2、3、 4、5中一条
23
1.空气飞沫传播为主 2.污染的日用品传播
9
三.易感人群
➢ 普遍易感，病后有一定免疫力 ➢ 三型流感之间、甲型流感不同亚型之间无交叉
免疫，可反复发病。
10
四.流行特征
(一)流行特点突然发生 迅速蔓源自 发病率高 流行期短 常沿交通线传播
(二)流行的一般规律
先城市后农村 先集体单位后分散居民
11
重 ➢ 用法：分2次口服 疗程3-4天 ➢ 副作用：口干、头晕、嗜睡、共济失调
29
甲基金刚烷胺（金刚乙胺） ➢ 用量 100-200mg/天 ➢ 用法 分2次口服 ➢ 注意：1.孕妇、精神异常、肝肾功能严重损
害者禁用上述二种药。 2. 耐药
（二）神经氨酸酶抑制剂 澳司他韦等
30
三.治疗各种并发症 四.中药 ➢ 风热型 银翘解毒丸 板兰根冲剂 ➢ 风寒型 葱豉汤 荆防败毒饮加减
4
病原学
流感病毒 ➢ 属于正粘病毒科，球型 ➢ 直径80-120nm，为RNA病毒 ➢ 流感病毒特点：容易发生病毒变异
5
流感病毒分型 ➢ 甲型 最易变异，可感染人和多种动物，
为人类流感的主要病原，常引起大 流行和中、小流行。 ➢ 乙型 变异较弱，仅感染人类。可引起局部暴 发或小流行。 ➢ 丙型 病毒抗原较稳定，仅感染人类，多引起散发 病例。
三.实验室检查 1.WBC正常或↓， LC ↑ 2.从病人鼻咽分泌物中分离到流感病毒 3.恢复期血清抗体效价4倍以上↑ 4.呼吸道上皮细胞病毒抗原检查阳性 5.呼吸道分泌物检测病毒核酸阳性
22
诊断分类
疑似病例 流行病学+临床症状
确诊病例 流行病学+临床症状+实验室2、3、 4、5中一条
23
1.空气飞沫传播为主 2.污染的日用品传播
9
三.易感人群
➢ 普遍易感，病后有一定免疫力 ➢ 三型流感之间、甲型流感不同亚型之间无交叉
免疫，可反复发病。
10
四.流行特征
(一)流行特点突然发生 迅速蔓源自 发病率高 流行期短 常沿交通线传播
(二)流行的一般规律
先城市后农村 先集体单位后分散居民
11
重 ➢ 用法：分2次口服 疗程3-4天 ➢ 副作用：口干、头晕、嗜睡、共济失调
29
甲基金刚烷胺（金刚乙胺） ➢ 用量 100-200mg/天 ➢ 用法 分2次口服 ➢ 注意：1.孕妇、精神异常、肝肾功能严重损
害者禁用上述二种药。 2. 耐药
（二）神经氨酸酶抑制剂 澳司他韦等
30
三.治疗各种并发症 四.中药 ➢ 风热型 银翘解毒丸 板兰根冲剂 ➢ 风寒型 葱豉汤 荆防败毒饮加减
4
病原学
流感病毒 ➢ 属于正粘病毒科，球型 ➢ 直径80-120nm，为RNA病毒 ➢ 流感病毒特点：容易发生病毒变异
5
流感病毒分型 ➢ 甲型 最易变异，可感染人和多种动物，
为人类流感的主要病原，常引起大 流行和中、小流行。 ➢ 乙型 变异较弱，仅感染人类。可引起局部暴 发或小流行。 ➢ 丙型 病毒抗原较稳定，仅感染人类，多引起散发 病例。
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标本准备 检卵 标本接种于9日龄鸡胚 33℃～35℃培养72小时
鸡胚分离方法-试剂准备
鸡胚分离方法-标记鸡胚
鸡胚分离方法
■ 接种病毒方法
◆ 单腔接种
盲种
◆双腔接种
灯下接种
开窗接种
鸡胚分离流程（1）
◆将标记好的鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，通常每个样 本接种3个鸡胚
◆用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10x6mm 窗口 ◆用注射器吸200µl处理过的临床标本，装上16 号针头 ◆从窗口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让 液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯下即 可清楚 的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺入胚胎的 鄂下胸前， 用针头轻轻拨动下颚及腿，当进入羊膜腔时，能看到鸡胚 随着针头的拨动而动，即可注射100µl标本。将针头退出至 ½ 寸，将另外100 µl标本 注入鸡胚尿囊腔
咽拭子采集
• 咽拭子
•
用灭菌棉签（最好用聚丙烯纤维头的
塑料杆拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，
将棉签头部浸入含3-4ml采集液的管中，尾
部弃去，旋紧管盖。
• 标本采集后应在4℃条件下，尽快（哨点监 测48小时疫情24小时内）运送至流感监测网 络实验室
• 未能送至实验室的，应置-70℃或以下保存， 一周内送实验室
标本的接收
• 接收标本时必须核对送检表 • 流感监测网络实验室的工作人员接到标本
后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例 标本原始登记送检表”（表2）录入到“监 测信息系统”
标本的处理
• 标本送至实验室后，立即进行处理，未加 抗菌素的加入适量的抗菌素。
• 将原始标本一分为三份，一份（1ml）用于
MDCK细胞病毒分离
CPE出现时间与感染病毒的型别、毒株的差 异、感染量的大小和MDCK细胞的敏感性 有关
每日观察细胞病变(CPE) 标本接种后7天还未出现CPE，维持液经HA
试验阴性者，继续盲传1～2代后，HA试验 仍为阴性者，则MDCK细胞病毒分离为阴 性，标本可弃去
细胞病变图
鸡胚病毒分离
荧光PCR结果－可疑样品
病毒分离-MDCK细胞
标本接种MDCK细胞 33－35℃培养 每日观察细胞病变(CPE)
MDCK细胞收获
接种流程
清洗MDCK 细胞
Hank’s液清洗细胞，一般清洗2遍
临床采样标本接种细胞
流
程
33－35度吸附1－2小时
图
Hank’s液清洗细胞
加入病毒生长液，33－35度培养箱培养
核酸检测
荧光定量PCR
荧光定量PCR
荧光定量PCR
• 反应体系和条件
• 试剂：Invitrogen SuperScript® III Platinum® One-Step Quantitative Kit （公司： Invitrogen，货号：11732-020或 11745-100）
– 分子级无菌蒸馏水 (无RNA酶 和DNA酶)
根据使用的细胞瓶的大小，决定接种 量，一般的小细胞瓶接种0.5ml的临 床标本
24小时后，观察细胞病变。当细 胞病变为3+或4+时，即75～100% 细胞出现病变时进行收获，收获 之前将细胞冻融1～2次，以提高 收获标本的病毒滴度。即使无细 胞病变也应该于第7天收获 （细胞 病变情况：细胞病变的特征是细 胞肿胀圆化，细胞间隙增大，细 胞核固缩或破裂，严重时细胞部 分或全部脱落 ）
暴发疫情标本采集
常规
➢咽拭子 ➢鼻拭子 ➢痰液
采集标本类型
特殊
鼻咽/呼吸道吸取物 鼻洗液 呼吸道灌洗液 肺组织活检标本 尸检标本
采样液
• 常用的采样液有：PH 7.4-7.6的Hank’s液或 MEM；
• 标本采集后应立即放入适当的采样液中低 温保存，同时加入抗菌素（入庆大霉素 50 mg/mL，多粘菌素B 250μg/mL ）
– 正反向引物 (40μM) – 双重标记探针(10μM)
• 反应条件：逆转录50℃ 30min→95 ℃ 2min →（95 ℃ 15s → 55 ℃ 30s*）×45
• 反应体系为25ul • 注：*在55 度这一步骤中要收集荧光信号
（FAM）
荧光PCR结果－阳性样品
荧光PCR结果－阴性样品
流感样病例监测标本采集
• 采集对象： 流感样病例
发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者
• 采集时间：病人发病的头3天内采集 • 采集地点：国家级流感样病例监测哨点医院
• 采集数量：根据就诊ILI病例数的多少，每家
哨点医院每周至少采集5～15份流感样病例的
标本(根据流行季节、流行强度、防控工作需要实时 调整）
流感病毒实验室检测技术 及盲样考核结果分析
湖南省疾病预防控制中心
微生物检验科
2013-12-27
流感监测目的
• （一）监测流感活动水平和流行动态；
• （二）及时发现流感病毒变异并作出预警；
• （三）为全球及我国流感疫苗毒株的预测 和推荐提供依据。
流感监测内容
• （一）流感样病例监测 • （二）流感样病例暴发疫情监测
鸡胚分离流程（2）
鸡胚分离流程（3）
鸡胚病毒鉴定
鸡胚收获
HA试验
经HA试验阴性者，将羊水和尿囊液混合，继 续盲传1代（72小时），如仍为阴性，则鸡胚 病毒分离为阴性，标本可弃去
病毒鉴定
• 红细胞凝集 • 红细胞凝集抑制试验
病毒鉴定流程
红细胞凝集试验 4个凝集单位配制“回滴”
红细胞凝集抑制试验 判定流感病毒型别
MDCK细胞接种，一份（1ml）用于鸡胚接
种，一份（1ml）保存待复核。（根据检测 程序实时调整）
实验室检测
◆核酸检测
◆病毒分离和鉴定：鸡胚分离和细胞培养 ◆胶体金快速检测
检测流程
临床标本采集
流感病毒核酸检测阳性
接种MDCK细胞
接种鸡胚
红细胞凝集试验
红细胞凝集抑制试验，鉴定病毒 寄送国家流感中心
红细胞凝集试验（HA）
红细胞
适用范围
终浓度 （％） 孔底部形 状 孵育时间 细胞对照
鸡
流感和禽流 感病毒 0.5（1%）
，倾 斜时细胞向 下流成泪滴 状
• 冻存的标本，尽量避免其反复冻融，在冷 藏条件下送到实验室
实验室生物安全要求
季节性流感病毒分离鉴定在生物安全Ⅱ级 实验室进行。
流感病毒分离鉴定及其它检测过程中所有 能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物 安全Ⅱ级实验室的生物安全柜里操作。
用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生 物安全Ⅰ级实验室进行
鸡胚分离方法-试剂准备
鸡胚分离方法-标记鸡胚
鸡胚分离方法
■ 接种病毒方法
◆ 单腔接种
盲种
◆双腔接种
灯下接种
开窗接种
鸡胚分离流程（1）
◆将标记好的鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，通常每个样 本接种3个鸡胚
◆用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10x6mm 窗口 ◆用注射器吸200µl处理过的临床标本，装上16 号针头 ◆从窗口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让 液体石蜡在鸡胚壳膜内层铺开，此时在照蛋灯下即 可清楚 的看到鸡胚胎的位置。将注射针头刺入胚胎的 鄂下胸前， 用针头轻轻拨动下颚及腿，当进入羊膜腔时，能看到鸡胚 随着针头的拨动而动，即可注射100µl标本。将针头退出至 ½ 寸，将另外100 µl标本 注入鸡胚尿囊腔
咽拭子采集
• 咽拭子
•
用灭菌棉签（最好用聚丙烯纤维头的
塑料杆拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，
将棉签头部浸入含3-4ml采集液的管中，尾
部弃去，旋紧管盖。
• 标本采集后应在4℃条件下，尽快（哨点监 测48小时疫情24小时内）运送至流感监测网 络实验室
• 未能送至实验室的，应置-70℃或以下保存， 一周内送实验室
标本的接收
• 接收标本时必须核对送检表 • 流感监测网络实验室的工作人员接到标本
后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例 标本原始登记送检表”（表2）录入到“监 测信息系统”
标本的处理
• 标本送至实验室后，立即进行处理，未加 抗菌素的加入适量的抗菌素。
• 将原始标本一分为三份，一份（1ml）用于
MDCK细胞病毒分离
CPE出现时间与感染病毒的型别、毒株的差 异、感染量的大小和MDCK细胞的敏感性 有关
每日观察细胞病变(CPE) 标本接种后7天还未出现CPE，维持液经HA
试验阴性者，继续盲传1～2代后，HA试验 仍为阴性者，则MDCK细胞病毒分离为阴 性，标本可弃去
细胞病变图
鸡胚病毒分离
荧光PCR结果－可疑样品
病毒分离-MDCK细胞
标本接种MDCK细胞 33－35℃培养 每日观察细胞病变(CPE)
MDCK细胞收获
接种流程
清洗MDCK 细胞
Hank’s液清洗细胞，一般清洗2遍
临床采样标本接种细胞
流
程
33－35度吸附1－2小时
图
Hank’s液清洗细胞
加入病毒生长液，33－35度培养箱培养
核酸检测
荧光定量PCR
荧光定量PCR
荧光定量PCR
• 反应体系和条件
• 试剂：Invitrogen SuperScript® III Platinum® One-Step Quantitative Kit （公司： Invitrogen，货号：11732-020或 11745-100）
– 分子级无菌蒸馏水 (无RNA酶 和DNA酶)
根据使用的细胞瓶的大小，决定接种 量，一般的小细胞瓶接种0.5ml的临 床标本
24小时后，观察细胞病变。当细 胞病变为3+或4+时，即75～100% 细胞出现病变时进行收获，收获 之前将细胞冻融1～2次，以提高 收获标本的病毒滴度。即使无细 胞病变也应该于第7天收获 （细胞 病变情况：细胞病变的特征是细 胞肿胀圆化，细胞间隙增大，细 胞核固缩或破裂，严重时细胞部 分或全部脱落 ）
暴发疫情标本采集
常规
➢咽拭子 ➢鼻拭子 ➢痰液
采集标本类型
特殊
鼻咽/呼吸道吸取物 鼻洗液 呼吸道灌洗液 肺组织活检标本 尸检标本
采样液
• 常用的采样液有：PH 7.4-7.6的Hank’s液或 MEM；
• 标本采集后应立即放入适当的采样液中低 温保存，同时加入抗菌素（入庆大霉素 50 mg/mL，多粘菌素B 250μg/mL ）
– 正反向引物 (40μM) – 双重标记探针(10μM)
• 反应条件：逆转录50℃ 30min→95 ℃ 2min →（95 ℃ 15s → 55 ℃ 30s*）×45
• 反应体系为25ul • 注：*在55 度这一步骤中要收集荧光信号
（FAM）
荧光PCR结果－阳性样品
荧光PCR结果－阴性样品
流感样病例监测标本采集
• 采集对象： 流感样病例
发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者
• 采集时间：病人发病的头3天内采集 • 采集地点：国家级流感样病例监测哨点医院
• 采集数量：根据就诊ILI病例数的多少，每家
哨点医院每周至少采集5～15份流感样病例的
标本(根据流行季节、流行强度、防控工作需要实时 调整）
流感病毒实验室检测技术 及盲样考核结果分析
湖南省疾病预防控制中心
微生物检验科
2013-12-27
流感监测目的
• （一）监测流感活动水平和流行动态；
• （二）及时发现流感病毒变异并作出预警；
• （三）为全球及我国流感疫苗毒株的预测 和推荐提供依据。
流感监测内容
• （一）流感样病例监测 • （二）流感样病例暴发疫情监测
鸡胚分离流程（2）
鸡胚分离流程（3）
鸡胚病毒鉴定
鸡胚收获
HA试验
经HA试验阴性者，将羊水和尿囊液混合，继 续盲传1代（72小时），如仍为阴性，则鸡胚 病毒分离为阴性，标本可弃去
病毒鉴定
• 红细胞凝集 • 红细胞凝集抑制试验
病毒鉴定流程
红细胞凝集试验 4个凝集单位配制“回滴”
红细胞凝集抑制试验 判定流感病毒型别
MDCK细胞接种，一份（1ml）用于鸡胚接
种，一份（1ml）保存待复核。（根据检测 程序实时调整）
实验室检测
◆核酸检测
◆病毒分离和鉴定：鸡胚分离和细胞培养 ◆胶体金快速检测
检测流程
临床标本采集
流感病毒核酸检测阳性
接种MDCK细胞
接种鸡胚
红细胞凝集试验
红细胞凝集抑制试验，鉴定病毒 寄送国家流感中心
红细胞凝集试验（HA）
红细胞
适用范围
终浓度 （％） 孔底部形 状 孵育时间 细胞对照
鸡
流感和禽流 感病毒 0.5（1%）
，倾 斜时细胞向 下流成泪滴 状
• 冻存的标本，尽量避免其反复冻融，在冷 藏条件下送到实验室
实验室生物安全要求
季节性流感病毒分离鉴定在生物安全Ⅱ级 实验室进行。
流感病毒分离鉴定及其它检测过程中所有 能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物 安全Ⅱ级实验室的生物安全柜里操作。
用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生 物安全Ⅰ级实验室进行