培养基制备技术(PPT)

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培养基配制技术ppt课件

概述
一、微生物的概念及种类
（一）什么是微生物？
是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能观察到的微小生物。
（二）微生物有什么特点？
个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、容易变异等特点
在整堂课的教学中，刘教师总是让学生带着问题来学习，而问题的设置具有一定的梯度，由浅入深，所提出的问题也很明确
二、微生物与人类的关系
• 绝大多数微生物对人和动植物是有益的，有些则是必需的。
自然界中N、C、S等元素循环
有少数微生物能引起人类和动、植物的病害
工业,微生物应用于食品、皮革、纺织、石油、化工、冶金等
污水处理,利用微生物降解有机磷、氰化物等
农业,以菌造肥, 以菌催长,以菌防病,以菌治病
在整堂课的教学中，刘教师总是让学生带着问题来学习，而问题的设置具有一定的梯度，由浅入深，所提出的问题也很明确
• 抑制剂
培养基的类型（作用）
• 作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率
• 种类：
• 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）。
• 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、玫瑰红。
回顾
• 微生物培养基的类型 • 微生物培养基配制原则、配制步骤 • 常用的几种培养基的适用微生物 • 牛肉膏蛋白胨培养基中琼脂的作用
在整堂课的教学中，刘教师总是让学生带着问题来学习，而问题的设置具有一定的梯度，由浅入深，所提出的问题也很明确
培养基的类型
按物理性状划分：
• 固体培养基：适合于菌种和孢子的培养和保存，也用于有子实体的真菌类（香菇、白木耳）的生产

培养基配制技术—培养基的制备

3.调pH
在未调pH 前，先用精密pH 试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 1mol ／L NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH 试纸测其pH，直至 pH 达 7.4～7.6。反之，用 1mol／L HCl 进行调节。对于要求pH 较精确的培养基，其pH 的调节常用酸度计进行。 pH 调节不要过头，以避免回调而影响培养基内各物质的浓度。 4.过滤
谢谢
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g， NaCL5.0g，琼脂15～20g，水1000ml ，pH 7.4～7.6 。其中牛肉膏提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，而NaCL提供无机盐，在配制固体培养基时需要加入一定量琼脂作凝固剂，如果配制液体培养基则不用加入琼脂。
将灭菌的试管培养基冷至 50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24～ 48h，检查确实无菌生长方可使用。
谢谢
PDA培养基配方：
马铃薯 200克、葡萄糖 20克、琼脂 15～20克、自来水 1000毫升、自然pH。
二、控制营养物质的浓度和比例营养物质浓度过低不能满足微生物正常生长所需，太高则可能
对微生物产生毒害，如高浓度的无机盐、重金属离子等会抑菌或杀菌。因此，营养物质合适的浓度是微生物生长发育的必要条件之一。在生产过程中，在不影响微生物的生理特性和代谢转化率的情况下，通常趋向在较高浓度下进行生产，以提高产物产量，并尽可能选育高渗透压的生产菌株。当然，培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量降低。

培养基的配制

• 加热灭菌
• 干热灭菌 • 湿热灭菌
• 过滤除菌 • 辐射灭菌
• 放射线辐照灭菌 • 紫外线灭菌
• 化学药品灭菌
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一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
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过滤除菌
定无菌生长，方可使用。
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几种常用培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：
牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g
NaCl 水 pH
5.0g 1000ml 7.4～7.6。
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高氏Ⅰ号培养基配方如下：
可溶性淀粉
20g
NaCl
0.5g
KNO3 K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O
• 碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、蛋白质、核酸合成。
• 氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋白质、核酸合成。
• 能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能。
• 生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。 • 无机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。 • 水分：水是保证生命活动重要的介质。
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 • 调pH值：用1MNaOH或1MHCl调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 • 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确
琼脂

细菌培养基的制备灭菌及接种培养技术(共34张PPT)

2.半合成培
养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
从培养基的物理状态可分为
1.
液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。
2.固体培养
基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。
3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法：不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。
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第二部分细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求
实验材料
实验程序
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目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从而获得若干种细菌纯培养技能。掌握几种接种技术。
注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。 4. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待温度计指示温度为100℃时关闭排气阀；或当排出的蒸气相当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌） 22) ，延长时间。
6. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内剩余水。 7. 待培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。
④ 取对照无菌培养皿，倒平板待凝固后，打开皿盖10min后盖上，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。
其它：接种环、酒精灯、恒温箱。实验程序4
（培养基和玻璃器材等的灭菌）
① 取10套无菌培养皿编号， 10－4、10－5、10－6各3个，另一个为空气对照。

培养基的配制和灭菌-

三.实验步骤—培养基的配制
4．灭菌 ❖ 将上述培养基以0.103Mpa,121℃,20min高压蒸气灭菌. 5. 搁置斜面 ❖ 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太
多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 6.到固体平板
❖ 将灭菌培养基降温50℃，到固体平板。
谢谢大家
三.实验步骤—培养基的配制
二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、
培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）
配方：
❖ 营养肉汤
1.8g
❖ 琼脂
2g
❖ 固体培养基
2%L
三.实验步骤—培养基的配制
1. 斜面的制备
❖ 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中先加入200 ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g 加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，
灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞
三.实验步骤—高压蒸汽灭菌
❖ 3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
❖ 4. 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭菌。
每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起做）。加塞，包扎后，灭菌。
❖ 注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。

培养基的制备-PPT课件

半合成培养基
既含有同天然成分化学成分又含有纯化学成分
在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%
按物理状态不同划分
固体培养基半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定

7)所用原料尽可能减少对发酵过程中通气搅拌的影响，利于提高氧的利用率，降低能耗。

(8)有利于产品的分离纯化，并尽可能减少产生“三废”的物质。
注意的几个问题。

根据不同微生物的营养需要营养成分的恰当比例渗透压 pH值氧化还原电位
培养基中的碳氮的比例（C/N）在发酵工业中尤为重要。
按使用目的不同划分
鉴别培养基
用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化
是供制备孢子用的培养基
按用途不同划分
孢子培养基种子培养基
满足菌种生长的培养基
发酵培养基
满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累的营养基质
液体培养基
不加任何凝固剂大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究
牛肉膏蛋白胨培养基是最常含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基用的基础培养基基础培养基加富培养基选择培养基
在培养基中加入相应的特殊营养物质用来将某种或某类微生物从混杂的或化学物质，抑制不需要的微生物的微生物群体中分离出来的培养基生长，有利于所需微生物的生长特殊营养物质包括血液、血清、酵在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基母浸膏、动植物组织液等

培养基的制备及消毒与灭菌ppt实用资料

《基础生物学实验》精品课程
• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。
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不能灭菌的物质：
• 硝化丙烷、硝化甘油、硝化纤维，含氮硅酯。 • 三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性
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牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基；
❖ 牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素；
❖ 蛋白胨主要提供氮源和维生素； ❖ NaCl提供无机盐； ❖ 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝
固剂； ❖ 用稀酸稀碱将其pH调至中性或微碱性。
• 要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则会引起装置故障、起火、短路。
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一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa,112.6℃灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可，而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa， 122℃灭菌30min。
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半合成培养基
❖ 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，应用广泛。
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第三章__培养基的制备和灭菌设备PPT课件

KF Tt2
式中：τ1—间接加热时间，h
G—培养基的质量，Kg C1—培养基的比热，kJ/kg.℃ K—总传热系数， kJ/m2.h.℃ F—传热面积，m2 T—加热蒸汽温度，℃ t1—加热前培养基的温度，℃ t2—灭菌温度到灭菌时间） ❖ 维持保温时间：
第三章培养基的制备设备
主要内容：第一节培养基的灭菌设备第二节原料的蒸煮与糖化设备第三节麦芽汁的制备设备第四节淀粉水解制糖设备
学习要求：掌握培养基的分批灭菌计算、连续灭菌流程和设备的结构及设计了解培养基制备设备的结构和设计
.
第一节培养基的灭菌设备
一、灭菌的基本理论二、分批灭菌过程与计算三、连续灭菌流程与设备
罐连接的管道在灭菌过程中如果不进入蒸汽就一定要进行排汽，使所有管道都被加热蒸汽（或二次蒸汽）经过而实现热灭菌 ❖ 进汽：凡开口在培养基液面以下的各连接管道及冲视镜管道都应进汽 ❖ 排汽：凡开口在液面之上者均应排汽 ❖ “三进四出”、“三进五. 出”
冷却降温阶段
❖ 关汽：关闭各排汽、进汽阀门
❖ 通水：向罐夹套或蛇管中通入冷却水降温
❖ 送气：向罐内送入无菌空气，降温不降压
.
（二）分批灭菌特点优点：不需要专门的灭菌设备，投资少；对
设备要求简单，对蒸汽的要求也比较低；操作简单易行，灭菌效果可靠缺点：占罐时间长，发酵罐的利用率低；灭菌所需时间较长，使培养基中营养成分破坏较多；用汽不平衡适用：生产规模较小或极易发泡、粘度较大难以连续灭菌的培养基灭菌
上式积分
NS dNk d
N N0
0
.
对数残留定律 1lnN0 2.30l3gN0
k NS k NS
式中： τ——理论灭菌时间，s

培养基的制备

保养流程
定期对设备进行检查和维护，保持设备处于良好状态；根据设备使用情况更换易损件和润滑油等。
06
包装、储存和运输管理
包装材料选择和封口方式
包装材料选择
应选用无菌、无毒、耐高温、无荧光、密封性好的材料，如玻璃、塑料等。对于需要长时间储存或运输的培养基，应优先考虑使用玻璃瓶包装。
封口方式
封口应严密，以防杂菌污染。常用的封口方式有热压封口、旋盖封口等。对于需要特殊保存条件的培养基，如厌氧培养基，应采用抽真空并充入惰性气体的封口方式。
环境监测要求
定期对无菌室或超净工作台进行微生物监测，确保操作环境符合无菌要求。同时，对制备好的培养基也需进行无菌性检查，确保培养基未被污染。
成分含量检测方法及标准限值
成分含量检测方法
采用化学分析法对培养基中的主要成分进行检测，如氮源、碳源、无机盐等。通过测定这些成分的含量，可以判断培养基的配方是否准确，以及各成分之间的比例是否合适。
培养基的制备
目录
• 培养基概述 • 原料选择与准备 • 制备工艺流程 • 质量控制与检测方法 • 设备选型和操作维护 • 包装、储存和运输管理
01
培养基概述
培养基定义与作用
定义
培养基是一种为微生物、植物或动物细胞的生长、繁殖或维持提供所需营养物质的混合物。
作用
它为细胞提供碳源、氮源、无机盐、生长因子等必需成分，以支持其新陈代谢和生长活动。
灭菌、除菌方法及参数设置
采用高压蒸汽灭菌法，将培养基装入灭菌容器中，设置灭菌温度为121℃ ，灭菌时间为20-30分钟。
对于某些不耐高温的成分，可采用过滤除菌法，使用0.22μm孔径的滤膜过滤除菌。
也可采用干热灭菌法，将培养基装入干热灭菌器中，设置灭菌温度为160170℃，灭菌时间为1-2小时。

培养基优秀PPT讲义

如灰色链霉菌在葡萄糖-硝酸盐-其他盐的培养基上都能很好地生长和产生孢子;但若加入0，5%酵母膏或酪蛋白后;就只长菌体而不产孢子
B所用无机盐的浓度要适量;否则会影响孢子量和孢子颜色，
C注意pH和培养基的湿度，
常用孢子培养基：
◆ 麸皮培养基
◆ 小米培养基
◆ 大米培养基
◆ 玉米碎屑培养基
◆ 用葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制的琼脂斜面培养基
淀粉水解糖的制备是发酵生产的一项
重要工艺，
糖类
葡萄糖乳糖淀粉蔗糖
工业上常用的糖类及来源
来源
纯葡萄糖、水解淀粉纯乳糖、乳清粉大麦、花生粉、燕麦粉、黑麦粉等甜菜糖蜜、甘蔗糖蜜、粗红糖、精白糖等
葡萄糖
最易利用;几乎所有微生物都能利用
葡萄糖常作为培养基的一种主要成分;并且作为加速微生物生长的一种有效糖，
一般种子培养基都用营养丰富而完全的天然有机氮源;因为有些氨基酸能刺激孢子发芽，但无机氮源容易利用;有利菌体的迅速生长;所以在种子培养基中常包括有机氮源和无机氮源，
最后一级的种子培养基的成分最好能较接近于发酵培养基; 这样可使种子进入发酵培养基后能迅速适应;快速生长，
3发酵培养基
供菌体生长、繁殖和合成大量代谢产物用的培养基，
糖蜜主要含有蔗糖;总糖可达50%-75%，
糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜;二者在糖的含量和无机盐的含量上有所不同;即使同一种糖蜜由于加工方法不同其成分也存在差异;因此使用时要注意，
淀粉糊精多糖;也是常用的碳源; 需经胞外酶水解成单糖后再被吸收利用; 使用淀粉可克服葡萄糖代谢过快的弊病;价格也比较低廉;在发酵工业中被普遍使用，常用的淀粉为玉米、甘薯、马铃薯、木薯淀粉，
培养基