培养基的制备技术.
培养基制备的方法
培养基制备的方法培养基是微生物学研究和实验室中微生物的生长和繁殖的基础。
培养基的制备主要分为固态培养基和液态培养基两种形式。
下面我将详细介绍培养基的制备方法。
1. 固态培养基制备方法：a. 准备所需材料：琼脂、食物源（如肉汤、蛋白胨等）、矿物质、维生素、葡萄糖等。
b. 称取适量矿物质、维生素和葡萄糖，并添加到蒸馏水中，溶解成浓缩液。
c. 称取适量肉汤或蛋白胨等食物源材料，并加入蒸馏水中，并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合，并加热搅拌，使其完全溶解，并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养皿中，使用自动灌装机进行灌装。
f. 放入高压灭菌锅中，在121高压下灭菌15-20分钟。
取出后冷却至室温。
g. 检查培养基是否凝固，如凝固则放入冰箱中保存。
2. 液态培养基制备方法：a. 准备所需材料：氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、葡萄糖等。
b. 称取适量氯化钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，并加入蒸馏水中，溶解成浓缩液。
c. 称取适量葡萄糖，并加入蒸馏水中，并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合，并加热搅拌，使其完全溶解，并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养瓶中，并使用自动灌装机进行灌装。
f. 倒入适量培养基后，使用高压灭菌锅进行灭菌。
高压灭菌条件一般为121高压15-20分钟。
g. 取出后冷却至室温，检查液态培养基是否出现浑浊或沉淀物，若有则需要重新制备。
在制备培养基过程中，需要注意以下几个方面：1. 材料选择：根据实验需要，选择适合微生物生长的食物源、矿物质、维生素等材料。
2. 材料溶解：将所需材料称取放入试管或容器中，并加入适量的蒸馏水中进行溶解，加热搅拌加快溶解速度。
3. 浓度调整：根据实验需要和微生物的生长条件，调整培养基材料的浓度，以满足微生物生长的要求。
4. 灭菌处理：使用高压灭菌锅进行灭菌处理，达到高温高压杀灭细菌、真菌和病毒的目的。
灭菌是为了减少外界微生物对培养基的污染，保证实验的准确性和可靠性。
培养基制备的流程
培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。
2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。
3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。
对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。
4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。
一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。
5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。
6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。
7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。
灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。
8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。
9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。
在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。
需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。
同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。
培养基制备技术
6. pH值
培养的植物材料大多 数要求弱酸性环境，在 培养基灭菌前一般都将 pH调整到5.5~6.0之间。 当pH高于6.0时，培养基 会变硬；低于5.0时，琼 脂凝固效果不好。pH 的 测试常用精密pH试纸， 调整通常采用1mol/L盐 酸或1mol/L NaOH。
三、培养基的选择
3.1 在离体培养条件下，不同的植物材料，对 各类营养元素有不同的要求，甚至同一种植物不 同部分的组织对营养的要求也不相同，只有满足
5
贮备液Ⅲ 贮备液Ⅳ
FeSO4· 2O 7H Na2· EDTA· 2O 2H 肌醇
5
烟酸 盐酸吡哆醇（维生素B1）
盐酸硫胺素(维生素B6) 甘氨酸
100 100
20 400
5
3 培养基的配制
（1） 称出规定数量的琼脂和蔗糖，加水直到 培养基最终体积的1/4，在电炉或电磁炉上加热使 之溶解。
培养基的配制
了它们各自的特殊要求，才能使它们的生长取得
令人满意的结果。目前使用的约有上百种。
3.2常用的培养基可分为MS及其类似物培养基
如LS，BL，BM，ER等，可用于大多数植物组
织和细胞的培养；硝酸盐含量较高的培养基
（如B5、N6、SH等）；中等无机盐含量的培
养基（如H、Nitsch、Miller等）；低无机盐培
通过以上实验，常常就足以研制出一种适合的
培养基。
四、培养基的配制
1 准备工作
配制培养基所用的主要器具包括：不同型
号的烧杯、容量瓶、移液管、滴管、玻棒、三
角瓶、试管以及培养基分装器等。配制培养基
前，要洗净备齐所用器具。
配制培养基一般用蒸馏水或无离子水。化
学药剂应采用化学纯CP（三级）及分析纯AR
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基配制技术—培养基的制备
3.调pH
在未调pH 前，先用精密pH 试纸测量培养 基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐 滴加入 1mol ／L NaOH，边加边搅拌，并随时用 pH 试纸测其pH，直 至 pH 达 7.4～7.6。反之， 用 1mol／L HCl 进行调节。对于要求pH 较精确 的培养基，其pH 的调节常用酸度计进行。 pH 调节不要过头，以避免回调而影响培养基内各 物质的浓度。 4.过滤
谢谢
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g， NaCL5.0g，琼脂15～20g， 水1000ml ，pH 7.4～7.6 。其中牛肉膏提供碳源、能源、磷 酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，而NaCL提供 无机盐，在配制固体培养基时需要加入一定量琼脂作凝 固剂，如果配制液体培养基则不用加入琼脂。
将灭菌的试管培养基冷至 50℃左右(以防斜 面上冷凝水太多)， 将试管口端搁在玻棒或其他 合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试 管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24～ 48h，检查确实无菌生长方可使用。
谢谢
PDA培养基配方：
马铃薯 200克、葡萄糖 20克、琼脂 15～20克、 自来水 1000毫升、自然pH。
二、控制营养物质的浓度和比例 营养物质浓度过低不能满足微生物正常生长所需，太高则可能
对微生物产生毒害，如高浓度的无机盐、重金属离子等会抑菌或杀菌。 因此，营养物质合适的浓度是微生物生长发育的必要条件之一。在生 产过程中，在不影响微生物的生理特性和代谢转化率的情况下，通常 趋向在较高浓度下进行生产，以提高产物产量，并尽可能选育高渗透 压的生产菌株。当然，培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量 降低。
培养基的制作方法
培养基的制作方法培养基是微生物学研究中常用的实验材料，用于培养和繁殖微生物。
正确的制备培养基对于保证实验结果的准确性和可重复性至关重要。
本文将介绍培养基的制作方法，以帮助读者掌握正确的制备技巧。
一、准备工作1. 清洗和消毒培养器具：包括量筒、容量瓶、烧杯、培养皿等。
使用去离子水或含0.1%次氯酸钠的消毒液进行清洗和消毒。
2. 准备所需试剂和培养基成分：包括碳源、氮源、无机盐、维生素、生长因子等。
根据实验需要选择合适的配方。
二、制备培养基步骤1. 按照配方计算所需试剂的质量或体积。
精确称量或计量试剂，避免误差。
2. 将所需试剂分别溶解于适量的去离子水中，搅拌均匀。
注意溶解过程中的温度和pH值控制。
3. 将溶解好的试剂倒入容量瓶中，加入适量的去离子水，使总体积达到容量瓶标记线。
再次搅拌均匀。
4. 用适当的容器（如烧杯）接收制备好的培养基。
注意避免污染，避免气泡的产生。
5. 进行高温高压灭菌，通常为121摄氏度，压力为15磅，时间为20分钟。
确保培养基的无菌性。
6. 灭菌后，将培养基倒入培养器具（如培养皿、试管等），根据实验需要分装适量的培养基。
7. 将培养器具密封，避免外界污染。
存放于冰箱或低温冷藏室中，避光保存。
三、常见培养基的制备方法1. 营养琼脂培养基制备方法：a. 按照配方计算所需琼脂的质量。
b. 将琼脂溶解于适量的去离子水中，加热至完全溶解。
c. 加入所需营养成分，如葡萄糖、胰蛋白酶胨等。
搅拌均匀。
d. 倒入容器中，高温高压灭菌后分装。
2. 非琼脂培养基制备方法：a. 按照配方计算所需试剂的质量或体积。
b. 将所需试剂溶解于适量的去离子水中，搅拌均匀。
c. 调整pH值至所需的范围，使用盐酸或氢氧化钠溶液进行调节。
d. 倒入容器中，高温高压灭菌后分装。
四、培养基制备中的注意事项1. 注意实验室的洁净环境，避免外界污染。
2. 注意试剂的质量和纯度，避免影响培养基的质量。
3. 注意培养基的pH值控制，不同微生物对pH值有不同的要求。
普通培养基的制备步骤
普通培养基的制备步骤一、简介培养基是微生物学研究中的重要工具，它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。
普通培养基是最常用的培养基之一，适用于多种细菌和真菌的生长。
下面将介绍普通培养基的制备步骤。
二、原料准备制备普通培养基的首要任务是准备所需的原料。
普通培养基的主要成分包括蛋白胨、胰蛋白胨、蔗糖和琼脂。
这些原料可以在实验室的常备试剂中找到。
另外，还需要准备蒸馏水和试管、烧杯等实验器材。
三、制备步骤1. 称取适量的蛋白胨和胰蛋白胨。
根据所需制备的培养基量来确定称取的重量，通常是根据1L培养基的需求来计算。
将称取好的蛋白胨和胰蛋白胨分别放入烧杯中备用。
2. 加入适量的蔗糖。
蔗糖是普通培养基中的碳源，提供微生物生长所需的能量。
根据实验要求，确定加入的蔗糖量，并将其加入到烧杯中。
3. 加入适量的蒸馏水。
蒸馏水是制备培养基的溶剂，用于将各种原料溶解和稀释。
根据所需制备的培养基量，确定加入的蒸馏水量，并将其缓慢倒入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌均匀，直至溶解。
4. 调节pH值。
使用pH计测量培养基的pH值，通常普通培养基的pH值应在6.8-7.2之间。
根据测量结果，可以使用盐酸或氢氧化钠溶液来调节pH值，直至达到所需范围。
5. 加入琼脂。
琼脂是一种固化剂，用于将培养基凝固成固体状态，方便微生物的生长观察和分离。
将琼脂加入到烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。
6. 灭菌。
将制备好的培养基倒入试管中，每支试管倒入适量的培养基，然后用棉塞或铝箔盖好。
将试管放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理，一般条件下可以选择121℃、15-20分钟的灭菌条件。
7. 储存和使用。
灭菌后的培养基可以保存在冷暗处，避免阳光直射。
使用时，需要将试管取出，加热至琼脂融化后，即可使用。
四、注意事项1. 严格按照制备步骤进行操作，避免污染和误差。
2. 使用蒸馏水和高纯度试剂，以保证培养基的质量和稳定性。
3. 注意灭菌条件的控制，确保培养基的无菌性。
4. 在制备培养基过程中，注意个人防护，避免对身体和环境造成伤害。
制备培养基的操作要点和注意事项
制备培养基的操作要点和注意事项一、制备培养基的操作要点：1.熟化培养基：将适量的培养基用蒸馏水溶解，装入宽口烧瓶或容器中，用布覆盖并进行高压灭菌。
熟化培养基时需要使用高压灭菌器，确保培养基中的细菌等微生物被完全杀灭。
2.添加营养物质：根据所培养的微生物需要的营养物质，将适量的蛋白胨、葡萄糖、矿物盐等溶解于培养基中，并用蒸馏水调整pH值。
注意在添加营养物质时，要根据目标微生物对其需求的了解，以确保培养基中包含了所有必需营养物质。
3.混匀均匀：搅拌培养基时要保持匀速和均匀，避免产生泡沫和液面的震荡。
混匀均匀有助于营养物质的均匀分布，提高细菌等微生物的生长率。
4.测定pH值：培养基的pH值是细菌生长的重要因素之一，通常在6.5-7.5之间。
使用酸碱度计准确测定培养基的pH值，并根据需要进行调整。
过高或过低的pH值都可能影响细菌生长。
5.灭菌：培养基中的细菌、真菌等微生物会影响到目标微生物的生长和繁殖。
因此，在熟化后要进行灭菌处理，常用的方法有高压灭菌、过滤灭菌和化学灭菌等。
在灭菌的过程中要注意操作的严谨，确保培养基中不存在任何的污染源。
6.储存：制备好的培养基在灭菌后，应放置于干燥、阴凉通风处，避免阳光直射。
同时要注意储存方式，避免出现倒置、倾斜等情况，防止培养基发生泄漏。
二、制备培养基的注意事项：1.空气污染：在制备培养基的过程中，要保持操作地点的清洁和物品的无菌状态，避免空气中的细菌、真菌等污染源进入到培养基中。
2.器皿消毒：使用前需要对容器、烧杯、移液器等器皿进行充分消毒，避免残留有杂菌或有机物质。
3.营养物质选择：根据目标微生物的需要，选择合适的营养物质添加到培养基中。
要了解目标微生物对营养物质的需求，合理添加。
4.pH值调整：细菌对pH值的敏感度较高，因此需要精确调整培养基的pH值。
同时，注意pH值的稳定性，避免因为培养条件不合适而引起pH值的变化。
5.消毒处理：在制备培养基、添加营养物质等操作中，要对使用的器械进行彻底的消毒处理，以保证培养基的无菌状态。
制备培养基步骤
制备培养基步骤:第一，用水培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。
第二，称量称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。
第三，复水复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。
为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热。
烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。
对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。
第四，灭菌一般培养基采用湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，通常是121℃15 min，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。
已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。
高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。
高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。
第五，pH测定微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。
培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值，即培养基使用前的pH，并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量，固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。
使用过程中，如果需要调整培养基的pH，应用1mol/L Na0H或lmol/LHCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。
第六，配制好的培养基保存灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。
实验1 培养基的制备技术(讲稿)
实验1 培养基的制备与微生物接种技术一、实验目的1、掌握基础培养基的制造方法和过程。
2、了解人工培养基的主要成分及一般制备原则。
3、了解各种培养基的特点。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖的营养基质。
培养基要具备以下条件：①要有适宜的营养物质和水分；②具有适宜的PH值；③配制后应经灭菌呈无菌状态。
培养基按物理状态可分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
常用琼脂作凝固剂。
培养基制备的基本程序：配料、溶化、测定及矫正PH、过滤、分装、灭菌、无菌检验三、仪器设备试管、刻度吸管、纱布、滤纸、三角瓶、培养皿、量筒、漏斗、棉塞、电炉、天平、包装纸、棉线、ph试纸、玻棒。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂条、0.1mol/L和1mol/L氢氧化钠、0.1mol/L和1mol/L的盐酸溶液、蒸馏水等。
四、配制原则和种类（一）培养基配制原则1、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。
制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。
因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。
换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。
2、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。
一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。
须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。
（二）培养基的种类1、根据营养物质的来源，可以把培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
培养基的制备方法
培养基的制备方法
培养基的制备方法可以根据不同的用途和需要进行调整，但一般步骤如下：
1. 确定培养基的配方：根据需要培养的微生物种类和特性，确定培养基的组成，包括有机物、矿物质、氮源、碳源等。
2. 准备原料：根据配方，准备相应的原料和试剂。
一般使用的有琼脂、葡萄糖、胰蛋白胨、氯化钠等。
3. 称取和混合：按照配方要求，称取适量的原料，并将其混合均匀。
4. 加入溶剂：将混合的原料加入适量的蒸馏水或其他溶剂中，搅拌溶解。
5. 调整pH值：使用pH计测量溶液的pH值，根据需要调整pH值，一般范围为
6.8-
7.2。
6. 灭菌：将调制好的培养基分装入培养瓶或琼脂平板中，使用高压灭菌器或高温灭菌法进行灭菌处理，杀灭其中的微生物。
7. 琼脂平板的制备：将灭菌好的培养基倒入平板中，倾斜平板使培养基均匀摊开，培养基凝固后就可以使用。
8. 储存和保存：将制备好的培养基储存在4下，或根据需要添加适当的防腐剂保存。
需要注意的是，制备培养基时要注意无菌操作，避免进一步污染。
同时，不同的微生物可能需要不同的培养基配方和条件，需根据具体需求进行相应调整。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，保证培养基无菌，为微生物实验提供良好的生长条件。
一、培养基的制备。
1.1 培养基的组成。
培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，通常包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
根据不同微生物的需求，培养基的组成也有所不同。
1.2 制备步骤。
（1）称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等原料；（2）加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（3）调节pH值，通常为7.0-7.2；（4）分装至试管或培养皿中，加入琼脂（如需要固体培养基）；（5）高压蒸汽灭菌15分钟。
二、培养基的灭菌实验。
2.1 灭菌方法。
培养基的灭菌是为了保证培养基中无菌，通常采用高压蒸汽灭菌法。
在高压下，微生物及其孢子、病毒等能够被有效杀灭。
2.2 实验步骤。
（1）将制备好的培养基分装至试管或培养皿中；（2）密封好容器，放入高压灭菌锅中；（3）加水至适当高度，密封锅盖；（4）加热至121摄氏度，压力达到1.05kg/cm2后开始计时，持续15分钟；（5）关火，等待冷却后取出培养基。
实验结果，经过高压蒸汽灭菌处理后，培养基中无任何微生物生长。
证明培养基已达到无菌状态，可以用于微生物的培养和实验。
结论，通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物实验提供了良好的条件。
同时，也加深了对无菌技术的理解和应用。
参考文献：[1] 陈华. 微生物学实验指导. 北京，高等教育出版社, 2015.[2] 王明. 实验室微生物学. 上海，上海科学技术出版社, 2018.以上为培养基的制备与灭菌实验报告。
（文档结束）。
常用培养基的制备技术及应用
实验一常用培养基的制备技术及应用一实验目的要求1 •掌握培养基的概念和分类。
2 •掌握常用培养基制备的一般程序。
3 •熟悉常用培养基的制备技术和用途。
二实验原理培养基（culture medium）是根据微生物生长繁殖所需要的一定比例的营养物质（碳源、氮源等）、氢离子浓度（pH值）以及渗透压等条件，用人工方法制成的无菌营养基质。
主要用于微生物分离培养、生化鉴定和保存菌种等。
培养基按物理性状不同可分为固体、半固体和液体培养基；按性质和用途不同又可细分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基和特殊培养基。
根据物理性状和用途等不同常将培养基分装于试管或平皿等容器中。
常用培养基制备的一般程序是：调配成分溶解较正pH值过滤分装灭菌质量检验保存。
配制培养基时可以按照培养基配方调配各种基本成分，也可购买半成品的商品培养基干粉制剂直接配制。
三器材与试剂1•试剂普通营养琼脂干粉、脱纤维羊血、半固体培养基、SS培养基干粉、克氏双糖铁培养基干粉、1 mol/L NaOH溶液、麦康凯培养基成分（蛋白胨、氯化钠、胆盐、乳糖、5 g/L中性红水溶液、琼脂粉）、蒸馏水。
2•器材小型药物天平、药匙、称量纸、三角烧瓶、量筒、吸管、精密pH值试纸试管、硅胶塞、牛皮纸（或报纸）、棉线、玻璃棒、玻璃纸、无菌平皿、高压蒸汽灭菌锅、微波炉等。
四步骤与方法1 •常用培养基制备的一般程序及方法1）调配成分根据培养基配方或用法，准确计算、称量所需培养基各基本成分或干粉制剂，装于三角烧瓶中，加入定量蒸馏水充分混合。
2）溶解将盛有混合物的三角烧瓶置于沸水浴或流动蒸汽灭菌器中加热溶解，呈半透明状。
3）校正pH值即将培养基pH值校正到适合细菌生长的最适pH值，一般病原菌的最适pH值为7.2〜7.6。
校正培养基pH值的常用试剂有 1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L NaCO3 溶液和1 mol/L HCl溶液（注意：培养基高压灭菌后，用NaOH和HCI校正的pH值会下降0.1〜0.2，而用NaCO3溶液校正的pH值会上升0.1〜0.2）;校正培养基pH值的方法常用精密pH 值试纸法、比色法和电子pH计法等。
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项培养基是微生物学实验研究中必不可少的一部分。
通过适宜的培养基制备，可以提供微生物生长所需的营养物质和环境条件，促进微生物的生长和繁殖。
下面将介绍培养基制备的基本方法和注意事项。
1.选择适当的基质：培养基的基质通常是碳源、氮源和微量元素等。
根据所需要培养的微生物的特点和生活习性，选择适当的基质，例如葡萄糖、蛋白胨、琼脂等。
2.确定培养基性质：根据微生物的需求，调整培养基的酸碱性、温度、湿度等性质，使其符合微生物的生长条件。
3.杀菌处理：使用适当的方法（如高温、紫外线照射、滤过等）杀灭培养基中的有害菌群，使培养基具备无菌状态。
4.添加所需营养物质：根据微生物的需求，向培养基中添加所需的营养物质，如氨基酸、维生素等。
5.调整pH值：根据微生物的需求，调整培养基的pH值，以维持微生物的生长条件。
6.固化培养基：将调整好的培养基倒入培养皿中，待其凝固后，即可用于微生物的培养。
1.严格无菌操作：培养基制备过程中，必须进行严格的无菌操作，避免有害微生物的污染。
2.合理的杀菌方法：为了杀灭培养基中的有害菌群，需要选择合适的杀菌方法，避免对培养基造成不良影响。
3.正确添加营养物质：根据微生物的需求，正确添加营养物质，避免过量或缺乏，影响微生物的生长。
4.注意培养基的保存：制备好的培养基需要保存在干燥、阴凉的环境中，避免潮湿、高温等情况导致其变质。
5.注意培养基的标记：为了方便使用和排查，制备好的培养基应进行明确的标记，标注培养基名称、成分、pH值等信息。
6.根据需求调整培养基：不同的微生物对培养基的要求不同，根据所需要培养的微生物的特点，合理调整培养基的成分和性质。
总结一下，培养基制备是微生物学实验研究中非常重要的一环。
通过选择适当的基质，调整培养基性质，杀菌处理，添加营养物质，调整pH值和固化培养基等步骤，可以得到适合微生物生长的培养基。
在制备培养基时，需要注意严格无菌操作，选择合适的杀菌方法，正确添加营养物质，保存和标记培养基，以及根据微生物的需求调整培养基等因素。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。
一、培养基的制备。
1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。
2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。
3.加入适量琼脂，搅拌均匀。
4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。
二、培养基的灭菌。
1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。
2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。
3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。
4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。
5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。
三、实验结果。
1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。
2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。
3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。
4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。
四、实验结论。
本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。
培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。
通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。
五、实验注意事项。
1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。
2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。
3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。
4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。
六、实验延伸。
在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。
总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌
1. 培养基的制备
制备培养基需要先准备好各种化学试剂，并按照配方将其称量、混合。
通常情况下，培养基的配方会包括以下成分：碳源、氮源、矿物质、维生素等。
其中，碳源可以是葡萄糖、蔗糖等简单的单糖或复糖；氮源可以是氨基酸、蛋白胨等；矿物质可以是磷酸盐、镁盐、钙盐等；维生素可以是叶酸、核黄素等。
将配制好的各种化学试剂按照配方溶解在蒸馏水中，制得液体培养基。
根据不同的需求，还可以将液体培养基加入琼脂糖等凝胶剂制成固体培养基。
2. 培养基的灭菌
培养基的灭菌是为了保证培养基中不含有任何杂菌或细菌，避免其对微生物学实验结果产生影响。
常用的灭菌方法有以下几种：
(1) 煮沸法：将液体培养基放入自减压锅或常压锅内进行煮沸，时间一般为20-30分钟，可杀死绝大多数的细菌和孢子。
(2) 高压灭菌法：将液体培养基放入压力灭菌锅内，压力升至1.5kg/cm2，温度达到121℃，时间一般为15-20分钟。
(3) 紫外线灭菌法：将液体培养基放入紫外线灯下，辐照时间一般为30-60分钟，可以杀灭一部分的细菌和孢子。
(4) 过滤灭菌法：利用过滤膜过滤液体培养基，可杀灭微小的细菌和病毒。
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培养基的制备技术
1、制备培养基的准备工作
(1)仪器用具的准备
烧杯、玻棒、台称、吸管、玻璃漏斗、试管、三角瓶、电炉、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、铝锅、恒温箱、干燥箱、无菌室等都是制作培养基不可缺少的仪器用具，事先必须准备齐全。
(2)玻璃器皿的清洗
玻璃器皿的清洁度，直接影响到实验结果是否准确。
因此，要求所用的玻璃器皿必须洗涤后才能使用。
洗涤的方法及所用洗涤剂因目的不同而异。
一般新玻璃器皿可用2%盐酸浸泡1～2小时，再用水冲洗干净；一般玻璃器皿（如试管、三角瓶、培养皿等）先用毛刷及洗衣粉去污垢、无机盐等物质，然后再用水冲洗干净；少数实验室要求清洁度较高的器皿，可先放在洗液中浸泡数十分钟，在用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗2～3次，以水在器壁上均匀分布成一薄层而不出现水珠时，为油垢除尽的标志；玻璃器皿用过之后，在未干之前应立即洗涤；带菌的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌后再洗涤。
培养皿经洗刷晾干后，配成套，5～10套为一包，用旧报纸包扎，干热灭菌后备用。
2、培养基制备的过程
配料→溶解→校正PH值→加琼脂融化→过滤→分装→加棉塞，包扎→灭菌
(1)用具的选择
制备培养基首先要选择合适的用具，不能用铜铁器皿，以免铜锈、铁锈混进培养基中。
一般可用搪瓷缸或铝锅等。
(2)配料溶解
容器中先盛所需量的水（按需要可为蒸馏水或自来水），然后按照培养基的配方，准确称取各种原料，依次加入，使之溶解。
一些不易称量的成分，如牛肉膏比较粘稠，可先称好一根玻棒和烧杯，再用玻棒取牛肉膏放在烧杯中一起称。
有些需要量甚微的药品，可先配成定量比的稀释液，再从中定量取出需要的量。
(3)调节pH值
除培养基配方为自然pH值，配制时不用调节pH值外，其它皆需按要求调节pH 值。
调节pH值必须待加入水中的物质全部溶解并冷却至室温时才可进行。
调节前先用
精密pH试纸测定所配得溶液的pH值，然后根据配方所要求的pH值确定加碱还是加酸来调节pH值。
所用酸一般为1mol/LHCl溶液，碱为1mol/LNaOH溶液。
调节时要小心，逐滴加碱或酸，且要边加边搅，防止局部过酸或过碱而破坏培养基的营养价值，尽量不要调过头。
(4)固体培养基制备
如需配成固体培养基，应将适量琼脂投入所配的溶液中，加热使其全部融化。
琼脂完全融化后，要加热水补足所蒸发的水分。
(5)过滤
可用二层纱布中间加脱脂棉趁热过滤，如气温低容易凝固可用保温漏斗。
(6)分装
趁热用玻璃漏斗或保温漏斗将培养基按需要分装于试管或三角瓶内。
管口或瓶口不能粘附培养基，以免引起污染。
装入试管的培养基的量一般为试管高度的1/5～1/4，装入三角瓶内的培养基的量一般为瓶容量的1/3。
(7)加棉塞，包扎，灭菌
为了避免试管和三角瓶中的培养基被污染，又能使培养的微生物获得必要的氧气，因此管口和瓶口要用棉花塞加封。
棉花塞的大小要合适，既能塞牢，又能拔出。
棉花塞塞好后，外包一层油纸（以防止灭菌时冷凝水湿润棉花塞），用棉绳扎牢，即可进行灭菌。
灭菌后，斜面培养基趁热摆成斜面。
冷凝后无菌存放，备用。
(8)无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，或放入28℃的温室中培养5～7天，以检查灭菌是否彻底。
3、常用培养基配方
1)牛肉膏蛋白胨培养基(MPA)
牛肉膏5克蛋白胨10克NaCl 5克琼脂20克蒸馏水1000mL pH 7.4～7.6
2)马铃薯葡萄糖培养基(PDA)
马铃薯200克葡萄糖20克琼脂20克蒸馏水1000mL pH4.0～6.0
3)麦芽汁培养基(MDA)
麦芽汁(10°Bx)1000mL 葡萄糖20克琼脂20克4)察氏培养基
NaNO
3 3克 KCl 0.5克 K
2
HPO
4
1克 FeSO
4
0.01克MgSO
4
5克蔗糖 30
克蒸馏水1000mL pH 6.7
5)豆芽汁培养基(BSA)
黄豆芽100克蔗糖50克琼脂20克蒸馏水1000mL pH4.0～6.0
（二）消毒、灭菌技术
1、加热灭菌
(1)干热灭菌法
1)火焰灭菌法直接利用火焰把微生物灼烧死。
此法灭菌可靠，简便迅速，适用于接种环、接种针、玻璃棒、镊子、解剖刀等用具的灭菌。
在接种过程中，试管口、三角瓶口也都用火焰作短暂灼烧而达到灭菌的目的。
2)干热空气灭菌法在干燥箱内，通过加热使箱内空气温度上升，而达到灭菌的目的。
具体操作方法是：首先将包扎好的器皿放入干燥箱内，使其勿与箱壁接触，并保持箱内空气流通；然后接通电源加热，使温度升至160～170℃，恒温维持2～3小时；再切断电源停止加热，当箱内温度降至60℃以下时，方可打开箱门，取出被灭菌的物品。
此法只适用于玻璃仪器及金属用具。
(2)湿热灭菌法
湿热灭菌法是用煮沸或饱和水蒸气等湿热进行灭菌，此法适用于一切含水物品。
实验室常用高压蒸汽灭菌法灭菌。
高压蒸汽灭菌锅的使用方法：首先，在灭菌锅内加入适量的水，然后把欲灭菌的物品放入，盖上内盖，再对称拧紧外盖上的螺栓；打开锅盖上的放气阀，开始加热；锅内产生蒸汽后，放气阀即有蒸汽排出，约3～5分钟后，待冷湿空气排尽，再关闭放气阀；待压力升到0.1兆帕（121℃）时，维持此压20～30分钟；停止加热，自然冷却，待压力降为零后，打开放气阀，排出残留蒸汽；打开锅盖，取出灭菌的物品，无菌放好。
2、过滤除菌
不适于加热灭菌的物质，可以采用过滤法除菌。
过滤除菌就是利用特别的细菌过滤器，以及活性炭、超细纤维等，将液体或空气中的细菌滤掉。
一般以细菌过滤器为常用。
3、化学药剂消毒与灭菌
化学药剂消毒是利用化学药剂来杀死微生物。
实验室和生产中常用的消毒剂有：5%苯酚溶液常用于实验室、无菌室和无菌操作箱中的空间消毒；10%的福尔马林溶液常用于容器消毒；70～75%酒精是最常用的消毒剂，可用于一般器皿、器械、皮肤、玻片等表面消毒；0.1%次氯酸钠溶液可用于粮粒表面消毒，5%次氯酸钠溶液可用于霉菌毒素的去毒；3～5%的来苏儿常用于桌面地面及皮肤的消毒。
4、紫外线灭菌法
紫外线灭菌法主要应用于无菌室和无菌操作箱的空气灭菌。
通常在10～15㎡空间容积内，采用30瓦紫外光灯照射5～15分钟即可。
为了加强灭菌效果，在开灯之前，可以在无菌室内喷5%苯酚溶液或2～3%的来苏儿溶液，使空气中微生物随雾滴和尘埃降落，以便有效地杀死微生物。
紫外线对人体有伤害，应注意防护。