霍乱弧菌实验室检测22页PPT
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霍乱弧菌实验室检测ppt课件
11.12.2020
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11.12.2020
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• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力 ，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005） 。
11.12.2020
0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
11.12.2020
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6
霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
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霍乱实验室检测
2020/12/11
检验科
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1
霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1 9 0 5 年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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11.12.20ห้องสมุดไป่ตู้0
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• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并
霍乱弧菌ppt参考课件
1883年，埃及发生了一次瘟疫大流行，一批 批的病人相继死亡，共计58500人。
患者往往起病急，出现严重的腹泻和呕吐， 米泔水样（rice water）腹泻物。若得不到及时救 治，常常在短时间内因全身脱水、肌肉痉挛和周 围循环衰竭，造成休克而死。
问题： 1、患者患有什么疾病？ 2、如何确诊？ 3、如何治疗？
二、幽门螺杆菌
1、形态、染色和培养特性：呈螺旋形、S 形或海鸥展翅状。有鞭毛，运动活泼。革兰染 色阴性。微需氧菌，营养要求高，需加血液， 37℃培养3d后，可见针尖状半透明的菌落。
尿素酶丰富，快速尿素酶试验强阳性，是 鉴定该菌的主要依据之一。
二、幽门螺杆菌
2、所致疾病：是引起慢性胃炎和消化性溃 疡（胃溃疡、十二指肠溃疡）的病原菌，与胃 癌、胃黏膜相关B细胞淋巴瘤的发生密切相关。
霍乱弧菌
德国细菌学家科赫通过尸体解剖和镜检， 从肠道乳白色液体中发现了外形短小、略有弯 曲、拖曳细小尾部而形如逗号的霍乱弧菌。通 过水、食物、生活接触和苍蝇等传播而进入人 体的“逗号”，导致了霍乱。
霍乱弧菌
一、生物学特性
形态与染色：革兰染色阴性，弧菌，排列如 “鱼群”状。单端鞭毛，运动活泼。可取呕吐或 腹泻物，作悬滴法活菌检查，可见细菌呈穿梭状 或流星雨样运动。加入鞭毛血清（抗鞭毛抗体）， 运动终止（制动试验阳性）。
霍乱弧菌
2．The microbial responsible for the patients’s diarrhea is a toxin（毒素）that A．Blocks EF-2 and inhibits protein synthesis B．Yields increased intracellular levels of cAMP C．Yields increased intracellular levels of cGMP D．Inbibits the release of acetylcholine（乙酰胆 碱）at the synapse（突触） E. Stimulates neural receptors
患者往往起病急，出现严重的腹泻和呕吐， 米泔水样（rice water）腹泻物。若得不到及时救 治，常常在短时间内因全身脱水、肌肉痉挛和周 围循环衰竭，造成休克而死。
问题： 1、患者患有什么疾病？ 2、如何确诊？ 3、如何治疗？
二、幽门螺杆菌
1、形态、染色和培养特性：呈螺旋形、S 形或海鸥展翅状。有鞭毛，运动活泼。革兰染 色阴性。微需氧菌，营养要求高，需加血液， 37℃培养3d后，可见针尖状半透明的菌落。
尿素酶丰富，快速尿素酶试验强阳性，是 鉴定该菌的主要依据之一。
二、幽门螺杆菌
2、所致疾病：是引起慢性胃炎和消化性溃 疡（胃溃疡、十二指肠溃疡）的病原菌，与胃 癌、胃黏膜相关B细胞淋巴瘤的发生密切相关。
霍乱弧菌
德国细菌学家科赫通过尸体解剖和镜检， 从肠道乳白色液体中发现了外形短小、略有弯 曲、拖曳细小尾部而形如逗号的霍乱弧菌。通 过水、食物、生活接触和苍蝇等传播而进入人 体的“逗号”，导致了霍乱。
霍乱弧菌
一、生物学特性
形态与染色：革兰染色阴性，弧菌，排列如 “鱼群”状。单端鞭毛，运动活泼。可取呕吐或 腹泻物，作悬滴法活菌检查，可见细菌呈穿梭状 或流星雨样运动。加入鞭毛血清（抗鞭毛抗体）， 运动终止（制动试验阳性）。
霍乱弧菌
2．The microbial responsible for the patients’s diarrhea is a toxin（毒素）that A．Blocks EF-2 and inhibits protein synthesis B．Yields increased intracellular levels of cAMP C．Yields increased intracellular levels of cGMP D．Inbibits the release of acetylcholine（乙酰胆 碱）at the synapse（突触） E. Stimulates neural receptors
霍乱检测课件
抵抗力
水中存活20天 怕酸耐碱 庆大霉素耐药 消毒 漂白粉：吐泻物（1：4）,1hr
二、临床意义
致病物质 • 侵袭力： 鞭毛 菌毛 • 霍乱肠毒素（cholera enterotoxin ,CE)
A1肽链
具有激活腺苷酸环
霍 乱 肠 毒 素
1个A亚单 毒性
位 单位 A2肽链
化酶的酶活性
结合B亚单位； 参与转位
生物学性状
具有嗜盐性，氯化钠的最适浓度为3.5%；
增菌培养基: 1%NaCl碱性蛋白胨水或 4%NaCl蛋白胨水 TCBS琼脂: 菌落圆形、隆起、光滑、湿润、不透明， 蓝绿色 SS琼脂： 2-3mm，扁平、无色、半透明、蜡滴状， 菌落不易挑起 我妻琼脂培养集: β–溶血(神奈川现象，KP)
培 养 特 性
cholerae)
• 到目前为止共发生了七 次霍乱世界大流行
流行情况 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地） 古典生物型
1961年
第七次大流行 El Tor生物型
亚洲流行（印度、盂加拉、泰国） O139群
1992年
一、生物学特性
形 态 与 染 色
• 革兰氏染色阴性 • 弧型或逗点状,米泔水样粪便涂片镜检：可见
霍 乱 红 反 应（cholera red test）
硝酸盐 色氨酸 亚硝酸盐 靛基质
红色
浓硫酸
5. 分型鉴定
(1) 使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应 小川型单价血清凝集 小川型 稻叶型 彦岛型 稻叶型单价血清
+
+
+ +
(2)古典型和埃尔托型的鉴别
我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主
霍乱弧菌的实验室
霍乱弧菌的实验室检测
霍乱的流行病学
霍乱的病原菌：霍乱弧菌 是我国《传染病防治法》：甲类传染病（又称2号病）， 是国际检疫的烈性传染病 霍乱：七次世界大流行： 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地）~古典生物型； 1961年 第七次大流行 ElTor生物型（我国以ElTor生物 型为主） 1992年 在印度， 孟加拉， 泰国发生的霍乱，分离到菌 株不与O1群霍乱血清凝集，定为O139群，被认为下一次 大流行的主角。浙江省94年发现，
疑似病人或急诊病人如何处理
如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 标本直接涂片，镜检观察有没有呈鱼群穿梭样或流星状运 动活跃的细菌，如有加一滴霍乱诊断血清后再观察细菌运 动情况（3分钟运动被抑制为制动试验+） 标本直接涂片作革兰氏染色，镜检观察弧状或逗点状，革 兰染色阴性的细菌。 如形态典型，运动活泼，制动试验+，可作出疑似初步报 告，报涂片见到xx形态，xx染色性细菌等。--常见于紧急 情况
℃
- 抗原性
-生化反应：发酵葡萄糖，甘露醇，蔗糖，产酸不产气
霍乱红试验（+） o/129敏感试验（+） 赖氨酸，鸟氨酸脱羧酶（+） 精氨酸双水解酶（-） 氧化酶（+）粘丝试验（+）
-致病性：侵袭力 （鞭毛来自菌毛）霍乱肠毒素 -抵抗力：水中存活20天，怕酸耐碱，庆大霉素耐药 -消毒： 漂白粉
霍乱弧菌常规检验
霍乱弧菌的病原学特点
-形态与染色： 弧状或逗点状 -革兰染色阴性 有一根单鞭毛，细菌运动非常活跃，呈鱼 群穿梭样或流星状 -培养特性：营养要求不高，生长较快，兼性厌氧。 最适生长温度为37 ℃ ， 怕酸嗜碱，最适pH7.2-7.4, PH7.4-9.6快速生长 O抗原：耐热，耐受100℃2h,特异性高，分群 和分型的基础。 H抗原：不耐热，特异性低
霍乱的流行病学
霍乱的病原菌：霍乱弧菌 是我国《传染病防治法》：甲类传染病（又称2号病）， 是国际检疫的烈性传染病 霍乱：七次世界大流行： 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地）~古典生物型； 1961年 第七次大流行 ElTor生物型（我国以ElTor生物 型为主） 1992年 在印度， 孟加拉， 泰国发生的霍乱，分离到菌 株不与O1群霍乱血清凝集，定为O139群，被认为下一次 大流行的主角。浙江省94年发现，
疑似病人或急诊病人如何处理
如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 标本直接涂片，镜检观察有没有呈鱼群穿梭样或流星状运 动活跃的细菌，如有加一滴霍乱诊断血清后再观察细菌运 动情况（3分钟运动被抑制为制动试验+） 标本直接涂片作革兰氏染色，镜检观察弧状或逗点状，革 兰染色阴性的细菌。 如形态典型，运动活泼，制动试验+，可作出疑似初步报 告，报涂片见到xx形态，xx染色性细菌等。--常见于紧急 情况
℃
- 抗原性
-生化反应：发酵葡萄糖，甘露醇，蔗糖，产酸不产气
霍乱红试验（+） o/129敏感试验（+） 赖氨酸，鸟氨酸脱羧酶（+） 精氨酸双水解酶（-） 氧化酶（+）粘丝试验（+）
-致病性：侵袭力 （鞭毛来自菌毛）霍乱肠毒素 -抵抗力：水中存活20天，怕酸耐碱，庆大霉素耐药 -消毒： 漂白粉
霍乱弧菌常规检验
霍乱弧菌的病原学特点
-形态与染色： 弧状或逗点状 -革兰染色阴性 有一根单鞭毛，细菌运动非常活跃，呈鱼 群穿梭样或流星状 -培养特性：营养要求不高，生长较快，兼性厌氧。 最适生长温度为37 ℃ ， 怕酸嗜碱，最适pH7.2-7.4, PH7.4-9.6快速生长 O抗原：耐热，耐受100℃2h,特异性高，分群 和分型的基础。 H抗原：不耐热，特异性低
霍乱弧菌实验室检验技术PPT课件
骨可以改善融合率。加拿大一项 4 年的研究结果发现
rhBMP-2的融合率（94％）高于髂骨植骨组（69％）。另
一项研究发现联合应用 “ INFUSE ” + 自体髂骨”可以提
高椎间融合率（> 95％）。65岁以上的老年患者与年轻患
者使用rhBMP-2，二者的并发症发生率并没有太大差异。
+ 椎间盘置换术
在过去的几年内，有2种新型的人工椎间盘装置获得了美国
FDA 的批准，其适应症是单节段脊髓神经根病，还有1种装置同
时适用于单节段或者双节段的病变。这3种人工椎间盘装置的临 床功能预后和安全性和其他已经批准上市的人工椎间盘类似。
+ 椎间盘置换术
已获得上市的人工椎间盘 7-9 年的随访显示其具有较好的预 后，和融合手术相比，其邻近节段退变而导致的再手术率较低。
但是，人工椎间盘也有其潜在的缺点，如边缘撞击造成的椎间盘
装置磨损，由此而形成的磨损碎屑的炎症反应等，目前报道这类
并发症的发生率较少。美国医疗保险数据库的调查发现，使用人
工椎间盘的花费要少于融合手术，可能与术后较少的再手术率和 术后较少的费用相关。
+ 2013 年脊柱生物学研究的焦点在重组人骨形态发生蛋白
+ 过去数十年间，有3种人工椎间盘获得了相关监管机构的批
准，其长期随访取得了较为满意的结果。
+ 脊髓型颈椎病
Fehling 等人报道一项对 222 例脊髓型颈椎病患者进行了术后 1 年随访的多中心观察研究，结果发现术后疼痛、功能、步态、 生活质量等可以获得较好的改善。 作者认为：前后路手术效果无显著差异；多因素分析显示， 临床功能预后较差有关的因素包括：症状持续时间长，术前较差 的基础功能，合并有精神疾病，严重步态障碍，较高的年龄等。
rhBMP-2的融合率（94％）高于髂骨植骨组（69％）。另
一项研究发现联合应用 “ INFUSE ” + 自体髂骨”可以提
高椎间融合率（> 95％）。65岁以上的老年患者与年轻患
者使用rhBMP-2，二者的并发症发生率并没有太大差异。
+ 椎间盘置换术
在过去的几年内，有2种新型的人工椎间盘装置获得了美国
FDA 的批准，其适应症是单节段脊髓神经根病，还有1种装置同
时适用于单节段或者双节段的病变。这3种人工椎间盘装置的临 床功能预后和安全性和其他已经批准上市的人工椎间盘类似。
+ 椎间盘置换术
已获得上市的人工椎间盘 7-9 年的随访显示其具有较好的预 后，和融合手术相比，其邻近节段退变而导致的再手术率较低。
但是，人工椎间盘也有其潜在的缺点，如边缘撞击造成的椎间盘
装置磨损，由此而形成的磨损碎屑的炎症反应等，目前报道这类
并发症的发生率较少。美国医疗保险数据库的调查发现，使用人
工椎间盘的花费要少于融合手术，可能与术后较少的再手术率和 术后较少的费用相关。
+ 2013 年脊柱生物学研究的焦点在重组人骨形态发生蛋白
+ 过去数十年间，有3种人工椎间盘获得了相关监管机构的批
准，其长期随访取得了较为满意的结果。
+ 脊髓型颈椎病
Fehling 等人报道一项对 222 例脊髓型颈椎病患者进行了术后 1 年随访的多中心观察研究，结果发现术后疼痛、功能、步态、 生活质量等可以获得较好的改善。 作者认为：前后路手术效果无显著差异；多因素分析显示， 临床功能预后较差有关的因素包括：症状持续时间长，术前较差 的基础功能，合并有精神疾病，严重步态障碍，较高的年龄等。
霍乱弧菌实验室检测完整版
PCR检测阳性或粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌快速辅助检测试验阳性 ；
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
S
SS S
S
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
S
SS S
S
霍乱弧菌实验室检验技术PPT医学课件
2024/1/24
快速诊断初步报告
1、快诊断实验阳性者同时涂片染色和悬 滴法观察，如镜检为革兰染色阴性弧菌 或悬滴细菌呈“鱼群穿梭样”运动，氧 化酶试验阳性，可作初诊报告。为开展 疫情处理提供依据；
2024/1/24
制动试验
暗视野/相差显微镜直接镜检，水样便滴 在玻片上，可见流星状动力的细菌；当 加入01/0139免疫血清后，运动停止即凝 集成块，根据这种特殊动力和制动试验， 可提早做出初步诊断。
注意：免疫血清使用浓度1：64，并尽可 能不加防腐剂
2024/1/24
胶体金免疫层析快诊
采用胶体金免疫层析双抗体夹心法， 检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作 为标记物，交联抗霍乱弧菌单克隆 抗体，与样品中的霍乱弧菌结合。 形成双抗体夹心一步法，呈现出目 测可见的红色条带，显色程度与抗 原含量成正比。
霍乱实验室检测技术
2024/1/24
内容
一、霍乱概述 二、霍乱病原学 三、霍乱弧菌常规检验 四、霍乱弧菌的快速诊断 五、霍乱弧菌的噬菌体-生物分型 六、霍乱菌株的管理、保存与上送
2024/1/24
一、霍乱概述
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌 （V．cholerae）引起的急性肠道传染 病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。
增菌/二次增菌分离培养 所有粪便标本都 应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增 菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培 养物，划线接种于强选择性碱性琼脂和 TCBS琼脂平板各两个。必要时进行二次 增菌
2024/1/24
疑似菌落初步鉴定：
每个碱性琼脂、TCBS琼脂平板上各挑取 5个以上(少于5个的全部挑取)疑似菌落接 种于营养琼脂平板/营养琼脂斜面或克氏 双糖置37℃18-24h纯培养(即每份样品至 少从2个分离平板上获得约10株可疑菌落 菌株)，取斜面纯培养物进行血清鉴定、 并涂片进行革兰氏染色及氧化酶试验等。
快速诊断初步报告
1、快诊断实验阳性者同时涂片染色和悬 滴法观察，如镜检为革兰染色阴性弧菌 或悬滴细菌呈“鱼群穿梭样”运动，氧 化酶试验阳性，可作初诊报告。为开展 疫情处理提供依据；
2024/1/24
制动试验
暗视野/相差显微镜直接镜检，水样便滴 在玻片上，可见流星状动力的细菌；当 加入01/0139免疫血清后，运动停止即凝 集成块，根据这种特殊动力和制动试验， 可提早做出初步诊断。
注意：免疫血清使用浓度1：64，并尽可 能不加防腐剂
2024/1/24
胶体金免疫层析快诊
采用胶体金免疫层析双抗体夹心法， 检测标本中霍乱弧菌。以胶体金作 为标记物，交联抗霍乱弧菌单克隆 抗体，与样品中的霍乱弧菌结合。 形成双抗体夹心一步法，呈现出目 测可见的红色条带，显色程度与抗 原含量成正比。
霍乱实验室检测技术
2024/1/24
内容
一、霍乱概述 二、霍乱病原学 三、霍乱弧菌常规检验 四、霍乱弧菌的快速诊断 五、霍乱弧菌的噬菌体-生物分型 六、霍乱菌株的管理、保存与上送
2024/1/24
一、霍乱概述
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌 （V．cholerae）引起的急性肠道传染 病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。
增菌/二次增菌分离培养 所有粪便标本都 应接种碱性蛋白胨水培养基，放37℃增 菌6～8h后，从菌膜下表层取一接种环培 养物，划线接种于强选择性碱性琼脂和 TCBS琼脂平板各两个。必要时进行二次 增菌
2024/1/24
疑似菌落初步鉴定：
每个碱性琼脂、TCBS琼脂平板上各挑取 5个以上(少于5个的全部挑取)疑似菌落接 种于营养琼脂平板/营养琼脂斜面或克氏 双糖置37℃18-24h纯培养(即每份样品至 少从2个分离平板上获得约10株可疑菌落 菌株)，取斜面纯培养物进行血清鉴定、 并涂片进行革兰氏染色及氧化酶试验等。
《霍乱弧菌》课件
霍乱毒素。
霍乱弧菌的防治措施
01
02
03
04
预防接种
接种霍乱疫苗，提高人群免疫 力。
饮食卫生
保持良好的饮食卫生习惯，避 免食用生冷食物。
水源管理
加强水源管理，保证饮用水安 全。
环境卫生
保持环境卫生，减少霍乱弧菌 的传播。
霍乱弧菌的疫苗研究
传统疫苗
利用灭活或减毒的霍乱弧菌作为疫苗，已取得一定效果。
控制霍乱弧菌的传播需要国际社会的合作，共同 加强出入境检验检疫，防止疫情跨国传播。
THANKS
感谢观看
《霍乱弧菌》PPT课件
• 霍乱弧菌简介 • 霍乱弧菌的生物学特性 • 霍乱弧菌的致病性 • 霍乱弧菌的检测与防治 • 霍乱弧菌的流行病学
01
霍乱弧菌简介
霍乱弧菌的发现与命名
发现
1817年，印度恒河三角洲地区首 次发现霍乱弧菌感染的人类病例 。
命名
由英国医生John Snow在1854年 正式命名为“霍乱”。
霍乱弧菌的抵抗力
霍乱弧菌对干燥、阳光和一般消毒剂 较为敏感，但在水体中可存活数周至 数月之久，甚至在污染的食物或水中 也能存活较长时间。
霍乱弧菌的抵抗力与其变异有关，变 异株可能具有更强的抵抗力，需要引 起关注。
霍乱弧菌对某些抗生素如四环素和氟 喹诺酮类具有抗性，但仍然对一些抗 生素如多黏菌素和磺胺类药物敏感。
霍乱弧菌的形态与结构
形态
霍乱弧菌呈逗点状或弯曲的杆状，大 小约1.5-3微米 x 0.3-0.4微米。
结构
单极鞭毛，无芽孢，无荚膜，革兰氏 染色阴性。
霍乱弧菌的分类地位
01
02
03
生物型
根据其抗原特性和生化反 应的不同，霍乱弧菌可分 为O1型和O139型。
霍乱弧菌的防治措施
01
02
03
04
预防接种
接种霍乱疫苗，提高人群免疫 力。
饮食卫生
保持良好的饮食卫生习惯，避 免食用生冷食物。
水源管理
加强水源管理，保证饮用水安 全。
环境卫生
保持环境卫生，减少霍乱弧菌 的传播。
霍乱弧菌的疫苗研究
传统疫苗
利用灭活或减毒的霍乱弧菌作为疫苗，已取得一定效果。
控制霍乱弧菌的传播需要国际社会的合作，共同 加强出入境检验检疫，防止疫情跨国传播。
THANKS
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《霍乱弧菌》PPT课件
• 霍乱弧菌简介 • 霍乱弧菌的生物学特性 • 霍乱弧菌的致病性 • 霍乱弧菌的检测与防治 • 霍乱弧菌的流行病学
01
霍乱弧菌简介
霍乱弧菌的发现与命名
发现
1817年，印度恒河三角洲地区首 次发现霍乱弧菌感染的人类病例 。
命名
由英国医生John Snow在1854年 正式命名为“霍乱”。
霍乱弧菌的抵抗力
霍乱弧菌对干燥、阳光和一般消毒剂 较为敏感，但在水体中可存活数周至 数月之久，甚至在污染的食物或水中 也能存活较长时间。
霍乱弧菌的抵抗力与其变异有关，变 异株可能具有更强的抵抗力，需要引 起关注。
霍乱弧菌对某些抗生素如四环素和氟 喹诺酮类具有抗性，但仍然对一些抗 生素如多黏菌素和磺胺类药物敏感。
霍乱弧菌的形态与结构
形态
霍乱弧菌呈逗点状或弯曲的杆状，大 小约1.5-3微米 x 0.3-0.4微米。
结构
单极鞭毛，无芽孢，无荚膜，革兰氏 染色阴性。
霍乱弧菌的分类地位
01
02
03
生物型
根据其抗原特性和生化反 应的不同，霍乱弧菌可分 为O1型和O139型。
霍乱弧菌检测ppt
A、C
异型 中间型
小川型（Ogawa）
彦岛型 （Hikojima）
A、B A、B、C
-
非O1群霍乱弧菌
O139群霍乱弧菌 1992年，在印度印度马德拉斯、泰米尔纳
德发生的霍乱疫情，分离到的菌株不与O1 群霍乱血清凝集，但是引起O1群霍乱的典 型症状。引起WHO重视，定为O139群霍乱弧 菌，被认为下一次霍乱大流行主角。
-
疑似菌落鉴定基本要求：
分别从庆大霉素琼脂或TCBS 琼脂、碱性琼脂 平板上各挑取5 个以上的（少于5 个的全部挑取）
疑似菌落接种于营养琼脂斜面置37℃18-24h 纯培养（即每份样品至少从4 个分离平板上获 得约20 株可疑菌落菌株），取斜面纯培养物 进行O1 群及O139 群霍乱诊断血清玻片凝集试 验，血清凝集阳性的菌株继续相关的系统鉴定 并报告结果。必须注意同一样品中O1、O139群 霍乱弧菌可能同时存在，有必要对所有选出的
TCBS 琼脂平板和一个碱性琼脂平板进行划线 分离培养。 同时，以无菌吸管吸取0.2-0.5ml 增菌液接种 到新的碱性蛋白胨水中，进行二次增菌培养后， 再如上述步骤进行划线分离培养。 特别强调所有环境样品的增菌分离培养步骤必 须包括上述二次增菌和强、弱双平板分离。
-
鉴定
TCBS上出现黄色菌落，4号琼脂或庆大霉素 平板上出现灰褐色中心的菌落，均为可疑 菌落，应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多 价和单价抗血清进行玻片凝集试验，结合 菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
El Tor霍乱弧菌为主。
-
霍乱弧菌古典生物型和 El-Tor生物型的区别
特征
古典生物型
羊红细胞溶血
-
鸡红细胞凝集
-
VP 试验
霍乱弧菌的分离与鉴定、霍乱诊断的相关实验技术、鉴别诊断.pptx
4.3菌株复核
菌株的复核鉴定应以纯培养物为基础，至少应包括以下项目：革兰染色、黏丝试验、氧化酶试验、血清分型、 动力试验、CT毒素基因检测（按附录B）,也可选择生化鉴定条或全自动微生物生化鉴定系统。凝集反应不典型或者 怀疑为彦岛型的菌株应增做试管凝集试验。菌株血清群的鉴定也可用聚合酹链式反应（PCR）方法扩增01群和0139 血清群脂多糖特异性基因力来确定（按附录B）。
C.2.1肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）性肠炎
潜伏期4h〜24h,有发热、恶心呕吐及腹部绞痛，腹泻呈黄水或清水样便，无脓血便,严重腹泻者亦可产生重度脱 水，婴幼患儿常因此而危及生命。
C.2.2肠致病性大肠埃希菌（EPEC）性肠炎
主要症状为腹泻，大便为黄色和黄绿色蛋花样稀水便，量较多，常有特殊腥臭味，重症者可有脱水等全身症状 。
A.2标本的送检
采得的标本应立即接种于培养基，不能立即接种的，应放入pH8.4〜9.2的碱性蛋白陈水或文腊二氏保存液或插 入Cary-Blail•半固体保存培养基中，放置于冷藏箱内保存、送检。粪便或呕吐物等标本与运送培养基或增菌液的比例 约为1:10,肛拭子应插入5m1.运送培养基或增菌液中。
A.3分离培养
诺如病毒感染在各年龄人群普遍易感，可引起暴发流行，是成人病毒性腹泻的首位病原体。临床症状主要以腹 泻和呕吐为主，水样便或稀便多见，可伴有腹痛、恶心、纳差、乏力、低至中度发热等。粪便标本诺如病毒检测阳 性。
C.6急性细菌性痢疾
由志贺菌引起，潜伏期Id〜2d,起病急，以发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便为主要特征，有全身感染中毒 症状。重症患者可伴有头痛、全身肌肉酸痛甚至惊厥，可出现脱水和电解质紊乱相关症状。不典型的急性细菌性痢 疾以婴儿多见，多无全身中毒症状、不发热或低热，腹痛较轻，粪便呈水样或稀糊样，含少量黏液，左下腹可有压 痛，应注意鉴别。急性中毒性细菌性痢疾可出现高热，在儿童患者早期即可出现烦躁、谐妄、惊厥等，发病初期肠 道症状不明显。成人患者主要表现为黏液脓血便频繁，呈里急后重。从粪便或肛拭标本等检出志贺菌可确诊。
菌株的复核鉴定应以纯培养物为基础，至少应包括以下项目：革兰染色、黏丝试验、氧化酶试验、血清分型、 动力试验、CT毒素基因检测（按附录B）,也可选择生化鉴定条或全自动微生物生化鉴定系统。凝集反应不典型或者 怀疑为彦岛型的菌株应增做试管凝集试验。菌株血清群的鉴定也可用聚合酹链式反应（PCR）方法扩增01群和0139 血清群脂多糖特异性基因力来确定（按附录B）。
C.2.1肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）性肠炎
潜伏期4h〜24h,有发热、恶心呕吐及腹部绞痛，腹泻呈黄水或清水样便，无脓血便,严重腹泻者亦可产生重度脱 水，婴幼患儿常因此而危及生命。
C.2.2肠致病性大肠埃希菌（EPEC）性肠炎
主要症状为腹泻，大便为黄色和黄绿色蛋花样稀水便，量较多，常有特殊腥臭味，重症者可有脱水等全身症状 。
A.2标本的送检
采得的标本应立即接种于培养基，不能立即接种的，应放入pH8.4〜9.2的碱性蛋白陈水或文腊二氏保存液或插 入Cary-Blail•半固体保存培养基中，放置于冷藏箱内保存、送检。粪便或呕吐物等标本与运送培养基或增菌液的比例 约为1:10,肛拭子应插入5m1.运送培养基或增菌液中。
A.3分离培养
诺如病毒感染在各年龄人群普遍易感，可引起暴发流行，是成人病毒性腹泻的首位病原体。临床症状主要以腹 泻和呕吐为主，水样便或稀便多见，可伴有腹痛、恶心、纳差、乏力、低至中度发热等。粪便标本诺如病毒检测阳 性。
C.6急性细菌性痢疾
由志贺菌引起，潜伏期Id〜2d,起病急，以发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便为主要特征，有全身感染中毒 症状。重症患者可伴有头痛、全身肌肉酸痛甚至惊厥，可出现脱水和电解质紊乱相关症状。不典型的急性细菌性痢 疾以婴儿多见，多无全身中毒症状、不发热或低热，腹痛较轻，粪便呈水样或稀糊样，含少量黏液，左下腹可有压 痛，应注意鉴别。急性中毒性细菌性痢疾可出现高热，在儿童患者早期即可出现烦躁、谐妄、惊厥等，发病初期肠 道症状不明显。成人患者主要表现为黏液脓血便频繁，呈里急后重。从粪便或肛拭标本等检出志贺菌可确诊。
霍乱弧菌ppt课件
培养特性：耐碱怕酸，pH 8.8-
9.2，可在无盐环境中生长
抗原构造与分群：
H抗原：无特异性 O抗原：分群
一、生物学特性
古典生物型
O-1群
EL Tor 生物型
非O-1群 引起散发性胃肠炎。
O-139型，1992年起引起 霍乱流行。
与人类感血 清群
A亚单位 （毒性亚单位）
B亚单位 （结合亚单位）
激活腺苷环化酶，使细胞 内cAMP水平升高，主动分 泌Na+、K+、HCO3—和水， 导致重的腹泻与呕吐
与小肠粘膜上皮细胞GM1神 经节苷脂受体结合，介导A 亚单位进入细胞
B亚单位 与小肠粘膜 上皮细胞 GM1神经节苷 脂受体结合
A亚单位裂 解为A1和 A2两条多 肽，A1亚 单位进入细 胞发挥毒性 作用
非O1和非O139霍乱弧 菌血清群
副溶血性弧菌
霍乱，可造成大流行甚至世界性 大流行
霍乱样腹泻，一般腹泻，偶尔， 肠道外感染
胃肠炎，肠道外感染
其他：拟态弧菌、创伤 弧菌、霍利斯弧菌、河 弧菌
不常见
一抵、抗生力物：学特性
较强，但100℃ 1-2 分 钟可
灭活，怕酸（1份漂白粉加 4份水，1小时）
致病性与免疫性
直接镜检
G-弧菌 运动活泼
分离培养 PCR
碱性蛋白胨水 肠毒素 凝集反应
防治原则
防：
霍乱死菌苗：肌肉注射，保护率50%，3-6个月 减毒重组活菌苗：口服，保护率82-100% 菌苗加类毒素：B亚单位+灭活菌细胞，3
年以上
霍乱、伤寒杂交菌苗：基因工程菌苗
致病性与免疫性
治：隔离，及时补充液体，敏感抗菌素 抗生素可选用四环素、 强力霉素、氟哌酸等。
9.2，可在无盐环境中生长
抗原构造与分群：
H抗原：无特异性 O抗原：分群
一、生物学特性
古典生物型
O-1群
EL Tor 生物型
非O-1群 引起散发性胃肠炎。
O-139型，1992年起引起 霍乱流行。
与人类感血 清群
A亚单位 （毒性亚单位）
B亚单位 （结合亚单位）
激活腺苷环化酶，使细胞 内cAMP水平升高，主动分 泌Na+、K+、HCO3—和水， 导致重的腹泻与呕吐
与小肠粘膜上皮细胞GM1神 经节苷脂受体结合，介导A 亚单位进入细胞
B亚单位 与小肠粘膜 上皮细胞 GM1神经节苷 脂受体结合
A亚单位裂 解为A1和 A2两条多 肽，A1亚 单位进入细 胞发挥毒性 作用
非O1和非O139霍乱弧 菌血清群
副溶血性弧菌
霍乱，可造成大流行甚至世界性 大流行
霍乱样腹泻，一般腹泻，偶尔， 肠道外感染
胃肠炎，肠道外感染
其他：拟态弧菌、创伤 弧菌、霍利斯弧菌、河 弧菌
不常见
一抵、抗生力物：学特性
较强，但100℃ 1-2 分 钟可
灭活，怕酸（1份漂白粉加 4份水，1小时）
致病性与免疫性
直接镜检
G-弧菌 运动活泼
分离培养 PCR
碱性蛋白胨水 肠毒素 凝集反应
防治原则
防：
霍乱死菌苗：肌肉注射，保护率50%，3-6个月 减毒重组活菌苗：口服，保护率82-100% 菌苗加类毒素：B亚单位+灭活菌细胞，3
年以上
霍乱、伤寒杂交菌苗：基因工程菌苗
致病性与免疫性
治：隔离，及时补充液体，敏感抗菌素 抗生素可选用四环素、 强力霉素、氟哌酸等。