大学生物化学实验
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
浙江大学生物化学实验甲酶的基本性质激活剂与抑制剂对酶活力的影响
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
常见的酶的抑制剂：重金属离子（Ag+，Hg2+等）， CO，氰化物，有机磷农药等。
少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且 它常具有特异性。
一种物质对某种酶是激活剂，对另一种酶则可能 是抑制剂。
有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，在高浓 度时则可能为该酶的抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.2、原理
• 本试验利用淀粉水解不同阶段产物与碘有不同颜 色反应的特点，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应 中激活或抑制的现象。
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉
紫色糊精
红色糊精
无色糊精
麦芽糖
葡萄糖
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
I2
I2
I2
I2
I2
I2
蓝色
紫色
红色
不显色（碘色） （金黄色）
不显色 （碘色）
不显色 （碘色）
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.3、操作方法
• 操作过程及注意事项参P99。
1.4、实验结果及处理
• 仔细观察并纪录各管颜色，对试验现象进行简要说 明并判断激活剂和抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.1、激活剂和抑制剂简介
激活剂：凡能使酶活性增加的物质。 抑制剂：凡能使酶活性降低但并不引起酶蛋白变性
的物质。 常见的酶的激活剂： ⑴、无机离子：常为阳离子，如Mg2+，Na+等，但也
有阴离子，如Cl-。 ⑵、中等大小的有机分子：如抗 坏血酸，谷胱苷肽 ⑶、某些蛋白分子：指对某些无活性的酶原起激活作
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
云南农业大学生物化学实验讲解(新)
生物化学实验实验基本原理1 有效数字计算（结合电子天平的应用等）加减法：进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。
如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。
乘除法：进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。
如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。
2 误差分析误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。
误差越小，测定值越准确，即准确度越高。
误差可用绝对误差和相对误差表示。
绝对误差= 测定值- 真实值相对误差= 绝对误差÷真实值×100%一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。
3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握）精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。
一般用偏差来衡量分析结果的精确度。
偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。
绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号）相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下：分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负）16.1% 0.1%15.8% 0.2%16.3% 16.0% 0.3%16.2% 0.2%15.6% 0.4%平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2%平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25%在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度：两次分析结果的差值÷平均值×100%4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。
大学生物化学实验报告
一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理：凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相，通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中，大分子物质不能进入凝胶内部的孔径，而小分子物质可以进入孔径，从而在洗脱过程中，大分子物质先流出，小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积，可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂：1. 凝胶层析柱（直径1.5cm，长30cm）2. 凝胶（聚丙烯酰胺凝胶）3. 蛋白质样品（已知分子量）4. 标准样品（已知分子量）5. 洗脱液（Tris-HCl缓冲液）6. 显色剂（考马斯亮蓝G-250）7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤：1. 准备凝胶层析柱：将凝胶倒入层析柱中，用洗脱液充分浸泡凝胶，直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品：将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样：将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中，用洗脱液洗脱，收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色：将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂，室温下显色10分钟。
5. 测量：用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理：以标准样品的分子量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值，从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果：（此处插入实验数据表格，包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等）七、实验分析：通过凝胶层析法，成功分离了蛋白质样品，并测定了其分子量。
实验结果表明，蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符，说明实验操作正确。
八、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法，可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中，要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤，以保证实验结果的准确性。
生化实验期末总结
生化实验期末总结一、引言生物化学实验是一门将生物学与化学结合起来的学科。
通过生化实验，我们可以了解和掌握生物分子的结构、功能以及生物活动的机理等。
本学期的生化实验课程主要包括胶体溶液的制备与性质、蛋白质的分离与鉴定、酶的性质与功能、代谢与能量等实验内容。
通过实验的学习，我深刻体会到了实验与理论相结合的重要性，更加系统地了解了生物化学的基本原理和实验技术。
二、学习目标本次生化实验的学习目标是掌握常用的生化实验操作技巧，了解和熟悉相关的实验仪器设备，学会分析实验数据并撰写实验报告。
另外，也旨在提高我们的实验设计与分析能力，并培养团队合作意识和实验安全意识。
三、实验内容与方法1. 胶体溶液的制备与性质胶体溶液是一种介于溶液和悬浮液之间的分散体系。
本实验主要学习了胶体溶液的制备与性质，包括凝胶、乳胶、溶液胶等不同种类的胶体。
实验中通过调节胶体溶液的组成、浓度和pH等条件，观察胶体溶液的稳定性、胶状挺度以及光学性质等。
2. 蛋白质的分离与鉴定蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有丰富的功能和结构变化。
实验中我们学习了蛋白质的分离技术，包括离心、过滤、电泳等方法。
通过这些方法，我们可以分离不同种类的蛋白质，并进行比色、紫外吸收光谱、氨基酸组成分析等鉴定手段，了解蛋白质的结构和功能。
3. 酶的性质与功能酶是一类具有生物催化功能的蛋白质，对生物体内的代谢和生长起到重要作用。
本实验主要学习了酶的性质与功能，包括酶的活性、底物浓度、温度和pH对酶活性的影响等。
通过测定酶活性的方法，我们可以评估酶的稳定性和催化效能，进而研究酶在代谢过程中的作用机理。
4. 代谢与能量代谢是生物体内一系列化学反应的总称，与生物体的能量供应密切相关。
本实验主要学习了细胞的代谢途径和能量转化规律，包括糖代谢、脂肪代谢和蛋白质代谢等。
通过测定细胞内不同代谢产物的含量，并结合酶的活性测定，可以分析细胞的代谢途径和能量转化过程。
四、实验结果与讨论通过本学期的实验学习，我们获得了一系列实验数据，并进行了详细的数据处理和分析。
大四选修实验课生物化学实验教学大纲
大四选修实验课生物化学实验教学大纲一、实验课程简介1.1 实验课程名称：生物化学实验1.2 实验课程性质：选修实验课1.3 实验课程学分：2学分1.4 实验课程学时：36学时二、实验课程目标2.1 培养学生使用生物化学实验仪器和设备的基本技能。
2.2 培养学生进行生物化学实验的观察能力。
2.3 提高学生的实验设计和数据分析能力。
2.4 培养学生的科学研究思维和合作能力。
三、实验课程内容3.1 生物化学实验原理和基本操作3.1.1 生物化学实验室安全操作规范3.1.2 常用生物化学实验仪器和设备的使用方法3.2 常见生物分子的提取与纯化实验3.2.1 蛋白质提取和纯化实验3.2.2 DNA提取和纯化实验3.2.3 RNA提取和纯化实验3.3 酶动力学实验3.3.1 酶的浓度对反应速率的影响实验 3.3.2 酶的温度对反应速率的影响实验 3.3.3 酶的pH值对反应速率的影响实验 3.4 生物化学分析实验3.4.1 蛋白质浓度测定实验3.4.2 DNA含量测定实验3.4.3 RNA浓度测定实验3.4.4 酶活性测定实验3.5 生物分子特性分析实验3.5.1 蛋白质电泳实验3.5.2 DNA电泳实验3.5.3 RNA电泳实验3.6 细胞生物化学实验3.6.1 细胞色素氧化实验3.6.2 细胞代谢实验四、实验教学方法4.1 理论教学与实践相结合4.1.1 理论知识讲授4.1.2 实验操作演示4.2 实验课前准备4.2.1 实验课程大纲的讲解4.2.2 实验操作流程的演示4.3 实验课程实践操作4.3.1 学生实验操作指导4.3.2 学生自主探究实验4.4 实验数据收集与分析4.4.1 学生实验数据的记录和整理 4.4.2 实验数据的统计和分析4.5 实验总结与讨论4.5.1 学生实验报告撰写4.5.2 学生实验结果的讨论和总结五、实验教学评价方法5.1 实验报告的评分5.1.1 实验报告的内容完整性和准确性5.1.2 实验数据的整理和分析能力5.2 实验操作的评分5.2.1 实验过程的规范性和安全性5.2.2 实验结果的准确性和可重复性5.3 实验讨论的评分5.3.1 学生对实验结果的讨论和结论5.3.2 学生对实验中存在问题的思考和解决方案六、教材及参考资料6.1 教材：《生物化学实验原理与技术》6.2 参考资料：1. Berg, Jeremy M., Tymoczko, John L., & Gatto, Gregory J. S. (2012). Biochemistry (7th ed.).2. Nelson, David L., Cox, Michael M. (2017). Lehninger Principles of Biochemistry (7th ed.).七、实验教学大纲修订和调整7.1 实验教学大纲的修订和调整需根据教学实际需求进行。
重庆大学生物化学实验_实验七 蛋白质沉淀反应
3．向上述两试管的沉淀内各加蒸馏水5毫升，观 察沉淀能否复溶？为什么？
II. 用重金属沉淀蛋白质
原 理
？？？
•应注意 ？
在溶液的PH值大于蛋白质的等 电点时，带负电荷的蛋白质与重 金属离子（Ca2+、Hg2+、Ag1+、 Pb2+等）结合成盐而沉淀。
I．蛋白质的盐析作用
原 理
？？？
用高浓度的中性盐，使蛋白质带电荷 量减少，水化膜破坏蛋白质而从溶液中沉 淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白质变性， 故常用于分离各种天然蛋白质。
操作方法
1．取一试管加入盐析用蛋白质溶液和饱和硫酸 铵溶液各5毫升，混匀后静置数分钟，球蛋白即 沉淀析出。
叶酸（VB11）和四氢叶酸(FH4)
四氢叶酸是合成酶的辅酶，其前体是叶酸(又称为蝶酰谷氨酸，属 于维生素B11,绿叶中含量丰富)。
H
N NH
H2N
H
O
N
N
CH2 NH H
C
OH H
(2-氨4-羟6-亚甲基喋呤)
(对氨基苯甲酸)
COOH CH2 CH2 NH CH COOH
(谷氨酸)
四氢叶酸的主要作用是作为一碳基团，如-CH3, -CH2-, -CHO 3%硝酸银液
结果
2
1 2
数滴
3
1 2
数滴
III．用“生物碱试剂”沉淀蛋白质
问题：1、什么叫生物碱与生物碱试剂？ 2、生物碱有什么生物学意义？ 3、为什么生物碱试剂能沉淀Pr?
最新生物化学设计性实验报告
最新生物化学设计性实验报告实验目的：本实验旨在通过设计性实验，探究特定生物化学过程的机制和特点，验证理论假设，并培养学生的科研能力和实验技能。
实验背景：生物化学是研究生物体化学组成、化学变化及这些变化与生物体功能之间关系的科学。
设计性实验是生物化学教学和研究中的重要组成部分，它能够帮助学生更好地理解生物化学的基本概念，并通过实践活动加深对知识的掌握。
实验材料：1. 酶类样品2. 底物溶液3. 缓冲液4. 酶活性测定试剂盒5. 分光光度计6. 离心机7. 微量移液器8. 试管和比色皿9. 冰浴和恒温水浴实验方法：1. 预实验：首先对酶样品进行纯化，并通过酶活性测定初步了解其活性范围。
2. 实验设计：根据预实验结果，设计一系列实验，包括不同pH值、温度、底物浓度对酶活性的影响。
3. 实验操作：a. 准备一系列不同pH值的缓冲液，并调整酶样品和底物溶液至相应pH值。
b. 在不同温度下（如25℃、37℃、50℃）测定酶活性，记录数据。
c. 改变底物浓度，观察米氏常数（Km）和最大速率（Vmax）的变化。
4. 数据分析：利用图表和统计学方法分析实验数据，得出酶活性与实验条件之间的关系。
实验结果：1. pH值对酶活性的影响图显示，酶活性在特定pH值下达到最大，而在过高或过低的pH值下活性显著降低。
2. 温度对酶活性的影响图表明，酶活性随温度升高而增加，但在接近50℃时急剧下降，表明酶可能发生变性。
3. 底物浓度实验结果显示，当底物浓度增加到一定程度后，酶活性趋于平稳，计算得到的Km值与文献值相近。
讨论与结论：通过本实验，我们验证了酶活性受pH值、温度和底物浓度的影响。
实验结果与理论预期相符，表明设计性实验是理解和掌握生物化学原理的有效手段。
同时，实验过程中可能出现的误差和问题也为我们提供了宝贵的学习和改进机会。
生物化学实验内容(一)
生物化学实验内容（一）引言概述：生物化学实验是在生物化学领域中进行的实验研究，主要涉及生物分子的结构和功能、生物代谢、生物反应等方面的内容。
本文将介绍生物化学实验的一些基本内容。
正文：一、生物分子结构1. 研究生物大分子（如蛋白质、核酸、多糖）的结构与功能。
2. 分析生物分子的化学组成、序列和空间结构。
3. 制备和纯化生物分子样品，如蛋白质表达与纯化。
4. 应用分子生物学技术（如基因工程）对生物分子进行改造。
5. 测定生物分子在生物系统中的定位和互作关系。
二、生物代谢1. 研究生物的能量转换过程，如糖酵解、脂肪酸代谢等。
2. 测定生物体内代谢产物的生成量及速率。
3. 研究酶的活性、底物特异性及反应机制。
4. 探索代谢途径的调控机制，如信号转导通路等。
5. 应用同位素示踪技术研究代谢途径和产物的动力学变化。
三、生物反应1. 研究生物反应的动力学和热力学特性。
2. 研究酶促反应的速率与底物浓度、酶浓度等之间的关系。
3. 利用酶反应测定生物样品中特定分子的含量。
4. 研究药物与生物分子的相互作用。
5. 测定酶的抑制剂和激活剂对酶反应速率的影响。
四、生物分析技术1. 应用色谱技术对生物化学分子进行分离与分析。
2. 应用质谱技术鉴定和定量生物分子。
3. 应用光谱技术探究生物分子的结构和功能。
4. 应用电泳技术测定生物分子的大小、电荷和形态。
5. 应用生物传感器技术检测生物分子的存在和浓度。
五、生物化学实验安全与伦理1. 遵守实验室安全操作规范，保证实验人员的安全。
2. 尊重生物材料的来源和使用权益，遵守伦理规范。
3. 危险试剂的储存、处理和废物处理。
4. 生物实验的风险评估与危害控制。
5. 遵守相关法律法规，保护实验对象和环境安全与健康。
总结：生物化学实验内容涵盖了生物分子结构、生物代谢、生物反应、生物分析技术以及实验安全与伦理等方面的研究。
这些实验内容不仅促进了对生物化学领域的深入理解，还为疾病治疗、药物研发等方面的应用提供了重要的基础。
大学课程生物化学实验SOD1课件
一、实验目的
(1)本实验通过对绿豆中SOD的分离，掌握从细胞中抽提酶
的原理和方法。
二、 实验原理
SOD ：超氧化物歧化酶(superoxidc dismutase，简称
SOD，EC 1.15.1.1)是广泛存在于动物、植物和微生物中 的金属酶，它的功能是催化超氧阴离子自由基歧化为过氧 化氢和氧 。
人体正常的新陈代谢就会产生自由基、是人体活动所需要的，
但在某些特殊的情况下，体内会产生过量的自由基。
1938年， Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶 1969年，Irwin Fridovich和Joe McCord重新发现这种蛋白，并且 发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应 的性质。
任何生物来源的Cu/Zn SOD ，Fe SOD和Mn SOD的一级结构的同源性都很高。
蛋白质纯化
前
生物组织
处 理
破碎、溶 解、差速离心
无细胞提取液
粗
分 离
选择性沉淀法
电泳
离子交 换层析
凝胶 亲和 疏水 过滤 层析 层析
吸附 层析
细
分
离
精制后的蛋白质
提取
大多数蛋白质均能溶于水、稀盐、
前
稀碱或稀酸溶液中，故蛋白质的提 取一般以水溶液提取为主。通常采
个天冬氨酸的侧链和一个水分子或羟基（取决於锰的氧化态）配
位结合。
大肠杆菌和其他一些细菌还含有结合铁的超氧化物歧化酶
（Fe SOD）：一些细菌只含Fe SOD，另一些只含Mn SOD，还
有一些则两种都含有。Fe SOD也被发现存在於植物的色素体中。
Mn—SOD在真核生物中多为四聚体，在原核生物中为二聚体，
生物化学实验内容(二)
生物化学实验内容（二）引言概述：生物化学实验是生物学和化学相结合的实验，旨在探究生物体内化学过程和反应机制。
本文将介绍生物化学实验的内容，包括酶活性测定、蛋白质分离与纯化、核酸提取和分析、生物膜模型的构建以及基因克隆实验。
通过这些实验，我们可以深入了解生物体内的分子机制，为生物医学研究和药物开发提供重要的实验基础。
正文内容：1. 酶活性测定- 酶的选择和提取方法- 酶活性检测的原理和方法- 酶动力学参数的计算和分析- 酶的变性和抑制实验方法- 酶的催化机制和反应动力学的实验研究2. 蛋白质分离与纯化- 蛋白质提取和组织裂解方法- 蛋白质分离的凝胶电泳原理和方法- 蛋白质纯化的柱层析方法和技术- 蛋白质结构和功能研究的实验策略- 蛋白质鉴定和定量的质谱分析方法3. 核酸提取和分析- 核酸提取的方法和材料选择- 聚合酶链式反应（PCR）的实验原理和步骤- DNA测序和序列分析的实验技术- RNA的转录和翻译实验方法- 基因表达和调控的实验研究4. 生物膜模型的构建- 磷脂类生物膜的制备方法- 生物膜相关蛋白的定位方法- 生物膜的功能和透过性研究实验- 生物膜与药物相互作用的实验策略- 膜蛋白结构和功能分析的实验技术5. 基因克隆实验- DNA片段的扩增和限制性酶切- 载体构建和转化的实验步骤- 基因突变和基因敲除的实验方法- 基因表达和蛋白质产量的测定- 基因编辑和CRISPR-Cas9的应用总结：生物化学实验的内容涵盖了酶活性测定、蛋白质分离与纯化、核酸提取和分析、生物膜模型的构建以及基因克隆实验。
通过这些实验，我们可以深入了解生物体内的分子机制，为生物医学研究和药物开发提供重要的实验基础。
通过实验结果的进一步分析和研究，我们可以揭示生物体内的化学反应过程，并推动科学技术的进步。
四川大学生物化学实验教学大纲
生物化学实验教学大纲
课程名称：生物化学实验
英文名称：EXPERIMENT OF BIOCHEMISTRY
课程性质：基础课
课程代码：20403020
本大纲主笔人：
面向专业：生命学科相关专业
实验指导书名称：《现代生物学基础实验指导》出版单位：四川大学出版社出版日期：2002 年主编：林宏辉等
一、课程学时学分
课程总学时：51 课程总学分：2
实验总学时：51 实验总分学：2
二、实验的地位、作用和目的
生物化学实验课程是生命科学教学中重要的基础课,它使学生通过本门课程的学习,掌握生物化学实验的基本理论\基本知识以及基本实验技能,培养学生分析问题和解决问题的能力,培养学生具有一定的科学实验能力及严格认真的科学学风,加深理论知识和感性认识,注重培养学生的创新意识。
三、基本原理及课程简介
生物化学实验课程包括滴定、比色、层析、电泳、生化物质的分离、制备、分析和鉴定等基本实验技术及原理，包括实验方法、操作技术和一些基本仪器的原理及使用，分析糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生物化学物质（定量、定性分析）及某些代谢过程（如脂肪酸的β-氧化、氨基移位反应等），培养学生基本实验技能，提高综合分析问题的能力。
四、实验方式及基本要求
每个实验由教师讲解和示范0.5-0.8 学时，其余时间在教师指导下，由学生独立动手进行实验。
学生学习本实验课程之前，需学习无机化学、有机化学、分析化学及相关实验课程，学生进入实验室必须听从老师指导，遵守实验室规则。
五、实验报告
每次实验后按实验讲义要求书写实验报告。
六、考核与考试
考试
七、基本设备与器材配置（名称及数量）
八、实验项目及内容提要。
浙江大学生物化学实验甲 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
浓度的计算
• 测出未知样品在595nm处的光吸收值，通过标准 曲线求出未知样品的蛋白含量并进而求出未知样 品的浓度。
• 但由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的
含量不同，因此考马斯亮蓝法用于测定不同蛋白 质时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
• 主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二 烷基硫酸钠（SDS）等。
3、实验材料及试剂
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
管号 1 试剂 0.1mg/ml标准蛋白质溶液（ml） 蒸馏水（ ml ） 考马斯亮蓝试剂（ ml ） 1.0 5 0.2 0.8 5 0.4 0.6 0.6 0.4 5 5 0.8 0.2 5 5 1.0 0.5 0.5 0.5 0.5 5 5 2 3 4 5 6 7 8
即摇匀使反应完全。 • 反应的灵敏度很高，比Lowry法约高四倍，因此
是一种常用的快速测定微量蛋白质的方法。
• 且结合物在室温下1h内保持稳定，在5～20min之 间，颜色的稳定性最好。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
2、考马斯亮蓝法的特点
• 操作简便快捷；可测范围为0～1 000μg/mL，最小
可测2.5μg/mL蛋白质， • 干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+ 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、 EDTA等均不干扰此测定法。
（1）、试验材料 • 待测蛋白溶液 （2）、试验试剂 • 0.1mg/ml的牛血清白蛋白 • 蒸馏水
• 考马斯亮蓝试剂
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
4、操作步骤
（1）、标准曲线的制作
华南农业大学茶叶生物化学实验报告
华南农业大学茶叶生物化学实验报告《茶叶生物化学实验》是培养茶学专业学生茶叶生物化学动手能力和创新思维的一门课程。
结合实验教学的现状，对如何提高实验教学质量和学生创新能力进行分析，提出改革建议，以期提升教学效果，切实提高学生的综合能力。
茶叶生物化学是茶学专业一门重要的专业基础课，主要对茶鲜叶以及成品茶中主要化学成分及代谢产物的结构和功能进行分析，研究不同茶类加工过程中的化学成分的变化。
该课程是将化学与制茶学、茶树栽培学、茶叶深加工等结合在一起形成的交叉学科，也是茶学专业学生知识结构的重要组成部分。
而对于茶学专业学生来说，不仅要掌握茶叶生物化学的理论基础知识，还要能够熟练操作基本的实验，因此在茶叶生物化学理论教学中，离不开实验教学的辅助作用。
实验教学在培养学生创新精神、创新能力、创新思维，提高动手能力等方面具有非常重要的作用。
虽然很多涉茶院校对茶叶生物化学实验课程的重视程度有所提高，教学改革也有很大进展，但是在实验教学过程中还是存在很多问题，如实验设施不完善，学生参与度不高；教学内容过于传统，不能有效培养学生独立思考和操作的能力；不注重实验成绩的考核等。
因此，如何提高实验教学质量，培养学生的创新能力和实验操作能力，改革实验教学是我们要解决的关键问题。
一、与时俱进，丰富教学内容目前，茶叶生物化学实验课教学内容单一，缺乏整体规划，导致实验内容存在重复或遗漏的现象，学生不能系统地掌握实验技能。
以我校茶叶生物化学实验课程为例，传统的实验教学大纲中只有茶叶样品制备以及水分、多酚类、游离氨基酸、茶三素的测定。
实验教学过程中主要测定仪器只有可见分光光度计，仪器设备单一，学生所学受到限制；茶多酚、游离氨基酸、茶三素测定三个实验中样品提取方式均为沸水浸提，实验过程中存在样品提取方法重复等问题。
茶叶生物化学实验教学应该注重培养学生的基本技能，将实验室基本常识、茶叶样品制备、有效化学成分分离、提取、光谱分析（包括原子光谱、紫外光谱、可见光谱）、色谱分析（包括液相色谱、气相色谱等）等技术融合在教学过程中，使学生能够学习更多的实验内容。
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生物化学实验安排实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理1. 双缩脲反应(biuret reaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。
3.苯环的黄色反应Tyr+ 浓硝酸黄色TrpPhe+少量浓硫酸+浓硝酸黄色4. 乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。
当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时，产生分层现象，界面出现紫色环。
主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。
5. 偶氮反应偶氮化合物都含有-N=N-这样结构，通常作为染料。
6. 醋酸铅反应()↓--→+--+Pb COO NH Pb COOH N H 2222Pr Pr三、实验步骤1. 双缩脲反应(biuret reaction)取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清：水= 1：9）约1ml 和10%NaOH 约2ml ，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。
观察现象，记录。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（蛋清：水= 1：9）和甘氨酸溶液1ml ，再各加0.5ml0.1%茚三酮，混匀，沸水浴中加热1-2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。
（2）在一块小滤纸上滴1滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴1滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。
3. 苯环的黄色反应向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
鸡蛋清溶液（蛋清：水= 1：9）4. 乙醛酸的反应：向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
蛋白质溶液（蛋清：水= 1：20）5. 偶氮反应向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。
鸡蛋清为纯蛋清。
6. 醋酸铅反应取1支试管，加入10%醋酸铅溶液1ml，再加入10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。
加入被水稀释一倍的蛋白质溶液0.4ml.混匀,小心加热,至溶液变黑后,加入浓盐酸数滴,嗅气味,并将湿润的醋酸铅试纸置于管口,观察其颜色变化,记录。
（蛋白质溶液为蛋清：水= 1：1）四、注意事项1、实验内容繁多，请认真预习、操作。
2、操作请按步骤进行五、问题讨论1、如果茚三酮反应呈阳性，结果颜色为何？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？2、黄色反应得阳性结果说明什么问题？3、为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？实验二氨基酸单向纸层析一、实验目的：1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术；2、掌握分配层析法；3、掌握影响分配系数的因素。
二、实验原理:纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
移动速率：Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
影响Rf值的主要因素：Rf决定于被分离物质在两相间的分配系数以及两相间的体积比。
由于在同一实验条件下，两相体积比是一常数，所以主要决定于分配系数。
不同物质分配系数不同，Rf也就不同。
（1）物质的结构和分子极性：结构不同极性不同，在两相中的溶解度也就不同，物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况，极性大的易溶于水中即固定相中，Rf小；反之Rf则较大；（2）层析溶剂：首先，溶剂的纯度要高，否则需经预先处理（酸碱抽提，重蒸馏，脱水干燥等）；其次，溶剂系统选择应考虑被分离的物质在溶剂系统中的Rf在0.05～0.85，样品被分离物质的组分的Rf之差最好大于0.05。
再次，有些溶剂系统必须新鲜配制，如正丁醇-甲酸-水系统久放易引起酯化；最后，溶质和溶剂之间若能形成氢键，对分配系数的影响很大；（3）pH值：溶剂、滤纸和样品的pH值都会影响物质的解离，从而影响物质的极性和溶解度，使Rf改变；溶剂的pH还可以影响流动相的含水量，溶剂的酸碱度大，吸水量多，使极性物质的Rf增加（将滤纸和溶剂用缓冲溶液处理）；（4）滤纸：层析滤纸由高纯度棉花制成，要求滤纸要清洁，质地均一，厚薄一致，纤维松紧度适中，具有一定的机械强度，要被溶剂所饱和。
不同型号的滤纸，其厚薄程度、纤维松紧度各不相同，因此，滤纸纤维结合水的量不一样，两相的体积比也就不同，Rf也不同；另外，滤纸的杂质也会影响Rf，必要时进行预处理（可用0.01～0.4M的HCl处理除去金属离子）；（5）室验室的温度和时间:温度影响物质在两相中的溶解度，即影响分配系数；也影响滤纸纤维的水合作用，影响固定相的体积；也显著地影响溶剂系统的含水量，即影响流动相的组分比例，层析必须在恒温条件下进行，某些对温度敏感的溶剂系统，最好不配制成饱和溶液。
层析时间长Rf大。
（6）展开方式：下行法（层析缸上部有一盛展开剂的液槽,滤纸点样端向上进入槽中，重现性差，斑点易扩散）Rf大，上行法Rf小；环行法（最好用无方向性的特制滤纸）用圆形滤纸层析时，由于内圈较外圈小，限制了溶剂的流动，Rf较小。
（7）样品溶液中杂质：如氯化钠的存在会影响氨基酸的Rf值。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸标准品2、仪器：(1)毛细管(2)电热吹风机(3)层析缸(4)层析滤纸（5）小型玻璃喷雾器（6）铅笔、直尺等。
3、试剂：（1）氨基酸标准溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸标准品。
（2）溶剂系统：正丁醇：冰乙酸：水=40：10：30 (体积比）摇匀，取上层清夜；（3）0.1%的水合茚三酮溶液。
四、实验步骤：1、样品的准备：（实验室准备）2、滤纸的准备：取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个“+”作为点样位置，共4个点。
3、点样：用毛细管点样，中间的点混合氨基酸，两侧点三种标准氨基酸；每个点样点重复点2次，每点一次用电吹风吹干后再点下次（此时，用冷风吹干，防止氨基酸变性降解），点样点的直径应控制在2mm左右，点样完毕用定书针将滤纸做成筒形，点样面向外,注意纸的两边不要接触。
4、展层：向层析缸中加入层析溶剂，液层不要超过点样线，（高约1.5cm，约50－60ml溶剂）将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶剂到达标志线后取出，冷风吹干。
5、显色：用喷雾器将0.1％茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上，热风（加快反应）反应吹干显色。
五、实验结果与计算：1、用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来。
2、测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算各种氨基酸色谱的Rf值。
3、分析混合样品中未知氨基酸的组分。
六、思考题：1、分析影响移动速率的因素有哪些？2、何谓分配层析法和分配系数？实验三 蛋白质两性解离与等电点测定一、 实验目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
二、实验原理蛋白质分子中仍然存在游离的氨基和游离的羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离的性质。
pI 概念：当蛋白质溶液处于某一pH 时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH 称为蛋白质的等电点。
pI 是蛋白质的特征性常数。
利用蛋白质两性电离的性质，可通过电泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋白质。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH 值。
本实验借观察在不同pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH 值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白的等电点。
三、实验试剂与器材 1、试剂乙酸(1mol/L 、 0.1mol/L 、 0.01mol/L) 0.2mol/LNaOH; 0.2mol/LHCl;0.5%酪蛋白溶液;0.01%溴甲酚绿指示剂; 酪蛋白-乙酸钠溶液 2、器材试管、移液管 四、实验步骤PrNH 3+COOHPr NH 3+COO -Pr NH 2COO --OH -H+兼性离子pH=pI阳离子pH<pI阴离子pH>pI1、蛋白质的两性反应1ml 0.5%酪蛋白+4d0.01%溴甲酚绿先滴加0.2mol/l HCl溶液，观察溶液颜色变化，并记录；然后再滴加0.2mol/l NaOH溶液，观察溶液颜色变化，并记录现象。
2、酪蛋白等电点的测定（1）不同pH环境条件的营造（2）向上述7支试管中各加1ml酪蛋白乙酸钠溶液，混匀，静置5min，观察各管浑浊度，用+、±、－等符号表示浑浊度，并判断酪蛋白等电点。
五、实验记录1、蛋白质的两性反应结论：2、酪蛋白等电点的测定结论：六、思考题1、如何根据实验现象判断酪蛋白的等电点？为什么？2、如何根据以上实验现象确定制备酪蛋白路线?实验四牛乳中酪蛋白的制备一、实验目的学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
二、实验原理牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、实验仪器与试剂1、仪器离心机，抽滤装置，精密pH试纸或酸度计，电炉，烧杯，温度计2、试剂（1）95%乙醇；无水乙醚；乙醇-乙醚混合液（体积比1:1）（2）0.2mol/LpH4.7 醋酸—醋酸缓冲溶液3000mL（先配制A液与B液）A液：（0.2mol/L醋酸钠溶液）：称NaAC·3H2O54.44g，定溶至2000mL。
B液：（0.2mol/L醋酸溶液）：称优级纯醋酸〈含量大于99.8%〉12.0g定溶至1000mL。
取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸缓冲溶液3000mL。
3、材料牛奶五、实验操作1．将25mL牛奶加热到40℃。