紫外 可见分光光度法标准操作程序
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
紫外可见光分光光度计操作规程
1 仪器的使用1.1 将设备平稳地安置在一个通风，无阳光直射，干净整洁的房间内，空压机与设备保持一定的距离，最好分室而放。
1.2 打开箱盖，搁置好漏斗架，将集雾器上的硅胶管分别和对应的漏斗接好。
1.3 连接设备及空压机的电源。
打开仪器电源开关，面板低水位指示灯亮，在底部加蒸馏水至面板左边低水位指示灯灭为止。
1.4 安装喷雾系统，样品架，并将样品放置于样品架上。
1.5 在密封槽内加入适量蒸馏水，盖上箱盖。
在空气饱和器内加入蒸馏水或去离子水，水位高度以液面计上部4/5为准。
1.6 从盐水加入口加入配置好的浓度为5%的盐溶液。
1.7 检查各种管道的连接状况，将排雾管用软管引出使盐雾排出室外或下水道。
1.8 打开运转开关，按标准设定好试验温度及饱和器温度值，设定好试验时间。
1.9 将空压机的出气口与设备第一级调压阀连接，打开空压机电源充气。
打开连续开关，调节压力到规定范围：进气压力0.4~0.5mPa之间；喷雾压力0.07~0.17mPa之间。
（一般情况下无需调节）连续喷雾即开始运行。
.如需“间隙”喷雾时，关闭连续开关，打开间隙开关，分别设定好喷雾时间值、停喷时间值，间隙喷雾即开始运行。
1.10 试验结束设备自动停止，应先切断设备和空压机电源，待取出样品后，将饱和器、箱体及盐水箱中的水全部排掉，并用清洁的水将整个箱体冲洗干净。
1.11 仪器使用开始前和结束后，操作人员应对仪器的状态进行检查，并认真填写使用记录。
2 仪器的维护和保养2.1保持设备外观整洁，干净。
2.2试验完毕后清洗试验室内部，并将加热水槽内水排放使箱内清洁，尽量使试验箱处于干燥环境中。
2.3定期更换饱和器内存水。
若长久不做试验，打开饱和器将水放光。
2.4定期对空气压缩机加润滑油，并定期检查空气调节阀功能。
2.5长期未使用情况下重新开机做试验，应先对全部电气系统进行检查。
2.6控制面板上的的电器元件，如发生故障需要调换，应在厂家的指导下进行，以免造成不必要的麻烦。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
紫外-可见分光光度法标准操作规程
紫外-可见分光光度法标准操作规程1 编制依据：《中华人民共和国药典》2005年版（二部）2 定义：紫外可见分光光度法是基于被测物质在紫外光区、可见光区的电磁辐射的选择性吸收现象，对该物质进行定性或定量分析的方法。
3 原理：紫外可见分光光度法是分子与原子外层电子能级跃迁对辐射的吸收，属于分子吸收光谱法。
4适用范围：凡具有芳香环或共轭双键结构的有机物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。
5检验操作方法5.1 仪器及用具紫外-可见分光光度计吸收池擦镜纸5.2 操作方法5.2.1 准备5.2.1.1 根据测量的波段范围，用拨杆选择适当光源（195～360nm用氘灯，360～800nm用钨灯）。
5.2.1.2 转动波长手轮，使波长指示器置于测试波长。
5.2.1.3 根据需要将光谱带手轮置适当位置5.2.1.4 根据测量的波段范围，选择合适的比色皿（195～350nm 用石英比色皿，350～800nm用石英比色皿或玻璃比色皿）。
5.2.1.5 打开试样室盖5.2.1.6 开启电源·按POWER按钮开关，开启总电源，微机显示屏亮。
·点燃钨灯：按下W·ＯＮ-ＯＦＦ按钮开关，按钮上指示灯亮。
·点燃氘灯：按下Ｄ·ＯＮ-ＯＦＦ按钮开关，按钮上指示灯亮，然后再按住D·START按钮数秒，当按钮上指示灯亮后立即释放按钮。
如果氘灯老化，按住按钮的时间应相当适当延长。
（根据测量需要，可以只点燃一种灯。
）注：开启总电源后，微机面板上指示灯亮，显示屏出现闪耀的暗电流值，提示清除。
清除暗电流方法：将试样室盖开足，接触内部的微机开关，暗电流即为零。
若暗电流超出-5.0～+5.0范围，可用螺丝刀适当调节电源面板上的100%T调节器，然后再用上法清除暗电流。
在测量过程中如果发现暗电流漂移不为零，皆可用此法清除暗电流。
5.2.1.7 关闭试样盖，拉动拉杆使1#试样槽进入光路，调节100%T/OA手轮，使显示屏显示“100.0”。
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。
1.2屏幕显示和触摸键盘UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。
选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。
此外，输入数值时，如波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。
下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。
①START/STOP键一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。
②AUTO ZERO键按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。
测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。
③GOTOWL键该键可用来改变当前的波长。
④ENTER键输入数值后，按该键确认。
⑤Cursor光标键（＜（-），＞）这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。
输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。
⑥Function功能键（F1~F4）这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。
⑦RETURN键按下该键可返回当前屏幕的前一屏。
⑧MODE键用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。
⑨Print打印键用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。
⑩Numeric数字键用该键可输入数值？CE键用该键可清除数值输入错误。
按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。
模式选择和共享操作初始化完成后即显示模式选择屏幕各种模式概述：在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。
①光度模式在固定波长下测量样品的吸光度或%透光率。
紫外可见分光光度计的标准操作规程
制药GMP管理文件一、目的：建立紫外/可见分光光度计的操作规程，保证正确操作。
二、适用范围：适用于紫外/可见分光光度计的操作。
三、职责：质检员对本标准的实施负责。
四、正文：1 操作方法：1.1 打开主机电源开关，在仪器初始化后，按“ENTER”键进入光度测量主界面。
1.2 设定测量模式。
在光度测量主界面下，按下“SET”键进入测量模式选择界面，选定所需测量模式后按“ENTER”键，则“√”移动到相应模式的后面，此时按“ERTURN”键返回上一级界面。
1.3 设定工作波长。
在光度测量主界面下，按“GOTO”键可进入波长设定界面，在界面的底部提示信息处用0—9和小数点输入波长，输入完后按“ENTER”键返回上一级界面。
（注：输入值范围为190—1100nm，否则无效视为无效数据应重新输入。
）1.4 进行自动校零。
在光度测量主界面下，按“ZERO”键对当前工作波长下的的空白液进行调0.000Abs、100%T1.5 进行测量。
在光度测量主界面下，当调零完毕后，把待册试样拉入光路，按“START”键进入测量界面，再次按“START”键可在当前工作波长下对样品进行测量。
1.6 数据清除。
如数据以村满（共50个数据）或者想清除以测量数据，可在测量结果显示界面下按“CLEAR”键，选择“确认”后，即可清除数据，然后选择“ENTER”键，系统返回上一级界面。
1.7数据打印。
在测量结果显示界面下，可直接按“PRINT”键进行打印设定界面，把光标移到“确认打印”上，按“ENTER”键后系统打印，打印后，系统和屏幕数据将自动清除。
1.8 操作完毕关闭电源。
紫外可见分光光度计的操作规程
紫外可见分光光度计的操作规程一、仪器及试剂准备1.确保仪器所在的工作台或使用环境整洁干净，确保工作台上无烟灰、灰尘等对结果产生干扰的物质。
2.检查仪器各个部分的连接是否牢固，仪器表面是否有损坏或污损情况。
3.检查紫外可见分光光度计所需的试剂是否充足，试剂是否过期。
二、做样品前的准备1.根据实验要求，选取适当的溶剂，将待测试样品溶解或稀释至适当浓度。
如果有特殊要求，还需要进行滤液作业。
2.确保样品容器干净，没有异物或杂质。
三、仪器开机及预热1.确认紫外可见分光光度计与电源连接正常，开启电源开关。
2.打开仪器电源后，等待其自检完成，确保各个部分的功能正常。
3.操作前预热，大多数仪器需要预热一段时间，以确保仪器能够达到工作温度，并保持稳定。
四、波长设置及基线调整1.根据实验要求，在键盘上设置所需的波长。
2.将试剂添加至样品池中，调节“调零”钮，使仪器显示为零吸光度。
五、样品测定1.将校准好的样品注入样品池中，确保样品池干净、无气泡。
2.调整仪器使其显示所需波长，并进行基线调整。
3.测量前，用空白试剂进行零点矫正，将试剂加入样品池中，点击“零位调整”按钮。
4.加入待测试样品后，点击“测量”按钮，以获取样品的吸光度值。
5.如需多次测量，应按要求将样品室清洗干净，然后重复上述步骤。
六、数据处理1.根据实验要求，对所得的吸光度数据进行计算，如浓度计算等。
2.准确记录实验所得数据，包括吸光度值、浓度等。
七、仪器关闭及清洁1.测量结束后，关闭仪器电源开关。
2.清除样品池中的试剂，用洁净的纸巾或棉签擦拭样品池。
3.用干净的棉布或纸巾清洁仪器表面，以确保仪器干净整洁。
4.如有需要，关闭其他仪器配件，如电源、冷光源等。
八、故障排除总结：紫外可见分光光度计的操作规程包括仪器及试剂准备、做样品前的准备、仪器开机及预热、波长设置及基线调整、样品测定、数据处理、仪器关闭及清洁和故障排除等步骤。
在操作过程中需要注意仪器的正确使用和维护，以确保实验的准确性和仪器的正常运行。
紫外-可见分光光度法(2010药典一部)检验标准操作规程
1.目的：建立紫外-可见分光光度法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2. 依据：2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。
3. 范围：适用于所有用紫外-可见分光光度法(一部)测定的供试品。
4. 责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5. 正文：5.1. 仪器的校正和检定。
5.1.1. 波长：由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho2O3）4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外光区±1nm，500nm附近±2nm。
5.1.2. 吸光度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定 ，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
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紫外-可见分光光度法标准操作程序1 简述紫外-分光光度法是通过被测物质在特定波长处或一定波长长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
本法的在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰化合物无吸收，则可用本法作检查。
物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的。
因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区(200-400nm)或可见光区(400-850nm)产生吸收。
通常使用紫外分光光度计的工作波长范围为190-900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯－比尔（Lambert-beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：Ａ=log1/T=ECL式中Ａ为吸光度；Ｔ为透光率；Ｅ为吸收系数；Ｃ溶液浓度；Ｌ为光路长度。
如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml），光路长度(L)为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。
如溶液的浓度(C)为摩尔浓度(mol/L)，液层厚度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
2 仪器紫外-可见分光光度计：主要由光源、单色器，样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯-为了满足紫外和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。
单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。
色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200~400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。
光栅系将反射或透光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。
检测器有光电管和光电倍增管二种。
紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。
单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。
双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离为两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。
3 紫外-可见分光光度计的检定3.1 波长准确度3.1.1 波长准确度的允差范围紫外一可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。
3.1.2 波长准确度检定方法3.1.2.1 用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min）、响应“快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0-100%，在200-800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。
单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×0.1位置，透光率读数放在100（或选择开关放在×1，透光率放在10），关小狭缝，打开光闸门，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm峰出现的位置，若与波长读数不符，应调节仪器左侧准直镜的波长调整螺丝，如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波方向移动，则应逆时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。
用于检定紫外可见分光光度计的汞灯谱线波长: 237.83，253.65，275.28，296.73，302.15，313.16，334.15，365.02，365.48，366.33，404.66（紫色），435.83（蓝色），546.07（绿色），576.96（黄色）及579.07nm。
3.1.2.2 用仪器固有的氘灯检定本法主要用于日常工作中波长准确度的核对。
取单光束能量测定方式，测量条件同上述低压汞灯的方法，对486.02及656.10ml 二单峰进行单方向重复扫描3次。
3.1.2.3 用氧化钬玻璃检定将氧化的休玻璃放入样品光路，参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。
校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。
氧化钬玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.7、460.0、484.5、536、2及637.5nm波长处有尖锐的吸峰值，可供波长检定用。
氧化钬玻璃因制造原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，另外，在放置的过程中也会发生波长漂移，因此需定期由计量部门校验。
3.1.2.4 用高氯酸钬溶液检定本法可供没有单束光测定功能的双束光紫外分光光度计波长准确度检定用。
高氯酸钬玻璃溶液的配制方法：取10%的高氯酸为溶剂，加入氧化钬配成4%的溶液即得。
）高氯酸溶液有较强的吸收峰波长为241.3、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64、640.52nm。
如果是双束光扫描仪器，但不是数据贮存型的（指的是直接将信号描记于记录纸上），记录的波长可能因记录笔滞后而非真实波长，为了准确测定，建议采用定点检定而不用扫描方式。
3.2 吸光度的准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L）溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm石英池，以硫酸液0.005mol/L为空白，在235，257，313，350nm分别E，测得值应符合下表中规定的允差范围。
测定吸光度，然后换算成波长(nm) 吸收强度吸收系数（E）允差范围235 最小 124.5 123.0-126.0257 最大 144.0 142.8-146.2313 最小 48.6 47.0-50.3106.6 105.5-108.5最大350分辨率、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按现行国家技术监督局“双光束紫外可见分光光度计检定规程”中华人民共和国国家计量检定规程，应符合有关项下的规定。
日常使用中，对以上两项，即波长和吸光度准确度应根据需要随时检查。
3.3 杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
试剂浓度/%（g/ml）测定用波长/nm透光率＜0.8 220 碘化钠 1.000.8＜3405.00亚硝酸钠 4 样品测定操作方法按各该品种项下规定的方法配制供试品溶 4.1 吸收系数测定（性状项下）项）测定其吸光度，并计算吸收系数，应符合规定液，在规定的波长（参见5.8 范围。
测定供试品溶液在有关波长处的最按该品种项下的规定， 4.2 鉴别及检查大及最小吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。
4.3 含量测定按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液 4.3.1 对照品比较法对照品溶液所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量和对照品溶液，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液10以内用同一溶剂，）%±（的100 的吸光度。
在规定的波长及该 4.3.2 吸收系数法按各该品种项下配制供试品溶液，波长±2nm 处测定其吸光度，按该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。
，并注意仪器的校正与检定。
如100用本法测定时，吸收系数通常应大于测定新品种的吸收系数，需按后列“吸收系数测定法”的规定进行。
计算分光光度法一般不宜4.3.3 计算分光光度法按规定，《中国药典》应严格按各品种项下规用于含量的测定，对于少数采用计算分光光度法的品种，有一些吸光度是待测成分吸收曲线的上升或下用本法时应注意：定的方法进行。
若故因仔细操作，降的陡坡处测定时，尽量使供试品和对照品的测定条件一致。
，则应在测定前A该品种不用对照品，如维生素测定法（见《中国药典》附录）对仪器作仔细的校正和检定。
．4.3.4 比色法供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂，使反应物的最大吸收移至可见光区。
用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作。
除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或者供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。
当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。
5 注意事项5.1 试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用。
5.2 使用的石英吸收池必须洁净。
用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。
5.3 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧，装盛样品溶液以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上面下擦拭干净，检视应无残留溶液，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。
吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。
使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时，可用硫酸：硝酸（3:1v/v）混合液稍加浸后，洗净备用。
如用重铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的重铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铭酸钾吸附于吸收池表面。
5.4 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。
因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截至使用波长。
列如甲醇、乙醇的截至使用波长为205nm。
另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。
因此，在检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应符合下表规定。