大肠杆菌测试片半成品质量标准

大肠杆菌测试片半成品质量标准

一、用途

大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，食物或水中大肠杆菌的检出即意味着直接或间接被粪便污染。大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品，与传统检测方法相比省去了乳糖发酵、氧化酶试验、三糖铁琼脂（TSI）、靛基质试验、尿素酶试验等鉴定过程，大大缩短了检测周期。本产品适用于食品、饮用水及原料中大肠杆菌的计数，也可用于食品设备加工设备表面的卫生检查。

执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数PetrifilmTM测试片法（GB/T 4789.38

二、基本要求

设施与生产质量管理按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。

三、相关参数要求

[准确度]

大肠杆菌测试片对样本检测的准确度为：80%~100%

[假阳性率]

本测试片通过对判定为大肠杆菌阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，假阳性率应小于20%。

[误差率]

随机抽取20片测试片进行同一样本平行检测，进行P值检验，比较P值与α值的大小，

从而判断本测试片检测样本的均一性。

[稳定性及老化]

取半成品30片分别进行4℃和37℃保存12天的数据比对,12天两组保存数据菌落数符合率大于90%

（一）样品：

序号食品大类食品品种典型代表样品

1 饮料桶（瓶）装饮用水娃哈哈

碳酸饮料可口可乐

2 乳制品乳粉伊利女士营养奶粉

液体乳旺仔牛奶、三花酸奶、伊利纯牛奶

3 肉制品生肉鸡肉、猪肉、里脊、鸭肉（选其一）

熟肉熟肉干制品、熏烧烤肉制品（选熟肉即

可）

4 速冻食品速冻面米食品饺子、汤圆

5 蔬菜制品蔬菜生菜

蔬菜干制品挑选一种有代表性的

注：每大类不少于2中样本，样本可随季节和客户需求进行更换

2.国标方法所用试剂：VRBA -MUG 培养基、蛋白胨水、缓冲葡萄糖蛋白胨水、西柠檬酸盐培养基、无菌生理盐水、甲基红试剂、V-P 试剂、Kovacs 靛基质试剂、1M HCL 和 NaOH 等。

3.仪器及耗材

均质机、恒温恒湿培养箱、高压灭菌锅、显微镜、大肠杆菌测试片、平板、移液管、均质袋等。

（二）、 试验流程

1、样品的处理及稀释

参照 GB4789.38-2012 中 6.1 进行。

2、检测流程----国标方法（GB4789.38-2012）

3、检测流程----测试片（参照测试片说明书进行培养和菌落计数）

↓ ↓

37℃ ↓18-24h ↓

四、 验证参数

1.准确度

取样品，随机抽取测试片，每个稀释度接种三片，按照本测试片方法进行检测。

检样 25g （mL ）样品+225mL 稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2~3个适宜的稀释度的样品匀液，接种测试片 计数典型和可疑菌落 报告结果

相同样本，按照国标GB 4789.38-2012《食品安全国家标准食品微生物学检测大肠埃希氏菌计数》进行检测。

本测试片和国标方法报告菌落数相比较的准确度应80%-100%范围内，计算公式如下：

M：样品国标方法测得大肠杆菌对数值；

M

：样品测试片测得大肠杆菌对数值。

X

2.假阳性率

从单个测试片上挑取判定为阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，分别统计阳性菌落数和非阳性菌落数。

F: 为接种VRBA -MUG的所有菌落数

本测试片检测的假阳性率应小于20%。

生理鉴定：革兰氏阴性无芽孢杆菌

生化鉴定步骤如下：

参照GB4789.38-2012中大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化进行

从培养好的测试片上挑取判定为大肠杆菌阳性的菌落，用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂平板上，36 ℃±1 ℃，培养 18 h～24 h。取培养物进行革兰氏染色和生化试验。

取营养琼脂平板上的培养物进行靛基质试验、MR、V-P 试验和柠檬酸盐利用试验。大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别见表 1。

判定标准：鉴定为革兰氏阴性无芽胞杆菌，IMViC 生化试验为＋＋――或－＋－－的菌落即未大肠杆菌阳性菌。

3.均一性

随机抽取20片测试片进行同一样本平行检测，进行P值检验，比较P值与α值的大小，

从而判断本测试片检测样本的均一性。

4、稳定性老化

取样品，随机抽取测试片，每个稀释度接种三片，按照本测试片方法进行检测。

相同样本，按照国标GB 4789.38-2012《食品安全国家标准食品微生物学检测大肠埃希氏菌计数》进行检测。

本测试片和国标方法报告菌落数相比较的准确度应80%-100%范围内，计算公式如下：

M：4℃测得大肠杆菌对数值；

M

X

：37℃测得大肠杆菌对数值。

对应表格：

表1 大肠杆菌测试片验证数据

项目名称大肠杆菌快速检测测试片

培养条件

检测样品及项目

样品稀释倍数

国标法(cfu/mL) (cfu/mL) 第三方

平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3

1 浓度1 浓度2

2 浓度1 浓度2

3

浓度1

浓度2 4

浓度1

浓度2

5 浓度1

浓度2

表2报告大肠杆菌及准确度

报告菌落数及准确度

样品方法

报告菌落数

(cfu/mL)

log10（cfu/mL）

（测试片与国标比

较）准确度%

（第三方测试片与国标比

较）准确度%

1 国标法第三方测试片

2 国标法

第三方

测试片

表3假阳性率

检测样品挑取菌落数BGLB产气管数假阳性率1

2

3

表4 均一性分析数据

随机取测试片编号平行1 平行2 平行3 报告菌落数（cfu/mL）

1

浓度1 浓度2

2 浓度1

浓度2

表5稳定及老化数据

保存天数第六天第九天第12天

温度样品

及倍数

本批次上批次本批次上批次本批次上批次

4℃37℃4℃37℃4℃37℃4℃37℃4℃37℃4℃37℃

【贮藏】在2～8℃下避光保存，12个月内使用。