微生物细胞大小的测定(精)PPT课件
微生物细胞的大小测定
电子显微镜图像分析法是通过电 子显微镜获取微生物细胞的图像，
然后利用图像处理技术进行分析 和测量的方法。
优点
可以获得高分辨率和高清晰度的细 胞图像，通过图像处理技术可以实 现自动化测量，提高测量效率。
缺点
需要昂贵的电子显微镜设备，且图 像处理技术需要专业知识和技能。
04 微生物细胞大小的生理意 义
05 微生物细胞大小的测定实 例
单个细胞大小的测定实例
测量方法
注意事项
使用显微镜和测量工具，如测微计或 显微镜测微器，对单个细胞进行直接 测量。
为保证测量准确性，应选择处于对数 生长期的细胞进行测量，避免细胞形 态不规则或重叠影响测量结果。
测量步骤
将微生物样品制备成临时装片，放置 在显微镜载物台上，调整焦距使细胞 清晰可见，使用测量工具对单个细胞 进行长、宽、高的测量。
缺点
测量过程较为繁琐，需要 经验丰富的实验员操作， 且容易受到观察者的主观 影响。
染色法
定义
染色法是通过染色剂对微 生物细胞进行染色，使其 更容易观察和测量的方法。
优点
染色后细胞轮廓清晰，易 于观察和测量，可以提高 测量的准确性和精度。
缺点
染色过程可能对细胞造成 损伤，影响其生理状态和 活性。
电子显微镜图像分析法
微生物细胞大小与生长速率的关系
总结词
微生物细胞的大小与其生长速率密切相关。一般来说，较小的细胞具有更快的生长速度，因为它们具有更高的表 面积与体积比，有利于物质交换和能量代谢。
详细描述
微生物细胞的生长速率与其大小呈负相关。较小的细胞具有更大的表面积与体积比，这使得它们能够更有效地进 行物质交换和能量代谢，从而支持更快的生长速度。例如，细菌的繁殖速度通常与其大小呈负相关，较小的细菌 在适宜条件下能够更快地繁殖。
微生物大小测定
染液：草酸铵结晶紫 吕氏碱性美蓝
微生物大小测定
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不是直接测量细胞大小！ 而是用于校正目镜测微尺相对长度
镜台测微尺
微生物大小测定
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微生物大小测定
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2 校准目镜测微尺
❖ 放镜台测微尺：镜台测微尺置于载物台上，使刻 度朝上。
校准：先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜 台测微尺刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜 台测微尺刻度平行，移动推进器、使两尺重合， 再使两尺在某一区域内两刻度线完全重合，计数 两重合刻度之间目镜测微尺格数和镜台测微尺格 数。
格长度为0.01mm即10um
目镜测微尺 是一块圆形玻片，其中央刻有准确等分刻度， 有把5毫米刻成为50等分或把10毫米长度刻成 100等分。测量时，将其放在接目镜中隔板上 来测量经显微镜放大后细胞物象。
微生物大小测定
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1 装目镜测微尺
试验步骤
❖取出目镜，把目镜透镜旋 下，将目镜测微尺刻度朝下 放在目镜镜筒内隔板上， 旋上目镜透镜，然后将目镜 插入镜筒内。
两重合线间镜台测微尺格数*10um 目镜测微尺每格长度(um)= ———————————————————
两重合线间目镜测微尺格数
微生物大小测定
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3 菌体大小测定
校正完后取下镜台测微尺，换上所需观察菌体制片,细菌用简
单染色；测定酵母菌时制成水浸片也能够用美蓝染色
先用低倍镜观察找到菌体，然后选择适当倍镜观察，在不一
❖ 用一样方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测 出高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占 格数。
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校准目镜测微尺
实验六 微生物细胞大小的测定
实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。
2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。
二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。
用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。
是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。
由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。
三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。
四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。
根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
实验七微生物细胞大小测定
实验七微生物细胞大小测定实验目的1．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造。
2．掌握用显微测微尺测量微生物细胞大小的方法。
实验材料1．菌种啤酒酵母菌24h液体培养物；2．其它光学显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、盖玻片、载玻片、香柏油、擦镜纸。
实验原理在一定条件下，各种微生物细胞的大小，是微生物形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于微生物细胞很小，只能在显微镜下测量，一般采用显微测微尺来测量。
显微测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺是在中央部分刻有精度等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格，每格长度为10 m，用于校正目镜测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形玻片，其中央一般有100等分的小格。
目镜测微尺可直接用于测量细胞的大小。
由于不同的显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的相对大小。
球菌用直径来表示大小，杆菌用宽和长的范围来表示。
如金黄色葡萄球菌直径约为0.8微米，枯草芽孢杆菌大小为0.7-0.8*2-3微米。
实验内容（一）目镜测微计的校正1．放置目镜测微尺取出目镜，旋开目镜，将目镜测微尺放在目镜的隔板上（有刻度的一面向下），然后旋上目镜，最后将此目镜插入目镜镜筒内。
2．放置镜台测微尺把镜台测微计放在显微镜载物台上（有刻度的一面向上）。
3．校正目测微尺用低倍物镜观察，对准焦距，通过调焦能看清镜台测微计的刻度；移动镜台测微尺和转动目测微尺使两者刻度平行；转动推进器从而使两测微尺某段起、止线完全重合，数出两条重合线之间的格数。
用同法分别校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜时，防止物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
微生物细胞大小的测定方法
微生物细胞大小测定一、实验目得了解目镜测微尺与镜台测微尺得构造与使用原理,掌握微生物细胞大小得测定方法. 二、实验原理微生物细胞得大小就是微生物重要得形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小得工具有目镜测微尺与镜台测微尺。
目镜测微尺（图－1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍm长度刻成50等分，或把10 mｍ长度刻成1０0等分。
测量时，将其放在接目镜中得隔板上（此处正好与物镜放大得中间像重叠)来测量经显微镜放大后得细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合得放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示得长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上得镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小方格所代表得相对长度.镜台测微尺（图２0-2）就是中央部分刻有精确等分线得载玻片，一般将ｌmm等分为10０格，每格长l0μm(即０、0ｌmm）,就是专门用来校正目镜测微尺得.校正时,将镜台测微尺放在载物台上，图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜得两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数得放大而放大，因此从镜台测微尺上得到得读数就就是细胞得真实大小，所以用镜台测微尺得已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表得长度,然后移去镜台测微尺，换上待测标本片,用校正好得目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验器材1.活材料：酿酒酵母（Sacchaｒomyces ｃerｅvisｉae)、枯草杆菌（Bacｃiｌlｕｓｓubｔili ｓ)染色标本片。
2。
器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法１．目镜测微尺得校正把目镜得上透镜旋下，将目镜测微尺得刻度朝下轻轻地装入目镜得隔板上，把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上.先用低倍镜观察，对准焦距，视野中瞧清镜台测微尺得刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺得刻度平行,移动推动器,使两尺重叠，再使两尺得“0”刻度完全重合,定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合得刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺得格数与镜台测微尺得格数.因为镜台测微尺得刻度每格长ｌ0μｍ,所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表得长度.例如目镜测微尺5小方格正好与镜台测微尺5小方格重叠,已知镜台测微尺每小方格为l0μm，则目镜测微尺上每小方格长度为=5×10μｍ/5＝10μm用同法分别校正在高倍镜下与油镜下目镜测微尺每小方格所代表得长度。
实验五微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数
主要实验内容：
一 显微镜下细菌细胞大小的测定 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数）
一 显微镜下细菌细胞大小的测定
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法
5 实验报告
（1） 目镜测微尺标定结果记录
物镜 低倍镜 油镜 物镜放大倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格 代表长度（um）
100
×
×
0.5um
（2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录
菌体 编号 1 2 3 4 5
….
宽 目尺 格数
长
菌体宽 平均值 目尺格 菌体长 平均值 （um） （um） 数
计数方法
在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位 计数左上、左下、右上、下等四个中方格（100个小方格） 所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数 的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×106 (ml) 计算公式：
每ml菌液含菌数 = N ×K ×d
菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um）
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二 血球计数板测定微生物细胞的数量
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。
2 实验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液 放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微 镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推 算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。
实验六、微生物细胞的大小测量和显微计数目
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计数规则：
1）要求每小格内约有5－10个菌体为宜；
2）选计数室四个角的中方格和中央的一个中方格进行计数；
3）当细胞位于方格的线上时，一般只数上方和右边线上的细胞；
4）酵母出芽，又未脱离母体的，只有当芽体大小达到母细胞的
一半时，即作为两个菌体计算；
操作要点：
•血球计数室要清洁。
•观察时光线不宜过强，否则难以找到计数室。
操作要点： • 观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度。 • 换高倍镜和油镜校正时，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏 镜头。
2、显微直接计数
1）血球计数室的观察和清洗 取血球计数板置于载物台上→ 观察熟悉计数室的中 方格和小方格 → 取下血球计数板→用自来水冲洗计 数室后，再用无水乙醇将血球计数室冲洗干净→ 置 干燥箱干燥 。
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2）样品中酵母菌细胞的直接计数：
取干净血球计数板→ 在计数室上方盖上盖玻片→ 用无 菌吸管，吸取摇匀的酵母菌稀释液→ 在盖玻片边缘沾 一下，让菌液沿缝隙靠毛细管渗透作用进入计数室→ 静置5min → 低倍镜或高倍镜计算每个中方格内的细 胞数→ 完毕后清洗血细胞计数板→ 冲洗、干燥
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二、基本原理
1、微生物细胞大小的测量
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也 是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要 在显微镜下，借助特殊测量工具――测微尺（包括 镜台测微尺和目镜测微尺）。
测微尺原理：镜台测微尺是中央部分刻有精确等 分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长 0.01mm(即10μm)。镜台测微尺并不直接用来测量细 胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长 度，然后再用目镜测微尺测量微生物细胞的大小。
微生物细胞大小的测定方法
微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺与镜台测微尺的构造与使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。
二、实验原理微生物细胞的大小就是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺与镜台测微尺。
目镜测微尺(图-1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。
测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。
镜台测微尺(图20-2)就是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0、0lmm),就是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染色标本片。
2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。
先用低倍镜观察,对准焦距,视野中瞧清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数与镜台测微尺的格数。
04微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数
实验四微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数一、实验目的1.学习接目测微计的校正方法，了解血球计数板的构造和计数原理2. 学习使用显微镜测微尺测定微生物细胞大小，掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法。
二、实验原理微生物细胞的大小是微生物分类鉴定的重要依据之一。
微生物个体微小，必须借助于显微镜才能观察，要测量微生物细胞大小，也必须借助于特殊的测微计在显微镜下进行测量。
显微测微计由镜台测微计和目镜测微计两部分组成。
后者可直接用于测量细胞大小。
它是一块圆形玻片，其中央有精确等分到度，测量时将其放在接目镜中的隔板上。
由于目镜测微计所测量的是微生物细胞经过显微镜放大之后所成像的大小，刻度实际代表的长度随使用的目镜和物镜放大倍数及镜筒的长度而改变，所以，使用前须先用镜台测微计进行标定，求出某一放大率下，目镜测微计每一小格所代表的长度，然后用目镜测微计直接测被测对象的大小。
镜台测微计是一块中央有精确刻玻片，刻度的总长为lmm，等分为100小格，每小格长10um，专用于对目镜测微计进行标定的。
三、材料3.1 器械：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺，载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、肾形盘、洗瓶、接种环、酒精灯、火柴、滴管。
3.2 菌种：培养48h的啤酒酵母斜面菌体和菌悬液。
3.3 革兰氏染液四、实验步骤（一）微生物菌体大小的测定1.目镜测微尺的校正（1）更换目镜镜头：更换目镜测微尺镜头（标记为PF）；或者取下目镜上部或下部的透镜，在光圈的位置上安上目镜测微尺，刻度朝下，再装上透镜，制成一个目镜测微尺的镜头。
（2）某一倍率下标定目镜刻度：将镜台测微尺置于载物台上，使刻度面朝上，先用低倍镜对准焦距、看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器使两尺重叠，并使二尺的左边的某一刻度相重合，向右寻找另外二尺相重合的刻度。
记录两重叠刻度间的目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
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提示：很重要的部分，要牢记
原核细胞与真核细胞的不同，表现在：
A. 原核细胞基因组的大小仅有真核生物基因组大小的一半 B．原核细胞具有单链的DNA分子 C．原核细胞中与DNA结合的蛋白质较少，而且没有核膜包裹 D．原核细胞具有RNA而不是DNA
原核生物
A．具有细胞器，但不具有细胞核 B．能产生ATP，能独立进行生命过程 C．细胞壁含几丁质 D．大多具有环状DNA E．都是厌氧生物
微生物分布
微生物无处不在，我们无时不生活在“微生物的 海洋”中
✓ 细菌数亿/g土壤 ✓ 每张纸币带细菌：900万个 ✓ 人体体表及体内存在大量的微生物
➢ 口腔：细菌种类超过500种 ➢ 肠道：微生物总量达100万亿 ➢ 皮肤表面：平均10万个细菌/cm2 ➢ 粪便干重的1/3是细菌，每克粪便的细菌总数为：1000亿个
✓ 第一步：采用生黑葡萄糖杆菌或弱氧化醋杆菌，将D山梨醇转化为L-山梨糖
✓ 第二步：采用氧化葡萄糖杆菌和芽孢杆菌混合发酵， 将L-山梨糖转化为1-酮基-L-古龙酸，再经化学转化 为维生素C
2019年，泉生热孢菌全基因组序列测定
微生物特点
个体微小
✓ 杆菌的平均长度：2 微米 ✓ 面积/体积比：人 = 1，大肠杆菌 = 30万 ✓ 这样大的比表面积特别有利于它们和周围环境进行物
病毒
亚病毒
拟病毒
类病毒
朊病毒
古细菌
（真）细菌
真菌
酵母菌
霉菌
蕈菌
藻类
原生动物
下列各项中属于原核生物的是＿＿。
A、蓝藻，支原体 B、衣原体，噬菌体 C、衣藻，金鱼藻 D、放线菌，霉菌 真菌通常是指＿＿。 A、所有的真核微生物 B、具有丝状体的微生物 C、霉菌、酵母菌和蕈菌 D、霉菌和酵母菌 下列物种之间相似程度最大的一组是＿＿。 A、疟原虫，血吸虫，蚊子 B、痢疾杆菌，酵母菌，青霉菌 C、蓝藻，硝化细菌，硫细菌 D、水稻，水蛭，水绵
微生物细胞大小与数量的测定
微生物细胞大小与数量的测定一、实验目的1. 了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
2. 学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
3. 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
（1）目镜测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm 长度刻成50等分，或把10mm 长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中间像重叠）来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
2）镜台测微尺镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为100格，每格长l0”m （即O.Olmm ），是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的 ◎图 1目镜测微尺目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
2.显微镜计数法测定微生物的原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
微生物大小的测定
3. 镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为 1mm 的 直线等分成 100 个小格，每格长 10μm，专用于校正目镜测微尺。
4. 微生物大小的表示方法：球菌用直径范围表示大小；杆菌和螺菌 用细胞的直径和长度的范围来表示，但杆菌测量的是细胞的直接 长度，而螺菌测量的是菌体两端的距离而非细胞实际长度。
三、实验器材
1.菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酿酒 酵母
2.仪器、材料：显微镜、目镜测微尺、镜台 测微尺、擦镜纸、香柏油、二甲苯。
一、实验目的及要求
1. 学习并掌握用测微尺测定微生物大小 的方法。
2. 增强微生物细胞大小的感性认识。
二、实验原理
l．微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在 一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之 一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜 测微尺两部分。
五、实验报告
2.各菌测定结果
微生物名 称
金黄色葡 萄球菌
目微尺 每格代 表长度
宽
目微尺 格数
宽度
大肠杆菌
长
目微尺 格数
长度
菌体大小 范围
酿酒酵母
六、思考题
1．为什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时必须 重新用镜台测微尺对目镜微尺进行标定？
2．若目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变物镜， 那么目镜测微尺每格所测量的镜台上的菌体细胞 的实际长度（或宽度）是否相同？为什么？
一般测量菌体的大小，应测定10－20个菌体，求出平均值，才能代取下镜台测微尺，换上酿酒酵母制
3.微生物的大小测定
公式：
目镜测微尺每小格长度（μm）=
例如：目镜测微尺的5格等于物镜测微尺的2 格，则目镜测微尺1格=（2×10）/5 = 4微米
5、其他辅料的作用
糖是供给酵母能量的来源，糖的含量在5％以 内时能促进发酵，超过6％会使发酵受到抑制 ，发酵的速度变得缓慢。 油能对发酵的面团起到润滑作用，使面包制 品的体积膨大而疏松 蛋、奶能改善发酵面团的组织结构，增加面 筋强度，提高面筋的持气性和发酵的耐力， 使面团更有胀力，同时供给酵母养分，提高 酵母的活力。
製作酵母菌標本
3 5
使用鑷子拾起載玻片 4 6
過火
利用濾紙吸乾
置入玻片夾
接種針消毒
7
利用酒精燈將接種針燒至通紅,整支接種針過火三次
接種
8 10
利用雙手輕輕輕動混合均勻 9 11
取出酵母菌
轉動試管瓶口消毒
塗抹於載玻片上
接種完畢消毒
12
13
接種針消毒
試管消毒
蓋上蓋玻片
14
15
取出蓋玻片
蓋上蓋玻片
镜下测定酵母菌的长和宽。
选择有代表性的10个细胞进行测定，取平均值。
儀器與器具
裝置接目測微鏡
1 3
取出接目測微鏡 2 4
蓋回接目鏡
打開接目鏡並放置接目測微鏡
安置接目鏡並觀察是否安裝完整
安置接物測微鏡
1
2
打開接物測微鏡
微生物的大小测定
•微生物的大小测定
•第1页
2、物镜测微尺:
• 物镜测微尺是一块中央部分 刻有准确等分线载玻片。每一刻 度间距为10um即把1mm等分为 100格，是专门为校正目镜测微 尺实际数值用。
•微生物的大小测定
•第2页
三、材料与仪器
• 1、啤酒酵母 • 2、显微镜、物镜测微尺、
目镜测微尺 • 3、无菌水
•微生物的大小测定
• 2)将“水浸片”标本置于载物台上，先用 低倍镜观察到目标后，转换高倍镜测量 酵母大小，杆菌要测长度与宽度，球菌 测直径，普通在测微生物细胞大小时， 通常测量10—20个菌体，求出其平均值。
•微生物的大小测定
•第8页
(3)测量结果统计：
• 在高倍镜下：
• 目镜测微尺——格=物镜测微尺——格
• 目镜测微尺1格=
•微生物的大小测定
•第5页
•目镜测微尺安装方法 • 目镜测微尺
•一
•镜台测微尺及其中央部分放大
•目镜测微尺
•微生物的大小测定
•第6页
镜台测微尺校准目镜测微尺时情况
•微生物的大小测定
•第7页
2、微生物大小测定：
• 1）在载玻片上滴上美兰染色液，按无菌 操作，挑取啤酒酵母均匀地涂片，然后 盖上盖玻片。
1、目镜测微尺：
目镜测微尺是一块能够放入接目镜内
特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带 刻度尺，等分成50或100小格，每个等分线 间距为0.1mm，测量时将其放在接目镜隔板 上。所以，目镜测微尺只是测量显微镜放 大后物像。因为不一样显微镜放大倍数不 一样，故目镜测微尺每格实际代表长度随 显微镜不一样而不一样。所以在使用前必 须用物镜测微尺校正，以求得在一定接物 镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格 所代表实际长度。
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四、实验方法
装目镜测微尺
❖ 用镜台测微尺进行校正
取得该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜 下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度（A）
在低倍镜下，看清镜台测微尺的 刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与 镜台测微尺的刻度平行，移动推动器， 使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的 某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺 第二个完全重合的刻度。计算两刻度 间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的 格数。
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3
二、实验原理
微生物细胞的大小是微生物 重要的形态特征之一，由于菌体 小，只能在显微镜下来测量。用 于测量微生物细胞大小的工具有 目镜测微尺和镜台测微尺。
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4
目镜测微尺
目镜测微尺是一块圆形 玻片，在玻片中央把5mm长 度刻成50等分，或把10 mm 长度刻成100等分。测量时， 将其放在接目镜中的隔板上 (此处正好与物镜放大的中 间像重叠)来测量经显微镜
微生物学实验
中南民族大学工商学院
环境与生物工程实验教学中心
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1
实验二
微生物细胞大小的测定
•一、实验目的 •二、实验原理 •三、实验器材 •四、实验方法 •五、实验结果 • 六、 思考题
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2
一、实验目的
•了解目镜测微尺和镜台测微ห้องสมุดไป่ตู้的 构造和使用原理，掌握微生物细 胞大小的测定方法。
• 增强微生物细胞的大小的感性 认识。
❖ 2.换高倍镜和油镜时要十分小心，防止压坏 镜台测微尺和损坏镜头。
❖ 3.测量对象要有代表性，数据及单位换算要 准确。
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六、思考题
❖ 1.如何保证安全准确的校正目镜测微尺？ ❖ 2.为什么更换不同放大倍数的物镜和目镜时
要重新校正测微尺？
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放大后的细胞物象。
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镜台测微尺
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻 片，一般将1mm等分成100格，每格长0.01mm
（即10µm）。它并不直接测细胞的大小，而是 用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
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6
·由于不同目镜、物镜组合的放大倍 数不相同，目镜测微尺每格实际表示的 长度也不一样，因此目镜测微尺测量微 生物大小时须先用置于镜台上的镜台测 微尺校正，求出在一定放大倍数下，目 镜测微尺每小格所代表的相对长度。
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7
❖
❖
由于已知镜台测微尺每格长10µm ，根据下
列公式即可分别计算出在不同放大倍数下目镜
测微尺每格所代表的长度。
镜台测微尺格数×10 目镜测微尺每格长度（µm）=-----------------
目镜测微尺格数
注：球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。
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三、实验器材
•1．材料：酵母斜面菌种。
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11
五、实验结果
将实验结果填入下列表格
1. 目镜测微目尺校正结果
物镜（μm） 目尺格数 4×
10× 40× 100×
台尺格数
2.菌体测定结果
目尺校正
微生物名称 目镜测微尺
宽
每格代表的 目镜测微 宽度
长度/ µm 尺格数 / µm
长 目镜测微 长度 尺格数 / µm
菌体 大小范围
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注意事项
❖ 1.校正目镜测微尺时光线宜弱些，以便找到 镜台测微尺的刻度。
用同样的方法换成高倍镜和油镜 进行校正。
菌体大小的测定
微生物细胞相当于目镜测微尺的长度（B）
取下镜台测微尺，将微生物染色标本置于
载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测
细胞的实际大小（ L＝A×B ）
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量菌体的长和宽。
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菌体大小的测定 •(1)将酵母菌斜面制成一定浓度的菌 悬液 •(2)取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。 •(3)移去镜台测微尺，换上酵母菌水 浸片，先在低倍镜下找到目的物，然 后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵 母菌菌体的长，宽各占几格（不足一 格的部分估计到小数点后一位数）。