最新CMVPP65抗原检测及临床意义汇总
非结核分枝杆菌病(临床病例讨论)
双肘关节疼痛，无明显红肿，但有双手肿胀、晨僵;伴
发热，体温最高为38℃，无寒战、盗汗，无肌痛、肌
无力、胸闷、四肢麻木等症状。曾于当地医院查肌酸
激酶(CK)236U/L，血沉(ESR)28mm/h，抗核抗体
(ANA)(+)1:140，抗双链DNA抗体(抗dsDNA)、抗
0(ASO)、类风湿因子(RF)、抗ENA均阴性，肌电图大
• 1.明确诊断 选药不仅要针对适应证还要排除禁忌证。 2.根据药理学特点选药 尽量少用所谓的“撒网疗 法”，即多ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ药物合用以防漏诊或误诊，这样不仅 浪费而且容易发生相互作用。
3.了解并掌握各种影响药效的因素 用药必须个体化， 不能单纯公式化。
4.对病人始终负责 开出医嘱、处方仅是治疗的开始， 必需严密观察病情反应，及时调整剂量或更换治疗 药物。要认真分析每一病例的成功及失败的关键因 素，总结经验教训，不断提高医疗质量，使用药技 术更趋合理化。
• 二氧化碳分压(paCO2)4.23kPa（31.73mmHg），氧 饱和度(SaO2)0.944。心电图提示:窦性心动过速。x 线胸片提示左肺野大片斑片状阴影，右肺中下野斑片 状阴影并小结节阴影，心影呈烧瓶状，双侧肋隔角变 钝。复查胸部CT:双侧胸腔积液，右肺多发结节，纵 隔多个淋巴结融合成块，心包积液。超声心动图 (UCG):中一大量心包积液，主要集中于左室面，内 可见絮状物，脏层心包可见絮状沉积物。
非结核分枝杆菌病 （临床病例讨论）
地点：门诊五楼电教室
•
患者男，21岁。因皮疹6个月，左拇趾皮肤破溃
伴间断发热3个月于2005一12一28入院。患者6个月前
无诱因突然出现双肘部伸侧、双手掌指关节(MCP)及
近端指间关节(PIP)伸侧、双眼内眦旁皮肤鲜红色红斑，
HCMV-pp65
• • • •
（二）阴性结果及细胞判定标准
• 阴性细胞判定标准：良好的细胞形态，细
胞核为圆形、肾形、（分叶状、杆状较少 见）细胞核无着色。 • 荧光显微镜下标本背景为暗红色或无明显 着色。
（三）阳性结果及细胞判定标准
阳性细胞判定标准： • 良好的细胞形态，细胞核为圆形、肾形、 （分叶状、杆状较少见）荧光照射呈暗绿 色或苹果绿色，细胞核周围呈暗红色或无 着色。 • 不典型阳性细胞判断标准 细胞形态欠佳，细胞核形态欠佳着色不清晰。
优势:
1. HCMVPP65抗原血症检测试剂采用快速、定量、简单、 2. 3. 4. 5.
敏感和易于读取结果的方法检测活性CMV感染。 比病毒分离快速培养和血清学方法敏感，对已经出现 临床症状的患者检测敏感度是100％。 疾病发作的几天到1周时间内抗原血症能够被检测出， 比快速培养法早2－25天。 当实验室不能进行细胞培养时可应用抗原血症检测。 采用的PP65单克隆混合抗体能够增加阳性样本细胞的 着色数量并且显示一个更加明亮的荧光场景
五、标本读片时视野较暗无法分辨细胞形态 时应注意以下问题：
• 制片过程最后蒸馏水冲洗不彻底；载玻片、盖玻
• •
片不洁净；封片剂用量过多。 应选择在暗室内读片，室内光线越暗越好。 荧光发生器功率应选择100W为宜，功率为50W的 荧光发生器不宜观察 调整荧光显微镜使其荧光位于视野中央易于观察 读片时应使用40倍物镜观察 调准细胞层面
检测人群：
• 用于诊断和跟踪心脏、肺脏、肝脏、肾脏
和骨髓移植接受者体内的HCMV感染 。
• 艾滋病患者体内的HCMV感染。
检验原理
• 采用混合单克隆抗体（IA6+4A8）标记不同
的抗原决定族结合位点表达在外周血白细 胞和单核细胞内的65－68kd磷酸蛋白（蛋 白激酶PP65） • 当病毒在血液散布期间混合单克隆抗体可 以识别存在于外周血受感染的分叶核白细 胞和单核白细胞的HCMV核蛋白内的2个抗 原决定族。
人巨细胞病毒pp65抗原检测
I gM
症状 1
症状 2
抗原血症 1
抗原血症 2
移植后时间 首 次 pp65 抗 原 血 症 出 现 于 移 植 后 59 天 ， 2 天 后 出 现 喘 憋 、 低 氧 血 症 ，经 更 昔 洛 韦 治 疗 13 天 后 症 状 消 失 ， 抗 原 血 症 转 阴 ， 此 时 I gM才 开 始 出 现 弱 阳 性 ， 此 后 I gM持 续 阳 性 。移 植 后 6 个 月 ，再 次 出 现 喘 憋 、低 氧 血 症 ，查 pp65 抗 原 血 症 转 阳 , 经更昔洛韦治疗 7 天后症状消失、抗原血症转阴。
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低，
人巨细胞病毒pp65抗原检测
CMV感染的危险因素 CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染 病程长、未正规治疗的狼疮
人巨细胞病毒pp65抗原检测
三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和 再障病人中CMV感染中的应用
A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者T细胞功能重建 C 配型不完全符合者T细胞功能重建
人巨细胞病毒pp65抗原检测
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2 － 骨髓移植后CMV感染的危险因素
CD34＋细胞分选
GVHD(FK506)
TBI
合并其他病原体感染
人巨细胞病毒pp65抗原检测
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 －－治疗时间
人巨细胞病毒pp65抗原检测
研究目的
了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床
HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。 了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指
导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点一、前言巨细胞病毒（CMV）感染是实体器官移植（SOT）术后最为常见的病毒感染，临床表现多样。
未采取预防措施的SOT受者CMV感染率较高，在不同移植类型和不同患者人群中也存在明显差异。
CMV侵入人体，成为CMV 感染，可为静止性感染或活动性感染。
CMV侵袭肺、肝脏、胃肠道、肾上腺、中枢神经系统以及骨髓等多种器官组织并引起相应临床症状，称为CMV病。
CMV感染可对移植受者造成多方面损害，包括移植物功能丧失、受者死亡或医疗成本增加。
CMV感染与移植物急性排斥反应互有促进作用；并可增加或加重移植受者各种机会性感染，如CMV肺炎。
二、SOT受者CMV感染的主要危险因素（一）供、受者血清CMV状况接受血清CMV阳性供者的器官移植的CMV阴性受者（供者阳性/受者阴性，D+/R-）应视为CMV感染极高风险人群。
相对而言，D-/R-移植受者CMV感染的发生率最低（<5%）。
（二）移植器官的种类CMV感染风险与移植器官的种类相关：肺、小肠、胰腺移植受者比肾、肝移植受者危险性更高。
（三）其他危险因素其他危险因素包括受者的免疫力低下、合并其他病毒感染、急性排斥反应、高龄和器官移植物功能不全等；供者在重症监护病房（ICU）监护时间较长，面临多重感染的风险，移植后也可造成受者获得性感染风险增加。
推荐意见：1. 推荐所有器官移植供、受者术前均进行CMV血清学检测，参考风险分层，指导制定预防策略（1-B）。
2. 建议术后对受者进行CMV-IgG血清学检测（1-B）。
抗CMV-IgG 阳性或抗CMV-IgG呈4倍以上增高者为高危；结果为临界值或不确定时，可按阳性考虑（2-C）。
3. ABO血型不合器官移植、接受淋巴细胞清除性抗体治疗以及术前存在人类免疫缺陷病毒感染的受者均可视为高危患者（1-B）。
三、实验室诊断推荐意见：1. CMV的早期快速诊断，推荐外周血及尿液的CMV DNA核酸定量（QNAT）检测，或间接免疫荧光法（IFA）外周血白细胞的CMV-pp65抗原检测（1-A）。
患者手术前五种感染性指标的检测及临床意义
检 测 ， 电化 学发 光 法检 测 患者 的 乙肝 表 面 抗 原 （ ｓ ） 结 果 １ ５ 用 ＨＢ Ａｇ 。 ９８ ０例 被 检 对 象 中 ， ｓ 、 ＴＰ抗 体 、 ＨＣ 抗 体 、 ＨＢ Ａｇ 抗 抗 Ｖ 抗
意义 。
２ 结 果
液 、 接 触 等 方 式 传 播 ， 些 医 疗 行 为 如 手 术 、 刺 、 血 等 也 性 一 穿 输 会 引起 院 内感 染 ， 患 者 术 前 进 行 常 规 传 染 病 因 子 的 检 测 可 以 对
了 解 患 者 的 感 染 状 况 及 避 免 不 必要 的 医疗 纠 纷［ ］ １ 。笔 者 采 用 。
指 标 的检 测 ， 报 道 如 下 。 现 １ 资 料 与 方 法 １ １ 一 般 资料 为本 院 ２ ０ ． ０ ８年 １ Ｏ月 至 ２ １ ０ ０年 １ ２月 各 类 急 诊 及 择 期 手 术 患 者 ， １ ５ 共 ９ ８ ０例 ， 中 ６ 其 Ｏ岁 以上 的 患 者 为 老
［］ 宁夏 医 学 杂 志 ，０ ５ ２ （ ）５ ８ Ｊ． ２０ ，７ ８ ：３ ．
Ｅ ３ 顾 沈 阳 ， 浩 ， 业 华 ， ， 移 植 术 后 应 用 硫 唑 嘌 呤 致 急 性 再 生 ３ 姚 王 等 肾 障碍 性 贫 血 ５例 ［］ 江 苏 临 床 杂 志 ，０ ２ ６ ３ ：９— ９ ． Ｊ． ２ ０ ， （） １ ４１５ Ｅ ３ 薛 武 军 ， 勇 ， 文 楷 ， ． 移 植 术 后 应 用 硫 唑 嘌 呤 致 纯 红 细 胞 ４ 陈 王 等 肾
中国肾移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗指南（2023_版）
· 指南与共识·中国肾移植受者巨细胞病毒感染临床诊疗指南（2023版）中华医学会器官移植学分会 中国医师协会器官移植医师分会 中国医疗保健国际交流促进会肾脏移植学分会 【摘要】 近几年在实体器官移植（SOT ）受者巨细胞病毒（CMV ）感染诊疗领域，无论是诊断方法还是新型抗CMV 药物都有了一些新的进展，对CMV 感染的诊治产生了积极的影响。
为了进一步规范中国肾移植术后CMV 感染的管理，中华医学会器官移植学分会组织了国内多个学科相关领域专家，参考《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南（2016版）》和国内外已发表的最新文献和指南，制定了《中国肾移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南（2023版）》，新版指南更新了CMV 流行病学，CMV 感染的危险因素和普遍性预防的研究进展，新增CMV 感染定义，细化CMV 血症和CMV 病的诊断标准，并对新型抗CMV 药物进行了介绍。
【关键词】 肾移植；实体器官移植；巨细胞病毒；感染；病毒血症；巨细胞病毒病；普遍性预防；抢先治疗【中图分类号】 R617, R373 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2024）03-0001-20Clinical diagnosis and treatment guidelines for cytomegalovirus infection in kidney transplant recipients in China (2023edition) Branch of Organ Transplantation of Chinese Medical Association, Branch of Organ Transplantation Physician of Chinese Medical Doctor Association, Branch of Kidney Transplantation of China International Exchange and Promotive Association for Medical and Health Care. *The First Affiliated Hospital of Xi 'an Jiaotong University , Xi 'an 710061, China Correspondingauthors:DingXiaoming,Email:***************.cnXueWujun,Email:******************.cn【Abstract 】 In recent years, there have been significant advances in the diagnosis and treatment of cytomegalovirus (CMV) infection in solid organ transplant (SOT) recipients, including diagnostic method and anti-CMV drugs. These advancements have had a positive impact on the management of CMV infection in SOT recipients. To further standardize the management of CMV infection after kidney transplantation in China, Branch of Organ Transplantation of Chinese Medical Association organized a multidisciplinary group of experts in relevant fields. They referred to the ‘Diagnosis and Treatment Guidelines for Cytomegalovirus Infection in Solid Organ Transplant Recipients in China (2016 edition)’ and the latest published literature and guidelines, resulting in the development of the ‘Clinical Diagnosis and Treatment Guidelines for Cytomegalovirus Infection in Kidney Transplant Recipients in China (2023 edition)’. The updated guideline includes CMV epidemiology, research progress on the risk factors and universal prevention of CMV infection, the definition for CMV infection, detailed diagnostic criteria for CMV viremia and CMV disease, as well as an introduction to new anti-CMV drugs.【Key words 】 Kidney transplantation; Solid organ transplantation; Cytomegalovirus; Infection; Viremia;Cytomegalovirus disease; Universal prevention; Preemptive therapyDOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2024096基金项目：国家自然科学基金（82370802、82170766、82270789、81970646）；陕西省卫生健康肾脏移植科研创新平台（2023PT-06）执笔作者单位： 710061 西安，西安交通大学第一附属医院（丁小明）；首都医科大学附属北京友谊医院（林俊）；首都医科大学附属北京朝阳医院（胡小鹏）；复旦大学附属中山医院（戎瑞明）；西安交通大学第一附属医院（郑瑾）通信作者：丁小明，Email ：***************.cn ；薛武军，Email ：******************.cn第 15 卷 第 3 期器官移植Vol. 15 No.3 2024 年 5 月Organ Transplantation May 2024 巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是一种全球传播广泛的β-疱疹病毒，原发感染之后在体内会呈潜伏状态，当人体的免疫功能下降时病毒会被再激活。
《炎症性肠病合并机会性感染专家共识意见》要点
《炎症性肠病合并机会性感染专家共识意见》要点IBD是一种慢性非特异性肠道疾病，主要包括CD和UC。
IBD呈慢性病程、迁延不愈，严重影响患者生命质量。
IBD的治疗经历了3个时期的演变，20世纪50年代引入糖皮质激素，60年代开始使用免疫抑制剂，而当今已进入生物制剂时代。
随着治疗的进展和不断规范化，IBD的治疗效果有了长足的进步，患者并发症和病死率明显下降。
然而这些药物单独或联合治疗会改变患者的免疫状态，从而带来相应的问题，特别是增加了机会性感染的风险。
机会性感染是指对健康人体致病能力有限或无致病能力的微生物，当疾病（如艾滋病）或治疗因素诱发机体免疫功能低下时，则可致病而引发感染。
IBD患者是机会性感染的高风险人群。
首先，疾病本身可导致患者营养状况下降；其次，应用糖皮质激素、免疫抑制剂和生物制剂可严重抑制患者的免疫力，因此机会性感染发生率显著增加，需要予以关注和重视。
我国各类传染病较西方国家相对高发，故积极预防、早期诊断和及时控制机会性感染是改善我国IBD患者预后的前提。
一、IBD合并巨细胞病毒（CMV）感染1. IBD患者CMV血清IgG抗体阳性率高于健康对照者，UC合并CMV 结肠炎者多于CD。
2. 重度UC出现糖皮质激素抵抗者建议临床除外CMV活动性感染。
3. CMV IgM抗体阳性和（或）CMVpp65抗原血症（每150000个白细胞中CMV 阳性细胞数≥1）和（或）血浆CMV DNA实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测阳性，提示CMV活动性感染。
4. CMV结肠炎的诊断金标准是结肠黏膜组织HE染色阳性伴免疫组织化学染色（IHC）阳性，和（或）结肠黏膜组织CMV DNAqPCR阳性。
5. 若外周血CMV DNAqPCR检测阳性＞1200拷贝/mL者可考虑行抗病毒治疗。
6. 结肠镜检查发现特殊内镜表现可提示CMV结肠炎，应常规行活组织检查并进行鉴别诊断。
7. 发生糖皮质激素抵抗的重度UC患者若合并CMV结肠炎，建议及时给予抗病毒治疗。
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【摘要】目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）核酸定量检测试剂（PCR‐荧光探针法）的临床使用及初步评价。
方法：用浓缩一步法试剂与煮沸法试剂对192例临床收集的样本进行HCMVDNA检测并对比其结果，同时，将两种试剂的检测结果分别与HCMV‐pp65抗原检测结果进行对比。
结果：新型人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比98．06％，阴性一致性百分比95．51％，总一致性百分比96．88％；对6例不符样本进行测序复核，并对复核后的结果进行Kap‐pa检验一致性分析，结果Kappa值＝1．000，表明新型试剂的检测结果与煮沸法试剂及复核检测的结果具有很好的一致性。
在与HCMV‐pp5抗原检测结果的对比中，两种试剂均表现出较好的准确性。
结论：人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂检测结果具有很好一致性，操作简单快速，减少污染环节，并具有内标控制假阴性，结果准确，符合临床检测要求，具有较高的应用价值。
%Objective:The goal of this study is to evaluate the clinical application of a new Human Cyto‐megalovirus DNA Diagnostic Kit (refer to as concentrated one‐step method hereafter) .Methods:A total of 192 clinical specimens were detected by concentrated one‐step method and another kind of fluorescence diagnostic kit u‐sing boiling method ,The results were analyzed a nd compared .Simultaneously ,HCMV‐pp65 antigenemia test re‐sults of these 192 specimens were gathered and compared with the results from the one step and Boiling method kits . Results :The two kits showed excellent agreement The Positive consistency was 98 .06% ,the negative consistency was 95 .51% and the total consistency was 96 .88% ;6 cases ofdiscrepant samples were sequenced review ,then the results were performed with the Kappa consistency analysis ,The value ofKappa=1 .000 ,showed good consistency between the two methods .In addition ,compared with HCMV‐pp65 antigenemia test results ,the two reagents both showed good accuracy .Conclusion :The one step method showed good consistency compared with the conventional boiling method ,In this method ,the nucleic acid targets extracted by lysis buffer all went into the PCR reaction .This avoids laboratory contaminations which occur often during routine DNA extraction process .And the PCR detection system uses an internal positive control (internal control) to avoid a false negative result .With a simple procedure , precise results ,this new diagnostic kit is suitable for routine clinical lab usage .【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2014(000)011【总页数】3页(P1542-1544)【关键词】巨细胞病毒感染;脱氧核糖酸酶类/分析;荧光免疫测定;聚合酶链式反应;试剂盒,诊断;煮沸法【作者】王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【作者单位】武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;湖南圣湘生物科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R446人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）亦称细胞包涵体病毒，为疱疹病毒科β属的双螺旋DNA病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体，所以称为巨细胞病毒。
PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染中的价值
［１］ ＳＺＣ ＺＥ ＰＵ Ｒ Ａ Ａ ， Ｗ Ｅ ＳＴＭ Ｏ Ｒ Ｅ ＬＡ Ｎ Ｄ Ｄ ， Ｖ ＩＮ Ｏ Ｇ Ｒ Ａ Ｄ Ｏ Ｖ Ａ Ｙ ， ｅｔ ａｌ． Ｅ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍ ｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃｙｔｏｍ ｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｉｍ ｍ ｕｎｏｃｏｍ ｐｒｏｍ ｉｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ［Ｊ］． Ｈ ｅａｌｔｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａ ｓｓｅｓｓｍ ｅｎｔ， ２００６， １０（１０）： ６－７．
１１／３７） Ｃ Ｍ Ｖ － ＰＰ６５ 抗原阳性， 均给予更昔洛韦抗病毒治疗， １１ 例患者中 ３ 例（ ８．１％ ， ３／３７） 发 展 成 巨 细 胞 病 毒
病 ， 均 发 生 于 停 用 或 未 采 用 更 昔 洛 韦 时 ； 另 外 ２６ 例 患 者（ ７０．３％ ， ２６／３７） ＰＰ６５ 抗 原 始 终 阴 性 ， 随 访 ３ 个 月 无 巨
Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｓｈａ， Ｈｕｎａｎ ４１００１１， Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｒｅｎａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ａ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ ３７ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｒｅｎａｌ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ． Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｅｌｅｖｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ （２９．７％， １１／３７） ｗｅｒｅ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｈａｄ ｔｏ ｒｅｃｅｉｖｅ ａｎｔｉ－ ｖｉｒｕｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ． Ｔｈｒｅｅ ｐａ－ ｔｉｅｎｔｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ａｌｌ ｔｈｅ ３ ｃａｓｅｓ ｈａｐｐｅｎｅｄ ｗｈｅｎ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｗｅｒｅ ｗｉｔｈｄｒａｗｅｄ． Ｏｔｈｅｒ ２６ ｐａｔｉｅｎｔｓ （７０．３％， ２６／３７） ｗｅｒｅ ＣＭＶ－ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｎｅｇａｔｉｖｅ ａｎｙｔｉｍｅ ａｎｄ ｎｏ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ ｈａｐｐｅｎｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ３ ｍｏｎｔｈｓ′ｆｏｌｌｏｗ－ ｕｐ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＰＰ６５ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｎａｌ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ ｏｆ ＣＭＶ ｄｉｓｅａｓｅ．
CMVPP65抗原检测及临床意义
• 通过动态监测CMVpp65抗原的表达水平，可以评 估病情的进展和治疗效果，指导临床治疗方案的 调整。
流行病学调查
• CMVpp65抗原检测可以用于流行病学调 查，了解CMV的感染率和流行趋势，为预 防和控制感染提供依据。
03 CMVpp65抗原检测的临 床意义
诊断CMV感染
诊断准确性
CMVpp65抗原检测能够准确快速地 检测出CMV感染，尤其在病毒血症期， 其阳性率较高，有助于早期诊断。
区分病原体
CMVpp65抗原检测可以与其他病毒 引起的疾病相区分，如EB病毒、巨细 胞病毒等。
监测治疗效果
评估抗病毒治疗
通过监测CMVpp65抗原水平，可以 评估抗病毒治疗的效果，指导临床调 整治疗方案。
监测复发
对于已经接受治疗的患者，定期监测 CMVpp65抗原有助于发现病毒复发， 及时采取干预措施。
CMVpp65抗原检测及临床意义
目 录
• 引言 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测方法 • CMVpp65抗原检测的临床意义 • CMVpp65抗原检测的局限性 • 展望
01 引言
目的和背景
CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值
探讨CMVpp65抗原检测在临床上的应用价值，包括其在诊断、治疗和预防CMV感染方 面的作用。
1 2
疫苗研发
研究更有效的CMV疫苗，降低感染风险和疾病 负担。
抗病毒药物
开发新的抗病毒药物，提高治疗效果和降低副作 用。
3
个体化治疗
根据患者的具体情况制定个体化的预防和治疗方 案，提高治疗效果和患者生活质量。
提高公众对CMV感染的认识和预防意识
01
02
03
更昔洛韦致白细胞下降两例
更昔洛韦致白细胞下降两例一、案例背景知识简介更昔洛韦（ganciclovi）是核苷类广谱抗DNA病毒药物，其作用机制是进入宿主细胞后，由病毒的激酶诱导生成三磷酸化物，竞争性抑制病毒的DNA聚合酶而终止病毒DNA链增长。
其在巨细胞病毒（CMV）感染细胞内的三磷酸盐的水平比非感染细胞中的水平高10倍，故临床上主要用于巨细胞病毒感染的治疗和预防。
但随着更昔洛韦在临床的广泛应用，其不良反应报道也日趋增多。
本案例拟通过2例更昔洛韦致白细胞下降的病例，探讨更昔洛韦的不良反应及其用药监护。
二、病例内容简介（一）病例1患者，女性，21岁，主因发热，头昏，伴双手指间关节疼痛16天入院。
患者于2011年8月8日无明显诱因出现发热，头昏，伴双手指间关节疼痛，当时测体温37.7℃，于当地医院给予感冒冲剂颗粒及头孢克肟治疗，3天后体温降至37℃，但仍有咽痛，无咳嗽、咳痰，无消瘦、盗汗，无头痛，无胸闷、胸痛、气短，无恶心、呕吐、腹痛、腹泻。
后患者仍有间断发热，多为夜间发热，伴全身肌肉酸痛、乏力、双手指间关节疼痛，体温最高达38.5℃，伴畏寒，无流涕、咳嗽、咳痰等，期间间断应用尼美舒利退热治疗，未见明显好转，遂就诊于本院，查CMV-IgM 154.0IV/ml，行肺部CT未见明显异常，考虑巨细胞病毒感染，8月24日收入院。
既往史：患者于2008年2月诊断为系统性红斑狼疮，初始给予泼尼松30mg，每日1次，激素逐渐减量，目前口服甲泼尼龙2mg，每8小时1次；硫酸羟氯喹0.1g，每日2次，2008年7月考虑对羟氯喹过敏而停药；2009年4月加用吗替麦考酚酯500mg口服，每日2次，10月减量至250mg，每日3次，2010年8月30日减量至500mg，每日1次至今。
患者自述对阿莫西林过敏，否认食物过敏史。
否认家族遗传病及传染病史，无吸烟、饮酒史。
入院查体：体温36.4℃，脉搏80次/分，呼吸18次/分，血压90/56mmHg，双肺呼吸音粗，未闻及干湿性啰音及胸膜摩擦音。
巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达及临床意义
㊃论著㊃通信作者:杨立娜,E m a i l :l i n d a y o n y2014@h o t m a i l .c o m 巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 表达及临床意义杨立娜(辽阳市第三人民医院检验科,辽宁辽阳111000) 摘 要:目的 探讨感染巨细胞病毒(C MV )感染性肺炎的儿童体内中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 的表达及诊断价值㊂方法 收集2014年11月至2016年10月在我院收治的C MV 感染性肺炎儿童113例,年龄2~4岁,其中男80例,女33例,通过C MV -p p 65抗原检测将C MV 肺炎的儿童分为C MV 肺炎高活动性感染组㊁C MV 肺炎活动性感染组和非C MV 肺炎感染阴性对照组,同时选取我院门诊体检健康同年龄段儿童男21例㊁女12例作为健康对照组㊂采用流式细胞仪分别检测上述各组的中性粒细胞表面黏附分子C D 11b 表达比例㊂计算C D 11b 在诊断儿童C MV 肺炎过程中的受试者工作曲线(R O C 曲线)㊂结果 C MV 肺炎高活动性感染的儿童中性粒细胞表达C D 11b 的比例与非C MV 肺炎感染阴性对照组和健康对照组比较差异有统计学意义(P <0.05)㊂C D 11b 诊断儿童C MV 肺炎高活动性感染组的最佳临界值为表达率40.11%,敏感度为100%,特异度为63.19%,受试者工作曲线下面积为0.612;C D 11b 诊断儿童C MV 肺炎活动性感染组的最佳临界值为表达率63.87%,敏感度为92.87%,特异度为98.34%,受试者工作曲线下面积为0.991㊂结论 儿童C MV 肺炎感染后中性粒细胞C D 11b 表达下调,可以作为鉴别诊断儿童C MV 肺炎活动性感染的实验室依据㊂关键词:肺炎,病毒性;巨细胞病毒;细胞活素类;流式细胞术中图分类号:R 563.1 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2017)08-0703-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2017.08.014E x p r e s s i o na n d s i g n i f i c a n c e o f n e u t r o ph i l s u r f a c e a d h e s i o nm o l e c u l e s C D 11b f r o mc y t o m e ga l o v i r u s i n f e c t i o n i n c h i l d r e n Y a n g Li n a D e p a r t m e n t o f L a b o r a t o r y ,t h eT h i r dP e o p l e sH o s p i t a l o f L i a o y a n g ,L i a o y a n g 111010,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Y a n g L i n a ,E m a i l :l i n d a y o n y2014@h o t m a i l .c o m A B S T R A C T :O b j e c t i v e T os t u d y d i a g n o s i sa n dc l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fn e u t r o p h i ls u r f a c ea d h e s i o n m o l e c u l e s i n c l u d i n g C D 11bf r o m c y t o m e g a l o v i r u s (C MV )i n f e c t i o n p n e u m o n i ai nc h i l d r e n .M e t h o d s B l o o ds a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m113c h i l d r e no fC MVi n f e c t i o n p n e u m o n i a i n c l u d i n g ma l e80a n df e m a l e40c a s e sb e t w e e n N o v e m b e r 2014a n dOc t o b e r 2016.H e a l t h y m a l e 21c a s e s a nd fe m a l e 12c a s e s s e r v e d a s h e a l t h y c o n t r o l g r o u pf r o mo u t pa t i e n t s i n t h es a m e p e r i o d .C h i l d r e no fC MVi n f e c t i o n p n e u m o n i a w e r ed i v i d e di n t oh i g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p ,C MV i n f e c t i o n g r o u p a n dt h en e g a t i v ec o n t r o l g r o u p ,a n dh e a l t h yg r o u p a sn o r m a l c o n t r o l g r o u p a c c o r d i n g t oC MV -p p65a n t i g e nd e t e c t i o n .N e u t r o p h i ls u r f a c e a d h e s i o n m o l e c u l e C D 11b w a s a n a l y z e d b y f l o w c y t o m e t r y a n d c o m pa r e d r e s p e c t i v e l y .R O Cc u r v e o f C D 11b i nc h i ld re n of C MV i n f e c t i o n p n e u m o n i aw a sm a d e .R e s u l t s T h e e x p r e s s i o n r a t i o o f C D 11b i nh ig ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p w a ss i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n ta sc o m p a r e d w i t hn e g a t i v ec o n t r o l g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p (P <0.05);o p t i m a l c u t -o f fv a l u eo fC D 11bi nhi g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p w a s40.11%,t h e s e n s i t i v i t y w a s 100%,t h e s p e c i f i c i t y i nh i g ha c t i v eC MVi n f e c t i o n g r o u p wa s63.19%,a n dt h ea r e au n d e r t h eR O C w a s 0.612.T h e o p t i m a l c u t -o f f v a l u eo fC D 11b i nC MVi n f ec t i o n g r o u p w a s63.87%,t h es e n s i t i v i t y o fC D 11bw a s 92.87%,t h e s p e c i f i c i t y o fC D 11bw a s98.34%,a n dt h ea r e au nde ro fR O Co fC D 11bw a s0.991.C o n c l u s i o n T h e n e u t r o p h i l sC D 11be x p r e s s i o n i nc h i l d r e no fC MVi nf e c t i o n p n e u m o n i a i sd o w nr eg u l a t i o n .C D 11be x pr e s s i o nc a nb e u s e da s a l a b o r a t o r y d i a gn o s i sb a s i s o f c h i l d r e n sC MVi n f e c t i o n .K E Y W O R D S :p n e u m o n i a ,v i r a l ;c y t o m e g a l o v i r u s ;c y t o k i n e s ;f l o wc y t o m e t r y人巨细胞病毒(h u m a n c y t o m e ga l o v i r u s ,H C MV )是具有双螺旋结构的D N A 病毒,属于疱疹病毒科中的β亚科,在疱疹病毒家族中,其基因结构最为复杂,且碱基的长度也最长[1]㊂巨细胞病毒(C MV )属于条件致病病毒,在健康人体内,C MV 虽然可以检测出阳性抗体,由于健康人免疫系统的监视作用,能够有效地防止C MV 活动性感染的发生㊂但是,在免疫力低下的人群体内,则容易发生C MV 活动性感染,目前报道的容易发生C MV 活动性感染的主要人群为婴幼儿和长期服用免疫抑制剂的患者㊃307㊃‘临床荟萃“ 2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s ,A u gu s t 5,2017,V o l 32,N o .8Copyright ©博看网. All Rights Reserved.如移植术后的患者和因疾病需要大量服用激素的患者等[2-5]㊂C MV具有组织和细胞的泛嗜性,因此临床表现也不一,可以累及泌尿生殖系统㊁中枢神经系统㊁肝脏㊁肺㊁血液循环系统等病变,其中以巨细胞病毒性肺炎最为常见[6-7]㊂我国属于C MV病毒感染的高发区域,有研究显示在我国通过C MVI g G抗体检测方法检测健康人群,其C MV的阳性感染率高达70%~100%,而孕妇C MV的感染率更是高达95%以上,对于周岁儿童C MV的阳性率约为80%[8-9]㊂由于儿童免疫系统尚处于发育期,其免疫功能有待完善,因此儿童C MV肺炎的发生比例较高,有研究报道,2~6岁C MV抗体检测阳性的儿童罹患C MV 肺炎比例可达13%[10]㊂如果儿童C MV肺炎活动性感染不能得到有的救治则病程发展迅速,病情凶险,严重者可能危及生命,因此在临床上早期发现并明确诊断C MV感染对于治疗该病具有重要的意义㊂1资料与方法1.1研究对象2014年11月至2016年10月在我院收治的儿童C MV肺炎感染者113例,其中男80例,女33例,年龄2~4岁,平均(3.3ʃ0.2)岁;同时选取我院门诊体检健康同龄儿童33例,男21例,女12例,作为健康对照组,本研究经我院伦理学委员会批准,选择研究纳入人群均获得其儿童监护人的同意并签署知情同意书㊂1.2试剂及检测方法 C MV-p p65抗原检测:采用酶联免疫吸附测定法(E L I S A)定性检测,采用C MV B r i t e T M T u r b oK i t试剂盒(荷兰I Q公司),将儿童的血液在肝素抗凝后采用密度梯度离心法分离白细胞,并调整白细胞的密度为2ˑ106/m l,将调整好的白细胞液滴入载玻片内并使用试剂盒中的固定液和打孔剂分别处理白细胞,将p p65的一抗在湿盒中孵育6小时后,取出在避光条件下使用高倍镜下镜检㊂C D11b检测:C D11b购买于美国B D公司,使用破膜固定液将白细胞分离后,使用磷酸盐缓冲溶液(P B S)将白细胞密度调整为5ˑ106/m l细胞悬液,取出195μl,并加入5μlC D11b流式抗体,避光保存20分钟后,采用流式细胞仪检测㊂1.3 C MV活动性感染诊断标准儿童外周血中C MV-p p65抗原检测阳性,C MV-p p65抗原检验阳性细胞>100个/5ˑ104白细胞为高活动性C MV感染,C MV-p p65抗原检验阳性细胞<100个/5ˑ104白细胞诊断为C MV活动性感染㊂儿童C MV肺炎的诊断标准参照1998年由中华医学会儿科分会制定的‘C MV感染诊断方案“[11]:①从儿童受检的血㊁尿㊁唾液或组织等任何一种中分离出C MV;②用特异的单克隆抗体从受检的组织或细胞中检测到C MV抗原如早期速发抗原(I E A)㊁热病抗原(F A)或p p65等;③从外周血白细胞中查得C MV抗原(以上3项中有任何一项阳性时,不仅可以诊断C MV感染,并能诊断为产毒性感染);④用分子杂交或P C R法从受检材料中检出C MV-m R N A,表明产毒性感染,如检出C MV-D N A特异片段,只能表明C MV感染,不能区分为产毒性或潜伏性感染㊂1.4统计学方法使用G r a p h p a dP r i s m5软件完成,符合正态分布的定量资料用均数ʃ标准差(x-ʃs)表示㊂符合正态分布方差齐的计量资料组间比较采用方差检验㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1 C MV-p p65抗原检测结果根据C MV-p p65抗原检测结果,将儿童分为C MV高活动性感染组㊁C MV活动性感染组和非C MV感染阴性对照组㊂其中儿童C MV高活动性感染组20例,占试验组儿童总数的17.7%,C MV活动性感染组48例,占试验组儿童总数的42.48%,阴性对照组45例,占试验组儿童总数的39.82%㊂2.2 C D11b在中性粒细胞表达经过流式C D11b 抗体标记后,儿童C MV肺炎高活动性感染儿童体内中性粒细胞可以检测C D11b表达的比例占中性粒细胞总数的(38.17ʃ5.22)%,与C MV活动性感染组(49.23ʃ4.22)%㊁阴性对照组(61.56ʃ4.37)%和健康对照组(63.34ʃ5.27)%比较差异有统计学意义(P<0.05)(图1)㊂C D11b诊断儿童C MV高活动性感染的最佳临界值为表达率40.11%,敏感度为100%,特异度为63.19%,受试者工作曲线下面积为0.612;C D11b诊断儿童C MV活动性感染的最佳临界值为表达率63.87%,敏感度为92.87%,特异度为98.34%,受试者工作曲线下面积为0.991(图2)㊂与健康对照组比较,**P<0.01;与非C MV感染阴性对照组比较,##P<0.01图1各组中C D11b在中性粒细胞表面的表达㊃407㊃‘临床荟萃“2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2017,V o l32,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.图2C D11b诊断儿童C M V高活动性感染和C M V活动性感染的R O C曲线3讨论婴幼儿由于免疫力低下容易诱发丙型肝炎病毒㊁柯萨奇B病毒㊁风疹病毒㊁流行性腮腺炎病毒㊁轮状病毒和C MV等病毒感染[12]㊂而C MV是已知的病原微生物中最容易引起婴幼儿急㊁慢性感染的病毒之一,而且C MV具有潜伏-活化的生物学特征,有研究显示1周岁儿童C MV抗原的阳性检出率高达80%,一旦儿童的免疫功能低下,C MV就可以直接诱发C MV的活化并最终导致C MV活动性感染,其临床表现以儿童C MV肺炎最为常见[10]㊂儿童C MV肺炎的病理改变主要集中在细支气管,可以出现细支气管周围炎,临床表现则与间质性肺炎相似,主要表现为发热㊁咳嗽并伴有肺哮鸣音,严重者可以出现呼吸困难㊂在早期由于缺乏特异性的检测指标,因此极易引起误诊,造成病情延误[13-14]㊂同时, C MV具有泛嗜性的特点,特别是在免疫力低下的患者中,C MV感染可以引起多个器官的病变,而且临床表现往往不典型,临床上鉴别诊断C MV感染十分困难㊂如果长时间不能得到有效的救治,还可以并发儿童免疫功能的损伤,严重危害儿童的身体健康㊂因此,临床上应对儿童C MV性肺炎引起高度重视,及时完善相关检查,做好鉴别诊断并采用适当治疗方案,实现抢先治疗,以改善儿童病情及预后,提高儿童生存质量㊂白细胞黏附分子是介导细胞之间的相互接触和结合分子的统称,其主要是存在于细胞表面或者细胞基质中的糖蛋白,发挥作用形式是通过受体与配体的相结合介导细胞间的信号传导㊂当受体与配体结合后,细胞之间㊁细胞与周围的基质间和细胞-基质-细胞之间的相互黏附,参与了细胞信号的整个转导与活化的过程㊂在中性粒细胞表面有多种黏附分子,其中包括整合素家族㊁选择素家族㊁黏蛋白样家族㊁免疫球蛋白超家族和钙粘素家族[15]㊂其中整合素是一种能够介导细胞与其周围环境之间的连接的跨膜受体㊂在细胞间信号转导过程中,整合素可以将细胞外基质的信号等有关信息传入细胞,同时也可以由细胞内向细胞外传递信号㊂整合素是由α(120000~185000)和β(90000~110000)两个亚单位形成的异二聚体[16]㊂C D11b是整合素家族中β2亚族的中的一员,相对分子质量约为160000,基因位点在16号染色体短臂p11~p13.1,单核巨噬细胞和自然杀伤(N K)细胞表面均可以表达,成熟的中性粒细胞表面C D11b处于非活化状态,在在体内的其他细胞中仅有低水平表达㊂C D11b的活化与多种因素有关,其中包括补体片段㊁一些趋化因子和细菌代谢的内毒素和脂多糖等,当白细胞与上述小分子接触后在数分钟内就可以高表达C D11b,因此C D11b的上调被认为是炎症相关的早期标志物之一㊂因此,C D11b的上调被认为是中性粒细胞被激活的标志㊂有研究报道,新生儿在重症肺炎的早期就有中性粒细胞表面C D11b高表达,且随着病情好转C D11b表达逐渐降低[17]㊂这一过程提示C D11b 在重症肺炎早期就可发生变化㊂儿童发生C MV病毒感染时,病毒的代谢产物可以引起机体内肿瘤坏死因子α等炎症趋化因子的高表达,这些炎症因子则可以诱发早期中性粒细胞表面黏附分子C D11b的变化[18]㊂但是,这个过程在体内存在时间很短,如果当诱发因素没有得到有效控制,C D11b上调的现象会随着时间而下降,这一过程可能与中性粒细胞转变为脓细胞而失去生物学活性有关㊂由于儿童C MV感染型肺炎的特点为隐匿性发病,早期的临床症状不典型,不易被察觉,因此儿童C MV感染性肺炎在早期往往不能被及时发现,出现临床症状后,感染程度加重,C D11b的表达下调㊂C D11b诊断儿童C MV肺炎活动性感染的R O C曲线下面积为0.991,具有较好的诊断价值,特异度可达98.34%,即出现C MV活动性感染后中性粒细胞表面C D11b表达明显降低,对鉴别诊断C MV活动性感染具有重要价值;而诊断C MV高活动感染R O C曲线下面积为仅0.612,诊断价值不如C MV活动性感染高,但敏感度仍较高可达100%㊂综上所述,儿童C MV感染性肺炎外周血中性粒㊃507㊃‘临床荟萃“2017年8月5日第32卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2017,V o l32,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.细胞表面C D11b表达下调这一现象对C MV活动感染的诊断有重要意义㊂配合中性粒细胞表面C D11b 指标可以有效地提高C MV感染的检出率,使儿童在早期能够得到有效地诊治,实现 抢先治疗 ㊂参考文献:[1]董妞妞,徐锦.巨细胞病毒包膜糖蛋白B㊁H㊁N及其基因型的研究进展[J].检验医学,2016,31(3):159-162. [2]宋华,张书红,徐晓华,等.婴幼儿巨细胞病毒感染的临床特点[J].临床荟萃,2008,23(20):1472-1473.[3]沈一燚,刘志峰.巨细胞病毒感染与脂质代谢相关性研究进展[J].临床儿科杂志,2015,33(5):494-497.[4]汪生,刘丹波,郑晓丽,等.不同方式的造血干细胞移植术后巨细胞病毒感染的临床分析[J].中国实验血液学杂志,2015, 23(5):1438-1444.[5] A z e v e d oL S,P i e r r o t t i L C,A b d a l aE,e t a l.C y t o m e g a l o v i r u si n f e c t i o n i nt r a n s p l a n tr e c i p i e n t s[J].C l i n i c s,2015,70(7):515-523.[6]吴春涛,刘苏,佟艳会,等.先天性心脏病患者中弓形虫㊁风疹病毒㊁巨细胞病毒基因的定量检测[J].临床荟萃,2009,24(1):49-50.[7]彭芬,沈昌桃,吴华莉,等.新生儿巨细胞病毒感染的临床特征分析[J].中华医院感染学杂志,2015(18):4257-4259.[8]胡云,甘忠芳.新生儿巨细胞病毒感染的危险因素分析及干预对策[J].中国地方病防治杂志,2014,(S1):241-241. 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人巨细胞病毒pp150-pp65蛋白的表达与应用
人巨细胞病毒pp150-pp65蛋白的表达与应用金玉芬;李艳蕾;华艳;张晓刚;于庭【摘要】Objective To construct mid express the rccombinant plasmid and lisa the purified protein for the eolloidal gold kit for its antigenicity evaluation. Methods Losing PCR technology,the pp150 and pp65 gene fragments were cloned and expressed, The recombination protein was inelueed , purified and identified. At last to eonstruet the eombined detce tion Kit for IgG/IgM Antibody to HrMV( Colloidal Gold) to eletcet the samples in contrast with the imported reagent kit. Results The gene fragment was correctly amplified and surrcssfully ronstrurt the rcrombinant vcrtor. The purified protein with the molcrular weight of 45 kd had good antigenirity. The protein was assembled into a rolloidal gold kit to detect 600 scrum samples, in contrast with the imported reagent kit HCMVTgG ,the kit of the sensitivity was 92. 7 ％ specificity was 83.1 ％ ,coarse consistency was 90. 2 ％ ,in contrast with the imported reagent kit HCMV TgM, the kit of the sensitivity was 88. 1 ％ . specificity was 89. 2 ％ . coarse consistency was 88. 5 ％ : in contrast with the local reagent kit, coarse consistency to TgG and TgM was 93. 0 ％ and 91.2％ ,thc stability is good. Conclusion HCMV pp150 pp65 protein highly expressed had strong specificity. Contrast to the local and the imported reagent kit, the colloidal gold kit market prospect.%目的构建并表达人巨细胞病毒(HCMV)pp150-pp65蛋白,将纯化的重组蛋白制备成胶体金试剂盒对其抗原性进行评价.方法采用PCR 方法扩增HCMV pp150-pp65基因片段,连接到原核表达载体pET28a进行表达并纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并与北京英诺特生物技术有限公司合作研制出巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒(胶体金法),与进口试剂盒(酶免法)进行临床标本比对试验.结果成功构建了HCMV的高效表达载体pET28a-pp150-pp65,并得到分子量在45 kd的高表达蛋白,具有良好的抗原性.将该蛋白制备成胶体金试剂盒,经600份血清标本的检测,与进口CMV-IgG试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为92.7%和83.1%,总的符合率为90.2%;与进口CMV-IgM试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为88.1%和89.2%,总的符合率为88.5%,稳定性良好.结论高效表达纯化的pp150-pp65重组蛋白抗原性强,利用其建立的胶体金试剂盒与国产已上市试剂盒和进口试剂盒比对,不仅具有较高的灵敏度和特异性,而且经初步临床应用,表明该试剂盒能检测不同临床感染阶段的患者,具有较好的市场前景.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)012【总页数】4页(P2193-2196)【关键词】巨细胞病毒;pp150-pp65;巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒;胶体金法【作者】金玉芬;李艳蕾;华艳;张晓刚;于庭【作者单位】吉林大学第二医院,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,吉林,长春130041;北京英诺特生物技术有限公司,北京100070;北京英诺特生物技术有限公司,北京100070;吉林大学第二医院,吉林,长春130041【正文语种】中文【中图分类】R373.1+1人巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus，简称HCMV）属疱疹病毒β亚科，是一种DNA病毒，其感染在人群中广泛存在，我国人群中HCMV感染相当严重。
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点
《中国实体器官移植受者巨细胞病毒感染诊疗指南》要点—、前言巨细胞病毒（CMV ）感染是实体器官移植（SOT ）术后最为常见的病毒感染，临床表现多样。
未采取预防措施的SOT受者CMV感染率较高，在不同移植类型和不同患者人群中也存在明显差异。
CM V侵入人体成为CMV 感染，可为静止性感染或活动性感染。
CMV侵袭肺、肝脏、胃肠道、肾上腺、中枢神经系统以及骨髓等多种器官组织并引起相应临床症状,称为CMV病。
CMV感染可对移植受者造成多方面损害，包括移植物功能丧失、受者死亡或医疗成本増加。
CMV感染与移植物急性排斥反应互有促进作用；并可增加或加重移植受者各种机会性感染，如CMV肺炎。
二SOT受者CMV感染的主要危险因素（一）供、受者血清CM V状况接受血清CMV阳性供者的器官移植的CMV阴性受者（供者阳性/受者阴性，D+/R-）应视为CMV感染极高风险人群。
相对而言，D-/R-移植受者CMV感染的发生率最低（＜5%\（二）移植器官的种类CMV感染风险与移植器官的种类相关：肺、小肠、胰腺移植受者比肾、肝移植受者危险性更高。
（三）其他危险因素其他危险因素包括受者的免疫力低下、合并其他病毒感染、急性排斥反应、高龄和器官移植物功能不全等；供者在重症监护病房（ICU ）监护时间较长，面临多重感染的风险，移植后也可造成受者获得性感染风险增加。
推荐意见：1. 推荐所有器官移植供、受者术前均进行CMV血清学检测，参考风险分层，指导制定预防策略（I-BL2. 建议术后对受者进行CMV-IgG血清学检测（I-B）O抗CMV-IgG 阳性或抗CMV-IgG呈4倍以上增高者为高危纟吉果为临界值或不确定时, 可按阳性考虑（2-C L3. ABO血型不合器官移植、接受淋巴细胞清除性抗体治疗以及术前存在人类免疫缺陷病毒感染的受者均可视为高危患者（I-B）O三、实验室诊断推荐意见：1. CMV的早期快速诊断,推荐外周血及尿液的CMV DNA核酸定量(QNAT )检测，或间接免疫荧光法(IFA )外周血白细胞的CMV-PP65抗原检测(I-A)t> CMV DNA病毒载量> 103拷贝/ml为病毒复制阳性，CMV-PP65抗原一个以上细胞阳性即可报告阳性。
CMV_PP65抗原检测及临床意义-文档资料
• CMV是导致胎儿先天性感染的最常见的病原体， 占约整个出生新生儿的0.5-2.5%。
• 分娩时胎儿通过产道可感染CMV，但该感染不 遗留后遗症。
• CMV产后感染大多数发生在婴幼儿及童年时期， 通常是无症状，感染途径大多是与CMV排毒者 的密切接触，如各种体液如唾液、尿液、乳汁、 泪液、血液、生殖道分泌物等。少数可通过输 血及器官移植感染。
• 分离白细胞(EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml) • 细胞计数即浓度调整，3.0106/ml • 细胞离心涂片及固定。 • 染色，IIF法，第一抗体是抗CMVpp65单抗，
第二抗体是羊抗鼠免疫球蛋白荧光抗体。 • 读片及结果判断
CMVPP65阳性
CMV PP65阳性意义
• CMV活动性感染，并可在出现临床症状 前检测到。
• 做为疗效观察的指标。
CMV PP65阳性治疗
• 更昔洛韦，ganciclovir
标本的采集
• EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml(白细胞过 低患者，如 200个/mm3，需要采集5－ 10ml抗凝的静脉血。
• 时间：周1或周4送标本(检验科病毒室， 新楼3段2层)。
CMV感染的最重要的形式
•滋病、
肿瘤化疗患者(尤其是白血病和淋巴瘤)以 及器官移植受者。
巨细胞病毒抗原血症(CMVpp65)检测的操 作步骤(CMV BriteKit，MCA Development, The Netherlands)
• 基本原理是检测分子量65KD的基质磷蛋白 (pp65)，该蛋白位于外周血白细胞的核仁内。
小儿巨细胞病毒感染的研究进展
小儿巨细胞病毒感染的研究进展巨细胞病毒（cytomegaIovirus，CMV）感染是婴幼儿最常见感染之一，可导致生殖泌尿、中枢神经、肝脏等各系统感染，从无症状感染直到严重缺陷或死亡。
本文主要对CMV的临床表现，发病机制，检测方法，动物模型以及疫苗的研发等方面进行综合阐述。
标签：巨细胞病毒；pp65抗原检测；动物模型；巨细胞病毒疫苗巨细胞病毒（cytomegaIovirus，CMV）感染又称巨细胞包涵体病，是由人巨细胞病毒（human cytomegalovirus ，HCMV）感染所导致的一种先天性或后天性全身感染性疾病。
CMV是一种疱疹病毒，为双链DNA病毒，引起以生殖泌尿系统，中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染，从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。
巨细胞感染可发生于先天，产后或任何年龄，但大多数是发生在幼年时期。
我国是巨细胞病毒感染高发区，有报道，我国成人CMV-IgG阳性率为90%，儿童至12岁时已高达80%。
所以，要控制和降低CMV感染率，婴幼儿时期的监测与防范就显得尤为重要。
本文就近年来有关小儿巨细胞病毒感染的研究状况进行归纳总结，为临床合理的诊疗提供科学依据。
1 传播途径和发病机制CMV通过血液、体液和移植器官传播，感染可发生于移植时或出生时。
感染时CMV能经吞噬细胞在体内扩散，同时与内皮生长因子受体结合进入宿主细胞。
病毒的DNA片段组合到人体血管细胞的DNA中，改变其基因功能和脂质代谢，并激活凝血系统以及细胞因子和生长因子基因，促进血小板衍生生长因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）的表达，促使白细胞和血小板黏附，损伤内皮细胞[1]。
巨细胞病毒侵入人体后，大多表现为亚临床感染，主要潜伏于血管平滑肌细胞和内皮细胞中。
CMV基因组含有其他辅助基因，可以参与免疫逃避或者抑制细胞死亡，致使病毒和宿主共生。
机体中T细胞、NK细胞等介导的细胞免疫起到重要的预防和控制作用，可是也不能完全清除病毒，使大部分人成为隐性或潜伏感染[2]。
关于测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值
关于测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值【摘要】目的以快速、简便的人巨细胞病毒特异性抗体亲和指数(CMV-IgG AI)检测方法作为有效的诊断工具，用于区分孕妇CMV原发感染与非原发感染。
方法以标准的间接ELISA方法，8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂，用标准曲线方法定量测定标本中的CMV-IgG含量。
结果共检测218例标本，其中187例为CMV既往感染标本，31例为继发或再感染、可疑原发感染和原发感染标本。
以抗体亲和指数<35.0 %作为阳性判断标准，此时方法的灵敏度为75.0 %，特异度为91.4 %，可用度为67.2 %。
既往感染、继发或再感染、可疑原发感染、原发感染4组的平均AI值分别是(61.42±25.69) %，(70.38±21.88) %，(66.73±23.62) %，(29.78±25.93) %，原发感染组与其它3组非原发感染比较，差异有统计学意义(P<0.01))。
结论以8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂，用标准曲线方法定量测定标本中CMV-IgG含量适用于检测巨细胞病毒IgG抗体亲和指数(CMV-IgG AI)，认为CMV-IgM联合CMV-IgG AI检测是区分原发与非原发感染的血清学方法之一。
【关键词】巨细胞病毒;亲和指数;IgG抗体;原发感染;酶联免疫吸附试验【Abstract】 Objective To establish a rapid， easy and simple method for determination of CMV-IgG AI to serve as effective diagnostic tool to distinguish primary CMV infection from non-primary infection in pregnant women. Methods The measurement of CMV-IgG AI is accomplished by standard indirect ELISA method using 8 mol/L urea as a mild protein denaturing agent and the amount of CMV-IgG in the specimen was measured quantitatively using a standard curve method. Results Of the 218 samples， 187 were from women with past CMV infection and 31 from those with secondary infection or re-infection， suspicious primary infection and primary infection. When the CMV-IgG AI less than 35.0 % was defined as positive， the sensitivity was 75.0 %， the specificity was 91.4 %，and availability was 67.2 %. The mean AI in the samples from women with past infection ， secondary infection or re-infection， suspicious primary infection and primary infection was( 61.42±25.69)%，(70.38±21.88)%，( 66.73±23.62)%，(29.78±25.93)%， respectively. There is a statistical difference between the primary and non-primary CMV infection (P<0.01). Conclusion The amount of CMV-IgG in the specimen quantitatively measured by a standard curve with 8 m urea solution as a mild protein denaturing agent， was found to be suitable for determination CMV-IgG AI. At present the combination of CMV-IgG AI and CMV-IgM assay seem to be one of the best serological tests for differentiating primary CMV infection from non-primary CMV infection.【Key words】 Cytomegalovirus; Avidity index; IgG antibody，primary infection; Enzyme-linked immunosorbent assay( ELISA)人巨细胞病毒(cytomegalovirus， CMV)是可以引发宫内感染最常见的病毒之一，对胎儿危害极大，可引发胎儿多种病变或畸形[1]，在活产儿中感染率为0.2 %～2.0 %左右，是风疹的2倍[2]。
HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值
中国现代医药杂志2018年5月第20卷第5期 MMJC，May 2018，Vol 20，No.579DOI ：10.3969/j.issn.1672-9463.2018.05.023HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用价值于锰锰 李小芹作者单位：450000 河南郑州，郑州大学附属儿童医院消化内科人巨细胞病毒（HCMV ）感染为儿科常见病、多发病，属于疱疹病毒科β属，是一种具有潜伏性的双链DNA 病毒，当免疫功能发育不全或者减弱后，HCMV 原发性或者潜伏-再激活感染就会使患者表现出黄疸、肝脾肿大、咳嗽、发热及贫血等临床症状，因上述临床症状不具备特异性，因此对患者开展早期HCMV 感染活性诊断意义重大。
有文献指出，HCMV-PP65抗原检测在小儿巨细胞病毒感染中有明显价值[1]。
现选择2014年7月~2017年7月在我院就诊的疑似HCMV 感染患儿为研究对象，探讨HCMV-PP65抗原检测对其诊断价值，报道如下。
1 材料与方法1.1一般资料 选择2014年7月~2017年7月于我院就诊的疑似HCMV感染患儿为研究对象，共200例。
男116例，女84例。
年龄2.5月~5.14岁。
按照卫计委颁布的关于HCMV 感染诊断方案，最终确诊为感染者共计104例。
排除其余类型感染。
分别使用HCMV-PP65抗原检验、化学发光法、FQ-RCR 法对200例患儿进行检测。
1.2设备与试剂 化学发光仪，荧光定量PCR 仪，荧光显微镜。
HCMV-PP65抗原检验试剂盒，DNA 提取试剂盒，化学发光免疫分析试剂盒，FQ-PCR 检验试剂盒。
1.3样本收集及检测 在患儿监护人知情同意前提下，收集受试者空腹静脉血5.0ml 进行检验，均分为2份。
其中1份进行3.0ml ED-TA-K2抗凝，开展PP65检测。
样本收集完成后6h 内对PMNLs 细胞进行分离。
另取1份2.0ml 促凝，以3 000r/min 离心，分离血清和血浆。
【doc】检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较
检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较278临床检验杂志2004年第22卷第4期ChineseJournal.fClinicalhb.rat.ryscience, 2004,v.1.22,N..4文章编号:1001—764X(2004}04-0278-02中图分类号:R446.6文献标识码:A?实验研究?检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较赵缜.,孙洪斌,彭奕冰,季育华(1.上海瑞金医院集团闵行医院检验科,上海201100;2.上海瑞金医院检验科)摘要:目的比较血pp65抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒(CMV)活动性感染的诊断价值.方法收集58位移植患者的血标本(共208份),分离血浆和多形核白细胞,血浆用于CMVIgM抗体检测(ELISA),白细胞用于pp65抗原血症检测(荧光免疫组化).同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析,检测CMVDNA.结果pp65抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关(r:0.87),也与病人的临床症状密切相关,可用于监测移植患者CMV的活动性感染.IgM抗体与pp65抗原阳性的一致率为21.2%,对CMV感染的敏感性为22.3%,特异性为95.6%.结论pp65抗原阳性细胞数能反映CMV的数量,可监测CMV活动性感染,检测方法特异,灵敏,操作简单,适宜临床实验室应用.血清IgM抗体检测因为敏感性较低,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测.关键词:巨细胞病毒;pp65抗原血症;IgM抗体:荧光定量PCR巨细胞病毒(CMV)在移植患者中的感染是广泛的,而且其活动性感染已成为患者死亡的重要原因之一.早期快速监测,采取适当治疗至关重要Ll.pp65抗原检测是国际公认的监测CMV活动性感染的"标准方法"之一L2.但是,目前我国仍然以检测血清CMVIgM抗体为主L4].本文对2种方法进行了比较,报告如下.1材料和方法1.1研究对象为上海市瑞金医院,儿童医学中心,儿科医院和苏州医学院附属医院的移植患者共58例,包括31例肾移植患者,20例骨髓移植患者和7例肝移植患者.1.2标本收集在知情同意的情况下,采集被检者静脉血3ml,EDTA抗凝.共208份.6h内分离血浆,然后用6%多聚甲醛溶液分离外周血多形核白细胞.血浆一部分用于CMVIgM抗体检测,其余冻存;取白细胞悬液涂片,2×10细胞/片,自然晾干, 4%中性多聚甲醛固定.1.3检测方法1.3.1pp65抗原检测用荧光免疫组化法,检测人外周血多形核白细胞中的pp65抗原.第一抗体为鼠抗CMVpp65单克隆抗体混合物(C10/C11),第二抗体为FITC标记的羊抗鼠IgG.检测试剂盒为CMVBrite(荷兰IQ公司),按说明书操作.荧光显微镜下观察结果,全片pp65抗原阳性细胞数≥5 个为阳性.1.3.2血浆CMVIgM抗体检测用ELISA(美国BiocheckInc公司),按说明书操作.1.3.3血浆CMVDNA检测从208份血浆标本中随机抽取50份,用CMVDNA荧光定量PCR检测试剂盒检测(匹基公司),按说明书操作.检测系统为LightCycler荧光定量PCR仪(罗氏公司).PCR结果≥10/ml拷贝为阳性.2结果2.1pp65抗原与CMVDNA检测结果的比较随机抽取50份血浆标本,用荧光定量PCR检测CMVDNA,并与pp65抗原检测结果比较.结果CMVDNA阳性14份,pp65抗原阳性15份,二者均阳性11份.两种方法检测结果的一致率为88%,同一份标本的DNA拷贝数与pp65阳性细胞数有很好的相关性(r=0.87,资料略).2.2pp65抗原与血清IgM抗体检测结果的比较208份血液标本中,pp65抗原阳性94份,IgM抗体阳性26份,二者均阳性21份.两种检测方法的阳性一致率为21.2%,以pp65抗原阳性为标准,IgM抗体法的敏感性为22.3%,特异性为95.6%.在94份pp65抗原阳性标本中,临床症状期采集的标本pp65阳性细胞数明显高于无临床症状期标本(前者平均为97个/片,后者平均为23个/片).IgM抗体是否阳性与临床症状无明显相关性.2.3在58例移植患者中,有36例于移植后出现pp65抗原阳性,平均持续36d,其中29例血清IgM作者简介:赵缜,1972年生,男,硕士,检验医师,主要从事病毒的免疫学研究.临床检验杂志2004年第22卷第4期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience,2004,V o1.22.No.4279抗体始终保持阴性,7例血清IgM抗体阳性,其中2例pp65抗原血症早于IgM出现(1例为50d,另1例为41d),1例在治疗后pp65转阴性,但IgM仍持续阳性超过3个月,而无临床症状;另有2例血清IgM抗体阳性,但pp65抗原血症阴性,其中1例出现相关临床症状,1例无相关临床症状.3讨论pp65抗原是CMV复制早期产生的被膜蛋白,位于衣壳与包膜之间.当CMV活动性感染时,一个显着的标志是外周血多形核细胞中呈现大量pp65蛋白j.随着研究的深入,pp65抗原检测已渐渐成为诊断CMV活动性感染的"标准方法"之一,并用于药物的疗效观察和病人的预后监督.我们对58例移植病人分析发现,pp65抗原的出现明显早于临床症状,而且pp65阳性细胞数与患者临床疾病的严重性明显相关,它对CMV活动感染的监测具有高度的敏感性和特异性.此法优于IgM抗体的测定,敏感性和特异性都较高,适于临床实验室应用.参考文献:[1]赵缜,季育华.移植病人中HCMV激活感染标志的研究进展[J].国外医学?病毒学分册,2001,8(4):180—182.[2]HornefMW,HacksteinH,KirchnerH,eta1.Significanceof cytoplasmicstaininginthecytomegaloviruspp65antigentest[J].Eur JClinMicrobiolInfectDis,1999,18(1):66-68.[3]SinghN,PatersonDL,GayowskiT,eta1.Cytomegalovirus antigenemiadirectedpre—eruptiveprophylaxiswithoralversusI.V. ganciclovirforthepreventionofcytomegalovirusdiseaseinliver transplantrecipients:arandomizedcontrolledtrial[J].Transplantation,2000,70(5):717-722.[4]夏吉荣,王富兰,祝继英.人巨细胞病毒活动性感染的分析[J].重庆医科大学,2003,28(2):195—197.[5]SiaIG,Pate1R.Newstrategiesforpreventionandtherapyof cytomegalovirusinfectionanddiseaseinsolid—organtransplantrecipients[J].ClinMicrobiolRev,2000,13(1):83—121. Monitoringofactivecytomegalovirusinfectionintransplantpatients:comparisonofpp65antigenemiatestandCMV?specificIgMassayZHAOZhen,SUNHongbin,PENGYibing,eta1.(DepartmentofLaboratoryMedicine,Min hangHospital,RuijinHospitalCompany,ShanghaiSecondMedicalUniversity,Shanghai201100,China.)Abstract:ObjectiveTocomparethediagnosticefficacyofthepp65antigenemiatestandtheC MV—specificIgMassayinmonitoring activeCMVinfectionoftransplantpatients.MethodsInthisstudy208bloodsemplesfrom58t ransplantpatientswerecollectedanddetectedbythesetwomethods.Andthenwecarriedaprospective,parallelandblindstudyonp artofthesesamplesinordertocomparethepp65antigenemiatestwithafluorescentquantitativePCRassay.Results1.Thenumberof CMV antigen—positivecellsbythepp65 antigenemiatestandthelevelofCMVDNAbythequantitativePCRhavegoodcorrelation(r= 0.87).2.ThepositiveagreementrateofIgMassayinplasmaandCMVpp65antigenemiaassaywas21.2%.ForpredictionofactiveC MVinfection.thesensitivityand specificityofIgMassayincomparisonwithpp65antigernemiatest.were22.3%and95.6%re spectively.ConclusionThepp65 antigenemiaassaycouldreflectthelevelofCMV andpredictactiveCMVinfectionintranspla ntpatients.TheCMV—specificIgMassay hadmoderatespecificitybutoftengavelatepositiveresultsandwasnotsensitiveenoughforus easpredictiontoolsfortransplantpatients.Keywords:eytomegalovirus;pp65antigenemia;lgMantibody;fluorescentquantitativePC R(收稿日期:2003.11-15,修回日期:2004-02-02)(本文编辑:杨林)(上接第277页)参考文献:[1]BizzaroN,BrandaliseM.EDTA—dependentpseud0thmmb0cytopenia. 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CMV三种感染方式
• CMV是导致胎儿先天性感染的最常见的病原体， 占约整个出生新生儿的0.5-2.5%。
• 分娩时胎儿通过产道可感染CMV，但该感染不 遗留后遗症。
• CMV产后感染大多数发生在婴幼儿及童年时期， 通常是无症状，感染途径大多是与CMV排毒者 的密切接触，如各种体液如唾液、尿液、乳汁、 泪液、血液、生殖道分泌物等。少数CMV PP65阳性治疗
• 更昔洛韦，ganciclovir
标本的采集
• EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml(白细胞过 低患者，如 200个/mm3，需要采集5－ 10ml抗凝的静脉血。
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CMV感染的最重要的形式
• CMV先天性感染。 • 在免疫抑制患者的感染，包括艾滋病、
肿瘤化疗患者(尤其是白血病和淋巴瘤)以 及器官移植受者。
巨细胞病毒抗原血症(CMVpp65)检测的操 作步骤(CMV BriteKit，MCA Development, The Netherlands)
• 基本原理是检测分子量65KD的基质磷蛋白 (pp65)，该蛋白位于外周血白细胞的核仁内。
• 分离白细胞(EDTA-K3抗凝的静脉血2－5ml) • 细胞计数即浓度调整，3.0106/ml • 细胞离心涂片及固定。 • 染色，IIF法，第一抗体是抗CMVpp65单抗，
第二抗体是羊抗鼠免疫球蛋白荧光抗体。 • 读片及结果判断
CMVPP65阳性
CMV PP65阳性意义
• CMV活动性感染，并可在出现临床症状 前检测到。