实验七酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别

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酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

酵母菌形态观察及死活细胞的观察

实验程序 Ⅱ1
（测定微生物数量）
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。
4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
实验五
结束
酵母菌形态观察及死活细胞的观察；微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染色鉴定酵母的死活
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序（测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
• 测定的工具：目镜测微尺镜台测微尺

实验七酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别

第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml：蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml，每管加7ml，共45管，内装倒置小管每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。
实验七酵母菌的形态观察与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物，其大小为常见细菌的几倍至几十倍。大多数酵母采用出芽方式进行繁殖。美蓝是一种弱氧化剂，其氧化态呈蓝色，还原态呈无色。用美蓝对酵母细胞进行染色时，由于新陈代谢，活细胞具有较强的还原能力，可使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型，染色后细胞呈无色。死细胞或代谢能力弱的衰老细胞其还原能力弱，染色后细胞呈蓝色。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。

实验7_酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

二、基本原理——美蓝染色液基本原理——美蓝染色液
美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无用它对酵母菌染色时，色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作使细胞内具有较强的还原能力，用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。区分死、活细胞。
四、操作步骤——美兰染色操作步骤——美兰染色
在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环 0.05%吕氏碱性美蓝染色液染液不宜过多或过少）挑取少量酵母菌苔，混合均匀；挑取少量酵母菌苔，混合均匀；（注：染液不宜过多或过少）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；盖玻片不宜平着放下）玻片放下使其盖在菌液上；（注：盖玻片不宜平着放下）
二、基本原理——酵母菌形态基本原理——酵母菌形态
酵母菌为单细胞真核微生物，菌体比细菌大。酵母菌为单细胞真核微生物，菌体比细菌大。无性繁殖主要是出芽生殖出芽生殖，性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片美蓝染色浸片来观察生活的酵母形本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。态和出芽生殖方式。

实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法

实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
（三）显微镜计数 3、加样品将清洁干燥的血细胞计数板先盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，再用镊子轻压盖玻片，以免菌液过多将盖玻片顶起而改变了计数室的容积。加样后静置5min，使细胞自然沉降。
二、实验原理
以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：
1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50 000AB
以16个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：
1ml菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32 000AB
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
一、实验目的
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别；
3、明确血细胞计数板计数的原理，以及使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
五、实验操作（三）显微镜计数 5、清洗使用完毕后，先用自来水冲洗血细胞计数板及盖玻片，再用95%的乙醇棉球清洗，吸水纸吸干后，放回盒中，以备下次使用。
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
六、实验作业 1、将显微计数的结果记录于表1中，A表示5个中方格中的总菌数，B表示菌液的稀释倍数。
二、实验原理计数室的容积：
1mm（大方格的边长）×1mm（大方格的边长）×0.1mm（盖玻片与载玻片之间的厚度）=0.1mm3（10-4ml）

酵母菌形态观察及死活细胞鉴定2

细菌形态观察简单染色法
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。美蓝有氧化型和还原型两种状态。氧化型为蓝色，还原型无色。酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为还原型。酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的美篮染色液中，混合均匀；

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

南京林业大学实验报告实验四酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（一）实验目的1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

（二）实验原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物。

无性繁殖主要是出芽生殖。

本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色。

三）实验器材1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁斜面培养物；2、染色液和试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液；3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。

(四）实验方法（美蓝浸片）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。

（五）注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察；2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。

酵母菌死活细胞区别图（10×40倍下观察）死细胞（呈蓝色或淡蓝色）活细胞（无色）（六）心得体会：在制片的时候，先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，并且要避免产生气泡。

在用美篮染色的时候，注意染色液和菌液不宜过多或过少，并且应该尽量等量而且要混匀。

酵母菌形态观察及死活鉴别

酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

1。

酵母菌形态观察及死活细胞的观察

实验五
结束
实验5-3：美蓝染色死活细胞鉴定
• 美蓝为无毒染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。 • 通过美蓝染色，检验细胞的还原能力。活细胞还
原能力强，在特定时间内将美蓝还原为无色。 • 老化、死亡细胞呈蓝色、淡蓝色。
思考题
• 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？
• 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
实验五
酵母菌形态观察及死活细胞的观察微生物细胞大小测定微生物数量的测定
酵母菌形态观察及死活细胞的观察；微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序（测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染色鉴定酵母的死活
实验5-1a：Yeasts(unicellular fungi)

实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法

血球计数法结果
通过血球计数板对酵母菌进行计数，我们得到了每毫升菌液中酵母菌的数量。结果显示，菌液中酵母菌的数量在合理范围内，计数结果准确可靠。
对实验过程的反思与总结
实验操作方面
在实验过程中，我们需要注意无菌操作，避免杂菌污染。同时，需要准确配制试剂，保证实验结果的准确性。
VS
实验设计方面
在实验设计时，需要考虑实验的可行性和可重复性。本实验中，血球计数法的操作较为简便，且结果准确可靠，是一种有效的计数方法。
死活细胞鉴定结果分析
死活细胞鉴定结果
通过染色法和荧光染色法，我们成功地对酵母菌的死活细胞进行了鉴定。活细胞能够吸收染料并发出荧光，而死细胞则不能。在显微镜下观察，活细胞呈现明显的荧光，而死
细胞则无荧光。
分析
死活细胞鉴定结果表明，大部分酵母菌为活细胞，仅有少量酵母菌为死细胞。这说明在实验过程中，酵母菌的生长条件较为适宜，且培养基的营养成分能够满足酵母菌生长的
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握酵母菌的形态观察方法
了解酵母菌的形态特征
通过显微镜观察，了解酵母菌的单细胞形态，包括其形状、大小、细胞壁、细胞膜等结构特点。
学习染色法
THANKS
感谢观看
酵母菌是单细胞真菌，通常呈卵圆形或圆柱形，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核等基本结构。通过显微镜观察酵母菌的形态，可以了解其生长状态和繁殖方式。
酵母菌在生长过程中，会经历由单倍体到二倍体的过程，通过观察其形态变化，可以了解其生长周期和繁殖特点。

实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数法

中的总菌数，B表示菌液的稀释倍数。
表1 显微计数结果
各中格的格数 A
1 2 345
B
两室平菌（孢子）均值数/mL
酿酒酵母
第1室第2室
下次实验课需要准备的材料
6套培养皿 1套用于PDA薄的琼脂块的制作； 1套用于放线菌的扦片法； 2套培养皿分别放入2块载玻片、2块盖玻片和
2个湿棉球，用于根霉、青霉的载玻片培养观察；最后2套：1套用于青霉的3点接种；1套用胞鉴定及血球计数
三、实验仪器与用具超净工作台、接种环、酒精灯、火柴、试管
架、显微镜、擦镜纸、双层瓶、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、毛细滴管等四、实验材料与试剂安琪酵母的活化液；吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用碘液
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
二、实验原理显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液
置于一种特别的、具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。该方法的优点是菌种亲眼见、省时又省钱；缺点是死活两相汇，杂菌不能辨、菌丝不能计。
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
五、实验操作
（三）显微镜计数
5、清洗
使用完毕后，先用自来水冲洗血细胞计数板及盖玻片，再用95%的乙醇棉球清洗，吸水纸吸干后，放回盒中，以备下次使用。
实验七酵母菌的形态观察、死活细胞鉴定及血球计数
六、实验作业 1、将显微计数的结果记录于表1中，A表示5个中方格
实验七酵母菌的形态观察、死活细
胞鉴定及血球计数
（三）显微镜计数
4、显微镜计数
一般样品稀释度要求每小格内有5~10个菌体为宜，每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）中的菌体进行计数。

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。

美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。

同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。

死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。

子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。

2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。

3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。

4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。

【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。

酵母菌死活细胞鉴别

四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞）；（不要过于剧烈中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡）；（不要产生气泡将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形将制片放置3min后态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞；态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变染色30min后再次观察后再次观察，化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）（建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿；的培养斜面或平皿；菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液；溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，接种环，滴管等。显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、酵母菌细胞的形态观察、死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构；观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和方法；方法；

酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别1

2、死活酵母细胞的染色鉴别
取美兰染色液一滴，滴在载玻片中央，再加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5min后加盖玻片镜检。未被染色的是活细胞，被染成蓝色的是死细胞。
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
取一洁净的载玻片用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液将其滴于载波片中央然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀盖上盖玻片小心将其一端与菌液接触然后缓慢放下避免产生气泡
酵母菌形态观察及死、活细胞的鉴别
班级：食检112 组员：孙中涛0102111217 徐洲0102111218 刘彩云 0102111219 孙洋0102111220 戚望平 0102111221
三、实验器材
• 菌种：酵母菌标准片、酵母菌菌悬液 1 • 染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏碱性美兰染色液 • 仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子
四、方法与步骤
1、
酵母细胞的形态观察
（1）酵母菌水-碘液浸片的制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载波片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡。（2）镜检:先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。用同样的方法观察其他酵母菌标本片。观察是注意酵母菌细胞的形状和出芽情况。
一、实验目的
（1）进一步熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了
解酵母菌的形态结构。（2）掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方案。
二、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核体和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就不会形成藕节状的假菌丝。

微生物实验七：酵母菌形态和死活鉴定

酵母菌的形态结构观察（菌落形态、美兰染色及死活鉴别）
一、目的要求
1、识别酵母菌的形态特征（观察酵母菌菌落的形态、大小、色泽、透明度和边缘特征。
2、酵母菌的细胞形态及出芽观察，并掌握区分酵母菌死活的染色方法。
二、基本原理
酵母菌的美蓝染色和死活鉴别
美蓝是一种无毒性染料，氧化型蓝色，还原型无色。
（三）其它物品显微镜擦镜纸载玻片吸水纸盖玻片
四、实验步骤
酵母菌的美兰染色及死活细胞的鉴别
在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美兰染液，液滴不可太多或太少，然后按无菌操作取酵母少许，放在吕氏碱性美兰染液中，将菌体与染液均匀混合。加盖玻片，在高倍镜下观察，区分其母细胞和芽体（画图），区分死细胞（蓝色）和活细胞（白色），观察死细胞（蓝色）和活细胞（白色）随时间变化的情况。
பைடு நூலகம்
用美蓝对酵母细胞进行活细胞染色，由于细胞的新陈代谢作用，细胞具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。还原能力强的活酵母是无色的，死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则是蓝色或淡蓝色——死活鉴别
酵母菌
三、实验材料
（一）药品生理盐水吕氏碱性美兰（二）菌种香柏油二甲苯
酿酒酵母、分离菌种

实验七八酵母菌形态观察

四、操作步骤
1、装目镜测微尺 2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。（2）先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰的看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占格数。用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所占格数。
实验七
酵母菌形态观察与死活细胞的鉴定
实验目的
• 1、了解自然界的酵母菌及其形态结构； • 2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法； • 3、学会计算成活率。
实验器材
1、菌种：酵母菌 2、仪器或其它用具： 0.05％美蓝染液和0.1%美蓝染液，载玻片，盖玻片，显微镜。
酵母菌的形状观察
1、不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。因此用高倍镜观察即可。
三、美蓝染色步骤
1、在载玻片中央加一滴0．1％和0.05％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后取酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 2、用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 3、将制好的片子放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酵母菌的形态，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 4、30分钟后再观察，注意死细胞数量是否增加。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。

实验七 酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物

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