104、分子诊断质控品的特性、选择和应用
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• 当任何质量控制测试的结果未能达到期望值时 ，应对失控原因进行分析。
28
失控分析
• 实验操作人员在检测样本时，如发现质 控检测数据不符合质控规则，应在室内 质控记录单上简述失控原因。
• 失控的原因主要包括：操作失误、质控 品失效、仪器维护不良以及质控测定不 当等。
29
失控分析
• 操作失误——主要是人为因素
966
5
质控品
定义：用于体外诊断的质量控制物质，是一种旨在用
于医学检测系统中使用的物质、材料等。
目的：是评价或验证测量精密度或由于试剂或分析仪
器的变化导致的分析偏差等。
用途：用于室内质量控制、室间质量评价等。
6
质控品的种类
• 根据有无测定值可分为定值质控品和非 定值质控品。
• 根据质控品的物理性状不同分为冻干质 控品和液体质控品。
Pasloske BL et al.,J Clin Microbiol. 1998 Dec; 36(12):3590-147.
人工合成样本——假病毒颗粒
优点：
• 明确的基因序列 • 监测反应全过程 • 生物安全性 • 稳定性好
缺点：
• 专利保护，价格昂贵
• 表面结构不同，不能 充分模拟真实病毒
18
https://www.dsmz.de/
Japanese Collection of Research Bioresources
http://cellbank.nibiohn.go.jp/english/
Riken Bioresource Center
http://en.brc.riken.jp/
21
• 不能监测提取过程
14
人工合成样本——体外转录RNA
Chang M et al, J Clin Virol. 2012, 55(2):128-3315.
人工合成样本——体外转录RNA
优点：
• 明确的基因序列 • 具有再生性 • 无感染性
缺点：
• 稳定性差
• 不能监测提取过程
百度文库16
人工合成样本——假病毒颗粒
4
专家指出
采用已知弱阳性和阴
性质控品进行室内质
量控制是保证检测质
量的关键环节之一，
其监控的是实验室测
定的最重要的性能指
标，即重复性，并决
定了当批实验测定是
否有效，报告能否发
出，是对实验室测定
的即时性评价。
李金明等，涉及基因扩增的
个体化医学检测质量保证的
重要性, 2012, 35(11), 963-
分子诊断质控品的特性 、选择和应用
1
涉及疾病种类
2
分子诊断实验室检测的现状
Gene Reviews：
截止2013年05月，已发现3007种基因疾病，其中2776种已经进入临床检测，231
种仍在研究阶段，目前全球已有618个有资质的实验室在进行相关检测工作
3
临床实验室如何 来保证检测结果 的准确可靠？
，仍应按传染性样本对待，注意防护措施 • 注意质控品最佳保存条件，使用完毕后应及时
放回冷藏室，如发生下述情况严禁使用
已过有效期 样品管已发生泄漏 样品管标记无法识别
27
质控品使用的局限性
• 无法对提供虚假结果的实验室进行质量保证， 不标准的应用检测方法与试剂也是不能进行评 价的。
• 因各种原因造成的常规试剂变化（如：过期、 污染等问题），仪器设备或者操作技术的缺陷 ，也无法进行客观评价。
22
质控品的使用
• 已知阳性质控 • 已知阴性质控 • 空白（无模板）
23
Baseman JG, et al. J Clin Virol 2005, 32S;16-24.
阳性质控品
• 定性检测
接近方法测定下限浓度
• 定量检测
测定线性范围内的高、中、低浓度
避免假阴性结果
24
阴性质控品
• 监测实验室以前扩增产物的污染 • 实验操作所致样本间的交叉污染 • 试剂污染
专家指出
尽管少部分分子检测项目
已有质控物质，但是大部 分的分子检测项目还 是缺乏有效的质控物 质。
其次，现在的多元质控物 质商品的开发也不够成熟。 实验室更愿使用免费的患 者标本或者根本不进行质 量控制，只有罕见突变才 勉强花钱购买质控品。
王治国等，分子诊断质量控制 面临的问题，2012，6(30)， 466-4670
7
常用质控品类型
• 临床样本
• 细胞系
• 人工制备样本
质粒 转录RNA 假病毒颗粒
8
临床样本
9
临床样本
优点：
• 真实样本
缺点：
• 来源有限
• 评价整个分析过程
• 生物传染性
• 包含所需基因序列
• 可能存在异质性
最优样本
10
细胞系
Meissner JD, J Gen Virol. 1999 Jul;80 ( Pt 7):17251-133.
避免假阳性结果
25
空白管质控
• 监测扩增试剂是否发生污染，具有 较强的污染鉴别性
• 监测反应液加样区及加样过程是否 发生污染
• 鉴别实验室是否发生污染
26
质控品使用的注意事项
• 均匀分散于临床标本中，与临床标本同时处理 • 扩增时不应将质控品放于固定孔中，放置位置
应顺延以便监测每孔的扩增效率 • 质控品虽经灭活处理，但仍具有潜在的传染性
细胞系
优点：
• 模拟真实样本，稳定 性好
• 评价整个分析过程 • 生物安全性 • 易于制备，成本低
缺点：
• 稳定性较差 • 细胞株有限
实用样本
12
人工合成样本——质粒
13
人工合成样本——质粒
优点：
• 明确的基因序列 • 易于生产，价格便宜 • 具有再生性 • 无感染性 • 材料稳定性好
缺点：
• 非“真实”样本
http://www.atcc.org/
Coriell Cell Repositories
https://catalog.coriell.org/
European Collection of Cell Cultures
https://www.phe-culturecollections.org.uk/ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures
目前现状？
• 分子诊断项目快速增长 • 新的技术发展（如NGS、数字PCR等）引入
新的检测项目
但是……
对于绝大多数分子诊断项目， 现在还不能提供阳性质控品 （经过确认的更是少之又少！）
19
官方机构-WHO
http://www.nibsc.org/
20
官 方 机 构——其他
American Type Culture Collection
28
失控分析
• 实验操作人员在检测样本时，如发现质 控检测数据不符合质控规则，应在室内 质控记录单上简述失控原因。
• 失控的原因主要包括：操作失误、质控 品失效、仪器维护不良以及质控测定不 当等。
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失控分析
• 操作失误——主要是人为因素
966
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质控品
定义：用于体外诊断的质量控制物质，是一种旨在用
于医学检测系统中使用的物质、材料等。
目的：是评价或验证测量精密度或由于试剂或分析仪
器的变化导致的分析偏差等。
用途：用于室内质量控制、室间质量评价等。
6
质控品的种类
• 根据有无测定值可分为定值质控品和非 定值质控品。
• 根据质控品的物理性状不同分为冻干质 控品和液体质控品。
Pasloske BL et al.,J Clin Microbiol. 1998 Dec; 36(12):3590-147.
人工合成样本——假病毒颗粒
优点：
• 明确的基因序列 • 监测反应全过程 • 生物安全性 • 稳定性好
缺点：
• 专利保护，价格昂贵
• 表面结构不同，不能 充分模拟真实病毒
18
https://www.dsmz.de/
Japanese Collection of Research Bioresources
http://cellbank.nibiohn.go.jp/english/
Riken Bioresource Center
http://en.brc.riken.jp/
21
• 不能监测提取过程
14
人工合成样本——体外转录RNA
Chang M et al, J Clin Virol. 2012, 55(2):128-3315.
人工合成样本——体外转录RNA
优点：
• 明确的基因序列 • 具有再生性 • 无感染性
缺点：
• 稳定性差
• 不能监测提取过程
百度文库16
人工合成样本——假病毒颗粒
4
专家指出
采用已知弱阳性和阴
性质控品进行室内质
量控制是保证检测质
量的关键环节之一，
其监控的是实验室测
定的最重要的性能指
标，即重复性，并决
定了当批实验测定是
否有效，报告能否发
出，是对实验室测定
的即时性评价。
李金明等，涉及基因扩增的
个体化医学检测质量保证的
重要性, 2012, 35(11), 963-
分子诊断质控品的特性 、选择和应用
1
涉及疾病种类
2
分子诊断实验室检测的现状
Gene Reviews：
截止2013年05月，已发现3007种基因疾病，其中2776种已经进入临床检测，231
种仍在研究阶段，目前全球已有618个有资质的实验室在进行相关检测工作
3
临床实验室如何 来保证检测结果 的准确可靠？
，仍应按传染性样本对待，注意防护措施 • 注意质控品最佳保存条件，使用完毕后应及时
放回冷藏室，如发生下述情况严禁使用
已过有效期 样品管已发生泄漏 样品管标记无法识别
27
质控品使用的局限性
• 无法对提供虚假结果的实验室进行质量保证， 不标准的应用检测方法与试剂也是不能进行评 价的。
• 因各种原因造成的常规试剂变化（如：过期、 污染等问题），仪器设备或者操作技术的缺陷 ，也无法进行客观评价。
22
质控品的使用
• 已知阳性质控 • 已知阴性质控 • 空白（无模板）
23
Baseman JG, et al. J Clin Virol 2005, 32S;16-24.
阳性质控品
• 定性检测
接近方法测定下限浓度
• 定量检测
测定线性范围内的高、中、低浓度
避免假阴性结果
24
阴性质控品
• 监测实验室以前扩增产物的污染 • 实验操作所致样本间的交叉污染 • 试剂污染
专家指出
尽管少部分分子检测项目
已有质控物质，但是大部 分的分子检测项目还 是缺乏有效的质控物 质。
其次，现在的多元质控物 质商品的开发也不够成熟。 实验室更愿使用免费的患 者标本或者根本不进行质 量控制，只有罕见突变才 勉强花钱购买质控品。
王治国等，分子诊断质量控制 面临的问题，2012，6(30)， 466-4670
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常用质控品类型
• 临床样本
• 细胞系
• 人工制备样本
质粒 转录RNA 假病毒颗粒
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临床样本
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临床样本
优点：
• 真实样本
缺点：
• 来源有限
• 评价整个分析过程
• 生物传染性
• 包含所需基因序列
• 可能存在异质性
最优样本
10
细胞系
Meissner JD, J Gen Virol. 1999 Jul;80 ( Pt 7):17251-133.
避免假阳性结果
25
空白管质控
• 监测扩增试剂是否发生污染，具有 较强的污染鉴别性
• 监测反应液加样区及加样过程是否 发生污染
• 鉴别实验室是否发生污染
26
质控品使用的注意事项
• 均匀分散于临床标本中，与临床标本同时处理 • 扩增时不应将质控品放于固定孔中，放置位置
应顺延以便监测每孔的扩增效率 • 质控品虽经灭活处理，但仍具有潜在的传染性
细胞系
优点：
• 模拟真实样本，稳定 性好
• 评价整个分析过程 • 生物安全性 • 易于制备，成本低
缺点：
• 稳定性较差 • 细胞株有限
实用样本
12
人工合成样本——质粒
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人工合成样本——质粒
优点：
• 明确的基因序列 • 易于生产，价格便宜 • 具有再生性 • 无感染性 • 材料稳定性好
缺点：
• 非“真实”样本
http://www.atcc.org/
Coriell Cell Repositories
https://catalog.coriell.org/
European Collection of Cell Cultures
https://www.phe-culturecollections.org.uk/ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures
目前现状？
• 分子诊断项目快速增长 • 新的技术发展（如NGS、数字PCR等）引入
新的检测项目
但是……
对于绝大多数分子诊断项目， 现在还不能提供阳性质控品 （经过确认的更是少之又少！）
19
官方机构-WHO
http://www.nibsc.org/
20
官 方 机 构——其他
American Type Culture Collection