104、分子诊断质控品的特性、选择和应用
现代分子检测技术在食品品质控制中的应用及优势PPT资料优秀版
• 实验步骤
• 1.将新鲜嫩叶放于瓷质的研钵中,将人适量的液氮进行 研磨,待叶片磨至粉末状后加入适量的-CTAB。
• 2.500μl 65℃预热的+CTAB 70℃保温30min,不时颠倒 混匀。
• 3.450μl酚/氯仿/异戊醇,颠倒混匀至溶液呈乳浊状—但 不要震荡,离心10000rpm, 3min,取上清。
现代分子检测技术在食品 品质控制中的应用及优势
一、转基因食品检测
• 转基因食品也称基因改造食品或基因修饰 食品 ( GeneticallyModifiedFood,GMF)。 近几年,随着转基因食品的快速发展,转 基因食品的安全性受到广泛关注,因而对 转基因食品的检测是非常必要的。
• 利用PCR 方法检测转BT 基因水稻
• 4.加入450 μl 氯仿,混匀后离心10000rpm,3min,取上 清。
• 5.加入600μl异丙醇,颠倒混匀,-20℃放置30min。
• 6.12000rpm,4℃/5min,弃上清。
• 7.用800μl预冷的70%乙醇洗涤沉淀(注意不要吹散沉淀) 。
• 8.离心后吸去残余乙醇。
• 9.待乙醇挥发后加入20-50μl TE缓冲液(含1%RNase A) ,温和混匀。
Analyte =antigen
Analyte =antibody
Incubate.
扩增后,在凝 江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体,建立了检测食品中总黄曲霉毒素的间接竞争 ELISA 检测
方法,为开展全国性总黄曲霉毒素污染调查提供了技术支持。
胶电泳检测中, 酶联免疫(ELISA)原理:
• 黄曲霉毒素:
•
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的
质控物选择原则
质控物选择原则质控物选择原则引言:质控物是在实验室质量控制过程中使用的参照标准,用于评估仪器的准确性和稳定性。
在选择适当的质控物时,需要考虑多种因素,如样品类型、检测方法、仪器规格和金融预算等。
本文将深入探讨质控物选择的原则和注意事项,以帮助实验室科研人员做出明智的决策。
一、质控物的定义和功能在开始深入讨论质控物选择原则之前,我们先来了解一下质控物的概念和作用。
质控物是为了评估实验室仪器的准确性、精密度和可靠性而使用的参照标准。
通过与质控物进行比较,实验室可以确定仪器的测量偏差和系统误差,从而提高实验的可靠性和准确性。
二、质控物选择的标准1. 与样品类型相匹配:在选择质控物时,首先要考虑与实验室正在研究的样品类型相匹配。
质控物应该能够模拟样品的性质和组成,以确保其在实际检测过程中可以真实地反映出样品的特征。
2. 与检测方法兼容:质控物的选择还要考虑与实验室使用的检测方法的兼容性。
不同的检测方法可能对质控物的属性有不同的要求,例如反应速度、稳定性和荧光强度等。
因此,在选择质控物时,需要确保其在所使用的检测方法下能够有效地提供准确的结果。
3. 对仪器规格要求不高:质控物不应要求过高的仪器规格,以便实验室可以在常规设备下进行测量。
如果质控物对仪器规格要求过高,可能会导致实验室需要购买更昂贵的设备或进行设备调整,增加实验成本和时间。
4. 稳定性和可追溯性:选择质控物时,需要确保其具有良好的稳定性和可追溯性。
质控物应具备长期存储的能力,以便在需要时进行重复使用和比较分析。
此外,质控物还应有明确的来源和制备方法,以确保其可追溯性和可靠性。
5. 金融预算:质控物的选择还需要考虑可用的金融预算。
有些质控物由于其独特性质和制备成本较高,可能价格昂贵。
因此,实验室需要在质控物的选择上做出理性的权衡,以平衡质量和金融预算之间的关系。
三、案例分析为了更好地理解质控物选择原则,我们以实验室检测血糖的质控为例来分析。
在这种情况下,我们需要选择与血液样品相匹配的质控物,具备与血糖检测方法兼容的特性,并具备良好的稳定性和可追溯性。
分子诊断试剂质量标准
分子诊断试剂质量标准一、性能验证分子诊断试剂的性能验证是确保试剂质量和可靠性的重要环节。
性能验证应包括以下方面:1.特异性:验证试剂是否能够准确检测目标基因或特定生物标志物,而不受其他基因或生物标志物的干扰。
2.敏感性:验证试剂能够检测到的最低目标基因或生物标志物浓度,以确保试剂在样本中存在微小变化时仍能准确检测。
3.重复性:验证试剂在不同批次、不同操作人员、不同实验条件下的一致性,以确保结果的可靠性和可重复性。
4.稳定性:验证试剂在储存和使用过程中的稳定性,以确保试剂在有效期内能够保持其性能。
二、阴性质控品阴性质控品是用于监控试剂性能和实验操作质量的阴性对照样本。
阴性质控品应符合以下要求:1.阴性质控品应不含目标基因或特定生物标志物,以验证试剂的特异性。
2.阴性质控品应与待测样本具有相似的基质和理化性质,以模拟实际样本的复杂性。
3.阴性质控品应与待测样本同时进行检测,以监控实验操作的规范性和试剂的稳定性。
三、阳性质控品阳性质控品是用于监控试剂性能和实验操作质量的阳性对照样本。
阳性质控品应符合以下要求:1.阳性质控品应含有目标基因或特定生物标志物,以验证试剂的敏感性和重复性。
2.阳性质控品应与待测样本具有相似的基质和理化性质,以模拟实际样本的复杂性。
3.阳性质控品应与待测样本同时进行检测,以监控实验操作的规范性和试剂的稳定性。
四、提取内对照提取内对照是用于监控实验操作质量和试剂性能的内对照样本。
提取内对照应符合以下要求:1.提取内对照应与待测样本具有相似的基质和理化性质,以模拟实际样本的复杂性。
2.提取内对照应与待测样本同时进行提取和检测过程,以监控实验操作的规范性和试剂的稳定性。
3.提取内对照应设置合理的浓度范围,以监控试剂的线性范围和检测下限。
五、扩增内对照扩增内对照是用于监控试剂性能和实验操作质量的内对照样本。
扩增内对照应符合以下要求:1.扩增内对照应与待测样本具有相似的基质和理化性质,以模拟实际样本的复杂性。
分子诊断检验领域的应用说明标准
分子诊断检验领域的应用说明标准
分子诊断检验领域的应用说明标准主要包括以下几个方面:
1. 检测灵敏度:分子诊断检验对于病原体或疾病的检测灵敏度要求较高,需要能够检测出极低浓度的病原体或疾病相关基因。
2. 特异性:分子诊断检验需要具有高特异性,避免误诊和错诊。
3. 标准化:为了确保分子诊断检验的准确性和可靠性,需要建立标准化的操作流程和质量控制体系。
4. 操作简便性:分子诊断检验需要简便易行的操作流程,方便实验室人员快速准确地完成检测。
5. 成本效益:分子诊断检验需要考虑到成本效益,以确保其在临床实践中的广泛应用和可推广性。
6. 伦理和隐私保护:分子诊断检验涉及到患者的隐私和伦理问题,需要遵守相关法律法规,保护患者隐私和权益。
7. 临床应用价值:分子诊断检验需要具有明确的临床应用价值,能够为疾病的诊断、治疗和预后提供有价值的参考信息。
综上所述,分子诊断检验领域的应用说明标准是一个综合性的标准体系,涉及到多个方面,以确保其准确、可靠、可重复和可推广。
分子诊断试剂质控标准物质制备
分子诊断试剂质控标准物质制备-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分旨在介绍分子诊断试剂质控标准物质制备这一主题的背景和重要性。
分子诊断试剂质控标准物质是进行分子诊断测试时非常关键的一环,它们被用作质量控制的参照物质,能够评估各种分子诊断试剂的准确性和可靠性。
分子诊断试剂质控标准物质的制备是确保诊断结果的准确性和可比性的重要步骤。
分子诊断试剂质控标准物质制备的核心目标是研发和制备一系列具有已知特性和浓度的参照物质,在分子诊断试剂的开发、质量控制和临床应用等领域中发挥作用。
这些标准物质可以包括特定基因、蛋白质、病毒、菌种等,通过准确测量其浓度和特性,可以为分子诊断试剂的准确性和可靠性提供有效保证。
分子诊断试剂质控标准物质的制备需要符合一定的规范和严格的过程控制,确保其稳定性、可重复性和可比性。
对于不同类型的试剂,制备方法和步骤也会有所差异,但总的原则是确保制备出的标准物质与临床样本具有相似的特性和浓度。
文章的剩余部分将对分子诊断试剂质控标准物质制备的重要性、背景、方法与步骤以及质量控制与验证进行详细探讨。
这将有助于读者全面了解分子诊断试剂质控标准物质的制备过程,以及它们在分子诊断领域的重要作用。
最后,我们将对分子诊断试剂质控标准物质制备的意义进行总结,并展望未来在这一领域的发展前景。
通过这篇文章的阅读,读者将能够深入了解分子诊断试剂质控标准物质制备的关键要点和研究进展,为临床分子诊断的发展与应用提供有益的参考和指导。
1.2 文章结构本文主要介绍了分子诊断试剂质控标准物质制备的相关内容。
文章分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分,我们首先概述了分子诊断试剂质控标准物质制备的背景和重要性。
通过介绍其在分子诊断领域中的作用和意义,让读者对本文的内容有一个初步的了解。
随后,我们给出了本文的目的,明确了我们撰写文章的目标和意图。
接下来,正文部分详细介绍了分子诊断试剂质控标准物质的重要性和制备的背景。
质控品、标准品的选择,这些讲究怎能不知?
质控品、标准品的选择,这些讲究怎能不知?认真做好导读:标准品、校准品与质控品区别何在?质控品该如何选择、验收及储存?选择具有代表性的质控样,能有效地控制分析结果的精密度和准确度。
而且,大量采用质控样,可以减少标准参考物的使用量。
所以不懂这些怎么行?标准品、校准品与质控品的区别1、质控品:IFCC的定义是专门用于质量控制目的的标本或溶液,不能用于校准。
对稳定性、瓶间差要求高。
分定值和不定值两种。
在选择控制品时,应该选择有几个浓度的、浓度范围分布较宽的、最好是医学决定水平的、有可报告范围范围是上下限值的质控品。
2、标准品:用于定标即标准曲线的绘制。
3、校准品:公司指定用来校准某检测系统(仪器+试剂+方法程序)的,是考虑到它具有基质效应的情况下,人为赋予校准品的校准值。
因此,校准品必须专用于某一检测系统。
众所周知,传统的标准液用纯水配制,同血清相比,成份非常简单,除了待测物质外只有水了。
此时在将样品同标准品相比较时,引入了基质效应(检体中的非测定物质对测定量的影响)。
换句通俗的话说也就是,检体中测定物外的其他物质对检测的干扰,使检测结果偏离真值。
此时通过同无基质效应的标准品比较得出的有基质效应的样品检测值,将偏离于真值。
是否能使用标准液取决于检测方法学,干扰极小的决定性方法或者某些已知干扰的参考方法可直接使用标准品。
质控品定值1)质控品的来源:质控品的来源同校准品大致相同,厂商可能会更具自己的要求添加了很多物质,此时有些物质的添加量常常达到病理状态的高浓度,在应用于某一项目时,对这个项目来说基质效应将更大;2)定值方法:有些厂商会给自己的标准品定一个定值范围,这个定值范围是由厂商联合几家使用同样检测系统的临床用户,仅多次测定得出的均值。
此时如果将该质控品应用于另一个检测系统,由于方法学的不同,可能得出同厂商给出值有较大差异的值。
此时不能认为该检测系统的准确度不佳。
此时需要强调的是检测系统都是用来测定新鲜血清的,不是用来测定质控品或其他物质的。
质控品试剂定义_解释说明以及概述
质控品试剂定义解释说明以及概述1. 引言1.1 概述在科学研究和实验中,质控品试剂是不可或缺的一部分。
质控品试剂指的是通过一系列特定的制备方法来确保其具有稳定性、可追溯性和准确性的化学品。
它们被广泛应用于临床诊断、药物生产、环境监测和食品安全等领域。
质控品试剂的使用可以有效地控制实验误差,并提高实验结果的可靠性和准确性。
1.2 文章结构本文将详细介绍质控品试剂的定义、特点及分类,以及质控品试剂的制备与检测方法。
首先,我们将解释并阐述质控品试剂的定义,包括其含义以及在科学研究中的应用范围和重要性。
然后,我们将介绍质控品试剂的特点,包括其稳定性、可追溯性和准确性等方面,并讨论现有的分类方法及原则以及具体分类示例。
接下来,我们将深入了解质控品试剂的制备方法和工艺流程,并介绍常用的质控品检测方法及其结果解读标准和相关技术要点。
最后,在结论部分,我们将总结质控品试剂的重要性和应用前景,并对未来质控品试剂的研究方向提出展望。
1.3 目的本文的目的是为读者提供关于质控品试剂的全面了解。
通过对质控品试剂定义、特点、分类、制备和检测方法等不同方面的介绍,读者将能够更好地理解质控品试剂在科学研究中的作用和重要性。
同时,本文也旨在促进对未来质控品试剂研究方向的思考和展望,为该领域的发展做出积极贡献。
2. 质控品试剂的定义:质控品试剂是指在生物医学、药物研发、化学分析等领域中用于质量控制和验证的一类特殊试剂。
这些试剂通常是经过严格制备和检测,并具有已知成分和特性的标准样品。
质控品试剂的主要目的是确保实验结果的准确性和可重复性,从而保证实验数据的可靠性。
在质控体系中,质控品试剂起着关键作用,它们被用作参比物或标准来进行定量分析、校正仪器偏差和评估实验方法的精确性。
通过与待测样品相比较,质控品试剂可以提供定量分析所需的参考值,并对样品测量结果进行校正。
具体说来,质控品试剂通常包括以下内容:2.1 定义解释:质控品试剂是指由高纯度化合物或混合溶液制备而成,并按照一定规范进行验证和检测的化学物质。
检验科选择质控品的要点
检验科选择质控品的要点实验室做质控的目的是为了监控检测系统的状态,因此选择质控品最重要的原则,就是如实的反映检测系统的实际状态。
因此好的质控品必然要保证以下几点都能做好。
一、良好的稳定性质控品的稳定性分两方面,一是不开瓶稳定性,一是开瓶稳定性。
不开瓶稳定性决定了质控品每个批次的效期,实验室在绘制质控图的时候需要计算靶值和标准差,而想保证这两个参数准确需要有长期大量的质控数据,要覆盖实验室的各项实际变化,比如试剂的批间差,校准品的批间差等等,才能绘制符合检测系统正常状态的质控图,才能及时有效的发现检测系统异常情况。
另外各项质控相关的法规均规定了更换质控品批号需要做新旧批号质控品的平行比对,这样,使用效期长的质控品可以减少平行比对的频率,从而减少工作量并降低实验室因平行比对产生的成本。
开瓶稳定性好可以保证每瓶质控品最大程度被应用,减少浪费,最理想状态是在开瓶后,瓶内质控品完全被使用,因此选择质控品时要注意根据开瓶稳定期和实验室的使用频次和每次检测用量,来选择符合实验室的规格装量。
二、瓶间差小实验室做质控的目的是如实反映检测系统的状态。
但日常检测的实验室CV则包含了检测系统的CV和质控品瓶间的差异。
因此只有让质控品甁间差异最小,才能真正体现检测系统的真实情况。
需要强调的是,各个实验室在使用冷冻干燥的质控品时,操作人员要执行标准的操作流程,并重视复溶前、复溶中和复溶后的每一个环节。
这是确保质控品在使用中可靠性的关键。
包括复溶前水的选择;移液管的选择和清洁、保存;认真阅读说明书,注意任何会影响质控液质量的环节等。
只有认真阅读说明书,才知道哪些分析物可以分装保存,哪些是不可实施的。
复溶中要确实完全按照厂商说明书要求,进行质控品的复溶和混匀等。
复溶后一定要妥善保存和做好分析前准备,避免可能引入人为导致的瓶间差,影响对检测系统的评价。
而使用液体质控品可以减少复溶过程引入的瓶间差,目前已经有越来越多的实验室开始使用液体质控品。
质控品_精品文档
质控品质控品:保障实验结果的可靠性与准确性引言在科学研究、药物研发以及工业生产中,对于实验结果的准确性和可靠性有着极高的要求。
为了确保实验结果的可信度,科学家和研究人员使用质控品作为实验的参照标准。
本文将介绍质控品的定义、作用、种类以及使用方法,以帮助读者更好地理解和应用质控品。
一、质控品的定义质控品(Quality Control Materials)是指被广泛使用于实验室和生产环境中,用来验证仪器的准确性和实验方法的可靠性的参照物质。
它们通常是已知成分和特性的标准样品,用于对比、调整和确认实验结果。
二、质控品的作用质控品在实验室和生产环境中起着至关重要的作用,主要有以下几个方面:1. 评估实验方法的准确性:质控品可以作为实验方法的参照标准,通过与质控品的比较,评估实验方法的准确性和可靠性。
2. 检测仪器的准确性:质控品可以用于验证和校准实验仪器,在实验过程中,通过与质控品的检测结果的比较,判断仪器的准确性和精确度。
3. 跟踪实验的稳定性:通过定期使用相同批次的质控品,可以评估实验的稳定性和一致性,确保实验结果的可靠性。
4. 为结果验证提供依据:实验结果与质控品的比较可以为结果的验证提供依据,确保实验结果的可信度。
三、质控品的种类根据其用途和特点,质控品可以分为以下几类:1. 定性质控品:用于确定目标物质是否存在。
例如,干预监控中使用的阳性和阴性质控品,用于检测某一特定物质是否出现。
2. 定量质控品:用于确定目标物质的浓度。
例如,浓度均一性和稳定性检测中使用的浓度梯度质控品,用于评估目标物质的测量和定量方法的准确性。
3. 稳定性质控品:用于评估实验样品和质控品在储存和运输过程中的稳定性。
例如,加速稳定性测试和温度循环测试中使用的稳定性质控品。
4. 外部质控品:由独立的质控实验室或组织提供,用于评估实验室的分析能力和结果可靠性。
例如,国家质量控制计划中提供的外部质控品。
四、质控品的使用方法使用质控品时,应按照以下步骤进行操作:1.选择合适的质控品:根据实验的要求和目的,选择合适的质控品。
质控品名词解释
质控品名词解释质控品,即质量控制品,是用于质量控制和质量保证的参考物质。
它可以提供一定的定量和定性分析的结果,用于检验实验室的准确性、可重复性和检出限等指标,以确保实验结果的准确性和可靠性。
质控品一般具备以下特点:1. 可追溯性:质控品必须有明确的来源,并与国际或国家标准物质进行关联,以便追踪分析结果和校准仪器。
2. 稳定性:质控品需要在一定的时间范围内保持稳定性,以确保在使用期限内能持续提供稳定的分析结果。
这需要对质控品进行适当的保存和管理。
3. 精确性:质控品的浓度和成分应该经过准确的测量和验证,以确保其准确性。
4. 多样性:为了适应不同实验室的需求,质控品通常有不同的浓度和组成,以满足不同的分析要求。
质控品可以分为外部质控品和内部质控品。
1. 外部质控品:外部质控品是由独立机构提供的,通常是一种认证的质控品。
它们经过大规模的制备和验证,并经过广泛的分析所得到的结果进行验证。
外部质控品一般用于评估实验室的分析准确性和可重复性。
2. 内部质控品:内部质控品是实验室自行制备和验证的,通常是一些经常使用的标准物质。
内部质控品在实验室中进行日常分析时使用,用于定量和定性分析的验证,以确保实验结果的准确性和可靠性。
质控品在实验室中的应用有很广泛的范围,包括药品研发、医学诊断、环境检测等。
它们可以用于验证分析方法的准确性,监控仪器的性能和实验室操作的质量,帮助实验室提高工作水平和质量控制能力。
总之,质控品是用于质量控制和质量保证的参考物质,通过对其浓度和成分进行准确的测量和验证,以验证实验室的准确性、可重复性和检出限等指标。
它们的应用可以帮助实验室确保实验结果的准确性和可靠性。
标准品在分子诊断中的应用
标准品在分子诊断中的应用
分子诊断的流程具有多个环节,从样品样本提取到变异检测,每个环节都存在不确定因素和不可规避的系统误差,这使得分析结果存在假阳性或假阴性的可能。
因此需要标准品,来检测与校对分析体系的准确性。
分子诊断标准品应该具备以下3个特征:
1. 代表性。
标准品需要与待测样品在基因遗传背景、细胞类型、组织类型和处理方式等方面高度相似,才能模拟待测样品的检测过程,以分析实验体系的精准度和判别待测样品结果。
2. 可量化。
标准品需要具备突变频率阶梯性,将编辑细胞与野生型细胞以不同比例混合,用于模拟不同疾病或检测系统的检测上下限。
3. 持续稳定。
标准品需要能持续且稳定生产。
在PCR检测变异的流程中,可以用标准品来验证试剂盒的提取效率、变异检测的准确度、试剂盒的灵敏度等。
在核酸提取步骤中,样本经过不同的处理往往对核酸提取率有影响,比如经过福尔马林、石蜡包埋等处理等。
如果存在与患者样本处理方式、材质、细胞复杂性和结构特性相似的标准品,例如FFPE标准品,则可以在提取环节中得知提取效率。
如果更换提取体系时,只要使用相同的标准品,还可以比较不同提取体系的提取效率。
同理,标准品在文库构建阶段和测序阶段也发挥着相同的作用,用于确定建库效率和测序质量。
生信分析位点变异情况时,由于标准品的突变位点、突变基因型和突变频率等信息都是通过人为修饰且已知,所以如果信息分析流程得出的变异检测结果与此不符,就需要调整参数,以得到准确的分析体系,同时还能准确判断患者样品的实际变异情况。
质控品选择、使用和评估指南
质控品选择、使用和评估指南在实验室检测过程中,质控品起着至关重要的作用。
质控品的选择、使用和评估是保证检测结果准确性的关键环节。
本文将详细介绍质控品的选择、使用和评估方法,以帮助大家更好地运用质控品。
一、质控品的选择1.了解质控品的作用质控品主要用于监测实验室检测过程中的精度和稳定性。
通过使用质控品,可以评估检测系统的性能,确保检测结果的可靠性。
因此,了解质控品的作用是选择合适质控品的基础。
2.选择合适的质控品类型市面上有多种类型的质控品,如液体、冻干粉等。
选择时需根据实验室的检测需求和设备类型进行选择。
例如,生化实验室常用液体质控品,而免疫实验室则常使用冻干粉质控品。
3.考虑质控品的质量指标在选择质控品时,应关注其质量指标,如定值准确性、稳定性、有效期等。
高质量的质控品能够更好地保障检测结果的准确性。
二、质控品的使用1.规范的操作流程使用质控品时,应遵循实验室规定的操作流程。
操作过程中要注意避免交叉污染,确保质控品与待测样本的同步处理。
2.确保质控品与待测样本的同步处理为保证检测结果的准确性,质控品的处理应与待测样本保持一致。
例如,在生化检测中,质控品和待测样本应同时进行保温、酶促反应等处理。
3.观察质控品的测量结果在使用质控品过程中,应密切关注测量结果。
如发现异常,应及时分析原因并采取相应措施,以确保检测结果的可靠性。
三、质控品的评估1.评估质控品的稳定性质控品的稳定性是其发挥重要作用的前提。
评估稳定性时,可以观察长时间内质控品的测量结果,看其是否保持在合理范围内。
2.评估质控品的精确性精确性是评估质控品的关键指标。
可以通过对比多个批次质控品的测量结果,评估其精确性。
3.评估质控品的可靠性质控品的可靠性体现在其对检测系统性能的监测能力。
可以通过观察质控品在实验室检测过程中的表现,评估其可靠性。
总之,质控品的选择、使用和评估是实验室检测过程中不可或缺的环节。
只有正确选择和使用质控品,并对其进行严格的评估,才能确保检测结果的准确性和可靠性。
质控品选择、使用和评估指南
质控品选择、使用和评估指南【原创版】目录一、质控品的定义与分类二、质控品的性能特征三、选择质控品的方法四、质控品的使用方法五、质控品的评估方法正文一、质控品的定义与分类质控品,又称质量控制品,是用于评价测量系统、校准测量程序或为材料赋值的一种参考物质。
根据其用途和特性,质控品可以分为校准品、标准品和质控品。
校准品主要用于校准测量系统,标准品则用于评价测量程序,而质控品则用于监测测量系统的稳定性和准确性。
二、质控品的性能特征质控品的性能特征主要包括以下几个方面:1.基质效应:质控品在不同的基质中,其测量结果应保持一致。
2.稳定性:质控品在储存和使用过程中,其特性值应保持稳定。
3.瓶间差:同一批次的质控品在不同瓶子中的测量结果应尽量一致。
4.定值和非定值:质控品可以根据需要分为定值和非定值两种类型。
定值质控品具有确定的特性值,非定值质控品则不需要特定的特性值。
5.分析物水平:质控品中的分析物含量应与实际样品中的含量相近。
三、选择质控品的方法在选择质控品时,应考虑以下几个方面:1.质控品的类型:根据实际需求,选择适合的质控品类型。
2.质控品的来源:选择信誉良好的生产商,确保质控品的质量。
3.质控品的性能特征:根据实际需求,选择具有合适性能特征的质控品。
4.质控品的价格:在满足性能要求的基础上,选择价格合理的质控品。
四、质控品的使用方法在使用质控品时,应遵循以下步骤:1.准备工作:检查质控品的储存条件,确保其未受潮、变质。
2.质控品的准备:根据实际需求,取出合适数量的质控品。
3.测量过程:按照测量系统的标准操作程序,对质控品进行测量。
4.数据处理:记录测量结果,并进行数据分析。
五、质控品的评估方法质控品的评估主要通过对比测量结果、稳定性分析和回收率测定等方法进行。
分子生物标记和医学诊断综合运用
分子生物标记和医学诊断综合运用引言:随着科学技术的发展和突破,分子生物学领域的标记技术在医学诊断中得到了广泛的应用。
分子生物标记是指通过对生物体进行特定标记,以便在体内或体外进行检测的一种技术。
这些标记物可以是DNA、RNA、蛋白质或其他分子,它们能够提供有关疾病诊断、预防和治疗的重要信息。
本文将探讨分子生物标记的种类和应用,以及在医学诊断中的综合运用。
一、分子生物标记的种类1. DNA标记:DNA标记是分子生物学研究中最常用的标记之一。
通过对DNA序列进行标记,可以用于识别基因组的特定区域,以及检测特定基因或序列的存在与否。
例如,PCR技术中常用的荧光标记剂,可以通过特定的检测方法来识别目标DNA片段的存在。
2. RNA标记:与DNA标记类似,RNA标记可以用于检测细胞中的特定RNA序列。
这对于了解转录组水平的基因表达具有重要意义。
通过测量mRNA的丰度水平,可以揭示与疾病相关的信号通路以及治疗反应的预测。
例如,RT-PCR技术中的RNA标记可以用来检测疾病相关基因的表达水平。
3. 蛋白质标记:蛋白质标记在医学诊断中具有广泛的应用前景。
通过对特定蛋白质的标记,可以用于检测其在生物样品中的存在与否,并评估其表达水平的变化。
例如,酶联免疫吸附试验 (ELISA) 可以通过检测血液中特定蛋白质的水平来诊断某些疾病,如艾滋病和乳腺癌等。
二、分子生物标记在医学诊断中的应用1. 疾病诊断:分子生物标记在疾病诊断中起到了关键的作用。
通过检测体液样本中的特定分子标记,可以及早发现疾病,并评估其严重程度。
例如,通过检测血液中癌细胞释放的循环肿瘤DNA,可以实现早期癌症的筛查和诊断。
2. 治疗选择:分子生物标记还可以帮助医生更好地选择治疗方案。
通过检测疾病相关基因的表达水平,可以预测患者对特定药物的反应。
这种个体化的医疗选择可以提高治疗效果,减少副作用。
3. 疾病预后评估:分子生物标记也可以用于评估疾病的预后。
通过分析肿瘤组织中特定基因的表达水平,可以预测肿瘤的侵袭性和复发风险。
分子诊断质控品的主要分类
分子诊断质控品的主要分类分子诊断质控品主要有两大类1. 临床来源质控品2. 人工制品:(1)质粒DNA;(2)细胞系样品;(3)异种移植肿瘤组织;(4)基因编辑细胞系1.临床来源质控品临床来源质控品,也就是患者组织样本。
临床来源质控品是指经诊断明确含有已知靶点基因的临床活检或者外科手术的肿瘤组织。
优点此类质控品可以有效的检测分子检测全过程,包括:脱蜡-核酸提取-基因扩增-上机测序等实验过程,确保检测结果准确可信缺点难以批量生产,患者组织来源有限;涉及医学伦理问题;肿瘤组织间存在异质性,即使是同一患者的同一组织块,也很难获得遗传背景完全相同的组织切片,影响检测结果的可重复性,由于异质性的存在,使得组织样本中的基因突变频率难以确认;再有就是稀有突变样品难以获取。
2.人工制品(1)质粒DNA构建含有已知基因突变位点的重组质粒,将质粒与细胞系基因组DNA混合制备成质控品。
优点制备简单,容易获得,可以对突变频率进行精确测定。
缺点质粒质控品不参与核酸提取过程,不能有效监测样品的核酸提取效率,另外DNA稳定性不好,容易受到外界环境影响而降解。
(2)细胞系制品收集携带靶基因突变位点的肿瘤细胞系培养后进行石蜡包埋切片,制作成分子检测阳性质控品,收集没有携带突变位点的肿瘤细胞系石蜡包埋切片,获得分子检测阴性质控品。
相比商品化质控品,临床检测中的使用成本可以大幅度降低。
此类质控品也可以确保在NGS检测FFPE标本过程中生成高质量测序数据。
优点稳定性好,易于大批量制备,可以充分模拟临床样本的全流程监控,可明确基因突变频率缺点稀有基因突变仍然难以获得;通常一种细胞系只携带一种靶位点突变,因此大Panel检测质控品通常需要将多种细胞系混在一起。
(3)异种移植肿瘤组织将携带靶位点的肿瘤细胞系或者患者组织以及不含有靶位点的细胞系接种到免疫缺陷小鼠,形成异种移植的肿瘤组织,制成FFPE组织样本,获得检测用质控品。
优点可以有效模拟人类肿瘤组织的实体瘤结构,有效减少质控品和临床样本间的基质效应。
分子诊断试剂原料
分子诊断试剂原料随着科技的不断进步,分子诊断技术在医学领域的应用越来越广泛。
而分子诊断试剂作为分子诊断技术的重要组成部分,其原料的质量和稳定性对于分子诊断结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将从分子诊断试剂原料的选择、质量控制和应用举例等方面进行探讨。
一、分子诊断试剂原料的选择分子诊断试剂原料的选择应综合考虑其纯度、稳定性、可靠性以及与其他试剂的兼容性等因素。
一般来说,分子诊断试剂原料包括核酸、蛋白质、抗体等。
对于核酸原料,应选择高纯度的DNA或RNA,以确保分子诊断试剂的灵敏度和特异性。
对于蛋白质原料,应选择纯度较高的蛋白质,以保证试剂的稳定性和可靠性。
对于抗体原料,应选择高亲和力和特异性较好的抗体,以提高试剂的准确性和可靠性。
二、分子诊断试剂原料的质量控制分子诊断试剂原料的质量控制是保证试剂质量的关键环节。
首先,应对原料进行严格的质量评估和筛选,确保其符合质量要求。
其次,应建立完善的质量控制体系,包括质量标准的制定、质量检测方法的建立和质量控制流程的规范化等。
同时,还应加强对原料供应商的管理和监督,确保供应商能够提供稳定可靠的原料。
三、分子诊断试剂原料的应用举例1.核酸提取试剂原料核酸提取试剂是分子诊断的基础,其原料为高纯度的DNA或RNA。
核酸提取试剂的主要作用是从样本中提取出目标核酸,为后续的分子诊断分析做准备。
常用的核酸提取试剂原料有硅胶、磁珠等。
硅胶是一种常用的固相萃取材料,具有较好的吸附性能;磁珠则具有较好的分离性能和操作性。
根据实际需要,选择适合的核酸提取试剂原料能够提高核酸提取的效率和准确性。
2.蛋白质检测试剂原料蛋白质检测试剂是分子诊断中常用的试剂之一,其原料为高纯度的蛋白质。
蛋白质检测试剂的主要作用是检测样本中的特定蛋白质,用于疾病的诊断和监测。
常用的蛋白质检测试剂原料有抗体和酶等。
抗体作为蛋白质检测的关键试剂,其原料应选择高亲和力和特异性较好的抗体。
酶作为常用的信号发生器,其原料应选择稳定性和活性较好的酶。
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28
失控分析
• 实验操作人员在检测样本时,如发现质 控检测数据不符合质控规则,应在室内 质控记录单上简述失控原因。
• 失控的原因主要包括:操作失误、质控 品失效、仪器维护不良以及质控测定不 当等。
29
失控分析
• 操作失误——主要是人为因素
/
Coriell Cell Repositories
https:///
European Collection of Cell Cultures
https:/// German Collection of Microorganisms and Cell Cultures
目前现状?
• 分子诊断项目快速增长 • 新的技术发展(如NGS、数字PCR等)引入
新的检测项目
但是……
对于绝大多数分子诊断项目, 现在还不能提供阳性质控品 (经过确认的更是少之又少!)
19
官方机构-WHO
/
20
官 方 机 构——其他
American Type Culture Collection
分子诊断质控品的特性 、选择和应用
1
涉及疾病种类
2
分子诊断实验室检测的现状
Gene Reviews:
截止2013年05月,已发现3007种基因疾病,其中2776种已经进入临床检测,231
种仍在研究阶段,目前全球已有618个有资质的实验室在进行相关检测工作
3
临床实验室如何 来保证检测结果 的准确可靠?
,仍应按传染性样本对待,注意防护措施 • 注意质控品最佳保存条件,使用完毕后应及时
放回冷藏室,如发生下述情况严禁使用
已过有效期 样品管已发生泄漏 样品管标记无法法对提供虚假结果的实验室进行质量保证, 不标准的应用检测方法与试剂也是不能进行评 价的。
• 因各种原因造成的常规试剂变化(如:过期、 污染等问题),仪器设备或者操作技术的缺陷 ,也无法进行客观评价。
Pasloske BL et al.,J Clin Microbiol. 1998 Dec; 36(12):3590-147.
人工合成样本——假病毒颗粒
优点:
• 明确的基因序列 • 监测反应全过程 • 生物安全性 • 稳定性好
缺点:
• 专利保护,价格昂贵
• 表面结构不同,不能 充分模拟真实病毒
18
• 不能监测提取过程
14
人工合成样本——体外转录RNA
Chang M et al, J Clin Virol. 2012, 55(2):128-3315.
人工合成样本——体外转录RNA
优点:
• 明确的基因序列 • 具有再生性 • 无感染性
缺点:
• 稳定性差
• 不能监测提取过程
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人工合成样本——假病毒颗粒
细胞系
优点:
• 模拟真实样本,稳定 性好
• 评价整个分析过程 • 生物安全性 • 易于制备,成本低
缺点:
• 稳定性较差 • 细胞株有限
实用样本
12
人工合成样本——质粒
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人工合成样本——质粒
优点:
• 明确的基因序列 • 易于生产,价格便宜 • 具有再生性 • 无感染性 • 材料稳定性好
缺点:
• 非“真实”样本
4
专家指出
采用已知弱阳性和阴
性质控品进行室内质
量控制是保证检测质
量的关键环节之一,
其监控的是实验室测
定的最重要的性能指
标,即重复性,并决
定了当批实验测定是
否有效,报告能否发
出,是对实验室测定
的即时性评价。
李金明等,涉及基因扩增的
个体化医学检测质量保证的
重要性, 2012, 35(11), 963-
专家指出
尽管少部分分子检测项目
已有质控物质,但是大部 分的分子检测项目还 是缺乏有效的质控物 质。
其次,现在的多元质控物 质商品的开发也不够成熟。 实验室更愿使用免费的患 者标本或者根本不进行质 量控制,只有罕见突变才 勉强花钱购买质控品。
王治国等,分子诊断质量控制 面临的问题,2012,6(30), 466-4670
22
质控品的使用
• 已知阳性质控 • 已知阴性质控 • 空白(无模板)
23
Baseman JG, et al. J Clin Virol 2005, 32S;16-24.
阳性质控品
• 定性检测
接近方法测定下限浓度
• 定量检测
测定线性范围内的高、中、低浓度
避免假阴性结果
24
阴性质控品
• 监测实验室以前扩增产物的污染 • 实验操作所致样本间的交叉污染 • 试剂污染
避免假阳性结果
25
空白管质控
• 监测扩增试剂是否发生污染,具有 较强的污染鉴别性
• 监测反应液加样区及加样过程是否 发生污染
• 鉴别实验室是否发生污染
26
质控品使用的注意事项
• 均匀分散于临床标本中,与临床标本同时处理 • 扩增时不应将质控品放于固定孔中,放置位置
应顺延以便监测每孔的扩增效率 • 质控品虽经灭活处理,但仍具有潜在的传染性
https://www.dsmz.de/
Japanese Collection of Research Bioresources
http://cellbank.nibiohn.go.jp/english/
Riken Bioresource Center
http://en.brc.riken.jp/
21
966
5
质控品
定义:用于体外诊断的质量控制物质,是一种旨在用
于医学检测系统中使用的物质、材料等。
目的:是评价或验证测量精密度或由于试剂或分析仪
器的变化导致的分析偏差等。
用途:用于室内质量控制、室间质量评价等。
6
质控品的种类
• 根据有无测定值可分为定值质控品和非 定值质控品。
• 根据质控品的物理性状不同分为冻干质 控品和液体质控品。
7
常用质控品类型
• 临床样本
• 细胞系
• 人工制备样本
质粒 转录RNA 假病毒颗粒
8
临床样本
9
临床样本
优点:
• 真实样本
缺点:
• 来源有限
• 评价整个分析过程
• 生物传染性
• 包含所需基因序列
• 可能存在异质性
最优样本
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细胞系
Meissner JD, J Gen Virol. 1999 Jul;80 ( Pt 7):17251-133.