141生化药物分析及生物检定技术

形瓶、研钵 (直径10～12mm)、培养皿 (直径90mm)、量筒、
试管及塞子、吸量管 (1mL、10mL)、载玻片、盖玻片、玻璃
或搪瓷消毒缸 (带盖)、大橡皮乳头、小橡皮乳头、无菌衣、无
菌裤、无菌帽、无菌口罩 (也可用一次性物品替代)、接种环、
酒精灯 (乙醇灯)、乙醇棉球、灭菌剪刀及镊子、灭菌称样纸及
方法：家兔法/鲎试剂
(2)异常毒性试验 用一定剂量药物按指定的操作方法和给
药途径给规定体重的试验动物，观察其急 毒反应(是否死亡)，是一个限度试验。
异常毒性试验出现： 主要取决于供试品在生产中是否引入， 可发生异常毒性杂质。
(3)过敏试验 检异性蛋白试验----引起多种过敏反应
轻:皮肤产生红斑/丘疹 过敏
价或生物活性的一种方法。 以药物的药理作用为基础，生物统计为
工具，运用特定的实验设计，通过供试品 和相应的标准品或对照品在一定条件下比 较产生特定生物反应的剂量比例，来测得
供试品的效价。
(4)理化法
①重量法 a.提取法 b.挥发法 c.沉淀法
②测定法 ③比色法 ④UV
⑤高效凝胶过滤色谱法 a.分离根据有效粒径 b.分离在固定比例水液中 c.活性蛋白可回收
⑥高效离子交换色谱法 a.分离根据离子化浓度 b.分离盐浓度增大的梯度洗脱法 c.分离在阳/阴离子交换间呈现差异大 d.柱效中等并具高质量的活性回收
三、生化药物分析进展 总体向理化/仪器分析发展
如：GC、HPLC、UV、TR、质谱、磁共 振、超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电 极检测等。
另，应用细胞培养，对生化药的活力和 效价检测。
故检查此项。
4、含量/效价测定 表示方法：
(1)含量百分比：适用于化学结构明 确小分子/经水解后变成小分子药物。 (2)生物效价/酶活力单位表示，适于 酶类、蛋白质类。
常用方法：
(1)酶法 (2)电泳法 (3)生物检定法 (4)理化法
(1)酶法 ①酶活力测定法：
a.终点法：单酶反应定量法 指示酶反应偶联定量法
单克隆体免疫分析技术及基因分析技术， 提高检测限量和灵敏度。
生物检定技术
第一节 微生物限度检查
一、定义
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及 其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检 查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控 制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度 10 000级下的局部洁净度100级的单向流 空气区域内进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止再污染。
141生化药物分析及生物检定技术
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二、生化药物分析的方法 1、鉴别 (1)化学反应法 (2)UV (3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶 (4)电泳法：如肝素-糖凝胶电泳法 (5)生物法：利用生物体进行试验
2、杂பைடு நூலகம்检查
(1)一般杂质 (2)特殊杂质 3、安全性检查
(1)热原检查：由微生物所分泌的某一种 代谢产物，一般以为是内毒素，能使恒温 动物体温升高。
一、平皿法
3．试验前的准备 无菌室使用前开启紫外灯和空气过滤装置，至少30min；将所
需已灭菌或消毒的用品按无菌操作技术要求移至无菌操作室； 操作人员按要求穿戴无菌服，进入无菌操作室；操作前，先用 乙醇棉球消毒手，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开 口处周围，待干后用无菌的手术剪刀将供试品瓶、盒、袋启封。 启封后先仔细检查瓶盖内侧及瓶口周围有无生霉长螨的迹象， 对肉眼可见疑似者用放大镜和显微镜观察，若证实为生霉、长 螨，即可判定为不合格，无需继续检验。
不锈钢药勺、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆等。
玻璃器皿均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽灭菌12l℃
20min，烘干备用。
一、平皿法
2．试剂 稀释剂(pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、
pH7.6无菌磷酸盐缓冲液、0.9%无菌氯化 钠溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液)、 聚山梨酯80、无菌斯盘80、单硬脂酸甘油 酯、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 (YPD)。
检验量：一般供试品的检验量为10g或10mL，化学膜剂为 100cm2，检验时，应从2
个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂不得少于4片。一般 随机抽取不少于检验用量的3倍量供试品。
一、平皿法
4．药品的预处理 供试液制备若需水浴加温时，温度不超过45℃，
从制备到加入检验用培养基不得超过 1h。 (1) 液体供试液 一般取供试品10mL，加入稀释剂90mL中，充分
重:窒息、发绀、血管神经性水肿 血压降低、休克、死亡。
(4)降压物质检查 指药物中含有能导致血压降低的杂质，
包括组胺、类组胺或其他物质。 来源：用动物脏器/组织制备时，在正常
组织中存在。 方法：猫/狗血压法检药物中所含降压物
质。
(5)无菌检查 对药物及敷料是否染有活菌的检查。 由于许多生化药物不能高温灭菌，
① 一般取供试品 取10g，置pH7.0无菌氧化钠一蛋白胨缓
冲溶液100mL中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀后制备成
1∶10供试液。
振摇，即可作为l∶10供试液；含王浆或蜂蜜的合 剂、滴眼剂可以原液作为供试液；油剂可加入适量 聚山梨酯80，再照上法制备成供试液；气雾剂可 以适宜方法使抛射剂导出后，加入适量稀释剂，混 匀，吸取相当于10g或10mL供试品，再稀释至 100mL，作为供试液。
一、平皿法
4．药品的预处理
(2) 固体、半固体或黏稠液供试品
二、检查方法
药品微生物限度检查采用活菌计数， 计数方法包括： 平皿法、薄膜过滤法。
一、平皿法
1．设备、仪器及用具
无菌室、超净工作台、恒温培养箱(室)、匀浆仪、恒温水浴
箱、电热干燥箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器、菌落计数器 (JLQ-
ST或JLQ-S2型)、显微镜 (1500×)、天平 (感量0.1g)、锥
b.取样测定法 c.连续测定法 ②酶分析法： a.动力学分析法 b.总变量分析法
(2)电泳法 ①自由界面电泳法 ②高效毛细管电泳法 ③区带电泳法 a.纸电泳法 b.醋酸纤维素薄膜电泳法 c.聚丙烯酰胺凝胶电泳法 d.十二烷基硫酸钠(SDS)
聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(3)生物检定法 是利用药物对生物体的作用以测定其效