141生化药物分析及生物检定技术
生化药物分析
3. 安全性检查 1）热原检查 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 5）无菌试验 6）杂质与污染物 7）致突变试验 8）生殖毒性试验
含量（效价） 4. 含量（效价）测定
1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法）
2）生化分析法 酶法： 酶活力测定法 酶分析法 SDS-PAGE法 免疫分析法
3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体 外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比 （IU/mg）
例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 冻干基因工程 干扰素制造及检定规程
本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基 因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b 干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙 型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。 主要包括以下内容： 1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备 5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定 8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期 12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书
第二章 生物药物的分析
一、概述
1. 生物药物： 生物药物： 利用生物体、生物组织和器官制得的药物 主要包括： 生化药物 生物技术药物 生物制品 生物体分离纯化得到 利用生物技术得到
2. 生术制得 生 化 药 物 生命基本物质及 其衍生物等
氨基酸、Pr类 酶、辅酶类 多糖类 脂类 核酸类
二、检验的程序和方法
收录于《中国药典》 收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》 中国生物制品规程》 程序和方法包括： 鉴别、杂质检查、安全性检查、含量 （效价）测定 1.鉴别 1.鉴别 1）理化鉴别法：UV、肽图等 2）生化鉴别法：酶法、电泳法等 3）生物鉴别法：动物试验等
药品生物检定技术简介
门冬酰胺酶（抗肿瘤药） Ch.P（2005）二部 本品系自埃希大肠杆菌（E.coli ASI.357）
或欧文菌（Er-winia casotovora）中提取制备的 具有酰氨基水解作用的酶。
肝素钠（抗凝血药） Ch.P（2005）二部 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨
基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质。
小包装容器的数量。
例：2支（瓶）/2板×12粒
检查量：指一次试验所用供试品的总量
（g 或 ML）
例： 2×10=20ML
24×0.25=6g
2、对照试验： 阳性对照
阴性对照
9
3、检查方法：
a、薄膜过滤法：应用广、准确性高，适用 于任何药品、尤其是具有抑菌作用的
。
b、直接接种法：操作简便，适用于无 抑菌 作用的供试品。
中文名称
英文名或缩写
适应症
重组人干扰素a1b
rhuIFNaIb
上皮生长因子
(EGF)
粒细胞集落刺激因子
(GCSF)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)
红细胞生成素
(EPO)
溶栓药物链激酶
(SK)
重组人胰岛素
Humulin
Novolin
Humalog
白细胞介素-2
rhuIL-2
治疗病毒性角膜炎 烧伤或创伤治疗外用药物
细胞因子类（重组人干扰素）
生长因子类（重组人表皮生长因子）
激素类（重组人胰岛素）
酶类（重组链激酶）
疫苗（重组乙型肝炎疫苗）
单克隆抗体
37
重组DNA技术
38
国外重组DNA制品
中文名称
英文名或缩写
适应症
胰岛素
[讲解]生物药物分析与检验
![[讲解]生物药物分析与检验](https://img.taocdn.com/s3/m/23c98ffd18e8b8f67c1cfad6195f312b3169eb34.png)
生物药物分析与检验生物药物分析与检验的特点：1.需要进行相对分子质量的测定、2.需要检查生物活性3.需做安全性检查4.需做效价测定5.要用生化法确证结构终点测定法的条件：1.必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品；2.能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件；3.反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助简便的方法进行测定高效液相色谱法的定性分析1.利用已知物质定性的方法①利用保留特性②利用不同柱比较2.色谱法与其他方法结合定性①利用化学反应定性②利用选择性检测器定性③液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术生物检定的范围:1.药物的效价测定2.体内微量生物活性物质的测定3.中药质量的控制4.某些有害杂质的限度检查基因工程药物的特点：1.分泌量极低而生理、药理活性极高2.具有细胞和组织特异性3.多数细胞生长因子具有多功能性4.细胞因子间存在复杂的相互作用5.具有低免疫原性特殊杂质检查方法：物理化学区分方法一、物理法“1. 臭味及挥发性的差异2. 颜色上的差异3. 溶解行为上的差异二、化学分析法1. 酸碱反应2. 呈色或沉淀反应4.氧化还原反应免疫电泳技术：将琼脂电泳与免疫扩散结合起来，即利用电场作用下带电蛋白质在琼脂凝胶中具有不同的迁移率，以及相同的蛋白质具有完整的抗原性的特点，用于分析抗原或抗体性质的一种技术。
电泳：带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。
终点测定法：先借助酶反应（单独的反应或几种酶构成的偶数酶反应）使被测物质定量地进行转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质（第二底物）等的变化量生物检定：利用生物体（整体动物、离体组织/器官、细胞和微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。
质反应：当一定剂量的药物注入动物体内后，观察某一反应或反应的某一程度出现与否，只有质的变化。
量反应：药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者。
药品生物检定技术教案
药品生物检定技术教案一、教学目标1.知识目标：使学生掌握药品生物检定的基本概念、原理和方法，理解生物药物的质量控制和评价。
2.能力目标：培养学生进行药品生物检定的实验操作能力，提高学生的观察力、判断力和解决问题的能力。
3.情感态度和价值观目标：培养学生对药品生物检定技术的兴趣，树立正确的药品质量观念，增强责任感和使命感。
二、教学重点和难点1.教学重点：药品生物检定的基本概念、原理和方法，生物药物的质量控制和评价。
2.教学难点：药品生物检定实验操作中的技术要点和难点，如何保证实验结果的准确性和可靠性。
三、教学过程1.导入新课：通过展示一些常见的生物药物，如胰岛素、干扰素等，引导学生思考这些药物的质量如何控制和评价，从而引出药品生物检定技术的内容。
2.讲授新课：通过讲解、演示和实验相结合的方式，使学生掌握药品生物检定的基本概念、原理和方法。
同时，注重培养学生的实验操作能力和观察力、判断力。
3.巩固练习：通过小组讨论、实验操作等方式，使学生进一步巩固所学知识，提高解决问题的能力。
4.归纳小结：通过总结本节课的重点和难点，使学生明确学习目标，为后续学习打下基础。
四、教学方法和手段1.教学方法：采用讲解、演示、实验、小组讨论等多种教学方法相结合的方式，使学生更好地理解和掌握所学知识。
2.教学手段：利用多媒体课件、实验器材等手段辅助教学，提高教学效果和教学质量。
五、课堂练习、作业与评价方式1.课堂练习：通过小组讨论、案例分析等方式，使学生进一步巩固所学知识，提高解决问题的能力。
2.作业：布置与本节课内容相关的课后作业，要求学生按时完成并提交。
3.评价方式：采用平时表现（包括课堂练习和作业完成情况等）和期末考试相结合的方式，综合评价学生的学习效果。
六、辅助教学资源与工具1.教学课件：提供相关的多媒体教学课件，便于学生学习和掌握重点难点知识。
2.实验器材：提供实验所需的器材和试剂等，保证实验的顺利进行。
3.网络资源：提供相关的学习网站和资料库，便于学生自主学习和拓展知识面。
生化药物质量标准中的生物检定及其进展
生长激素
重法和胫骨法
重组人胰岛素 小鼠或家兔血糖法 HPLC
降钙素
大鼠血钙法
HPLC
低分子肝素 血浆凝固法或家兔 分光光度法 全血凝固法
ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 BP2007
在本实验室已用理化测定代替生物测定 两种方法间具有良好相关性（P﹤0.01）的品种
活性测定分类
活性测定---定量：质量标准中生物效价 测定（HCG、HMG、肝素）
---半定量 ---定性
活性测定------半定量
半定量------当理化测定占主导地位，生物效价 测定降为辅助作用，只用于活性检查，设定限 值，采用半定量方法，不需精确的生物统计， 尽可能减少实验动物用量
如治疗二型糖尿病新药重组人胰高血糖素类多 肽-1（7-36）质量标准中采用半定量方法（限 值为小鼠血糖降低应大于20%）进行活性检查
生化药名
生物测定方法
理化测定方法 收载标准
伟素
大鼠血脂清除率法 分光光度法
(Sulodexide)
重组绒促性素 幼小鼠子宫增重法 HPLC (rHCG)
重组卵泡刺激 幼大鼠卵巢增重法 HPLC 素(rFSH)
重组黄体生成 幼大鼠精囊增重法 HPLC 素(rLH)
企业标准 企业标准 企业标准 企业标准
BP2007版胰岛素采用HPLC法
ChP2005版二部，动物胰腺提取的胰岛素定量生物测定
中国药典2010年版二部生化药品专业科研项目
1、药品中氨基酸分析方法的研究（归纳分类）。（中检所负责） 2、蛋白质含量测定方法的规范化研究，增订附录。（上海所负
责） 3、人工肠液和胃液中所用酶试剂的标准化研究。（中检所和北
（完整版）生物药物分析重点完整版
（完整版）生物药物分析重点完整版第一章绪论1.生物药物分析：是生物工程制药专业设置的一门专业课，是应用微生物学、分子生物学、免疫学、生物化学、有机化学、数学、分析化学、生化工程等学科的理论及其技术成就，检测和研究各种生物药物质量的一门综合性学科。
2.药典：是国家对药物质量标准及其检测方法所做的技术规定，是药物生产、监控、供应、使用及管理部门共同遵循的法令。
3.我国的第一部药典1953年出版，从1963年版开始，中国药典分一、二部，药典内容一般包括凡例、正文、附录、索引四部分，生物药物收载在第三部分。
4. 美国药典—USP英国药典—BP日本药局方—JP英国副药典或英国准药典—BPC国际药典—Ph.Int5.基因工程药物的质量控制规则（暂时未找到）6.生物药物质量的科学管理：（5个）《良好药物实验研究规范》—GLP《良好药品生产规范》—GMP《良好药品供应规范》—GSP《良好药品临床试验规范》—GCP分析工作的质量管理—AQC第二章生物药物的杂质检查1.药物的杂质：（定义）指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。
2.药物中存在的杂质其来源主要有两个：（1）是由生产过程中引入；（2）是贮存过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化而产生。
3.杂质限量：（定义）指药物中所含杂质的最大容许量，它通常不要求准确测定其含量，只要在杂质含量在一定限度内。
4.杂质限量检查法的特点：只需通过与对照液比较即可判断药物中所含杂质量是否符合限量规定，不需测定杂质的准确含量。
5.一般杂质的检查方法在药典附录中加以规定。
一般杂质检查项目有氯化物、硫酸盐、水分、酸、碱、硫化物、硒、氟、氰化物、铁盐、重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、干燥失重、炽浊残渣、溶液颜色与澄清度以及有机溶剂残留量等。
氯化物检查法：Cl- ┼Ag+──→AgCl↓原理：药物中微量的氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊程度比较，判定供试品中氯化物是否符合限量规定。
药物分析 课件 生化药物和基因工程药物分析概论
基因工程药物分析方法
1 基因测序技术
基因测序技术用于确定基因工程药物的DNA序列，如Sanger测序和高通量测序。
2 基因表达分析技术
基因表达分析技术用于研究基因工程药物的表达水平和活性，如实时定量PCR和蛋白质组 学。
3 脱氧核糖核酸（DNA）芯片技术
DNA芯片技术用于高通量检测基因工程药物的表达谱和基因变异，如基因芯片和基因组测 序芯片。
基因工程药物分析概论
什么是基因工程药物？
基因工程药物是通过基因重组 技术制备的药物，如重组蛋白 和基因治疗药物。
基因工程药物的种类和 应用范围
基因工程药物分析的意 义和方法
基因工程药物包括生物类似药 物和基因疗法，用于治疗癌症、 遗传性疾病等。
基因工程药物分析可以确定药 物的纯度、稳定性和活性，并 确保其质量和疗效。
分子印迹技术在药物分析中的 应用
分子印迹技术是一种针对特定分子的选择性识别和分离方法，广泛应用于药 物分析中的药物检测和分离纯化。
药物代谢动力学分析方法
药物在体内的代谢途径
药物在体内的代谢途径包括氧化、还原、水解等，通过代谢将药物转化为代谢产物。
药物代谢动力学分析方法的种类和应用
药物代谢动力学分析方法包括药物消除速率常数和半衰期的测定，用于评估药物的代谢和排 泄。
生化药物分析可以确定药物的纯度、结构和功能，并保证药物的质量和疗效。
生化药物分适用于药物的分离和检测，如
凝胶电泳和毛细管电泳。
3
色谱法
色谱法是一种用于分离和测定药物成 分的常用分析方法，如气相色谱和液 相色谱。
光谱法
光谱法包括紫外-可见光谱、红外光谱 和核磁共振光谱等，用于药物的结构 分析。
药物分析课件
药品生物检定技术
第二节 微生物限度检查
微生物限度检查法 系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到 微生物污染程度的方法，检查项目包括细 菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查成为非规定灭菌制剂保证药 品质量的重要检查内容，也是综合评价药 品生产各环节卫生状况的一个依据。
一、常规技术要求及检验量
（一）技术要求
四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
五、药品的微生物限度检验方法
（一）细菌、霉菌及酵母菌计数 1.计数方法的验证
用以保证方法中供试液没有抗菌活性、培养条件适宜 细菌、霉菌及酵母菌生长、制备过程中稀释剂未受微 生物干扰、供试液稀释级选择适宜。 验证试验包括试验组、菌液组、供试品对照组及稀释 剂对照组 判断指标:各试验菌每次试验的菌数回收率
五、药品的微生物限度检验方法
（二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （2）大肠菌群 在乳糖胆盐发酵培养基管中，分别加入1∶10、1∶100 、1∶1000的供试液1ml，用稀释剂1ml作为阴性对照 ，均培养18～24小时，观察结果
五、药品的微生物限度检验方法
（二）控制菌检查 4.控制菌检查法 （3）沙门菌
一、常规技术要求及检验量
（二）检验量
一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。除另有规定外，一般 供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微 量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品， 其检验量应增加 20g或20ml。 检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不 得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小 包装单位）的3倍量供试品。
药品生物检定技术基础知识药品生物检定技术的基本操作(药品生物检定技术课件)
（。完整性是指检测样品的最小包装应完好无缺，
没有任何破损和污染，可以用消毒液对其外表进行消毒处理而不会影响其内在微生物状况。 有效性是指检测样品编号的惟一性和可追溯性以及样品内在的微生物能保持其原始数量和 原始状态。
样品送入无菌室前，应用适宜的消毒溶液对其外表进行消毒处理，在物流中（传递窗） 经紫外线照射30分钟后进入无菌室，检验中注意及时将样品的惟一性编号转移到最小包装 及传递到每一步骤的容器上（可用适宜防水笔），保证实验结果的惟一性和正确性。
药品生物检定技术的基本操作
提纲
一、药品微生物检定技术的基本程序 二、常用仪器 三、无菌操作 四、消毒灭菌
一、药品微生物检定技术的基本程序
（一）采样 药品微生物检定的采样除了与理化分析法的抽样一样，遵循随机、客观、均匀、
合理的抽样原则外，还必须对抽样过程实施有效防止微生物污染的措施，以保证微生物 检测结果的代表性、真实性和有效性。为此，采样应由专门的无菌采样员或微生物检验 员进行具体的采样工作或实施采样的监管工作。
二、常用仪器
（一）玻璃类仪器 （二）橡胶类物品 （三）金属器械 （四）塑料及有机玻璃器皿
三、无菌操作
无菌技术主要指在微生物检定中，控制或防止各类微生物污染及其干扰的一系列 操作方法、手段、规则、程序等，其中包括无菌环境设施、无菌实验器材以及无菌操 作等。
（一）无菌环境
无菌环境是指人们用物理或化学的方法，在某一可控空间内使悬浮粒子、浮游菌数 量达到最低限度，接近于“无菌”的一种空间。 （二）无菌器材 （三）无菌操作
（三）检验记录和检验报告 检验记录是出具检验报告书的依据，是进行科学研究和技术总结的原始资料。检
验记录必须真实、完整、齐全，不得随意涂改。若需要涂改，须用斜线将涂改部分划 掉，并签上涂改者的名字或盖印章，不得使用涂黑方式，以保证错误部分清晰可见。
药品生物检定技术
二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
一、常规技术要求
药品生物检定技术绪论.
一、药品生物检定的含义 二、药品生物检定方法
第一节 药品生物检定的基本概念
一、药品生物检定的含义
生物检定法（Bioassay）是利用生物体包 括整体动物、离体组织、器官、细胞和微生物等 评估药物生物活性（包括药效和毒性）的一种方 法。
量反应平行线测定法系指药物对生物体所引 起的反应（如血压、血糖的变化值）随着药物剂 量的增加而产生变化。量反应平行线测定法，要 求在一定剂量范围内，S和T的对数剂量x和反应 或反应的特定函数y呈直线关系，当S和T的活性 组分基本相同时，两直线平行。
Байду номын сангаас
生物检定可分为体内测定（in vivo） 、体外测 定（in bitro）。
4．神经介质、激素及其他微量生理活性物质的测 定
由于神经介质、激素及其他微量生理活性物质 具有微量、生理活性强的特点，生物检定方法往往 具有更高的灵敏度和专一性。
2019/7/31
17
第二节 药品生物检定的应用
（一）药品质量的控制 药品质量的特性包含有效性、安全性、稳
定性、均一性和方便性。其中前三项为关键的质 量特性，不具备这三种特性，便不能成为合格的 药品。生物检定在检查药品有效性和安全性方面 发挥着重要作用。
中国药典规定的需要进行生物检定的药品包括： ◇ 激素类 ◇ 细菌类疫苗 ◇ 病毒类活疫苗 ◇ 免疫血清及毒素 ◇ 人免疫球蛋白及凝血因子 ◇ 细胞因子 ◇ 抗生素类 ◇ 其他类
（二）新药研究 （三）中药研究
要进行安全性检查，以保证用药安全。例如: 无菌检查 降压物质、升压物质检查 异常毒性或特性毒性检查 热原、细菌内毒素检查 过敏物质的过敏反应检查 微生物限度检查等
生化药物分析与生物检定技术护理课件
个性化治疗
根据患者的基因型、表型等特 征，制定个性化的治疗方案， 提高治疗效果和安全性。
生物技术的进步
利用生物技术手段，改进生化 药物的制备工艺，提高药物的
纯度和产量，降低生产成本。
02
生化药物分析技术
生化药物分析的基本原理
药物在体内的代谢过程
介绍药物在体内的吸收、分布、代谢 和排泄过程，以及这些过程对药物疗 效和安全性的影响。
随着新药研发和新技术的应用，生化药物在护理中的疗 效和安全性将得到进一步提高。
详细描述
生物检定技术的不断完善和发展，将为护理提供更加准 确、便捷的监测手段。
生化药物与生物检定技术的结合应用，将有助于实现个 体化护理和精准医疗的目标。
未来，生化药物分析与生物检定技术将在护理领域发挥 更加重要的作用，为提高医疗质量和保障患者安全做出 更大的贡献。
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总结词：合理使用生化药物是护理中的重要环节，需要遵 循安全、有效、经济的原则，根据患者的病情和医生的建 议进行用药。
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详细描述
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掌握药物的剂量、用法和用药时间，避免药物过量或不足。
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注意观察患者对药物的反应，及时调整用药方案。
生化药物分析的新技术
蛋白质芯片技术
介绍蛋白质芯片技术的原理、应用范围和优缺点，以及在生化药物分析中的潜 力和前景。
微流控芯片技 术
阐述微流控芯片技术的原理、实验步骤和注意事项，以及在生化药物分析中的 重要应用和未来发展方向。
03
生物检定技术
生物检定的定义与目的
定义
生物检定技术是一种利用生物学方法对药物、生物制品、医 疗器械等进行检测和鉴定的技术。
生化药物及分析
生化药物及分析生化药物是从生物体分离、纯化所得，可用于预防、治疗和诊断疾病的生化物质，其中部分现已通过化学合成或生物技术制备或重组。
一、生化药物的定义中国药典分化学药品、生化药品、抗生素、放射性药品、生物制品。
生物制品系指以微生物、寄生虫、动物毒素、生物组织作为起始材料，采用生物学工艺或分离纯化技术制备，并以生物学技术和分析技术控制中间产物和成品质量制成的生物活性制剂。
包括疫（菌）苗、毒素、类毒素、免疫血清、血液制品、免疫球胆白、抗原、变态反应原、细胞因子、激素、酶、发酵产品、单克隆抗体、DNA重组产品、体外免疫诊断试剂等，供某些疾病的预防、治疗和诊断用。
生化药物一般是系指从动物、植物及微生物提取的，亦可用生物-化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质，如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、辅酶、多糖、核苷酸、脂和生物胺等，以及其衍生物、降解物及大分子的结构修饰物等。
二、生化药物的种类、结构和特点按结构按功能分类如下：（一）氨基酸类药物1．单氨基酸白氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、异白氨酸、丝氨酸、色氨酸、丙氨酸、赖氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸、门冬氨酸、精氨酸、苏氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、胱氨酸、酪氨酸、谷氨酸。
2．氨基酸衍生物 N-乙酰-L-半胱氨酸、L-半胱氨酸乙酯盐酸盐、S-氨基甲酰半胱氨酸、S-甲基半胱氨酸、谷胺酰胺、S-羟色氨酸、二羟基苯丙氨酸。
3．复合氨基酸注射液有3S、6S、9S、11S、13S、14S、15S、17S、18S复合氨基酸注射液。
S代表氨基酸的种类。
（二）多肽类药物1．垂体多肽促肾上腺皮质激素（39肽）、促胃液素（5肽）、加压素（9肽）、催产素（9肽）、α-促黑素（13肽）、-促黑素（18肽）、人-促黑素（22肽）。
2．消化道多肽促胰液素（胰泌素，27肽）、胃泌素（14肽，17肽和34肽三种）、胆囊收缩素（33肽和39肽、另外还有4肽和8肽）、抑胃肽（43肽）、血管活性肠肽（28肽）、胰多肽（36肽）、神经降压肽（13肽）、蛙皮肽（10肽和14肽）。
最新生物药物分析与检验知识分析
生物药物分析与检验知识分析摘要：本次课程主要讲生物药物分析与检验常用的方法，杂质与安全检查，氨基酸、多肽和蛋白质类药物的分析与检验，酶类药物的分析与检验，脂类药物的分析与检验，核酸类药物的分析与检验，糖类药物的分析与检验，基因工程药物质量控制，生物药物的现代分析方法与检验技术。
关键词：发展前景分析检验方法安全应用生物药物分析与检验在将来相当长的时间内也仍是研究开发的主要方面，但随着现代生物技术的研究与应用日趋成熟，生物技术制药领域将发挥越来越重要的作用。
其发展趋势主要表现在：⑴应用基因工程技术，制取天然来源少和过去难以获得的生物活性物质；⑵应用蛋白质工程技术研制新型蛋白质类药物；⑶大分子物质活性片段的制取和化学修饰；⑷发展大分子药物的新剂型。
生物药物分析与检验的基本任务和作用是：使学生掌握生物药物分析与检验的基本理论知识和生物药物基本分析检验方法，培养学生重视生物药物质量的观念，从而不断提高分析问题和解决问题的能力。
它的内容主要包括生物药物分析与检验常用的方法，杂质与安全检查，氨基酸、多肽和蛋白质类药物的分析与检验，酶类药物的分析与检验，脂类药物的分析与检验，核酸类药物的分析与检验，糖类药物的分析与检验，基因工程药物质量控制，生物药物的现代分析方法与检验技术。
生物药物广泛用作医疗用品，特别是在传染病的预防和某些疑难杂症的诊断和治疗上起着其他药物所不能代替的独特作用。
随着预防医学和保健医学的发展，生物药物正日益渗入到人民生活的各个领域，大大扩展了其应用范围。
（1）、治疗药物肿瘤、爱滋病、心脑血管疾病等。
（2）、预防药物传染性强的疾病，疫苗、菌苗、类毒素。
（3）、诊断药物速度快、灵敏度高、特异性强。
免疫诊断、酶诊断、放射性诊断、基因诊断试剂。
（4）、其它生化试剂、保健品、化妆品、食品、医用材料。
生物药物是指利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学等学科的原理与方法制得的天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。
药品的生物检定法
具有灵敏度高、特异性强、能够对药 品的生物活性进行检测等优点，是药 品质量控制中不可或缺的一部分。
生物检定法的应用范围
抗生素类药物
用于检测抗生素类药物的效价 ，以确保药物质量和治疗效果
。
免疫调节剂
用于检测免疫调节剂的免疫活 性，以确保药物质量和安全性 。
激素类药物
用于检测激素类药物的含量和 活性，以确保药物质量和治疗 效果。
对于有毒、有害、易燃、易 爆的药品，应严格按照规定 进行储存和使用，并配备相 应的安全设施。
对于放射性药品，应遵循国 家相关法律法规和标准，采 取特殊的安全措施和防护要 求。
实验废弃物的处理与环保要求
实验废弃物应按照国家相关法律 法规和标准进行分类、储存和处
理。
对于有毒、有害、易燃、易爆的 废弃物，应采取特殊处理措施，
可靠性检验
对实验结果进行可靠性检验，判断结果的可 靠性。
误差处理方法
采取有效措施减小误差，提高实验结果的可 靠性。
可靠性分析
根据可靠性检验结果，对实验结果的可靠性 进行分析，得出结论。
05
药品生物检定法的实验 注意事项与安全措施
实验注意事项
实验前应充分了解药品的性质 和可能的危险性，遵循安全操
作规程。
细胞检定法
细胞检定法是一种利用细胞生长增殖特 性进行药物检测的方法，主要用于肿瘤
细胞、免疫细胞等特定细胞的检测。
细胞检定法的基本原理是利用药物对特 细胞检定法的优点是能够反映药物在细
定细胞生长增殖的抑制或促进作用，通 胞水平的作用效果，具有较高的特异性。
过观察细胞的形态、数量、活性等指标， 缺点是操作复杂，需要特定的细胞培养
实验过程中应保持实验室整洁 ，避免药品交叉污染。
药物分析：常用定量分析法与应用——生物检定法
（⼀）概述⽣物检定法是利⽤药物对⽣物体（整体动物、离体组织、微⽣物等）的作⽤以测定其效价或⽣物活性的⼀种⽅法。
它以药物的药理作⽤为基础、⽣物统计为⼯具，运⽤特定的实验设计，通过供试品和相应的标准品或对照品在⼀定条件下⽐较产⽣特定⽣物反应的剂量⽐例，来测得供试品的效价。
（⼆）⽣物检定法的应⽤范围1．药物的效价测定对⼀些采⽤理化⽅法不能测定含量或理化测定不能反映临床⽣物活性的药物可⽤⽣物检定法来控制药物质量。
中国药典收载了洋地黄、胰岛素、肝素、绒促性素、缩宫素、硫酸鱼精蛋⽩等的⽣物测定法及各种抗⽣素的微⽣物测定法。
有些天然药物、⽣物制品（包括⽣化药物）往往因结构复杂，⽽且往往⼜是由结构类似、⽐例不定的多种成份组成，很难⽤理化⽅法反映其⽣物活性；另⼀些药物，尤其是⼀些激素类药物，其结构相近，⽽⽣物活性不同；还有些药物虽可⽤理化⽅法测定含量，但含量不能完全反映效价，如天青A变⾊反应测定肝素，测定结果与抗凝⾎效价不⼀致。
因此，这些药物的质量控制都离不开⽣物检定。
2．微量⽣理活性物质的测定⼀些神经介质，激素等微量⽣理活性物质，由于其很强的⽣理活性，在体内的浓度很低，加上体液中各种物质的⼲扰，很难⽤理化⽅法测定。
⽽不少活性物质的⽣物测定法由于灵敏度⾼、专⼀性强，对供试品稍作处理即可直接测定。
如⼄酰胆碱，5-羟⾊胺等活性物质的测定。
3．中药质量的控制中药成份复杂，⼤部分中药的有效成份尚未搞清，难以⽤理化⽅法加以控制，但可⽤⼀些以其疗效为基础的⽣物测定⽅法来控制其质量。
4．某些有害杂质的限度检查如农药残留量、内毒素等致热物质、抗⽣素及⽣化制剂中降压物质的限度检查等。
由于⽣物差异的存在，⽣物检定结果误差较⼤，重现性较差，需要控制的条件较多，加上测定费时，计算繁琐，所以，⽣物检定主要⽤于⽆适当理化⽅法进⾏检定的药物，补充了理化检验的不⾜。
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① 一般取供试品 取10g，置pH7.0无菌氧化钠一蛋白胨缓
冲溶液100mL中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀后制备成
1∶10供试液。
方法：家兔法/鲎试剂
(2)异常毒性试验 用一定剂量药物按指定的操作方法和给
药途径给规定体重的试验动物，观察其急 毒反应(是否死亡)，是一个限度试验。
异常毒性试验出现： 主要取决于供试品在生产中是否引入， 可发生异常毒性杂质。
(3)过敏试验 检异性蛋白试验----引起多种过敏反应
轻:皮肤产生红斑/丘疹 过敏
⑥高效离子交换色谱法 a.分离根据离子化浓度 b.分离盐浓度增大的梯度洗脱法 c.分离在阳/阴离子交换间呈现差异大 d.柱效中等并具高质量的活性回收
三、生化药物分析进展 总体向理化/仪器分析发展
如：GC、HPLC、UV、TR、质谱、磁共 振、超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电 极检测等。
另，应用细胞培养，对生化药的活力和 效价检测。
重:窒息、发绀、血管神经性水肿 血压降低、休克、死亡。
(4)降压物质检查 指药物中含有能导致血压降低的杂质，
包括组胺、类组胺或其他物质。 来源：用动物脏器/组织制备时，在正常
组织中存在。 方法：猫/狗血压法检药物中所含降压物
质。
(5)无菌检查 对药物及敷料是否染有活菌的检查。 由于许多生化药物不能高温灭菌，
141生化药物分析及生物检定技术
•
•
•
二、生化药物分析的方法 1、鉴别 (1)化学反应法 (2)UV (3)酶法：如尿激酶-蛋白水解酶 (4)电泳法：如肝素-糖凝胶电泳法 (5)生物法：利用生物体进行试验
2、杂质检查
(1)一般杂质 (2)特殊杂质 3、安全性检查
(1)热原检查：由微生物所分泌的某一种 代谢产物，一般以为是内毒素，能使恒温 动物体温升高。
形瓶、研钵 (直径10～12mm)、培养皿 (直径90mm)、量筒、
试管及塞子、吸量管 (1mL、10mL)、载玻片、盖玻片、玻璃
或搪瓷消毒缸 (带盖)、大橡皮乳头、小橡皮乳头、无菌衣、无
菌裤、无菌帽、无菌口罩 (也可用一次性物品替代)、接种环、
酒精灯 (乙醇灯)、乙醇棉球、灭菌剪刀及镊子、灭菌称样纸及
不锈钢药勺、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆等。
玻璃器皿均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽灭菌12l℃
20min，烘干备用。
一、平皿法
2．试剂 稀释剂(pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、
pH7.6无菌磷酸盐缓冲液、0.9%无菌氯化 钠溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液)、 聚山梨酯80、无菌斯盘80、单硬脂酸甘油 酯、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 (YPD)。
二、检查方法
药品微生物限度检查采用活菌计数， 计数方法包括： 平皿法、薄膜过滤法。
一、平皿法
1．设备、仪器及用具
无菌室、超净工作台、恒温培养箱(室)、匀浆仪、恒温水浴
箱、电热干燥箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器、菌落计数器 (JLQ-
ST或JLQ-S2型)、显微镜 (1500×)、天平 (感量0.1g)、锥
b.取样测定法 c.连续测定法 ②酶分析法： a.动力学分析法 b.总变量分析法
(2)电泳法 ①自由界面电泳法 ②高效毛细管电泳法 ③区带电泳法 a.纸电泳法 b.醋酸纤维素薄膜电泳法 c.聚丙烯酰胺凝胶电泳法 d.十二烷基硫酸钠(SDS)
聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(3)生物检定法 是利用药物对生物体的作用以测定其效
单克隆体免疫分析技术及基因分析技术， 提高检测限量和灵敏度。
生物检定技术
第一节 微生物限度检查
一、定义
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及 其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检 查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控 制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度 10 000级下的局部洁净度100级的单向流 空气区域内进行，其全过程必须严格遵守无 菌操作，防止再污染。
故检含量百分比：适用于化学结构明 确小分子/经水解后变成小分子药物。 (2)生物效价/酶活力单位表示，适于 酶类、蛋白质类。
常用方法：
(1)酶法 (2)电泳法 (3)生物检定法 (4)理化法
(1)酶法 ①酶活力测定法：
a.终点法：单酶反应定量法 指示酶反应偶联定量法
振摇，即可作为l∶10供试液；含王浆或蜂蜜的合 剂、滴眼剂可以原液作为供试液；油剂可加入适量 聚山梨酯80，再照上法制备成供试液；气雾剂可 以适宜方法使抛射剂导出后，加入适量稀释剂，混 匀，吸取相当于10g或10mL供试品，再稀释至 100mL，作为供试液。
一、平皿法
4．药品的预处理
(2) 固体、半固体或黏稠液供试品
检验量：一般供试品的检验量为10g或10mL，化学膜剂为 100cm2，检验时，应从2
个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂不得少于4片。一般 随机抽取不少于检验用量的3倍量供试品。
一、平皿法
4．药品的预处理 供试液制备若需水浴加温时，温度不超过45℃，
从制备到加入检验用培养基不得超过 1h。 (1) 液体供试液 一般取供试品10mL，加入稀释剂90mL中，充分
价或生物活性的一种方法。 以药物的药理作用为基础，生物统计为
工具，运用特定的实验设计，通过供试品 和相应的标准品或对照品在一定条件下比 较产生特定生物反应的剂量比例，来测得
供试品的效价。
(4)理化法
①重量法 a.提取法 b.挥发法 c.沉淀法
②测定法 ③比色法 ④UV
⑤高效凝胶过滤色谱法 a.分离根据有效粒径 b.分离在固定比例水液中 c.活性蛋白可回收
一、平皿法
3．试验前的准备 无菌室使用前开启紫外灯和空气过滤装置，至少30min；将所
需已灭菌或消毒的用品按无菌操作技术要求移至无菌操作室； 操作人员按要求穿戴无菌服，进入无菌操作室；操作前，先用 乙醇棉球消毒手，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开 口处周围，待干后用无菌的手术剪刀将供试品瓶、盒、袋启封。 启封后先仔细检查瓶盖内侧及瓶口周围有无生霉长螨的迹象， 对肉眼可见疑似者用放大镜和显微镜观察，若证实为生霉、长 螨，即可判定为不合格，无需继续检验。