大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗_李少伟
肠道病毒病毒样颗粒疫苗研究进展
肠道病毒病毒样颗粒疫苗研究进展摘要：肠道病毒（Enterovirus，EV）可引发多种常见传染病，目前感染后尚无针对性药物，接种疫苗是预防感染的最佳方法。
病毒样颗粒（Virus-like particle,VLPs）疫苗作为亚单位疫苗具有无致病性，无感染性，免疫原性强等多种优势，是目前疫苗研发的热点之一。
本文肠道病毒VLPs的结构、表达方式、佐剂使用、疫苗评价所需动物模型以及新型肠道病毒疫苗等方面综述了肠道病毒VLPs疫苗的研究进展。
关键字：肠道疫苗、病毒样颗粒、疫苗肠道病毒（Enterovirus，EV）属于单股正链小RNA病毒，整个EV家族包括脊髓灰质炎病毒（poliovirus），柯萨奇病毒（Coxsackie virus ，CV ），埃可病毒及新型肠道病毒等，这类病毒是脊髓灰质炎、手足口病、急性出血性结膜炎、病毒性心肌炎等多种疾病的病因，且针对感染无特效药物可用，因此接种疫苗是预防疾病流行与爆发最重要的手段[1]。
传统的灭活疫苗难以引起细胞免疫，免疫原性偏低，生产过程具有一定危险性；减毒活疫苗则面临着毒力返强，引发免疫疾病等风险[2, 3]。
随着分子生物学技术的发展，亚单位疫苗逐渐成为疫苗研究的新方向，病毒样颗粒（Virus-like particle，VLPs）作为一种病毒亚单位结构，本质为单个或多个衣壳蛋白组装成的，与源病毒结构相同的空心颗粒[4]。
它不含核酸，不具备感染性，却具有同源病毒一样的抗原表位与免疫原性，能在体内有效诱导免疫反应，在疫苗的研究与应用前景上具有巨大优势。
1肠道病毒病毒样颗粒结构肠道病毒为正二十面体对称球形颗粒，大小约20～30 nm，外无包膜，内有一条约7.5kbp的单股正链RNA。
病毒衣壳由60个单元的结构蛋白组成，每个单元由VP1、VP2、VP3、VP4、共同组成，其中其中VP1、VP2、VP3暴露在衣壳外表面，VP4隐藏在衣壳内部[5]。
Putnak.JR等人在对脊髓灰质炎病毒的结构研究中发现，野生型PV感染的哺乳动物细胞中存在以五聚体(14s)和空衣壳(74s）为主的几种亚病毒颗粒，这两种亚病毒颗粒无病毒RNA，均包含一套完整的衣壳蛋白，具有类似于野生型病毒的免疫原性，提示可作为一种候选疫苗[5, 6]。
猪大肠杆菌病疫苗有哪些？猪大肠杆菌疫苗使用方法介绍
猪大肠杆菌病疫苗有哪些？猪大肠杆菌疫苗使用方法介绍畜牧堂倪老师为你,讲解该疾病的治疗预防:猪大肠杆菌病疫苗有哪些?目前，国内已商品化的猪大肠杆菌病疫苗有仔猪大肠杆菌病K88-K99双价基因工程活疫苗、仔猪水肿病多价油乳剂灭活疫苗、仔猪大肠杆菌病K88-K99双价基因工程灭活疫苗、仔猪大肠杆菌病三价灭活疫苗、仔猪大肠杆菌灭活苗。
猪场可用大肠杆菌K88ac-LTB双价基因工程菌苗，新生猪腹泻大肠杆菌K88、K99双价基因工程菌苗，子猪大肠杆菌腹泻K88、K99、987P三价灭活苗，MM-3工程菌苗(含K88ac及无毒肠毒素LT两种保护性抗原成分)等苗进行免疫接种。
猪大肠杆菌疫苗怎么使用?接种妊娠母猪，保护性抗体可通过初乳传递给哺乳仔猪，预防由产肠毒素大肠杆菌感染引起的仔猪黄痢。
猪大肠杆菌疫苗使用方法：耳根部皮下注射。
妊娠母猪在分娩前10-20天种1毫升。
目前，猪场主要使用K88、K99、987P三价菌苗来控制猪大肠杆菌病。
即可使用单苗，也可使有联苗，例如大肠杆菌病和产气荚膜梭菌病(红痢)联苗。
通常是初次妊娠的母猪分别在产前21天、14天每头注射l头份，之后只在产前14天进行1次免疫接种即可。
但在临床上来说，疫苗免疫效果有所不同，这主要是由于大肠杆菌具有各种血清型，抗原比较复杂，且变异性较强，从而导致购买的疫苗效果较差，无法很好的预防该病。
不过只要接种疫苗就具有一定的效果，尽管无法从根本上抑制该病，但及时配合使用药物进行控制就能够使病程明显缩短，减少死亡，且不容易出现复发。
根据本猪场的实际情况选择接种适宜的疫苗。
为预防猪水肿病，可在本猪场分离致病性菌株，并制成自家灭活菌苗，于仔猪断奶前1星期给每头肌肉注射2mL，能够促使仔猪得到较好的免疫效果。
猪大肠杆菌病能用药物预防吗?可以的。
母猪从产前1星期到产后1星期，可饲喂添加适量抗生素的饲料，并在产仔当天给其注射一针长效抗生素，用于控制母猪体内的细菌数量，不仅能够有效避免其发生乳房炎、子宫炎，同时还能够有效避免后代仔猪接触感染致病性大肠杆菌，另外还能够在一定程度上预防仔猪呼吸道疾病。
大肠杆菌表达病毒样颗粒的研究进展
大肠杆菌表达病毒样颗粒的研究进展①李生军张海霞冯若飞②（西北民族大学生物医学研究中心，兰州730030）中图分类号Q81文献标志码A文章编号1000-484X（2021）12-1526-07［摘要］病毒样颗粒是由结构蛋白组装而成，形态结构与天然病毒高度相似的一种多聚蛋白纳米结构，但不包含任何遗传物质，因此是一种理想的疫苗形式。
大肠杆菌表达系统因具有良好的安全性、生产周期短、易于放大培养等优点，被广泛应用于基因工程药物的生产，在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。
本文综述了利用大肠杆菌系统表达的病毒样颗粒及其组装、表位结构特征和临床试验结果等研究进展，以期为病毒样颗粒疫苗的生产提供可靠的数据支持和设计思路。
［关键词］疫苗；病毒样颗粒；大肠杆菌表达系统Research progress of E.coli expressing virus-like particle vaccinesLI Sheng-Jun，ZHANG Hai-Xia，FENG Ruo-Fei.Biomedical Research Center，Northwest Minzu University，Lan⁃zhou730030，China［Abstract］Virus-like particles are nanostructures assembled from viral structural proteins which mimic viral characteristics but are without any genetic materials and could work as candidate vaccines.The E.coli expression system offers a convenient and effec‑tive platform for genetically engineered products，due to its safety and easy handling and could be used as a model system for virus-like particles vaccines production.This paper reviews and discuses up-to-date research progress on virus-like particles expressed in E.coli models，their assembly，epitopes structure characteristics and clinical trials.Finally，it also provides an insight into the production of virus-like particles vaccines by analyzing available data and strategies.［Key words］Vaccine；Virus-like particle；E.coli expression system自1796年预防天花的牛痘疫苗诞生以来，疫苗至今已有200余年的发展历史，其研制与应用是上世纪公共卫生领域最伟大的成就之一［1］。
戊型肝炎病毒疫苗研究进展
５ ・ ４
中华 实验和 临床 感染病杂 志（ 电子版 ）２∞ 年 １ 第 １ 第 １ Ｏ ｉ ＪＥｏＣｉ ｎｅ ｉ Ｈｅ ｎ ｅ ｉ ） Ｊ ａ ２ ｏ Ｖ ｌｌ ｏ １ Ｏ 月 卷 期 ｌ ｘ ｌ ｆ ｔ ｓ（ ｃ ￣ｃＶ ｒｏ ， ｍａ ￣ ０ ７， ｏ 。Ｎ ． ｎ ｎＩ ｃ Ｄ ｔ ｓｎ ｒ
出对 所有 Ｈ Ｖ病 毒 株 均 有 ＨＶ 疫 苗 的研 究 取 得 了快 速 进 展 。
一
照组 ３只均出现血 清转 氨酶 （ Ｌ ） 高 ， ＡＴ 升 抗体 阳转 ， 粪便 持 续 排 毒 １ 月 以 上 ； 苗 组 无 一 发 病 ， 检 出非 疫 苗 来 源 的 个 疫 未
３周 以上 ， 抗体 阳转 ， １只 ＡＩ Ｊ Ｔ明显升高 ； 而抗体 中和组 ２只 猴始终未检 出粪便 排毒 ， Ｎ ２抗 体缓 慢下 降 ， Ｌ 抗 Ｅ Ａ Ｔ正 常。
这 些 结 果 表 明 Ｎ ２具 有 良好 的 免 疫 原 性 和 免疫 保 护 性 ， 可 Ｅ 有 能成 为 有 效 的 Ｈ Ｖ疫 苗 。 Ｅ Ｈ ｅ等 用 大 肠 埃 希 菌 表 达 Ｏ Ｆ 中 ３ ４～６６ ａ 段 Ｒ２ ９ ０ ａ片 （ Ｅ ） ３个 Ｎ 端 延 伸 突 变 体 ， 现 对 应 于 Ｏ Ｆ Ｎ２的 一 发 Ｒ ２的 ３ ８～ ６ ６ ６ａ 重 组 蛋 白 Ｈ Ｖ ２ ９在体 外 可 以形 成 颗 粒 性 抗 原 ， ０ ｎ的 Ｅ ３ 透 射 电镜 和原 子 显 微 镜 观 察 均 见 直 径 约 为 １ ３ ｍ 的颗 粒 。 ５— ０ ｎ Ｈ Ｖ ３ 原 颗 粒 与 戊 型 肝 炎 患 者 血 清 反 应 性 良好 ， 中 和 Ｅ ２９抗 对 性 单 克 提 Ｈ Ｖ ２９抗 原 颗 粒 免 疫 Ｂ Ｌ ／ Ｅ ３ Ａ Ｂ ｃ小 鼠 的半 数 有 效 剂 量 （ Ｄ ０ 在 ０ ０ ０ ２ ｇ之 间 ， 同样 以铝 佐 剂 吸 附 的 Ｅ ５ ） ． ８— ．５Ｉ ． ｚ 而
大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗
收稿日期：2013-12-24基金项目：国家自然科学基金项目(30925030；81172885)*通信作者：E-mail ：nsxia@夏宁邵，男，1964年7月生，教授，厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任，公共卫生学院院长，全国体外诊断产业技术创新战略联盟理事长。
长期致力于病毒性疾病的应用基础及转化研究。
主持研制出全球第一个商品化重组戊型肝炎疫苗及30余种传染病诊断试剂盒并均实现产业化，研制的重组人乳头瘤病毒16/18型二价疫苗正在进行三期临床试验。
所主持项目获国家技术发明二等奖、国家科技进步二等奖、中国专利金奖各1项，获授权专利22项，在Lancet 、PNAS 等SCI 刊物发表论文90余篇。
大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗李少伟，夏宁邵*(厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门 361102)摘要：重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式，形态结构与天然病毒高度相似，位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别，可激发机体产生保护性免疫反应，且不含有病毒基因，因此，是一种理想的疫苗形式，也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。
目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。
大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产，具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点，在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。
本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展，特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。
关键词：疫苗；病毒样颗粒；大肠杆菌；戊型肝炎病毒；人乳头瘤病毒；重组蛋白Virus-like particle-based vaccine development usingEscherichia coli expression systemLI Shaowei, XIA Ningshao *(National Institute of Diagnostics and Vaccine Development in infectious disease, Xiamen University, Xiamen 361102, China )Abstract: Virus-like particles (VLPs) are generated by the self-assembly of viral structural protein usingvarious expression systems. VLPs ensemble native virus particles in morphology and maintain key immune epitopes as authentic virus. In light of nanometer-sized particles with diameters of 20- 60 nm, VLPs were shown to be a passport to immune recognition, thus being capable of eliciting strong protective immune responses. Recombinant VLP-based vaccines have superior safety profiles due to lack of any viral genome. There are several licensed and highly successful VLP-based vaccines produced using recombinant DNA《生命的化学》2014年34卷1期· 14 ·专题：新兴疫苗technology, such as recombinant hepatitis B, human papillomavirus and hepatitis E vaccine. E.coli expression system was well-established in production of biotherapeutics. This production platform for recombinant VLP-based vaccines has many advantages, such as rapid replication cycle and amenability for scale-up for commercial scale production. This review outlines the success of hepatitis E and human papillomavirus vaccines derived from E.coli. We highlight the protein expression, particle assembly, key epitope structure and clinical trials of these VLP-based vaccines.Key words: prophylactic vaccine; virus-like particles; Escherichia coli; hepatitis E virus; human papillomavirus; recombinant protein疫苗是预防病毒性疾病最为成功的干预手段。
鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达
肤上发生痘疹 ，或在鸡 口腔 、咽喉部黏膜形成纤维 素性坏死性假膜。鸡只患该病后增重缓慢 、消瘦 ，
产 蛋 量暂 时 下 降［ ２ １ 。近年 来 ，鸡 痘 鹌 鹑 化 弱毒 苗 对 鸡 群进行 刺 种免疫 ，但常 出现 免疫 失败 ，鸡 群发 生
１ ＿ 重 组真核 质粒 的体 外瞬 时转 染 ．３ ２
１ 材 料 与方 法
１１ 材 料 ．
将 Ｂ Ｋ １细胞接 种 于 ２ Ｌ 中 ，在细 胞 达到 Ｈ ２ ４孑板 ８ ％的融 合 时 开始 转 染 。 取 ２ ｇ 组 质 粒 和 ２／ ０ 重 ｘ Ｌ
Ｌｐ ｆ ｔｍ ｎ 删 ０ ０ ｉｏｅ ａ ｉｅ ２ ０ ，分别 用 １ ０ｌ ｃ ０ Ｌ无 抗 生 素 、无 ｘ
１ 方法 ． ２
释 的 ＦＴ ＩＣ标记 的羊抗兔 Ｉ ｇ Ｇ二抗 ，室温避 光作用 ４ ｉ， Ｂ 清洗 ３ ；再用中性甘油封片， ５ ｎ ＰＳ ｍ 次 荧光显
微 镜 下 观 察 表 达 情 况 ，以 同 时 转染 Ｐ Ａ Ｖ Ｘ空 载体
的ＢＫ １ Ｈ ２ 细胞 为 阴性对 照 。 １ ． 重组 真核 质粒 的体 内试 验 ．５ ２
肌 肉注射免疫 １ 龄 雏鸡 ，通过 Ｒ — Ｃ ４日 Ｔ Ｐ Ｒ和 组织免疫 荧光检测体 内质 粒表达 。结 果表 明 ，成功构建 了真核 表达
质粒 ｐ Ａ — ｎ ，并证 明 ｐ Ａ — ｎ 在体 内体 外都 能有效表达。研 究为鸡 痘病毒基 因工程 疫苗进一步研制及 应用 Ｖ Ｘ ｅｖ Ｖ Ｘ ｅｖ
ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｔ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ｗａ ｕ ｔ ｅ ｏｎ ｉ ｅ ｙ ＲＴ－ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｈ ｒ ｔ ｉ ｓ ｆ ｒｈ ｒｃ ｆｒ ｄ ｂ ｍ ＰＣＲ ｄ ｉ ｍ ｕ ｏｈｓｏ ｈ ａｎ ｍ ｎ ｉｔ ｃ ｅｍｉａ ｕ ｅ ｃ ｎ ｅ． ｅ ｃ ｌ ｏｒ ｓ ｅ ｃ Ｔｈ ｌ ｆ ｒ ｓ ｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｋ ｒ ｏ ｉ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｐａ ｍ ｉ ＶＡＸ－ ｎ ｓ ｓ ｃ ｅ ｓｕ ｌ ｏｎ ｔｕ ｔ ｄ ａ ｄ ｐ ｅ ｕｌ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｓ ｅｕ ａ ｙ ｔ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｌｓ ｄ ｐ ｃ ｅ ｖｗａ ｕ ｃ ｓ ｆ ｌ ｃ ｓｒ ｃ ｅ ， ｎ ＶＡＸ— ｖ ｙ ｅｎ ｗａ ｂｅ ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ／ ｉ ｏ ａｎ ／ ｖｖ ．Ｔｈｉ ｅ ｅａ ｃ ａ ｅ ｈ ｙ ｆ ｒｔ ｅ ｆ ｒｈ ｔ ｄ ｎ ｓ ａ ｌ ｏ ｂ ｘ ｒ ｓ ｅ ｎ ｖｔ ｄ ｎ ｉｏ ｒ ｓ ｒｓ ｒ ｈ ｐ ｖ ｄ ｔ ｅ ｗａ ｏ ｈ ｕ ｔｅｒｓ ｕ ｙ ａ ｄ
肠道病毒71型灭活疫苗免疫恒河猴在攻毒实验中的感染动力学
中 国 医学 科 学 院 京 协 和 医 学 院 医学 生 物 学 研 究 所 ， 明 ６ ０ １ 北 昆 ５ １８
摘
要 ： 文 旨存 根 据 前期 研 究建 立 的恒 河 猴 感 染 动 物 模 型 ， 同期 研 制 的肠 道 病 毒 ７ 本 对 １型 （ Ｖ７ ） 验 性 灭 Ｅ １实
Ｋ ｕｎｍ ｉ ｇ ６３ ８ ， Ｃｈｉ ａ ｎ ，０１ １ ｎ
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肠 道病 毒 ７ １型 灭 活 疫 苗 免 疫 恒 河 猴 在 攻 毒 实 验 中 的 感 染 动 力 学
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核酸疫苗pcdna3.1-eg95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达
1 材料和方法
1 1 细胞系及培养条件 绵羊胎儿成纤维细胞系为本实验室保存, 经原代
培养, 建系后继代培养, 使用 P2 P10代细胞。细胞培 养用 DMEM / F12培养 基 ( G ibco), 加入 10% 的 FBS (杭州四季青 )和 100 un its/mL 的青霉素, 100 mg /mL 的链 霉 素 ( S igm a )。 饲 养 条 件: 37 , 饱 和 湿 度, 5% CO2。 1 2 细粒棘球蚴原头蚴采集
பைடு நூலகம்关键词: 细粒棘球蚴 EG 95基因 核酸疫 苗
Construction of Nucleic A cid Vaccine of EG95 and Expression in Sheep Fetal Fibroblasts
Y ang Jiaofu1 W ang Zh igang1 G ao L ian shan2 H ao H u ifang1 L i Zh iw ei1 L i J ie1 Zh an Ku i1
K ey w ords: Echinococcus granulosus EG 95 gene Nuc le ic acid vacc ine
细粒棘球蚴病 ( echinooocoosis) 又称囊型包虫病 ( cystic echinooocoosis, CE ), 呈全球性 分布 [ 1] , 在我 国北方牧区和半牧区均有流行 [ 2, 3] , 是严重危害中
肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)接种5年免疫持久性观察
国际生物制品学杂志 2()2()年12 月第 43 卷第 6 期Int J Biologicals，December 2()2(>，Vol. 43，No. 6肠道病毒71型灭活疫苗（V ero细胞）接种5年免疫持久性观察鲁卫卫^孟繁岳2郭会杰1郝春生1毛群颖3高帆3卞莲莲3段凯4陈晓琦4李新国4陈伟5陶红2张良豪5陈金华4李秀玲鲁卫卫和孟繁岳对本文有同等贡献1国药中生生物技术研究院有限公司第二研究室，北京u m i i;2江苏省疾病预防控制中 心疫苗临床评价所，南京210009; 3中国食品药品检定研究院肝炎病毒室，北京102629; 4武汉生物制品研究所有限责任公司科研开发部430070; 5武汉生物制品研究所有限责任 公司医学事务部430070; 6上海生物制品研究所有限责任公司201403通信作者：李秀玲，Email: 189****************【摘要】目的观察肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71)疫苗接种后5年的免疫持久性。
方 法在DI期临床试验免疫原性亚组中，对完成全程两针次免疫的、免前抗EV71中和抗体阴性人群进行 免疫后5年采血，并检测抗EV71中和抗体评价免疫持久性。
完整检测时间点包括0、56 d和8、14、26、64个月。
采用t检验和卡方检验分析数据。
结果疫苗组和安慰剂对照组分别有235和255名受试 者具有全部检测点的中和抗体数据。
接种后64个月，疫苗组抗EV71中和抗体几何平均滴度（369. 57) 高于对照组(55. 58),且差异有统计学意义(t= 14. 28,P<0. 01);分别以抗体滴度8、16、32为阳性判定 标准，疫苗组抗体阳性率（l〇〇%、99. 57%、97. 87%)均高于对照组（69. 02%、61. 96%、59. 61%)且差异 有统计学意义(；1；2分别为1〇7.93、133.14、130.69，_?值均<0.()1)。
新肠道病毒71型病毒样颗粒的制备
新肠道病毒71型病毒样颗粒的制备李晓楠;曹明慧;李培锋【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2012(028)011【摘要】目的:研究新肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的制备方法.方法:依据昆虫细胞偏爱密码子优化EV71 P1和EV71 3CD基因,将二者分别克隆至供体质粒pFastBac Dual多角体蛋白启动子pPh和pP10上;构建重组pFastBac Dual EV71 P1-3CD质粒,并与Bacmid质粒转座后,获得重组杆状病毒表达质粒转染至Sf9细胞,应用PCR、免疫荧光、SDS-Page和Western blot方法鉴定EV71 VLPs表达情况,最后利用蔗糖密度梯度离心的方法纯化EV71 VLPs.结果:经昆虫密码子优化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac系统成功组装了EV71 VLPs,纯化EV71 VLPs的浓度为0.817 mg/ml,纯度>90%.结论:成功地构建了重组杆状病毒EV71 P1-3CD Bacmid表达质粒,并表达和纯化了 EV71 VLPs,这为今后EV71 VLPs疫苗的研究奠定了基础.【总页数】6页(P1014-1018,1031)【作者】李晓楠;曹明慧;李培锋【作者单位】辽宁省动物疫病预防控制中心,沈阳,110164;中国农业大学生物学院,北京,100193;内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特,010018【正文语种】中文【中图分类】R378.5【相关文献】1.抗猪圆环病毒2型病毒样颗粒单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 侯强;侯绍华;贾红;姜一瞳;鑫婷;李明;陈青;朱鸿飞2.猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定 [J], 冯华; 刘晴坤; 任春晓; 刘运超; 张改平3.基因Ⅰ型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备及其对小鼠的免疫原性分析 [J], 施磊;周亚红;田占成;高闪电;独军政;关贵全;刘光远;罗建勋;殷宏4.猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测 [J], 何至远;吴冬荀;张贺楠;王飞;吴珊珊;刘昕泽;肖进5.猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究 [J], 边海桥;黄立平;危艳武;夏德利;朱红振;吴洪丽;于冲;刘建行;冯力;刘长明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护
大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护张军;李益民;李少伟;欧山海;黄果勇;何志强;葛胜祥;鲜阳凌;逄淑强;夏宁邵【期刊名称】《病毒学报》【年(卷),期】2004(20)1【摘要】大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。
结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。
每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染;1 0 μg和5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。
3个剂量免疫组及对照组另外3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。
3只1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。
另有 3只1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。
这些结果表明【总页数】6页(P1-6)【关键词】戊型肝炎;疫苗;原核表达;恒河猴;保护率【作者】张军;李益民;李少伟;欧山海;黄果勇;何志强;葛胜祥;鲜阳凌;逄淑强;夏宁邵【作者单位】厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室;北京万泰生物药业有限公司;广西壮族自治区疾病控制中心【正文语种】中文【中图分类】R512.6【相关文献】1.015 重组戊型肝炎疫苗在恒河猴中保护性免疫力的持久性 [J],2.原核表达戊型肝炎病毒基因重组结构蛋白免疫保护恒河猴的初步实验研究 [J], 毕胜利;鲁健;蒋琳;黄国勇;潘海东;江永珍;张明程;沈新亮3.大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究 [J], 葛胜祥;张军;黄果勇;逄淑强;周开姣;夏宁邵4.戊型肝炎病毒重组颗粒性蛋白疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答研究 [J], 吴婷;欧山海;程通;何水珍;伍小路;郑舟;张军;夏宁邵5.重组戊型肝炎疫苗在恒河猴中保护性免疫力的持久性 [J], 柯金山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
在大肠杆菌中高效表达人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核心蛋白
在大肠杆菌中高效表达人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核心蛋白吴卫星;张维;马贤凯【期刊名称】《病毒学报》【年(卷),期】1991(7)3【摘要】将编码人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核心蛋白(Gag)P24的大部分基因片段,插入大肠杆菌表达载体pEX31A中,获得的表达产物MS2-Gag融合蛋白占菌体总蛋白的20％左右。
Western blot结果证明,这种表达产物能被艾滋病(AIDS)患者血清中的特异性抗体所识别。
这是国内首次报道在大肠杆菌中高效表达人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核心蛋白。
对表达的重组核心蛋白的意义及应用前景进行了讨论。
【总页数】6页(P197-202)【关键词】免疫缺陷病毒;核心蛋白;大肠杆菌【作者】吴卫星;张维;马贤凯【作者单位】军事医学科学院基础医学研究所;北京市第二传染病医院【正文语种】中文【中图分类】R373.9【相关文献】1.缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析 [J], 陈璐;邓松华;曹洁;何俊;陈秋莉;蒋少华;廖文婷;潘卫2.HIV-1融合蛋白MA4-CA在大肠杆菌中的高效表达 [J], 孙晓光;宋长征;张更林3.人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 [J], 韩保光;孟莉;邹民吉;凌世淦;宋晓国;赵春文;段聚宝;王嘉玺;马贤凯4.人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定[J], 韩保光;孟莉;马贤凯;宋晓国;邹民吉;凌世淦;王嘉玺5.人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白(Gag)在大肠杆菌中的表达 [J], 王杨;褚嘉祐;周东霞;孙明;黄小琴;俞建昆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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收稿日期：2013-12-24基金项目：国家自然科学基金项目(30925030；81172885)*通信作者：E-mail ：nsxia@夏宁邵，男，1964年7月生，教授，厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任，公共卫生学院院长，全国体外诊断产业技术创新战略联盟理事长。
长期致力于病毒性疾病的应用基础及转化研究。
主持研制出全球第一个商品化重组戊型肝炎疫苗及30余种传染病诊断试剂盒并均实现产业化，研制的重组人乳头瘤病毒16/18型二价疫苗正在进行三期临床试验。
所主持项目获国家技术发明二等奖、国家科技进步二等奖、中国专利金奖各1项，获授权专利22项，在Lancet 、PNAS 等SCI 刊物发表论文90余篇。
大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗李少伟，夏宁邵*(厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门 361102)摘要：重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式，形态结构与天然病毒高度相似，位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别，可激发机体产生保护性免疫反应，且不含有病毒基因，因此，是一种理想的疫苗形式，也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。
目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。
大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产，具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点，在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。
本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展，特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。
关键词：疫苗；病毒样颗粒；大肠杆菌；戊型肝炎病毒；人乳头瘤病毒；重组蛋白Virus-like particle-based vaccine development usingEscherichia coli expression systemLI Shaowei, XIA Ningshao *(National Institute of Diagnostics and Vaccine Development in infectious disease, Xiamen University, Xiamen 361102, China )Abstract: Virus-like particles (VLPs) are generated by the self-assembly of viral structural protein usingvarious expression systems. VLPs ensemble native virus particles in morphology and maintain key immune epitopes as authentic virus. In light of nanometer-sized particles with diameters of 20- 60 nm, VLPs were shown to be a passport to immune recognition, thus being capable of eliciting strong protective immune responses. Recombinant VLP-based vaccines have superior safety profiles due to lack of any viral genome. There are several licensed and highly successful VLP-based vaccines produced using recombinant DNA《生命的化学》2014年34卷1期· 14 ·专题：新兴疫苗technology, such as recombinant hepatitis B, human papillomavirus and hepatitis E vaccine. E.coli expression system was well-established in production of biotherapeutics. This production platform for recombinant VLP-based vaccines has many advantages, such as rapid replication cycle and amenability for scale-up for commercial scale production. This review outlines the success of hepatitis E and human papillomavirus vaccines derived from E.coli. We highlight the protein expression, particle assembly, key epitope structure and clinical trials of these VLP-based vaccines.Key words: prophylactic vaccine; virus-like particles; Escherichia coli; hepatitis E virus; human papillomavirus; recombinant protein疫苗是预防病毒性疾病最为成功的干预手段。
早期，人们经验地利用动物活体或鸡蛋制备疫苗，随着新技术的发展，后期的疫苗更多依赖于细胞培养方法和分子生物学技术的应用。
新近在基因递送和表达、纳米颗粒、蛋白质制造和佐剂技术等方面取得的进展，特别是整合了人单克隆抗体分离、结构生物学和高通量测序技术，利用解析中和性单克隆抗体与病毒表面蛋白的复合物结构，阐明中和作用的结构基础，使得我们能够从原子水平上进行疫苗抗原的设计。
2013年，两篇Science论文利用结构生物学解析了人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)的融合细胞前中和表位构象并进一步设计新型的RSV疫苗，这一领域的进展被美国Science杂志评选为年度十大科学突破之一[1]。
可以说，随着各种技术的进步和学科的融合，我们已经进入分子疫苗学时代。
病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs) 是由病毒的一个或多个结构蛋白在体内或体外自组装而成的空心颗粒，因其不含病毒的遗传物质，无法复制和扩增，而不具备感染致病的能力。
VLPs在形态结构上与天然病毒颗粒相似，很好地模拟天然病毒的抗原表位，数十纳米的尺度(大约40nm)和高度有序的表位结构也有利于树突状细胞的吞噬和抗原加工，从而有效地诱导机体产生对病毒的免疫保护反应[2]。
与传统疫苗相比，VLPs具有相当的免疫原性和更好的安全性而成为一种理想的疫苗形式，它还可作为载体蛋白携带外源抗原或通过化学耦连接入非蛋白抗原，是疫苗设计的重要构件。
目前，已发现35种病毒的蛋白能形成VLPs[3]，其中，已上市的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)和戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)等三种基因工程疫苗均采用VLPs的疫苗形式[4]。
为了充分去除杂质，特别是避免含有病毒基因，VLPs的制备通常在表达系统外源表达后进行体外组装。
表达系统可分为真核表达系统和原核表达系统。
其中，真核表达系统包括杆状病毒/昆虫细胞表达系统[5, 6]、植物体表达系统[7, 8]、酵母表达系统[9, 10]、哺乳动物细胞表达系统[11]，而原核表达系统主要为大肠杆菌表达系统[12, 13]。
真核表达系统具有复杂的蛋白辅助折叠与后期修饰等功能，因而大部分病毒的衣壳蛋白在真核系统都能形成VLPs。
但是由于真核表达系统常面临培养周期长、成本高、表达量低、难纯化等难题，制约了VLPs疫苗的研发速度。
与真核表达系统相比，大肠杆菌表达系统更早、更广泛地被应用于生物医药领域，并且是公认的高效、低成本、安全性良好的表达系统。
大肠杆菌来源的疫苗产量高、成本低，尤其适合开发面向全世界(特别是多数的发展中国家)的新型疫苗。
但由于颗粒性抗原结构和组装都较为复杂，一般认为在大肠杆菌中的组装效率较低，因此，如何利用大肠杆菌进行颗粒性抗原的表达和组装是当今疫苗界的难题之一[14]。
近几年来，在利用大肠杆菌表达系统制备VLPs的技术取得了一系列突破，据统计，大肠杆菌表达系统可表达35种VLP中的16种，大肠杆菌表达的VLP可由包涵体复性得来，也可利用低温培养的策略获得可溶性的表达，甚至可以同时表达多个结构蛋白进行多层颗粒共组装[15]。
其标志性事件为全球首个戊型肝炎疫苗成功上市，该疫苗是第一种采用了大肠杆菌表达系统的VLPs疫苗[16]。
此外，使用大肠杆菌表达系统的HPV16/18型双价疫苗(宫颈癌疫苗)和李少伟, 等. 大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗· 15 ·HPV6/11型双价疫苗(尖锐湿疣疫苗)均已进入了临床试验阶段。
1 戊型肝炎病毒 VLPs疫苗1.1 戊型肝炎病毒戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)引发的急性肝炎是全球主要的病毒性肝炎之一，症状与甲型肝炎类似，多数呈自限性，但症状更重，病死率更高，特别是孕妇病死率可高达20%[17]。
慢性肝病患者合并戊肝感染易引发肝衰竭，死亡率达70%[18]。
HEV主要通过消化道传播，偶尔可通过输血或垂直[19]途径传播。
与大多数粪-口传播的传染病一样，提供清洁饮用水及加强人畜排泄物的消毒处理是最重要预防戊型肝炎的措施。
然而，这些措施在疫区往往不易及时做到，如果疫情一旦形成，仅凭这些措施也难以迅速消除疫情，接种疫苗是个体防护戊肝的最直接和最有效的手段，也是避免戊肝疫情爆发的有效手段。
由于HEV仅能在人或其他灵长类动物原代肝细胞中进行持续培养，体外大量培养戊肝病毒未能取得成功，无法进行减毒或者灭活疫苗的开发。
因此，基因工程疫苗成为研究的主要思路。
1991年，Tam 等[20]首次报道HEV的全基因序列，揭示HEV基因组为线性单股正链的RNA，全长约为7.2 kb，包含3个开放读码框架(ORF)。
其中，ORF1开始于HEV病毒基因组的5’端，编码1 693个氨基酸多肽，包括病毒复制和蛋白加工所需的非结构蛋白，包括甲基转移酶RNA依赖的RNA 聚合酶(RdRp)、RNA解旋酶、木瓜酶样丝氨酸蛋白酶以及未知功能的X和Y结构域(与rubella病毒相似)[21]。