自制血液质控品

一、自制质控品样本选择

1、红细胞质控品的制备

1.1、选择血液采集时间≤10d的献血者的血液样本A、B、O、AB型各10份。

1.2、同型混合后400g离心5分钟，分离血浆。

1.3、各型混合血浆分别用抗人球卡进行不规则抗体筛查试验，阴性方可用于制备血浆质控品。

1.4、压积红细胞用生理盐水洗涤后，去除血液凝块、衰老红细胞碎片等，加入CPDA保养液,直抗试验检测阴性。

2、血浆质控品的制备

2.1、用生理盐水将选取的血浆质控品进行连续倍比稀释

2.2、与选定的红细胞进行反应，以各型观察到的最后一个2+的稀释倍数为最佳稀释倍数。

2.3、按照最佳稀释倍数向ABO各型混合血浆中分别加入适量AB型血浆进行稀释后备用。

3、Rh(D)阴性红细胞

3.1、选择ABO血型相同的Rh(D)阴性献血者血液样本1-2份混合后，400g离心5min,去除血浆后加等量CPDA保养液混合成Rh(D)阴性红细胞质控品。

4、lgG抗-D血清：商品化lgG抗-D血清用无菌生理盐水进行连续倍比稀释（4），用配置好的1%Rh(D)阳性红细胞悬液和抗人球蛋白卡进行效价测定，以最后一个2+的稀释倍数为最佳稀释倍数，与AB型血

浆混合，配置成lgG抗-D质控血清备用。

5、lgG弱致敏红细胞：取混合后的O型压积红细胞适量（加量通常满足1周使用），加等量上述中所配置的lgG抗-Rh质控血清，37℃孵育30min，洗涤6-8次；末次洗涤后对洗涤液进行抗体残留检测，如有抗体残留仍需洗涤，直到洗涤液无抗体残留；用CPDA保养液将弱致敏红细胞配置成5%悬液，于4℃保存备用1周：如发现溶血或试验结果在非设计强度时，需要新制备。

二、自制质控品验证

1、红细胞验证：从红细胞质控品中取适量红细胞配置成5%红细胞悬液，用试管法按照标准操作规程与抗-A、-B血清进行检测，符合血清学反应格局且凝集强度为4+（见表1）方作为室内质控品使用。

2、血浆验证：从质控品中取各型血浆，用试管法按标准操作规程与ABO血型反定红细胞进行检测，符合血清学反应格局且凝集强度为2+（见表2），方作为室内质控品使用。

3、Rh（D）阴性红细胞验证：取Rh（D）阴性红细胞配置为5%红细胞悬液，与3批不同批次或公司的抗-D血清用抗人球蛋白试验进行确认，证实为阴性方可作为室内质控品使用。

表1 ABO型红细胞血清学反应格局

已知标准血正定型

A型待检红细胞 B型待检红细胞 O型待检红细胞抗-A血清 4+ - -

抗-A血清 - 4+ -

表2 ABO型血浆血清学反应格局

红细胞反定型

A型待检血清 B型待检血清 O型待检血清

AC - 2+ 2+

BC 2+ - 2+

OC - - -

三、质控品分装和保存

通过验证的各型质控品用无菌试管进行分装，每样分装5~6份，并在试管上注明制备日期及保存条件，盖帽后红细胞置4℃保存，血浆置-20℃保存。

四、室内质控的实施

1、每日工作前，取出质控品1份置室温平衡15min，按室内质控方案对实验室项目经行逐项检测，以评价各项结果的可靠性；试验完成后，尽快将红细胞于4℃保存，血浆于-20℃保存。

2、血型鉴定的室内质控：用经过验证的质控品中红细胞、Rh（D）阴性红细胞（分别配置成5%红细胞悬液）、质控血浆等，分别用试管法按照标准操作规程对ABO及Rh（D）血型进行试剂室内质量控制，符合已知血清学反应格局且凝集强度在设计强度时即检测在控（见表3）。

3、交叉配血的室内质控：用AB型混合血浆阴性对照，lgG抗-RhD质控血浆作阳性对照，分别加入5%“O”型RhD阳性红细胞悬液：另取一管加入AB型混合血浆于5%lgG弱致敏红细胞悬液以验证聚凝胺试

剂有效性：用试管法按照标准操作规程进行凝聚胺交叉配血试验，符合已知血清学反应格局且凝集强度在设计强度时即检测在控。

4、不规则抗体筛查的室内质控：用AB型血浆作阴性对照，lgG抗-RhD 阳性血浆作阳性对照，分别于0.8%-1.2%的筛选红细胞悬液，弱致敏红细胞悬液，用抗人球蛋白卡按照标准操作规程进行抗体筛查试验，符合已知血清反应格局且凝集强度在设计强度时即在控（见表4）。

5、质控结果的分析日常工作中实施室内质控时，各项检测结果均符合血清学反应格局且凝集强度为均在设计强度方能视为在控：如出现超过1+凝集强度的差异时，需要重复试验，分析并检查试剂的有效期、试剂与标本的比例、反应温度及时间、离心机的转速计时间、仪器的稳定性：另外，可重新开启1支，已评价本次检测中可能出现的误差：仍不能纠正时，此批次质控品视为失效，需要重新制备并定标。

表3血型鉴定室内质控（IQC）血清学反应格局

正定型反定型

红细胞抗-A标准抗-B标准抗-D标准血浆 A型标准 B型标准 O型标准血清血清血清红细胞红细胞红细胞

A 型 4+ - 4+ A型 - 2+ - B型 - 4+ 4+ B型 2+ - -

O型 - - 4+ O型 2+ 2+ - RH(D)型 - AB型 - - -

表4 不规则抗体筛查IQC血清学反应格局

筛选细胞I 筛选细胞II 筛选细胞III 弱致敏红细胞

AB型血浆 - - - 2+

lgG抗-D 2+ 2+ 2+ 2+

质控血浆