植物组织培养实验-2013

尖指较大的茎尖（如几mm到几十mm）及侧芽。
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实验三 实验材料与用具
实验材料：大蒜
大蒜的茎尖培养
试剂：0.1％升汞、70％酒精、无菌水等。 器具：镊子、手术刀、剪刀、酒精灯、棉球、三角瓶、火柴、 培养皿(无菌)、无菌滤纸、超净工作台、体视显微镜等。
在叶片上的分布、密度、形状、大小以及开闭情况等，可影响
叶片扩散阻力而对植物光合与蒸腾作用产生影响。
实验材料与仪器
植物材料：葡萄试管苗 仪器：显微镜
药品：酒精番红染液
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实验五
实验内容
试管苗气孔观察
（1）轻轻的剪取试管苗的叶片，将正面贴在透明胶带纸上；
在搪瓷盆或烧杯中加入计划配制培养基量（L）的80％的蒸馏水→母液抽取(大量20ml、钙
盐5ml、微量5ml、铁盐5ml、有机5ml）→加入蔗糖→ 加入相应的激素→pH 值调整→定容→熬
制→定容→分装→封口→灭菌→平放冷却。
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实验一
MS培养基的配制与灭菌
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实验四 烟草叶片再生
作业
1 烟草叶片再生的影响因素。 2 植物组织培养中不定芽的发生的方式有哪些？
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实验五
实验目的
试管苗气孔观察
掌握透明胶带法观察试管苗气孔的方法。
实验原理
气孔是植物叶片与大气间进行气体交换的主要通道，气孔
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实验一
作业
MS培养基的配制与灭菌
1 培养基灭菌时为什么要严格控制时间？
2 配制培养基时应该注意的事项有哪些？
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实验二 实验目的
外植体的消毒与接种
掌握外植体的表面消毒方法；掌握接种方 法与无菌操作技术；识别培养物的污染类型及 褐化现象。
编号 1 2 3 合计
主要污染菌种
备注
占接种外植体数(%)
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实验二 作业
外植体的消毒与接种
Βιβλιοθήκη Baidu
1 外植体污染的主要来源有哪些，如何防止？ 2 无菌操作的注意事项有哪些？
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实验三 实验目的
大蒜的茎尖培养
叶片，用自来水冲洗干净。
在超净工作台上，在烧杯中加入 70％酒精消毒20s，迅 速倒出酒精；0.1%升汞消毒5min; 用无菌水冲洗3~5次。准 备接种。
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实验二 实验内容
外植体的消毒与接种
无菌操作与外植体接种
1．在超净工作台上摆好酒精灯，用具、配制好的培养基等。 2．打开无菌室(包括缓冲间)紫外灯灭菌20min，超净工作台也要提前15~20min开机过滤空气， 然后，可以用70％酒精喷雾除尘。 3．操作前先用70％酒精球把手(特别是指尖)、工作台面及放入台面上的所有操作用具、器皿 等都擦一遍，以清除尘粒。点燃酒精灯，把操作用的器械(镊子、剪刀)再放在酒精灯上烧灼灭菌。 4．轻轻打开封口膜，将瓶口迅速在火焰上灼热灭菌(瓶口转动1圈)，然后轻轻放在工作台上。 5．在酒精灯上方，左手握住三角瓶，一般使瓶倒倾斜，右手用镊子将材料均匀地摆放到培养 基表面按原方向插入培养基，使腋芽露在培养基之上，每瓶放1个茎段。将瓶口再在酒精灯火焰上 转动烧一圈，并在火焰旁盖封口，贴标签，注明姓名，标明时间和材料名称。整理好接种室（箱） 的台面，搞好清洁卫生，超净工作台使用完毕，关闭电源，最后一起放入培养室。 6．为了防止交叉感染，工具要用一次烧灼灭菌一次。在接种过程中严禁讲话、咳嗽和走动。
试管苗气孔观察
1 在显微镜底下观察气孔，并画出两个视野的图。
2 交两张葡萄试管苗气孔观察的片子。
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外植体选取五叶地锦
• MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L
• MS+6-BA 1mg/L+IAA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L
掌握植物茎尖的剥离方法，熟悉茎尖培养的培养基以及培
养条件，并了解影响茎尖培养的其他因素。
实验原理
茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无 菌培养。这是组织培养中用得最多的一个取材部位。茎尖培养根 据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。微茎 尖指带有1～2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。普通茎
种后的材料置于培养箱中进行培养，三天开始统计污染率，30天统计茎尖的
生长情况。
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实验三 作业
大蒜的茎尖培养
1 画出大蒜茎尖图。
2 影响茎尖培养的因素有哪些？
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实验四 烟草叶片再生 实验目的
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实验四 烟草叶片再生
实验材料
植物材料：烟草试管苗叶片
培养基： MS+6-BA 0.5mg/L +IBA 0.1mg/L
实验内容
选择烟草无菌苗的叶片作为外植体。切取叶盘子，将切下的外植体接种于
不定芽分化培养基上，诱导不定芽分化，每平皿接种6块外植体，子叶正面向上。 15天后开始观察和统计烟草外植体上不定芽和愈伤组织分化的结果。
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实验二
实验内容
观察统计
外植体的消毒与接种
在外植体接种后1周和2周分别观察外植体的存活率、污染率、褐化率。观察 污染物的种类和特点。 污染率＝ 污染的外植体数 / 接种的总外植体数×100％
接种外植 体（个） 存活数 （个） 褐化数 （个） 污染数 （个）
棉线绳、高压灭菌锅。
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实验一
实验内容
培养基配制：
MS培养基的配制与灭菌
初代培养基(3L)：MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L 大蒜茎尖培养培养基 (2L) ：1/2 MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L+CH 200mg/L 叶片再生培养基(1 L) ：MS+6-BA 1mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6g/L
实验材料：五叶地锦带腋芽的茎段。
试剂：0.1％升汞、70％酒精、84消毒液、无菌水等。
器具：镊子、剪刀、酒精灯、三角瓶、无菌滤纸、超净
工作台。
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实验二
实验内容
外植体的消毒与接种
培养材料的表面消毒
从田间选取五叶地锦生长健壮无病虫害的新梢，去除
实验原理
生长在自然界中的各种植物表面都沾有各种各样的微生物或真
菌孢子，一旦带进培养基，它们就会迅速滋长，从而使实验前功尽 弃。消毒的一个基本原则既要把材料表面上附着的微生物杀死，又 不伤害材料内部的组织、细胞。
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实验二
外植体的消毒与接种
实验材料、试剂及器具
（2）对折胶带纸使试管苗的背面与胶带纸接触，平展胶带纸
使试管苗背面表皮的气孔印迹留在胶带纸上；
（3）从胶带纸上剪取试管苗印迹的部分贴在载玻片上，在载 玻片上滴一滴水和一滴染料； （4）将盖玻片盖好，在显微镜底下观察气孔，拍照记录。
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实验五
作业
长的需要，将培养基的pH值调节在一定范围内。
为防微生物污染，培养基配制好后需及时进行灭菌处理，以 确保无菌操作的顺利进行。
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实验一
药品与仪器
MS培养基的配制与灭菌
药品：蔗糖、琼脂、1mol/LHCl、1mol/L NaOH、 MS培养基的母液、植物生长调节物质母液。 仪器：电子天平、搪瓷盆、烧杯、量筒、药勺、 玻璃棒、移液枪、酸度计、三角瓶(100ml)、封口膜、
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实验三
实验内容
大蒜的茎尖培养
茎尖的剥取与观察 挑选大蒜杂菌污染少，生长嫩的蒜瓣；
在体视显微镜下剥取大蒜的茎尖，将观察到的茎尖的剖面图画
在作业纸上，待技术熟练后可进行接种操作。
外植体消毒和接种
在进行茎尖培养时对所有用到的器具都要进行
表面消毒，对显微镜应进行表面擦拭后在紫外灯下照射20min，植物材料去除 鳞片后置于流水冲洗2～4小时，再在75%的酒精中处理30秒，然后在0.1%的升 汞中浸2～3分钟，最后用无菌水冲洗数次，备用。 将消毒好的外植体在显微镜下剥取茎尖，动作要敏捷，• 切随接。将接 随
实验内容
培养基灭菌：
打开灭菌锅盖→将待灭菌的培养基、蒸馏水、滤纸等其它 物品放入灭菌锅筒内→盖好锅盖，按相对方向拧紧螺旋使锅密
闭 → 关 闭 放 气 阀 ， 待 压 力 上 升 到 1.1~1.2 kg ／ cm2 ， 温 度 为
12l℃时使其维持20min →切断热源，并缓慢放出蒸汽，待压力
降至零时，打开盖子，取出灭菌物品→培养基平放在工作台上， 使其自然冷却凝固。
园艺植物组织培养实验
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实验一
实验目的
MS培养基的配制与灭菌
掌握固体培养基的基本配制方法和程序； 掌握培养基灭菌的方法及操作要求。
实验原理
培养基含有水份、碳水化合物、无机盐外，还有各种必要的 维生素、有机附加物及生长调节物质，并根据植物细胞或组织生
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掌握烟草叶片不定芽诱导再生的适宜培养基的配
制以及不定芽的培养方式，熟悉设计性实验的开展环
节，并探讨影响其不定芽产生的影响因素。
实验原理
长期以来，体细胞的全能性一直被用于植物的营养繁殖，在自然界，从植 物分离出根、茎、叶等一部分器官，在切口处组织受到了损伤，但这些受伤的 部位往往会产生新的器官，• 出不定芽和不定根，从而成为新的完整的植株。 长
• MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L • MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.1mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L
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大蒜茎尖培养
1/2 MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L+CH 200mg/L 1/2 MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L+CH 200mg/L 1/2 MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L+CH 200mg/L 1/2 MS+6-BA 1mg/L+NAA 1.0mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂6g/L+CH 200mg/L