体外受精与胚胎培养

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• 精子入卵的过程
• 受精过程中涉及的反应
• 1.顶体反应：精子质膜与顶体外膜之间发生点状融合，并释放出 顶体酶的过程。顶体酶有很强的消化和水解蛋白的作用，从而使 精子顺利的穿过透明带。 • 2.皮质反应：精子接触卵黄膜后，皮质颗粒膜与卵黄膜发生融合， 皮质颗粒中物质被释放到卵黄膜与透明代之间的卵周隙中。皮质 反应引发了以下两个子反应（防止多精入卵机理）：透明带反应： 皮质颗粒中的类胰蛋白酶作用于透明带，使透明带发生改变，从 而是其它精子不能再穿过他。卵质膜反应：由于皮质反应结果， 卵质膜补充了皮质颗粒膜而发生了重组，重组后的卵黄膜可以防 止其余精子入卵。
• 其中0型代表正常合子, 1~5型代表各种不规则形态的合子， 且0型合子的临床妊娠率高于非0型合子的临床妊娠率。
异常受精的类型
• 1.单原核 • 2.未见原核 • 3.多原核（多精受精） • 通常异常受精的核子很难发育到囊胚，经常在卵裂期发生阻滞。
卵裂及囊胚形成
• 卵裂：受精卵经过多次连续迅速的细胞分裂，形成许多小细胞的 发育过程。每次卵裂产生的子细胞称卵裂球。 • 卵裂的主要特点：细胞周期短，细胞分裂间期（G1期）非常短甚 至没有；每次卵裂，核物质重新合成增长，细胞质没有增长，但 其理化性质发生变化，因而卵裂球几乎不生长即迅速地进行下次 分裂，卵裂球体积越来越小，一旦核质比例达到平衡，细胞分裂 速度开始减慢。卵裂后形成的大量小细胞，是便于以后形态发生 中细胞的重排、胚层和器官原基的形成和胚体体形的塑造。
• 3、胚胎中碎片的多少
• 胚胎的碎片是胚胎发育过程中产生的“废物”，一般认为与胚胎的质量及发 育潜能有关。通常认为碎片体积少于胚胎体积5%的胚胎是最美的，也称为 优质胚胎，25%以下是可以用的，称为有效胚胎，碎片体积大于50%的胚胎 一般会被淘汰。胚胎经过三天的发育，部分用于移植或冷冻。
• 胚胎发育是一个复杂的动态过程, 应结合从取卵到移植各时期的 胚胎评分情况, 建立连续的胚胎评分体系, 以选出合适的胚胎进行 移植。
哺乳动物卵裂的特点
• (1)哺乳动物旋转型全卵裂：第1次为经 线裂，其后的2个卵裂球各采不同的卵裂 方式。 • (2)早期卵裂球的卵裂不同步，可产生 奇数细胞的胚胎。
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(3)卵裂速度缓慢。
D3（8细胞）胚胎的质量评估
• 1、胚胎发育速度 • 2、胚胎中卵裂球的形态
• 卵裂球的形态是指胚胎中每个细胞的大小是否一致、形状是否相似。优先挑 选大小和形状一致差异非常小的胚胎，这些胚胎受孕的几率较大。
• 按照此方法评分, Z1、Z2级合子通常会发育为较优质的胚胎, 移植此类胚胎会得到 较高的妊娠率; Z3级合子发育为低质胚胎, 种植潜力低下; Z4级合子通常预示之后 的胚胎染色体异常, 一般不用于移植。
• 2.Tesarik提出的“原核评分系统，其根据原核形态与胚胎发育的相 关性将合子分为6型
卵裂的过程
• 卵裂率容易受到培养环境的影响, 一般 认为在一个稳定的培养条件下, 受精后 第1日应达到2细胞期, 第2日应达到4~6 细胞期, 第3日达到7~9-细胞期，第5日 形成囊胚。发育迟缓或生长过快的胚 胎种植率通常很低。我们通常采用第35天的胚胎进行移植。
• 卵裂类型
• 1.根据卵裂球的数目是否按几何基数增加，分为同时卵裂和异时 卵裂。哺乳动物（包括人类）的受精卵从一开始就是异时卵裂。 异时卵裂导致出现了我们常见的3细胞、5细胞、7细胞胚胎。 • 2.根据卵黄的含量和分布，分为等分全裂、不等全裂以及不全裂。 由于哺乳动物几乎不含有卵黄，其卵裂方式为等分全裂。
体外受精与胚胎培养
• 受精的概念
• 受精是两性配子（卵母细胞和精子）相融合形成一个新的细胞— 合子的过程。它标志着胚胎发育的开始，是一个具有双亲遗传特 征的新生命的起点。
• 受精的过程
• 1.精子穿过卵母细胞外层的颗粒细胞 • 2.精子结合并穿透卵母细胞的透明带 • 3.精卵融合 • 4.卵子激活 • 5.精子激活 • 6.原核形成
• 通过记录胚胎的细胞数，胚胎细胞球的均匀程度，胚胎碎片，以 及胚胎是否有小空泡、多核等指标对胚胎进行分级。可将8细胞 胚胎分为4级：
• I级胚胎：细胞大小均等，透亮，胞质无颗粒，碎 片0%-5%。
• II级胚胎：细胞大小略不均，胞质有颗粒现象，碎 片6%-20%。 • III级胚胎：细胞大小明显不均，胞质有明显颗粒现 象，碎片21%-50%。 • IV级胚胎：细胞大小严重不均，胞质有严重颗粒 现象，碎片>50%。
• 原核期胚胎的质量评估
• 体外授精后16~18 h, 此时合子处于原核期
• 1.Scott 提出的“合子评分系统”，其根据核仁数目和分布以及原核 形态将其分为4级
• Z1:2PN并列相连, 大小一致; 核仁大小、数目相同, 线 性排列于原核连接处; 核仁数量为3~7个。
• Z2: 2PN并列相连, 大小一致; 核仁大小、数目相同, 分 散排列于原核中; 核仁数量为3~7个。 • Z3: 2PN并列相连, 大小一致; 核仁数目相同或不同, 大 小均匀或不均匀; 其中一个原核中核仁呈线性排列于 原核连接处, 而另一个原核中, 核仁分散不规则; 核仁 数量为3~7个。 • Z4: PN大小不等或分离。
囊胚发育的评级
• 根据囊胚腔的大小和是否孵化,将囊胚的发育分为6个级别：
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• 根据内细胞团（ICM）和滋养层细胞（TE）的细胞数量和紧密程 度，各分为A、B、C三个级别：
囊胚培养具有筛选胚胎的作用，有助于提高临 床妊娠率。所谓囊胚培养，就是延长胚胎培养 时间，它通常形成于卵子受精后的第5-7天，过 程中，一些劣质甚至有缺陷的胚胎会被自然淘 汰，因此，相对优质的胚胎就会脱颖而出，长 成囊胚。
• 0. 每个原核核仁数目大于3个，两个原核核仁数目相差小 于3，核仁在原核内的排列方式一样 • 1. 两个原核核仁数目相差大于3 • 2. 两个原核中至少有一个原核核仁数目小于7，且核仁散 在排列 • 3. 两个原核中至少有一个核仁数目大于7，且核仁均为极 性排列 • 4. 两个原核中至少有一个核仁数目小于3 • 5. 两个原核核仁排列方式不一致