乳酸脱氢酶细胞毒性检测
乳酸脱氢酶360
乳酸脱氢酶360乳酸脱氢酶360（LactateDehydrogenase360,称LDH360）是一种专用于检测人体血液中乳酸脱氢酶的高灵敏检测试剂盒。
乳酸脱氢酶是一种多功能酶，可以在血液、组织和机体细胞中发挥多种作用。
它可以在体内合成或分解乳酸，参与细胞的建筑料的交换，还可以保护机体免受环境因素的破坏，对抗机体内毒素的毒性作用，参与血液循环中的氧气运输，以及调节细胞内磷酸脱氢这项重要反应。
LDH 360能够实现较高水平的检测灵敏度和准确性，为临床用户提供更加精确的诊断结果。
LDH 360基于四种不同活性的乳酸脱氢酶，即乳酸脱氢酶（LDH1）、脱氢葡萄糖醛酸酶（LDH2）、脱氢葡萄糖醛酸脱氢酶（LDH3）和脱氢羟肟醛酸脱氢酶（LDH4），以有效提升LDH 360的检测准确度。
LDH 360的原理是通过检测血液中的乳酸脱氢酶活性的变化，从而诊断患者的疾病情况，预测疾病的发展趋势。
乳酸脱氢酶是指在体内进行乳酸分解反应的酶，乳酸脱氢酶的活性可明显受到疾病的影响。
正常患者的乳酸脱氢酶活性一般都较低，但进行中某些疾病，活性会显著升高，比如肝病、心肌炎、糖尿病或肿瘤等。
因此，通过测定乳酸脱氢酶活性，就可以预测疾病的发生和发展情况。
LDH 360可以检测血液中的乳酸脱氢酶活性和血清中的乳酸脱氢酶含量，是一种高效，快速，精准的检测方法。
LDH 360括3个重要部分：一是LDH检测液，二是检测试剂盒，三是检测分析仪。
检测液由LDH 1、LDH 2、LDH 3和LDH 4组成，LDH1、LDH2、LDH3和LDH4检测试剂盒中包含各种抗体，可以检测样本中各个LDH基因的含量。
检测分析仪则可以用来测定检测试剂盒中抗体的反应结果，也可以读取血液中乳酸脱氢酶的活性水平，最终测定出患者的乳酸脱氢酶含量，以及预测疾病的发展趋势。
LDH 360的优势在于可以非常有效地检测血液中的乳酸脱氢酶活性，以更快的速度和更准确的诊断结果为临床用户提供服务。
两种膨润土细胞毒性的体外试验研究
Ｍｅｉ—ｂｉａｎ，ＬＩ Ｘｉａｏ－ｘｕｅ。ＹＡＮ Ｓｏｎｇ－ｘｕｅ，ＣＨＥＮ
ｏｆ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。Ｍｅｄｉｃｄ
Ｓｃｈｏｏｌ，ｚ呐咄Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｕｇｚｈｏｕ，ｇ，ｅｊｉｏａｇ
ｈ。
结果所有剂量２种膨润土的溶血率均明显高于对照组，差异有统计学意义（尸℃Ｏ．０５）。ＣＣＫ．８试验结 果表明，酸性土和有机土剂量分别≥３０、２０斗ｓ／ｍｉ时，细胞活性明显低于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０１）；ＮＲＵ试验和ＬＤＨ试验出现类似结果，并均呈剂量—效应关系。１８０脚ｒ／ｍＪ酸性土组与１２０、１８０¨固伽 有机土组的早期细胞凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ如．０５）。５个体外试验的结果均表
ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｍｉｎｅｒａｌｓ；Ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ；Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ；Ｉｎ ｖｉｔｒｏ
膨润土是一种广泛用于铸造、建筑、环境工程
（ＩＡＲＣ）列为对人致癌１３１。但是，至今膨润土细胞毒性 研究报道不多。最近Ｇｅｈ等１４１发现，膨润土可诱发细 胞凋亡及坏死，且具有潜在诱发细胞膜破裂的能 力。此外，不同膨润土对细胞的损伤作用可能不同阳。
等领域的非金属矿物质，我国是开采大国，浙江是
主要产地。已知膨润土不但可诱发尘肺【ｌ－２１，而且膨 润土成分之一晶体硅已被国际癌症研究中心
乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。
动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B 两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。
2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。
3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。
第一类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。
ldh法和mtt法
ldh法和mtt法一、介绍在细胞实验研究中，细胞增殖和生长的检测是必不可少的。
而常用的细胞增殖和生长检测方法有许多种，其中较为常见的是LDH法和MTT法。
这两种方法都是通过细胞的代谢和细胞的状态来反映细胞的增殖和生长情况的。
二、LDH法LDH法全称为乳酸脱氢酶检测法，是利用乳酸脱氢酶的氧化还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法基于细胞膜通透性的变化，当细胞膜发生损伤或破裂时，细胞内的乳酸脱氢酶会释放到培养基中。
而乳酸脱氢酶检测法就是通过检测培养基中乳酸脱氢酶含量的变化来判断细胞是否发生了损伤或破裂，以此来推测细胞的增殖和生长情况。
三、MTT法MTT法全称为四氮唑盐（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基-二氮杂烷）法，是利用MTT盐的还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法的原理是将MTT盐加入细胞培养液中，MTT盐通过细胞中的酶反应还原成具有紫色的甲醛样代谢产物。
而这个代谢产物则会在细胞中不断积累，从而使细胞颜色越来越深。
最后，通过检测细胞的颜色深浅来推测细胞的增殖和生长情况。
四、LDH法和MTT法的比较1.优点与缺点LDH法的优点是可以反映细胞的状态和增殖情况，适用于不同种类的细胞；缺点是需要时间较长，对细胞损伤有一定影响。
而MTT法的优点是简单易行，可作为高通量筛选的快速方法；缺点则是对细胞形态和生长状态的要求较高，对于一些较小或幼稚的细胞不适用。
2.应用范围LDH法和MTT法都常用于评估各种细胞因素（如生长因子、激素、细胞毒性物质等）对细胞生长的影响；同时也受到在细胞增殖实验和细胞毒性实验中的广泛应用。
此外，LDH法和MTT法也可应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
3.实验难度和操作技巧LDH法和MTT法均需要一定的实验基础和耐心，但LDH法一般操作难度稍高些。
五、总结细胞增殖和生长检测方法是细胞实验研究中非常重要的组成部分。
LDH法和MTT法是两种常用的检测方法，不仅能反映细胞的增殖和生长情况，也广泛应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
细胞膜毒性检测方法概括
首先，可进行细胞的毒性检测，通过台盼蓝拒染法检测细胞存活率变化，MTT或WST法检测细胞的活力。
其次，细胞功能的正常有赖于膜结构的完整及膜特性的保持，所以通过以下方法检测某种物质对细胞膜的毒性1.细胞膜通透性的变化：乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于生物细胞内，是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。
当细胞受损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可泄漏至细胞外介质中。
泄漏出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I 变成还原型辅酶I，通过测定NADH在340 nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力，从而得到细胞膜是否损伤的结果。
国外有通过试剂盒检测腺苷酸激酶的释放以及通过共聚焦激光扫描显微镜检测碘化丙啶的吸收量。
检测膜胆固醇采用邻苯二甲醛比色法。
测定波长为510 nm，按照试剂盒说明检测。
2.可通过透射电镜观察细胞膜结构及以PI为荧光染料检测核膜完整性，现在更有利用原子力学显微镜（AFM）观察细胞的形态结构及比较细胞表面粘弹力的变化，比较药物对细胞膜作用前后的膜表面结构变化。
利用AFM的力曲线得到能表明机械性能参数的粘弹力来分析比较未作用药和作用药后的细胞，一般，作用药组细胞其弹性小于未作用药细胞。
3.细胞膜表面整合素的变化：整合素是一类广泛存在于细胞表面的糖蛋白，由α和β两个亚基以非共价键连接的异二聚体，目前发现由19种α亚基和8种β亚基以不同方式组合形成24种整合素亚型。
用流式细胞仪检测细胞表面整合素(integrinpl)的表达(平均荧光强度）4.Western blot检测细胞骨架蛋白F-actin和Tubulin-β细胞骨架是由蛋白质纤维构成的胞内网络，相当于细胞的骨骼，支持着整个细胞，它紧贴在细胞膜下，赋予细胞一定的形状,对细胞及细胞器的运动也起着至关重要的作用。
应用流式细胞仪检测细胞内F-actin和tubulin-β蛋白表达的情况（通过平均荧光强度来体现）。
乳酸脱氢酶活力测定注意事项
乳酸脱氢酶活力测定注意事项乳酸脱氢酶（LDH）活力测定是一种用于评估细胞损伤或组织损伤的常见实验方法。
以下是进行乳酸脱氢酶活力测定时的一些建议和注意事项：1.样品处理：样品的获取和处理对于测定结果至关重要。
确保样品的采集和处理过程中避免引入细菌、污染物或其他可能影响测定结果的因素。
2.温度控制：乳酸脱氢酶活性受温度影响较大，因此在整个实验过程中要保持恒定的温度。
通常，室温或37摄氏度是常用的温度条件。
3.反应时间：控制反应时间以确保测定的准确性。
一般来说，设定一个适当的反应时间，过短或过长的反应时间都可能影响测定结果。
4.底物浓度：底物（如乳酸）的浓度也会影响乳酸脱氢酶活力的测定。
确保底物的浓度在合适的范围内，并在测定前进行标定。
5.pH值：乳酸脱氢酶活性对pH值敏感，因此保持反应体系的适当pH值是必要的。
使用适当的缓冲液来调整和维持pH。
6.试剂质量：使用高质量的试剂，特别是酶的提取液和底物。
使用过期或质量不佳的试剂可能导致结果不准确。
7.标准曲线：在进行实验之前，制备标准曲线以用于计算未知样品的乳酸脱氢酶活性。
确保标准曲线的准确性和可重复性。
8.控制组：始终包括一个阴性对照组和一个阳性对照组，以确保测定的准确性和可靠性。
9.避免光照：避免样品或试剂受到直接阳光或强光的照射，因为光照可能影响测定结果。
10.记录实验条件：记录实验的所有条件，包括温度、时间、底物浓度、pH 值等。
这有助于排除实验中的潜在变量，并提高结果的可重复性。
在进行乳酸脱氢酶活力测定时，严格遵循实验方法、仪器使用说明和相关安全操作规程，以确保实验的准确性和可靠性。
在有需要的情况下，最好由经验丰富的研究人员进行实验，或在需要时咨询相关专业人士的建议。
LDH检测
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：王政, 田菲菲, 刘丁, 吕凤林【关键词】 T淋巴细胞生物杀伤细胞毒性细胞介导的免疫效应在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥效应和自身免疫性疾病发生机制中发挥重要作用, 主要效应细胞之一为细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphoclyte, CTL)。
近年来, 基于CTL特异性表位的多肽疫苗已经成为研究热点之一, CTL的活化及对靶细胞的杀伤效应成为衡量疫苗质量的重要因素之一。
目前已经报道许多新的评价CTL活性及其杀伤效应的方法, 现就此做一综述。
1 单个细胞水平测定CTL活性目前一般常用的有产生细胞因子的细胞记数法和有限稀释分析法(LDA)。
活化的T淋巴细胞可分泌一些功能性的细胞因子, 如IL2、IFNγ、TNFα等, 由于分泌不同种类细胞因子可以区分不同免疫功能的记忆细胞或效应细胞, 这样可以在体外评价外周血单个核细胞（PBMC）中抗原特异性T细胞的数量和功能状态。
目前常用的检测细胞因子的方法如ELISA、ELISPOT、PCR/RT PCR及细胞内因子检测等。
1.1 有限稀释分析法(Limiting dilution analysis, LDA) 该方法是迄今应用较广泛的定量分析系统［1］。
LDA 法使我们能够详细了解免疫反应动力学和记忆CTL(Memory CTL, mCTL) 细胞亚群的细胞周期［2］, 也是对pCTL和mCTL亚群细胞表面的激活标志物进行研究的良好方法。
但此方法也存在缺点, 主要是: (1)在LDA条件下, 深入刺激会使效应CTL(eCTL)细胞加快凋亡［3］, 使CTL活性测定值变动较大, 对eCTL细胞数量不能测定或测定值偏低。
(2)实验较繁琐, 因为在实验之前, 首先需要将淋巴细胞表面表达的CD分子, 如CD44或CD62L进行染色, 再用FACS法分类筛选, 然后在LDA条件下培养6 d; 这样就会造成T细胞数量损失, 特别是在活化状态进行筛选和分离时。
乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产
乳酸脱氢酶（LDH）释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途乳酸脱氢酶（LDH）释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过酶联连续反应系统检测由于细胞损伤导致的细胞内稳定的乳酸脱氢酶释放到细胞外，使四唑盐染料碘硝基氯化四氮唑（INT）还原为红色甲臜（farmazan），即比色法定量测定酶活性，以评价活体细胞繁殖的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于各种药物、化学、环境因子和营养因子处理的贴壁或悬浮生长中的动物或人体细胞。
替代传统的同位素[51 Cr]释放检测的最佳选择。
产品严格无菌，即到即用，简捷敏感，性能稳定，显色清晰，检测准确，重复性好。
技术背景细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的损害或完全裂解导致细胞浆内的酶释放外泄到培养液里，其中包括活性稳定的乳酸脱氢酶。
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）释放法的测定是基于在乳酸脱氢酶的作用下，还原NAD+反应生成的NADH，再与氧化型2-（4-碘苯）-3-（4-硝基苯）-5-苯四唑（Iodonitrotetrazolium；INT）在硫辛酰胺脱氢酶（diaphorase）的催化下反应生成红色生色产物甲臜（formazan），在490nm波长下产生吸收峰，从而确定释放的乳酸脱氢酶的活性，作为细胞膜完整性的标志：吸光值与细胞死亡或毒性程度成线性正相关。
酶联连续反应系统为：lactate dehydrogenaseNAD+ + Lactate → Pyruvate + NADHdiaphoraseNADH + INT → NAD++ Formazan（red）产品内容裂解液（Reagent A）1毫升补充液（Reagent B）1毫升反应液（Reagent C）5毫升显色液（Reagent D）1毫升终止液（Reagent E）1毫升标准液（Reagent F）20微升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里，反应液（Reagent C）和显色液（Reagent D）避免光照；有效保证6月用户自备96孔细胞培养板：用于细胞操作的容器细胞培养箱：用于孵育反应孔板离心机：用于沉淀细胞酶标仪：用于定量检测染色后的细胞实验步骤一、贴壁细胞检测1．准备96孔细胞培养板的待测细胞（每孔100微升）：包括未处理的对照细胞（样品对照孔），未处理的后续裂解的细胞（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞（处理样品孔），并做好标记（细胞密度为每孔2 X 103至2 X 104细胞）2．到规定的检测时间点前1小时，从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板（注意：确保细胞培养液维持在100微升容量）3．加入10微升裂解液（Reagent A）到未处理的后续裂解的细胞孔里（样品最大酶活性对照孔）4．同时加入10微升补充液（Reagent B）到其余所有检测孔里5．放回湿润的细胞培养箱里，继续培养1小时，即规定检测时间6．从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板7．放进孔板离心机离心10分钟，速度为250g8．分别小心移取50微升上清液到新的96孔板的相应孔里，避免触摸细胞颗粒，同时注意做好标记9．分别加入50微升反应液（Reagent C）（注意：使用前，须混匀）10．分别加入10微升显色液（Reagent D）11．摇动96孔板混匀12．在室温下孵育30分钟，避免光照13．（选择步骤）分别加入10微升终止液（Reagent E）14．即刻放进酶标仪里测读：波长490nm15．计算处理样品实际吸光读数：处理样品孔吸光读数－样品对照孔吸光读数16．计算样品细胞最大酶活性的实际吸光读数：样品最大酶活性对照孔吸光读数－样品对照孔吸光读数17．计算细胞毒性或死亡率（％）：（处理样品实际吸光读数÷样品细胞最大酶活性的实际吸光读数）X 10018．或绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度；据此计算其LD50二、悬浮细胞检测1．准备96孔细胞培养板的待测悬浮细胞（每孔100微升）：包括未处理的对照细胞（样品对照孔），未处理的后续裂解的细胞（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞（处理样品孔），并做好标记（细胞密度为每孔5 X 103至5 X 104细胞）2．到规定的检测时间点前1小时，从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板（注意：确保细胞培养液维持在100微升容量）3．加入10微升裂解液（Reagent A）到未处理的后续裂解的细胞孔里（样品最大酶活性对照孔）4．同时加入10微升补充液（Reagent B）到其余所有检测孔里5．放回湿润的细胞培养箱里，继续培养1小时，即规定检测时间6．从湿润的细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板7．放进孔板离心机离心10分钟，速度为250g8．分别小心移取50微升上清液到新的96孔板的相应孔里，避免触摸细胞颗粒，同时注意做好标记9．分别加入50微升反应液（Reagent C）（注意：使用前，须混匀）10．分别加入10微升显色液（Reagent D）11．摇动96孔板混匀12．在30℃温度下孵育30分钟，避免光照13．（选择步骤）分别加入10微升终止液（Reagent E）14．即刻放进酶标仪里测读：波长490nm15．计算处理样品实际吸光读数：处理样品孔吸光读数－样品对照孔吸光读数16．计算样品细胞最大酶活性的实际吸光读数：样品最大酶活性对照孔吸光读数－样品对照孔吸光读数）17．计算细胞毒性或死亡率（％）：（处理样品实际吸光读数÷样品细胞最大酶活性的实际吸光读数）X 10018．或绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为实际吸光读数（A）；横坐标（X轴）为细胞数或时间点或药物浓度；据此计算其LD50注意事项1．本产品为100次（1个96孔板）操作2．操作时须戴手套3．整个操作须无菌操作4．建议每个样品安排3个孔，即重复3次，计算时取其平均值5．检测体系相应增加，试剂用量按比例相应增加：例如200微升检测体系，试剂用量增加1倍6．每孔中的培养液需100微升，避免使用周边培养孔（常常液体蒸发而减少）7．系统测试，可以加入2至5微升标准液（Reagent G）到50微升无细胞的细胞培养液里，然后按照说明书加入反应液（Reagent C）和显色液（Reagent D）即可8．细胞裂解效果不佳，可以使用20微升裂解液（Reagent A）处理9．孵育时，须避光10．染色完成后，建议即刻检测，最迟不得超过1小时11．细胞培养和处理时，避免使用草酸（OXALATE），草氨酸（OXAMATE）和EDTA，否则影响检测的准确性12．血清含有乳酸脱氢酶，建议使用浓度不要超过1％13．细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶14．酚红会干扰检测15．样品最大酶活性对照孔或最大OD吸光读数与细胞裂解程度密切相关16．如果用户没有孔板离心机，则移取上清液时格外小心17．如果用户没有匹配的波长，可以使用波长470nm至570nm之间的任一波长替代18．本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
细胞毒性检测方法总结
细胞毒性检测方法总结！细胞毒性(cytotoxic）是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。
有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。
细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化,然后通过酶标仪进行检测一。
LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等细胞增殖能力分析试剂原理:正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质（如 MTT、XTT、WST-1等）还原为紫色的结晶状的物质，沉积在细胞周围，然后通过酶标仪读取OD值，从而检测到细胞增值状态优点：1）快速:96孔培养板形式，可进行高通量检测。
2）灵活：可直接通过显微镜观察，也可通过酶标仪进行定量检测。
二.荧光素发光法细胞生存能力检测原理：腺苷酸激酶（AK）存在于所有真核和原核细胞的胞浆中,AK具有激活ADP生成ATP。
当细胞受损后,细胞膜发生破损，AK会释放到培养上清中。
该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光，通过化学发光仪可以定量进行检测。
特点： 1）简单、快速。
2）板式检测，可进行高通量。
三。
LDH法细胞毒性检测原理：LDH(乳酸脱氢酶)是一种稳定的蛋白质，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应形成紫色的结晶物质，可通过500nm酶标仪进行检测。
通过检测细胞培养上清中LDH的活性,可判断细胞受损的程度特点：1)方法简单，安全，不使用放射性物质2）可进行高通量检测。
用于药物筛选的细胞毒性测定方法总结
用于药物筛选的细胞毒性测定方法总结简介药物筛选是新药研发过程中的重要环节之一。
细胞毒性测定方法是评估药物候选的安全性和毒性的常用手段。
本文档总结了常见的用于药物筛选的细胞毒性测定方法，并对其原理和应用进行了简要介绍。
细胞毒性测定方法1. MTT法MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）法是一种常用的细胞毒性测定方法。
该方法通过测定细胞内还原MTT为紫色形成的甲基蓝晶体的量来评估细胞的生存率。
MTT法简便、快速，适用于评估化学物质对细胞的毒性。
2. SRB法SRB（sulforhodamine B）法也是一种常见的细胞毒性测定方法。
该方法利用SRB染色与细胞蛋白质结合来评估细胞的生存率。
SRB 法具有操作简便、结果稳定的特点，广泛应用于药物筛选领域。
3. LDH法LDH（lactate dehydrogenase）法是衡量细胞膜完整性的常用方法之一。
该方法通过测定培养上清液中乳酸脱氢酶的活性来评估细胞膜的破坏程度。
LDH法对细胞毒性的灵敏度高，适用于评估药物的细胞毒性。
4. ATP酶法ATP酶法是通过测定细胞内ATP酶的活性来评估细胞的生存能力的方法。
该方法适用于高通量筛选，可以同时评估大量化合物对细胞的毒性。
ATP酶法操作简单、快速，是药物筛选中常用的细胞毒性测定方法之一。
结论细胞毒性测定方法在药物筛选中扮演着重要的角色。
本文总结了常见的MTT法、SRB法、LDH法和ATP酶法，这些方法具有操作简便、结果可靠的特点，适用于评估药物候选的细胞毒性。
根据具体需求和实验条件选择合适的细胞毒性测定方法，将有助于提高药物筛选的效率和准确性。
血清乳酸脱氢酶测定
血清乳酸脱氢酶测定1. 实验原理LDHL-乳酸+ NAD ————→丙酮酸+ NADH在波长340nm处测定NADH生成速率，计算出LDH活力。
2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
避免溶血。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：中生乳酸脱氢酶试剂盒（试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成试剂1：2×65 ml 试剂2:1×70 ml06.1.2 试剂准备：试剂为双液即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为12个月。
试剂必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂空白吸光率A340nm(1.0cm)＞0.6，或有混浊和可见颗粒时，请不要再使用。
6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。
请勿吞服。
6.2 校准品：使用OLYMPUS公司提供的多项校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪操作规程.SOP 文件。
9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
ldh细胞毒性检测原理
ldh细胞毒性检测原理
LDH细胞毒性检测是一种常用的细胞毒性评价方法，其原理基于乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）在细胞损伤时释放到培养上清液中。
LDH是一种催化乳酸转化为丙酮酸的酶，在正常情况下主要存在于细胞内。
当细胞发生损伤或坏死时，LDH被释放到外界环境中。
因此，通过测定培养上清液中的LDH水平，可以间接反映细胞损伤程度。
LDH细胞毒性检测的具体步骤如下：
1. 给予细胞不同浓度的试剂处理，例如药物、化合物等。
2. 处理一段时间后，将培养上清液收集并离心，得到上清液。
3. 使用LDH试剂盒，按照说明书的步骤将上清液与试剂进行反应。
4. 将反应混合物置于检测设备中，通过测定OD值或荧光信号的强度，可以得到LDH的活性或浓度。
5. 将测定结果与对照组进行比较，可以评估细胞毒性的程度。
LDH细胞毒性检测的优点在于操作简便，结果可靠，常用于评估药物、化合物对细胞的毒性影响。
然而，需要注意的是LDH的释放并不一定代表细胞的坏死，因为在一些情况下，LDH也可能通过非坏死途径释放，如胞吞作用、葡萄糖缺乏等。
因此，综合分析LDH释放的动力学变化和其他细胞毒性指标，可以更全面地评估细胞的毒性情况。
乳酸脱氢酶测定方法操作规程
乳酸脱氢酶（LDH）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（IFCC 法）使用说明书【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或血浆中乳酸脱氢酶的活力。
【检验原理】LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH。
NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。
乳酸+ 2O LDH丙酮酸+NADH+H+【主要组成成份】R1：Good’s缓冲液50 mmol/LL-乳酸 5.0 mmol/LR2：NAD+7.0 mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2~8℃保存有效期为18个月。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定30天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或血浆，采集后及时测定，应避免溶血和污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向上升反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
质控品测定值应该在规定的范围内。
若超出规定范围，有必要采取相应的措施或联系生产厂家。
【参考范围】男性：135~225U/L 女性：135~214U/L（注：各实验室应有自己的参考范围。
动物实验心肌毒性检测指标包括
动物实验心肌毒性检测指标包括
动物实验中常用的心肌毒性检测指标包括：
1. 心电图（ECG）：通过记录动物的心电活动，包括心率、心律、QRS波、ST段、T波等参数来评估心肌的功能状态。
2. 心肌酶谱：包括肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）等，通过观察其活性水平来判断心肌细胞损伤程度。
3. 血清生化指标：包括肌红蛋白（Mb）、肌钙蛋白（cTn）等，这些蛋白质在心肌损伤时会释放到血液中，检测其浓度可以评估心肌损伤的程度。
4. 心肌超声检测：采用超声成像技术，观察心肌肌壁厚度、心腔大小等指标来判断心肌的功能和结构情况。
5. 病理学检查：通过动物解剖和组织切片染色等方法，观察心肌细胞形态学的改变，例如细胞肿胀、损伤和坏死等。
这些指标可以综合评估心肌毒性的发生和程度，辅助进行药物安全性评价、新药研发等相关工作。
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验方法
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测之阳早格格创做LDH释搁检测要领：a. 根据细胞的大小战死少速度将适量细胞交种到96孔细胞培植板中，使待检测时细胞稀度没有超出80-90%谦.b. 吸来培植液，用PBS液洗涤一次.换新陈培植液(推荐使用含1%血浑的矮血浑培植液或者适合的无血浑培植液)，将各培植孔分成如下几组：包罗无细胞的培植液孔(背景空黑对于照孔)，已经药物处理的对于照细胞孔(样品对于照孔)，已经药物处理的用于后绝裂解的细胞孔(样品最大酶活性对于照孔)，以及药物处理的细胞孔(药物处理样品孔)，并干佳标记表记标帜.依照真验需要赋予适合药物处理(如加进0-10μl安排特定的药物刺激，可树立分歧浓度，分歧处理时间，对于照孔中需加进适合的药物溶剂对于照)，继承按惯例培植.到预约的检测时间面前1小时，从细胞培植箱里与出细胞培植板，正在“样品最大酶活性对于照孔”中加进试剂盒提供的LDH释搁试剂，加进量为本有培植液体积的10%.加进LDH释搁试剂后，反复吹挨数次混匀，而后继承正在细胞培植箱中孵育.c. 到达预约时间后，将细胞培植板用多孔板离心机400g离心5min.分别与各孔的上浑液120μl，加进到一新的96孔板相映孔中，随即举止样品测定.准备处事：a. INT溶液(1X)的晃设：根据所需的INT溶液(1X)的量，与适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X.比圆，与20μl INT溶液(10X)，加进180μl INT稀释液，混匀后即晃设为200μl INT溶液(1X).INT溶液(1X)宜现配现用，晃设后4℃保存可于当天使用，没有宜晃设后冻存.b. LDH检测处事液的配造: 根据待测定的样品数(含对于照)，参照下表正在临检测前新陈配造适量的检测处事液.注意：LDH检测处事液必须现配现用，配造战使用历程中均要注意适合躲光.样品测定:a. 各孔分别加进60μl LDH检测处事液.b. 混匀，室温(约25℃) 躲光孵育30min(可用铝箔包裹后置于火仄摇床或者侧晃摇床上缓缓摇动).而后正在490nm处测定吸光度.使用600nm或者大于600nm的任一波少动做参照波少举止单波少测定.c. 估计(测得的各组吸光度均应减来背景空黑对于照孔吸光度)细胞毒性或者牺牲率(%)=(处理样品吸光度－样品对于照孔吸光度) / (细胞最大酶活性的吸光度－样品对于照孔吸光度)×100d. 可画造细胞毒性直线：纵座标为本质吸光度，横坐标为药物浓度；据此可估计该药物效率特定时间的半致死剂量LD50.。
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验方法
LDH乳酸脱氢酶细胞毒性检测LDH释放检测方法：a。
根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80—90％满。
b. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔),未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔)，未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔(药物处理样品孔)，并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，不同处理时间,对照孔中需加入适当的药物溶剂对照)，继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培养液体积的10%.加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育.c. 到达预定时间后,将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定.准备工作：a。
INT溶液（1X）的配置：根据所需的INT溶液（1X)的量，取适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X.例如，取20μl INT溶液（10X)，加入180μl INT稀释液,混匀后即配置为200μl INT溶液(1X）.INT 溶液(1X）宜现配现用，配置后4℃保存可于当天使用,不宜配置后冻存。
b。
LDH检测工作液的配制: 根据待测定的样品数（含对照)，参考下表在临检测前新鲜配制适量的检测工作液。
注意：LDH检测工作液必须现配现用，配制和使用过程中均要注意适当避光.样品测定:a. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
b. 混匀，室温(约25℃) 避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
乳酸脱氢酶LDH法操作说明
乳酸脱氢酶LDH法操作说明LDH法细胞毒性检测：原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数⽬与细胞培养上清中LDH活性成正⽐,⽤⽐⾊法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进⾏⽐较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率LDH（乳酸脱氢酶）是⼀种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，⼀旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红⾊甲臢化合物，可通过酶标仪进⾏检测。
颜⾊形成的量与裂解细胞的数⽬成正⽐。
应⽤⼀个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。
这个分析可⽤于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下⽬标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。
乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量⾮常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数⽬呈正⽐，通过⽤⽐⾊法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进⾏⽐较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。
该实验⽅法操作简便、快速，可应⽤于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，⽬前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。
同时设4个对照:靶细胞最⼤释放组、体积校正对照组、背景对照组和⾃然释放组按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞）细胞过度⽣长、密度过⾼、离⼼速度过⼤、培养箱内外温差过⼤等因素会造成细胞⾃然释放乳酸脱氢酶操作流程：设⽴效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设⽴效应细胞⾃发释放组）：50µl效应细胞+50µl培养基实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50µl效应细胞+50µl靶细胞设⽴靶细胞⾃发释放组：50µl靶细胞+50µl培养基设⽴靶细胞最⼤释放组：50µl靶细胞+50µl培养基+10µl裂解液（10×）设⽴体积校正对照组：100µl培养基+10µl裂解液（10×）设⽴背景对照组：100µl培养基250g离⼼4分钟37℃孵育4⼩时离⼼前45分钟添加裂解液（10×）⾄靶细胞最⼤释放组250g离⼼4分钟取上清50µl转移⾄另⼀孔板（可选）于独⽴的孔中加50µl LDH阳性对照（1：5000）于每孔中添加50µl再次稀释的底物混合物室温避光孵育30分钟添加50µl终⽌溶液490nm测吸收值1.靶细胞接种数⽬的优化1.1.设⽴检测板1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100µl，使⽤与细胞毒分析相同的培养基及孔板终体积。
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产品简介：
产品编号产品名称产品包装产品价格
C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT
(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：
可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：
产品编号产品名称包装
C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml
C0016-2 乳酸溶液2ml
C0016-3 酶溶液1ml×2
C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml
C0016-5 INT稀释液2ml
—说明书1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
C0016-3需注意避免反复冻融。
C0016-4需避光保存。
试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。
注意事项：
冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。
建议样品准备好后尽量当天完成测定。
如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。
如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。