乳酸脱氢酶测定标准操作程序

乳酸脱氢酶测定标准操作程序

1.摘要

乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。

2.适用范围

程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。

3.职责

使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法

上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。

5.原理

乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。

++

+

NADH

NAD

L LDH丙酮酸

乳酸

-H

−→

+

−

+

−

6.仪器

AU5811自动生化分析仪

7.试剂

7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供

7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防

腐剂

7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为

12个月。试剂不可冰冻。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制

8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。以9g/L氯化钠溶液或去

离子水为空白。

8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。每日在测定前做

一

次质控，加试剂后做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》

8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。

9.标本

9.1标本为及时分离的空腹血清，肝素、枸橼酸或草酸盐抗凝血浆。不可使用EDTA抗

凝血浆。采集的样本应在1小时内分析。若不能立即测定应及时分离血清，置于具塞试管内冰箱保存。

9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请

单不符状况，一律要求重新留取标本。

9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。

10.测定程序

10.1分析参数：详见参数表。

10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。

10.3获取结果：在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。

10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的

结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。

11.计算

标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。无需手工计算，每个标本的结果自动打印

12.废液处理

参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。

13.操作性能

13.1可报告范围：本法对LDH检测范围为0-1000 U/L。当样品测定值超过上限时，应将

样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。

13.2特异性/干扰：当样品中胆红素浓度≤40mg/L，甘油三酯浓度≤1000mg/dL时对测定

结果的影响可忽略。

13.3灵敏度：本试剂的检测限为15U/L。

13.4精密度:重复性CV%≤5% 批间差≤10%

14.注意事项

14.1试剂盒仅用于体外诊断。测定结果仅作为相关疾病的临床诊断依据。

14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器再测定，其余试剂盖紧后

放回冰箱。如试剂变混浊或空白吸光度值＜1.0A请勿使用。

14.3清等标本有些可能含有感染性成份，因此应以具有感染危险性而充分注意操作。

14.4试剂盒中含有防腐剂叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。如不慎接触，应

用大量清水冲洗。如误服，应立即上医院诊治。

15.参考值

健康成年人：109-245U/L。如果结果做为诊断指标应结合病史及其它临床检查结果。16.临床意义

乳酸脱氢酶增高主要见于心机梗塞、肝炎、肺梗塞、某些恶性肿瘤、白血病等。某些肿瘤转移所致的胸腹水中的乳酸脱氢酶活力往往升高。目前，常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。

17.支持性文件

17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。

17.2 AU5811自动生化分析仪分析参数。

17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。

18.参考文献

18.1《全国临床检验操作规程》第三版，叶应妩等，2006

18.2Wroblewski, F & Ledne, J.S.,Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,96,210(1955).

18.3Amador. E. Dorfman, L. E. and Acker,W. E.C.,Clin. Chem.,9,391(1963).

18.4Henry,R. J.,Chiamori,N. Golub, O.J.and Berkman, S., Am. J. Clin. Path.,34,381(1963)