乳酸脱氢酶测定标准操作程序
20血清乳酸脱氢酶测定
一、目的乳酸脱氢酶（LDH，LD）属于糖酵解酶，广泛存在于各种组织细胞的胞质中，以心肌、骨骼肌、肾脏含量最为丰富，其次肝、脾、胰、肺等，肿瘤组织，血液中均可检出。
红细胞内LDH含量较血清中高一百至数百倍，正常人血清中LDH主要来自红细胞，肝和骨骼肌。
二、测定方法连续监测法三、原理L—乳酸+NAD+ LDH丙酮酸+NADH+H+四．标本1.静脉抽取病人空腹血，臵于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
2.采血后应立即送到检验科生化室。
3.样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2-80C保存。
4．严重溶血或脂血的标本不能测定。
五．设备及试剂1．希迈全自动生化仪。
2．上海复星长征公司乳酸脱氢酶试剂。
3．乳酸脱氢酶试剂应贮存于2—8℃冰箱。
六．操作步骤1．样本的准备：将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位臵，再把样品盘放到仪器中相应位臵。
2．试剂的检查：每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，确认无误后方可进行测定。
3．操作方法：详见希迈生化仪操作手册。
七．质量控制每天操作过程中应使用上海复星长征公司的生化质控血清至少做一次室内质控，每年定期参加海南省临检中心所组织的室间质评。
八、干扰因素1、正常情况下，新生儿LDH含量最高，约为成人的两倍，随年龄增长逐渐降低至14岁时趋于稳定。
2、红细胞内LDH为正常血清的100多倍，故溶血标本不宜送检。
3、草酸盐可抑制LDH的活性，故不能用此抗凝剂的血浆测LDH。
4、LDH系细胞内酶，任何引起细胞膜通透性改变的情况（如剧烈运动、引组织缺氧等）均可使LDH在血中活性增高。
九、参考区间100 — 245 U/L十、实验室解释乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗塞、肝炎、肺梗塞、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活性往往升高。
目前，常用于心肌梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
十一、异常结果处理实验结果应与临床诊断相符，结果偏高的可用生理盐水稀释后重新测定。
乳酸脱氢酶（LDH）测定-标准操作程序
三级文件标准操作程序第2页共3页生效日期：目的：建立乳酸脱氢酶（LDH）测定标准操作规程。
范围：适用于乳酸脱氢酶（LDH）测定的标准操作。
职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。
规程：1 测定方法：乳酸脱氢酶在催化乳酸生成丙酮酸的同时将NAD+还原成NADH。
通过测定NADH在340nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力。
LDHL-乳酸+ NAD+─────→丙酮酸+ NADH + H+2 仪器设备GS200全自动生化分析仪3 试剂3.1 乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，包括试剂1（R-1）、试剂2(R-2)。
试剂成份含量R-1 L-乳酸锂≥76mmol/LR-2 NAD+≥31mmol/l3.2 分析用人基质质控血清（RANDOX）、血清3.3 试剂稳定性与贮存乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒在2-8℃避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。
3.4 样本稳定性与贮存3.4.1 分析用人基质质控血清：该血清自生产之日起，在2-8℃下保持可稳定4年；该血清一旦复融，在25℃下可稳定24小时，在2-8℃下可稳定7天，在-20℃可稳定1个月。
3.4.2 待测血清：2-8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
样本不可反复冻融。
不可使用已被污染的样本。
4 操作步骤4.1 打开全自动生化仪，按照GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普三级文件准操作程序第3页共3页生效日期：通测试流程。
4.2 检验方法分析方法：速率A；主波长：340nm；副波长：405nm；样品量：8.0ul；R-1：320ul，R-2：80ul；校准方式：K因子；反应方向：上升；测定温度：37℃。
样本与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟53秒，测定104秒。
样本8.0ul 主波长340nmR-1 320ul R-2 80ul 副波长405nm测光测光K=81990 5 6 8 min4.3 计算△A/min×Vt×1000ALT（U/L）= ─────────────6.22×Vs×d△A/min = 每分钟吸光度变化率Vt = 反应液总体积（ml）1000 =U/ml到U/L的转换系数 6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数Vs = 样本体积（ml） d = 比色杯光径（cm）5 检验结果的解释抗坏血酸≤50mg/dl、游离胆红素≤684umol/L（40mg/dl），结合胆红素≤855umol/L （50mg/dl）、乳糜微粒≤2500浊度单位对测定无影响。
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定作业指导书
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定作业指导书1. 实验原理VITROS LDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测LDH 采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+ NADH + H+———————→乳酸+ NAD2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros LDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。
血清乳酸脱氢酶测定
(1)正常LDHl、LDH2见于心肌损伤，如心肌梗塞、心脏手术、心脏移 植排异、充血性心衰、心肌炎。心梗病人出现症状后12一18小时血 清LDH升高，约在第3天达到高峰，7一18天才恢复正常。故对诊断发 病后数天才就医的病人特别有价值。LDHl>LDH2还见于肾梗塞、肾病， 巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血。 (2)恶性肿瘤以LDH3增高为主，LDH3明显大于LDHl，总LDH越高预后 越差。LDH2和LDH3增高见于肺癌、粒细胞白血病，LDH3和LDH4增高 见于淋巴瘤、胶原病和止血紊乱 (血小板增多症、凝血活酶释放)。 (3) LDH5增高见于骨骼肌损伤和肝胆疾病，如杜氏肌营养不良、横 纹肌溶解症、肌肉外伤，LDH5>LDH4见于肝损伤 (肝炎、肝硬化、肝 癌、心衰、肝淤血)，阻塞性黄疸时LDH 4与LDH5均增高，但以LDH4 最为明显。
0-5 30-8 40-97
5.7±2.9
（ 占总 LDH活性的百分比）
a
2
1
2
b
3 1 4 酶活性 5 酶活性 3 4 5
迁移位置 (a)
迁移位置
LDH同工酶电泳图谱
(b)
（a）正常人LDH同工酶电泳图谱 （b）心肌梗塞病人血清LDH同工酶电泳图谱
*生理及临床意义
在代谢调节上起 着重要的作用； 酶 用于解释发育过 活 程中阶段特有的代谢 性 特征； 同工酶谱的改变 有助于对疾病的诊断； 同工酶可以作为 遗传标志，用于遗传 分析研究。
乳酸脱氢酶的同工酶
人体心、肝和骨骼肌LDH同工酶谱
组织器官
心 肝 骨骼肌 正常血清
LDH1
35-70 0-8 1-10
27.1±2.8
LDH2
28-45 2-10 4-18 34.7±4.3
医院检验科血清乳酸脱氢酶(LDH)速率法测定 血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定方法
血清乳酸脱氢酶（1.DH）速率法测定1.实验原理VITROS1.DH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测1.DH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+0将一滴IOul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：1.DH丙酮酸+NADH÷H+ --------------------------- 乳酸+NAD2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros1.DH干片对完整血小板内的1.DH不敏感，因此对比方法的1.DH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3.标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6.试验材料：6.1测试AST所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit3；VitrOS特制质控液；Vitros7(⅛BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18~28℃。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明乳酸脱氢酶（LDH）法操作说明操作简介：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种常用的生物化学分析方法。
本文将详细介绍使用乳酸脱氢酶法进行实验操作的步骤。
材料准备：1. 乳酸脱氢酶试剂盒2. 样品溶液3. 乳酸标准品4. 实验用试管和显微管操作步骤：1. 样品制备- 将待测样品装入实验用试管中。
每个样品应分别装入不同的试管，以避免交叉污染。
- 若样品过浓稀，需要进行适当的稀释，确保样品浓度在测试范围内。
2. 标准曲线制备- 准备不同浓度的乳酸标准品溶液，浓度范围可根据实验要求而定。
- 将不同浓度的标准品溶液分别装入实验用试管中。
3. 试剂添加- 分别向样品管和标准品管中加入相同体积的乳酸脱氢酶试剂，充分混匀。
4. 反应温育- 将所有试管置于恒温水浴中，温度设定为适合乳酸脱氢酶反应的温度（一般为37°C）。
- 在设定的反应温度下，将试管保持在水浴中反应一段时间（时间根据实验要求而定）。
5. 反应终止- 在反应时间结束后，以适当的方法终止反应。
常见的终止方式是添加酸性试剂或采用其他合适的方法。
6. 测定乳酸脱氢酶活性- 使用光度计、分光光度计或其他合适的仪器，测定样品和标准品反应后产生的光吸收值。
吸收值与乳酸脱氢酶活性成正比。
- 通过标准曲线，将样品的吸收值转化为对应的乳酸脱氢酶活性。
注意事项：1. 本实验操作需要严格按照实验室安全操作规范进行，避免任何可能导致个人受伤或污染的行为。
2. 实验过程中的试剂、标样和废液等应按照实验室规定的方法处理，不得随意丢弃。
3. 在操作过程中，保持实验器材和试剂的洁净，尽量避免外界因素对实验结果的影响。
4. 操作时需注意避免交叉污染，尤其是样品的装管和试剂的配比过程。
5. 样品和标准品的选择要合适，浓度范围应覆盖实验要求。
6. 温育过程中，确保试管能均匀受热，并避免发生温度不稳定的情况。
总结：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种可靠的生物化学分析方法，适用于乳酸脱氢酶活性的测定。
血清乳酸脱氢酶同工酶测定
血清乳酸脱氢酶同工酶测定（醋酸纤维素薄膜电泳法）[原理]先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。
其反应如下：LD乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2NADH2+PMS NAD++PMSH2PMSH2 +INT PMS+INTH2[试剂]1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。
2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠（Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。
3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。
4．显色试剂：临用前配制下列试剂：（1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液；（2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml；（3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中；（4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。
其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。
应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。
4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
2 5． 2%醋酸：2ml 醋酸加水至100ml 。
[主要仪器]1. 恒温水浴箱2. 电泳仪和电泳槽3. 醋酸纤维素薄膜4. 载玻片5. 镊子6. 培养皿[操作步骤]1. 取8×2cm 薄膜一条，于无光泽面的一端2cm 处轻轻用铅笔画一直线（点样线），并在另一端上写上姓名，注明正极。
乳酸脱氢酶测定方法
乳酸脱氢酶测定方法>我们知道，现实生活中存在着各样各样的的酶，这些酶可以单独作用，也可以相互作用，对我们的人体产生很大的影响，但是相信大家对于酶的测定方法还不是很熟悉吧，不相同酶的测定有不相同的方式方法，而且方式方法也种类不一，现此刻乳酸脱氢酶测定方法成为很多人研究的领域话题，那么终究该如何测定呢，下面就让我们一起来了解一下乳酸脱氢酶测定方法吧。
方法：实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量防备起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品吻合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品 100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不波及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应 120 分钟。
为保证明验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用冲洗。
每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl 生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比率配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，60 分钟。
3. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡1-2 分钟， 350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃， 60 分钟。
5. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（ 30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后3-4 孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加停止溶液50μl，停止反应（此时蓝色立转黄色）。
停止液的加入序次应尽量与底物液的加入序次相同。
为了保证明验结果的正确性，底物反应时间到后应赶快加入停止液。
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程(SOP)
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。
二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。
LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。
由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。
（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。
此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。
因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。
血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
组织ldh检测方法
组织ldh检测方法
乳酸脱氢酶同工酶（LDH）检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
具体操作如下：
1. 将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
2. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔），未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔），未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔（药物处理样品孔），并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，
不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照），继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培
养液体积的10%。
加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
3. 到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
4. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
混匀，室温（约25℃）避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
然后在490nm处测定吸光度。
使用600nm或大于600nm的任一波长作为参考波长进行双波长测定。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
LDH的测定
2，酶活性的测定
加入物(ml) 加入物(ml) 测定管 对照管 血清 0.01 0.01 NAD＋ NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5 37度水浴 37度水浴5min 度水浴5min NAD＋ NAD＋溶液 0.1 － 37度水浴 度水浴15min 37度水浴15min 2,4二硝基苯肼 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 NAD＋ NAD＋溶液 － 0.1 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟 度水浴15 0.4mol/L溶液 0.4mol/L溶液 5.0 5.0 混匀，室温放置5min 5min后 440nm波长处比色 比色杯光径为1.0cm 波长处比色， 1.0cm， 混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm， 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查 校正曲线，得酶活性。 校正曲线，得酶活性。 单位定义： 100ml血清 37度 作用底物15min 产生1umol 血清， 15min， 1umol丙酮酸为 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为 一个金氏单位。 一个金氏单位。
乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋ ＋（正向L 乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋H＋（正向L-P，逆 向P－L）。 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2，4二硝 基苯肼作用生成丙酮酸－二硝基苯腙，后者在酸性环境中 呈草黄色，在碱性溶液中显棕红色，颜色的深浅与丙酮酸 的浓度成正比，与标准浓度的丙酮酸生成的苯腙进行比色， 可推算LDH的活力。 可推算LDH的活力。 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 位，
乳酸脱氢酶活力测定
结果异常可能原因及解决方案
1 2 3
样本问题
样本中可能存在干扰物质，如溶血、高血脂等， 导致结果偏高或偏低。解决方案包括重新采集样 本、使用抗干扰试剂等。
试剂问题
试剂质量不佳、过期或保存不当等可能导致结果 异常。解决方案包括更换试剂、检查试剂有效期 和保存条件等。
操作问题
操作不规范、加样不准确等也可能导致结果异常。 解决方案包括加强操作培训、使用加样器等。
荧光分析法
利用荧光探针与LDH结合产生荧光信号的原理，实现对LDH活力的高灵敏度、高选择性检 测。该方法具有操作简便、快速准确等优点，有望在生物医学领域得到广泛应用。
微流控芯片技术
将LDH活力测定过程集成到微流控芯片中，实现自动化、高通量的检测。该技术可大大提 高检测效率，降低人为误差，为LDH活力测定提供新的解决方案。
05 实验注意事项与安全防护
操作规范和安全防护措施
严格遵守实验室规章制度，确保实验环境整洁、有序。 使用前检查实验器材是否完好，如有破损应及时更换。
穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护用品，避免直接 接触化学试剂。
遵循实验操作步骤，避免操作失误导致试剂飞溅或仪器 损坏。
废弃物处理方法和环保要求
废弃物应分类收集，严禁 将不同性质的废弃物混合 处理。
挑战
在实际应用中，乳酸脱氢酶活力测定仍面临 一些挑战，如样本处理复杂、干扰物质多、 仪器设备昂贵等。此外，不同来源和类型的 样本中LDH活力水平可能存在差异，这给准 确测定带来了一定难度。因此，未来需要继 续加强研究，探索更加简便、快速、准确的
LDH活力测定方法。
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加样顺序
在反应体系中依次加入辅酶、底物、待测 样品和缓冲液，混合均匀后立即启动反应 。
LDH文档,乳酸脱氢酶测定试剂盒(LDH)检测标准操作规程
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒（IFCC法）测定方法2、适用范围：适用于人血清或血浆乳酸脱氢酶(LDH)的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定30天。
试剂不可冰冻。
3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。
LDH乳酸+ NAD+ + H2O 丙酮酸+ NADH + H+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆样本，采集后及时测定，应避免溶血和污染。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
4.3.3 测试基本参数4.4参考范围115～220 U/L （注：各实验室应有自己的参考范围。
）4.5 方法评价线性范围：4～1000U/L内。
当样本测定值超过上限时，应将样本用生理盐水稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
精密度：批内变异系数：≤ 3.0%；批间变异系数：≤5.0%。
分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于4 U/L。
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定
血清乳酸脱氢酶（LDH）速率法测定1. 实验原理VITROS LDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测LDH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+ NADH + H+———————→乳酸+ NAD2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros LDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。
乳酸脱氢酶测定标准操作程序
乳酸脱氢酶测定标准操作程序1.摘要乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。
5.原理乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。
+++NADHNADL LDH丙酮酸乳酸-H−→+−+−6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。
以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
乳酸脱氢酶测定方法操作规程
乳酸脱氢酶（LDH）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（IFCC 法）使用说明书【预期用途】该试剂盒采用IFCC法，用于体外定量测定人血清或血浆中乳酸脱氢酶的活力。
【检验原理】LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH。
NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。
乳酸+ 2O LDH丙酮酸+NADH+H+【主要组成成份】R1：Good’s缓冲液50 mmol/LL-乳酸 5.0 mmol/LR2：NAD+7.0 mmol/L*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【储存条件与有效期】未开启的试剂盒在2~8℃保存有效期为18个月。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃~8℃可稳定30天。
试剂不可冰冻。
【适用仪器】迈瑞BS系列全自动生化分析仪、日立7180型全自动生化分析仪、日立7060型全自动生化分析仪、日立7600P自动生化分析仪、奥林巴斯AU400型全自动生化分析仪、奥林巴斯AU2700型全自动生化分析仪、贝克曼库尔特AU680型全自动生化分析仪。
若需自动生化分析仪应用参数，请随时和公司联系。
建议用户在不同仪器上使用本产品时，根据实验室情况进行验证。
【样本要求】新鲜血清或血浆，采集后及时测定，应避免溶血和污染。
【检验方法】试剂准备R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂测定条件波长340nm温度37℃分析类型动力学法反应方向上升反应操作步骤* ΔA/min=ΔA/min样本管—ΔA/min空白管* 试剂和样本量可根据不同生化分析仪要求按比例适当增减。
校准校准品类型S1：生理盐水S2：迈瑞配套校准品推荐进行2点线性校准校准周期和要求（包括但不限于以下情况）更换试剂批号时仪器关键零部件更换时室内质控失效时质控每批样品检测时，建议使用迈瑞公司提供的配套质控品进行内部质量控制。
质控品测定值应该在规定的范围内。
若超出规定范围，有必要采取相应的措施或联系生产厂家。
【参考范围】男性：135~225U/L 女性：135~214U/L（注：各实验室应有自己的参考范围。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
LDH法细胞毒性检测：原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率LDH（乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合物，可通过酶标仪进行检测。
颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。
应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。
这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。
乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中 LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的 LDH 活性进行比较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。
该实验方法操作简便、快速，可应用于 CTL 和 NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有 LDH 法测定 CTL 活性的试剂盒。
同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞）细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶操作流程：设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50μl效应细胞+50μl培养基实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50μl效应细胞+50μl靶细胞设立靶细胞自发释放组：50μl靶细胞+50μl培养基设立靶细胞最大释放组：50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液（10×）设立体积校正对照组：100μl培养基+10μl裂解液（10×）设立背景对照组：100μl培养基250g离心4分钟37℃孵育4小时离心前45分钟添加裂解液（10×）至靶细胞最大释放组250g离心4分钟取上清50μl转移至另一孔板（可选）于独立的孔中加50μl LDH阳性对照（1：5000）于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物室温避光孵育30分钟添加50μl终止溶液490nm测吸收值1.靶细胞接种数目的优化1.1.设立检测板1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl，使用与细胞毒分析相同的培养基及孔板终体积。
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，LDHNADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸62.5mmol/LTris缓冲液 100mmol/L试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
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乳酸脱氢酶测定标准操作程序
1.摘要
乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
2.适用范围
程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。
3.职责
使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。
5.原理
乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。
++
+
NADH
NAD
L LDH丙酮酸
乳酸
-H
−→
+
−
+
−
6.仪器
AU5811自动生化分析仪
7.试剂
7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防
腐剂
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为
12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制
8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。
以9g/L氯化钠溶液或去
离子水为空白。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做
一
次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
9.标本
9.1标本为及时分离的空腹血清，肝素、枸橼酸或草酸盐抗凝血浆。
不可使用EDTA抗
凝血浆。
采集的样本应在1小时内分析。
若不能立即测定应及时分离血清，置于具塞试管内冰箱保存。
9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请
单不符状况，一律要求重新留取标本。
9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。
10.测定程序
10.1分析参数：详见参数表。
10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
10.3获取结果：在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。
10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。
可报告的
结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。
11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。
无需手工计算，每个标本的结果自动打印
12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。
13.操作性能
13.1可报告范围：本法对LDH检测范围为0-1000 U/L。
当样品测定值超过上限时，应将
样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
13.2特异性/干扰：当样品中胆红素浓度≤40mg/L，甘油三酯浓度≤1000mg/dL时对测定
结果的影响可忽略。
13.3灵敏度：本试剂的检测限为15U/L。
13.4精密度:重复性CV%≤5% 批间差≤10%
14.注意事项
14.1试剂盒仅用于体外诊断。
测定结果仅作为相关疾病的临床诊断依据。
14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器再测定，其余试剂盖紧后
放回冰箱。
如试剂变混浊或空白吸光度值＜1.0A请勿使用。
14.3清等标本有些可能含有感染性成份，因此应以具有感染危险性而充分注意操作。
14.4试剂盒中含有防腐剂叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
如不慎接触，应
用大量清水冲洗。
如误服，应立即上医院诊治。
15.参考值
健康成年人：109-245U/L。
如果结果做为诊断指标应结合病史及其它临床检查结果。
16.临床意义
乳酸脱氢酶增高主要见于心机梗塞、肝炎、肺梗塞、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中的乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
17.支持性文件
17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。
17.2 AU5811自动生化分析仪分析参数。
17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。
18.参考文献
18.1《全国临床检验操作规程》第三版，叶应妩等，2006
18.2Wroblewski, F & Ledne, J.S.,Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,96,210(1955).
18.3Amador. E. Dorfman, L. E. and Acker,W. E.C.,Clin. Chem.,9,391(1963).
18.4Henry,R. J.,Chiamori,N. Golub, O.J.and Berkman, S., Am. J. Clin. Path.,34,381(1963)。