牙菌斑指示剂 (2)

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牙菌斑、唾液和龈沟液的采集和处理

在5%～10%CO2、90%～95%的N2，或80% N2、 10%CO2和10%H2的大气环境下37℃孵育48小时
实验结果及结果评价
表型鉴定——（2）菌细胞形态和染色特征观察
菌细胞形态：球形、杆形、球杆形、弯曲状、梭状、菌细胞末端形状、细胞内有无颗粒、肿胀等。
革兰染色特征：阳性、阴性染色,染色均匀性。
如果两个相邻稀释度菌落平均数均在 30~300之间，则计数其比值：比值＜ 2 ，报告两个稀释度的平均菌落数；比值 ≥2，报告两个稀释度中较大的菌落数。如果只有一个稀释度的平均菌落数在 30~300之间，则以该平均菌落数乘以稀释倍数报告。如果稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。如果所有稀释度均未见菌落，则报告小于10，而不报告0。
水洗
革兰碘液媒染30秒
水洗
丙酮-乙醇混合脱色剂脱色5～10秒
水洗
石炭酸复红复染5秒
水洗
干燥后1000倍显微镜油镜下观察
实验结果及结果评价
表型鉴定——（1）菌落特征观察
初代培养的菌落观察要点：
形态：如水滴状、圆形、丝状、不规则状、根状、梭形等。大小：菌落直径一般以mm计，注意大小的一致性。厚薄：扁平、丘状、凸、半球状、瘤状(中央凸)。颜色：无色、白、黄、红、绿、黑或棕色。边缘：如整齐、锯齿状、波状等。透明度：透明、半透明、不透明。菌落型：光滑、粗糙、黏液样。溶血型：α、β、γ（限血平板）。
一、菌斑的采集二、唾液的收集三、龈沟液的采集和处理四、标本运送五、标本的分散和稀释
一、菌斑的采集
1、牙合面沟裂和邻面菌斑的采集 2 、根面菌斑的采集 3 、龈上或龈缘菌斑的采集 4 、龈下菌斑的采集

牙菌斑染色剂的研制

目前，清除牙菌斑的方式主要是使用牙膏牙刷进行机械式清除。但是由于牙菌斑一般较薄，且颜色与牙齿相似，不使用相关的辅助工具，难以直接观察到牙菌斑的存在，因此为达到有效清洁牙菌斑的目的，对牙菌斑进行检测就尤为重要［3］。
2 牙菌斑的检测方法
1. 1 菌斑体外取样检测法体外取样检测法是通过相应的器械或工具刮取样本，在离体的情况下对刮取的样本进行检测，可分为细菌培养法、PCＲ法、菌斑 pH 值检测法，上述方法各有优缺点，但上述三种方法均需具备一定的实验条件，难以获得简单、可靠、全面、可视的检测结果。 1. 2 埋藏电极遥测法此法是将一个微型电极埋入离体牙釉质小块，然后放入受试者的假牙中，使电极敏感面向着基牙。适用于检测牙菌斑形成过程中 pH 值的动态变化。但埋藏法的电极构造复杂、技术要求高，且要求受试者的口腔必须有足够的空隙可埋入电极，因此其使用范围较窄。 1. 3 显示剂法采用菌斑显示剂染色，使附着在牙面的无色菌斑直观显示，通过观察及测量染色宽度及染色范围，确定受试者的牙菌斑指数。该方法要求受试者口腔内涂抹或咀嚼染色剂，其检测结果受染色时间和颊部肌肉运动的影响。此法简便直观、易于操作，适用
北京: 中国标准出版社，2013. ［9］王玉秋，崔广庆，刘涛，等 . 牙刷质量、刷牙方法与牙齿楔状
缺损的关系［J］. 中华口腔医学杂志，1995，30( 3) : 169 ～ 171.
和分散牙龈压力的特点。 3) 舒客高密卓效净白牙刷的清洁力比舒客普
通牙刷提高了 97% ，能更好地帮助去除牙渍、牙菌斑、食物残渣等，清洁口腔; 舒客高密轻柔护龈牙刷能有效分散牙龈压力，温柔呵护牙龈，减少 78% 的牙龈压力，适合牙齿敏感的消费者。
态群体。牙菌斑是牙周病和龋齿的主要致病因素，清除的效果，并达到有效控牙菌斑的目的。

牙菌斑中氯化十六烷基吡啶含量测定方法学验证

・５３・４
齐鲁药事・Ｑｉｈｒａｕｉｌｆａｒ２１ｏ２，ｌＰａｍｃｔａＡｆｉ００Ｖ１９Ｎ９ｕｅｃｓ．
取３批，备供试品溶液。精密吸取供试制
２１样品测定．ｌ
《国药典￣０５（部）中２０年一白芍含量测定方法嘲及本试验结果，定芍药苷峰的理论塔板数不低于２０。规００３２结果评价实验结果表明，实验所采用测定方法测定．本
控制标准。
参考文献
［］１杨颖，戚爱棣，桂湘，．Ｌ潘等ＨＰＣ法测定补肾调冲颗粒ｍ号中芍
３讨论３１流动相的选择．实验中考察了甲醇一０１磷酸（０：．３
药苷的含量Ｅ３Ｊ．现代中药研究与实践，０８２（）４￣５．２０，２１，８０Ｅ３２国家药典委员会．中华人民共和国药典２００５年版一部［］Ｓ．北
ＡＢＳＲＡＣＴ：ＪＣＴＶＥＴＯＢＥＩ
Ｔｏｓａｌｈｍｅｈｄｏｄｔｒｎｔｏｏｃｔｌｙｉｉｉｍｃｌｒｄ（Ｃ）ｉｄｎａｅｔｂｉａｓｔｏｆｒｅｅｍｉａｉｎｆｅｙｐｒｎｕｄｈｏｉｅＣＰｎｅｔ１
测定并进行了系统的方法学验证。结果
ＣＣ在浓度为５１０ｇ・ｇ之间，应值和浓度呈良好的线性关系，Ｐ～０＃响线性方程：ｙ表明本方法

牙菌斑

牙菌斑 (dental plaque)一、牙菌斑的定义（掌握）二、牙菌斑的分类（了解）三、牙菌斑的基本结构（掌握）四、牙菌斑的组成（了解）五、牙菌斑的形成和发育（掌握六、牙菌斑的物质代谢（了解）七、牙菌斑的致病性（了解）一、定义● 20世纪60年代——存在于牙面或牙周袋内的一个细菌生态环境，细菌在其中生长、发育和衰亡，并进行着复杂的物质代谢活动，在一定条件下，细菌及其产物将会对牙齿和牙周组织产生破坏生物膜（biofilm）●指附着于有生命或无生命物体表面被细菌胞外大分子包裹的有组织的细菌群体。

生物膜是细菌在物体表面形成的高度组织化的多细胞结构，同一菌株的生物膜细菌和浮游生长细菌具有不同的特性。

牙菌斑与生物膜牙菌斑即是牙面上的生物膜，它能够容纳多种多样菌丛生存，其成层的结构和穿通其间的水道和气道，使它能包涵对氧不同敏感性的细菌，这些细菌嵌入在由多糖、蛋白质和矿物质组成的基质中，构成了复杂的生态系，细菌在其中的代谢活动，影响着细菌与宿主之间或细菌菌属之间的动态平衡。

生物膜的作用＊节制细菌代谢活性和保护菌丛抵抗口腔苛刻环境，使细菌在不适合的条件中仍能存留。

＊膜内的多聚物基质起约束网络作用，摄取和收藏食物，控制基质成分的移动速度。

＊膜内高水平的巯基能中和氧基，保护菌细胞免受氧化损伤。

＊浓缩从环境中来的营养物质和其它元素，保留一些遗漏出来的溶解物质。

二、分类（一）根据牙菌斑所在部位1．龈上菌斑（supragingival plaque）位于牙颈部龈缘以上牙面上的菌斑。

包括窝沟菌斑、光滑面菌斑、邻面菌斑、颈缘菌斑。

这种菌斑的结构比较完整，主要细菌是革兰阳性球菌、杆菌。

随着菌斑成熟，革兰阴性球菌、杆菌和丝状菌的数量将增多。

2．龈下菌斑(subgingival plaque)位于龈缘以下，分布在龈沟或牙周袋内，分为附着龈下菌斑和非附着龈下菌斑。

＊附着龈下菌斑（attached subgingival plaque）由龈上菌斑延伸到牙周袋内，附着于牙根面，其结构、成分与龈上菌斑相似，细菌种类增多，主要为格兰阳性球菌及杆菌、丝状菌，还可见少量格兰阴性短杆菌和螺旋体。

牙周病的治疗--菌斑控制

牙周病的治疗--菌斑控制(一)显示菌斑菌斑为无色、柔软组织，粘附于牙面，通常无法观察到菌斑附着的部位。

菌斑染色剂能使菌落着色，便于观察，因此被认定是菌斑控制的指示剂。

剂型有液体和片剂两种。

1.液体染色剂使用方法(1)涂布法：将蘸有液体的棉球涂布牙面，滞留一分钟后含漱，菌斑即可显示。

(2)滴舌法：将液体滴于患者舌尖区4～6滴，嘱患者用舌尖舔各区牙齿共一分钟，然后漱口，观察着色的菌斑。

2.片剂使用方法嘱患者将药片咬碎，然后用舌搅动，使牙面与药物接触，然后漱口，观察着色的菌斑。

3.菌斑观察被染色的牙齿可显示菌斑附着的位置、范围。

患者可用镜子或塑料口镜观察到正面(唇颊侧)菌斑，牙的背面(舌腭侧)。

进行刷牙后，再检查刷后菌斑减少情况，染色菌斑刷的不干净，则应再次刷牙，或配合使用其他工具，直至彻底消除菌斑为止。

(二)菌斑控制的记录和信息反馈0Leary设计的菌斑控制记录卡，是国际广泛采用的记录卡。

1.记录方法包括填写记录卡的方法。

（1）凡显示有菌斑存在的牙面，可在该卡有关部位的格内填写"-"画。

（2）凡未萌出或已拔除的牙齿用"x"表示缺失。

2.计算方法（1）被检牙的总数×4=牙面数（2）有菌斑的牙面数/牙面数×100=菌斑百分率根据菌斑记录卡反映的信息，医生需不断地分析记录卡出示的情况，具体向该患者指出菌斑最易滞留部位和应加强清除的方法。

关于菌斑控制的指标，如能达到20％以下，就属基本被控制。

(三)菌斑控制方法1.物理方法（1）刷牙是清除菌斑的主要手段，选择保健牙刷和正确的刷牙方法能清除菌斑，同时还能发挥其对牙龈的按摩作用。

最终目的是限度将菌斑刷掉，特别是牙颈部菌斑的清除。

（2）牙膏牙刷和牙膏是刷牙中不可分开的两个部分，单纯靠牙医-学-教-育-网-搜-集刷的洁净作用是不够的。

加用牙膏后，由于摩擦剂和洁净剂的作用，能达到应有的清除菌斑的效果。

药物牙膏流行，如有防龋、消炎、止血、防酸、止痛、抑制牙石、减轻口臭等方面作用的牙膏。

灭菌方法和生物指示剂(2)PPT讲稿

作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即 SAL≤10－6
灭菌工艺验证
• 验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,
通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。
• 物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据, 来估测一
个灭菌程序对微生物的致死性。
• 化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是
嗜热脂肪芽胞杆菌孢子
SGMStrip®(SGMLF/6)
灭菌方法
液体蒸汽
辐射干热环氧丙烷过氧化氢二氧化氯
孢子
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌孢子、枯草芽孢杆菌孢子
SterilAmp II®(SA/4,SA/5,SA/6)
SterilAmp II “5230” (SASU/6)
MagnaAmp®(MA/5,MA/6)
常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等
环氧乙烷法
灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后，能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、— NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌体死亡。
具有杀菌谱广，灭菌能力强的特点，对微生物的繁殖体、芽孢有较强的杀灭效果。
适用范围
• 塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固
对于辐射灭菌，无芽孢菌比有芽孢菌敏感得多；无芽孢菌中革兰氏阴性菌比阳性菌敏感；而病毒敏感性很差。
适用范围
不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、高分子材料、包装材料、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。
常用生物指示剂
短小芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus pumilus，如NCTC 10 327、NCIMB 10 692、 ATCC 27 142)。
• 为验证说明书上的孢子数，根据美国药典及

牙菌斑、唾液和龈沟液的采集和处理

一、菌斑的采集二、唾液的收集三、龈沟液的采集和处理四、标本运送五、标本的分散和稀释
一、菌斑的采集
1、牙合面沟裂和邻面菌斑的采集 2 、根面菌斑的采集 3 、龈上或龈缘菌斑的采集 4 、龈下菌斑的采集
S.mutans与龋病关系密切，但数量 <2%初期链球菌
唾液中某种微生物浓度与附着量呈正相关第一个细胞附着至牙面所需细菌浓度 S.mutans 104~105/ml saliva S.sanguis 103/ml
五、标本的分散和稀释
1. 分散
超声震荡（可加玻璃珠）
2 稀释
十倍系列稀释法菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
全平板CFU=每平方厘米平均菌落数×πr2（平均面积） 1 ml标本中活菌数=全平板CFU×稀释倍数
牙菌斑、唾液和龈沟液的采集和处理
先锋菌pioneer 定植colonize 环境改变(environment changes)
二次细菌定植（Secondary bacteria colonization)
生物体的社会
个体
(individual)
群体
(community)
极期群落
(climax community)
①龈沟内采集法
②牙周袋内采集法
龈沟或牙周袋的龈下菌斑采集法
2. 毛细管法
将细的毛细管置于龈沟口处，凭毛吸作用将龈沟液吸入管内
四、标本运送
1ml的硫乙醇盐（硫乙醇酸钠0.15g，磷酸氢二钠0.11g，氯化钠0.5g，加三蒸水100ml，加热溶解，冷却到50度，加新鲜配制的1％Cacl2 0.9ml，高压灭菌）收集好菌斑后用0.5ml无菌石蜡加盖

牙菌斑指示剂

牙菌斑指示剂 The document was finally revised on 2021菌斑指示剂菌斑指示剂（片剂）是用于显示牙齿表面牙菌斑的咀嚼片，在视觉上辅助我们判断由于口腔清理不到位而导致的牙齿菌斑积累，以做到及时清洁，预防菌斑积累而导致的口腔疾病。

产品名称：菌斑指示剂英文名称：Plaque Indicator产品类型：医疗器械（一类）产品背景菌斑指示剂（Plaque Disclosing Tablet）在欧美国家流行多年，大多数国民对于牙齿保健意识极高，牙科医师在临床用于判断和教育用户牙齿清洁的效果及正确方式。

同时，欧美家长对孩子养成良好的刷牙习惯也是非常关注，从小教育正确的刷牙习惯和方式，而菌斑指示剂在其过程中起到了非常受欢迎的教育工具。

产品本身一般是由植物或水果色素染色牙齿表面的菌斑积累，通过颜色的亮度区别或颜色区别来显示菌斑积累的严重性，有效提示个人或医师的清洁重点部位。

产品作用牙菌斑在牙齿上由食物和细菌积累形成的粘性膜，肉眼无法识别，延续性矿化然后形成牙垢，长期积累容易导致龋齿和牙周牙龈病症。

使用菌斑指示剂可以让牙菌斑鲜明可见，配合精准的完整的日常牙齿清理和专业洗牙。

成分每片含：食用色素，乳糖，葡萄糖，硬脂酸镁，二氧化硅，食用香精形状本品为紫色的圆柱形片剂。

作用类别本品为国家批准认证的第一类医疗器械使用方法●刷牙并漱口后取一片菌斑指示剂放入口中，使用两侧牙齿将其嚼碎，再使用舌尖舔至全部牙面内外两侧。

●将口中残余物吐出，并使用清水漱口。

●对着镜子检查口腔，牙面被染色的部分即为牙菌斑附着部位。

●含漱后直接刷牙效果显着，刷牙后可再检测一次是否已去除菌斑，固执菌斑建议到专业机构清晰牙齿。

注意事项●12岁以下儿童请在成人监督下使用，成人或青少年定期使用，有助于预防牙齿问题。

●1、对本品过敏者禁用；2、禁止直接吞服，少量误吞无害。

牙垢革兰染色实验报告

牙垢革兰染色实验报告实验原理：（1）G+菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫一碘复合物从胞内渗出。

G-菌的细胞壁结构疏松，肽聚糖层很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖又均含大量脂质，易被乙醇溶解，导致细胞壁通透性增加，胞内结晶紫-碘复合物被乙醇溶解析出而脱色。

（2）G+菌等电点(PI2~3)比G-菌(PI4~5)低，在相同PH 条件下，G+菌所带负电荷比G-菌多，故与带电的结晶紫染料结合牢固，不易脱色。

实验步骤：一、标本的制备：1、涂片：取玻片在火焰上稍微加温，以清洁纱布擦净，放置桌上，左手握菌种管，有搜持接种环，用无菌接种环取生理盐水一滴，置于载玻片的中央，再用接种环在火焰上灭菌，待冷却后，取斜面培养的葡萄球菌或大肠杆菌少许与盐水混匀，直接取1~2环菌液作涂片即可，涂片应厚薄均匀。

接种环采菌后，要通过火焰灭菌才能放下。

2、干燥：目的是是菌体水分慢慢蒸发，固定菌形。

涂片最好在室温中自然干燥，必要是将标本面向上，小心断续在弱火高处略烘，以助水分蒸发；但切勿紧靠火焰，以致标本烤枯，不堪检视。

3、固定：手执玻片一端，标本面向上，在火焰外层快速地来回通过三次，共2-3秒，以玻片反面触及皮肤不觉过烫为度。

冷却后，染色。

目的是杀死细菌，是菌体与玻片粘附较牢以及改变对染料的通透性，因活的细菌一般不能使许多染料进入细胞。

二、染色1、初染：将涂片标本夹持于左手，滴加结晶紫溶液盖满涂抹面，染色1~3分钟，用流水缓缓冲洗(即将龙头打开使水缓慢流出，将玻片倾斜使水在玻片面上端沿玻片流下冲洗染液)直至无颜色流下为止。

2、媒染：加卢戈氏染液4~5滴作用30秒到一分钟，再按上法冲洗，并将片上积水轻轻洒净。

3、脱色：在95%酒精缸中脱色约3~5秒，拿出玻片使酒精由玻片流下，如此反复2~3次，直至流下酒精略呈淡紫色为止，现按上法以流水冲洗，并将玻片轻轻洒净。

4、复染：用稀释石炭酸-复红(或沙黄液)复染半分钟后按上法冲洗。