mobio试剂盒提取土壤DNA的步骤(翻译)
土壤DNA提取试剂盒(Soil
技术咨询电话：400-607-9999土壤DNA提取试剂盒（Soil DNAout）货号: M090065产品及特点：由于土壤中有机质含量丰富,尤其是其中的腐殖酸对PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从土壤微生物提取高纯度的DNA一直是十分棘手的问题。
本产品是本公司精心优化的专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。
1.去污染效果好，OD260/280一般都在1.8以上, OD260/340一般都在3.0以上(表示腐殖酸少),得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR等后续反应。
2.产量高，每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA，片段长度在30 Kb左右。
3.操作过程简单快速，只需要30分钟。
4.扩容性好，既可以在1.5 mL离心管中微量提取，也可以在50 mL离心管中进行大规模制备。
5.试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：成份100 次包装溶液A 50 mL溶液B 50 mL使用手册1份注：溶液A和溶液B均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。
运输及保存：常温运输，4℃保存，保存期为一年。
使用方法：1.65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2.称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。
如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。
也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5 mL离心管中。
注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4.13000-15000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，具体取决于腐殖酸的含量，上清的体积一般为300-400 µL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤1.准备样品：选择合适的土壤样品，将其称重至1g。
如果样品中有根、树枝等杂物，需要将其去除。
2. 加入试剂：将1g土壤样品加入50ml试样管中，然后加入4ml试剂A。
用旋转混合器将土壤样品和试剂彻底混合。
3.离心：将混合物离心10分钟，以去除土壤颗粒和杂质。
离心后，样品将分为上清液和沉淀。
4. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
5. 加入试剂：将2ml试剂B加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，使试剂B和上清液充分混合。
6. 震荡：将离心管放入震荡器中，以6000rpm的速度震荡10分钟，以充分裂解细胞。
7.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的土壤颗粒。
8. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
9. 加入试剂：将0.5ml试剂C加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
10.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
注意不要转移沉淀物。
12. 加入试剂：将0.8ml试剂D加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
13.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
14. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
15. 加入试剂：将0.5ml试剂E加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
16.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
17. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
18. 加入试剂：将0.5ml试剂F加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
19.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
20. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
21. 加入试剂：将0.5ml试剂G加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
土壤DNA提取Part II 化学篇
土壤DNA提取Part II 化学篇接着前一篇文章关于如何提高土壤DNA提取得率的话题。
我们已经十分彻底的谈了样品研磨裂解、选择研磨珠类型的重要性、研磨设备以及裂解缓冲液。
从中你也可以发现，裂解步骤是提高得率的最值得钻研的地方。
研磨裂解后最终DNA抽提前，需要清洗去杂。
这一步主要由抑制因子去除技术（IRT）完成。
跟着操作说明书流程走，抑制因子去除完成后，文章的再下一段就是使用化学溶液配合硅胶离心柱抽提DNA了。
去除抑制因子：把土壤样品研磨破碎后就可以进行PCR抑制因子去除工作。
所谓的腐植酸其实就是使得样品呈现棕色的物质。
如果样品中有植物残骸甚至生物薄膜（Biofilm），杂质中还会含多糖类物质。
MO BIO以及Powersoil kits之所以在同行、同类试剂盒中出类拔萃就是因为其抑制因子去除。
MO BIO实验室开发出了一个专利技术，叫抑制因子去除技术（IRT）。
它能从细胞裂解物中沉淀去除腐植酸、多糖、多酚等。
IRT技术分两步，先去除蛋白质和其它残骸，然后去除不溶性大分子絮状沉淀物。
IRT处理后，样品看起来就清亮很多了。
PowerSoil 和PowerWater经过实验计算使用了充足的IRS量来对付最最难搞的问题土壤。
若最终依然存在有抑制因子（PCR扩增检测），重复一次IRS步骤。
IRT的第一步需要低温来加强絮状物形成。
而第二步，我们建议不要延长孵育时间超过5min。
试验证明过长孵育时间会降低DNA得率。
中点？如果要临时中止实验，时间点最好是在IRS结束后，加入绑定液之前。
把溶解产物存放在-20℃留到第二天再做硅胶离心柱绑定。
绑定到硅胶薄膜上：此时，DNA已经可以过硅胶薄膜用于抽提了。
一般上一步得到的细胞裂解产物应该是清亮的（如果土壤有机物含量很多，有可能微微发黄）。
为了把DNA吸附到硅胶薄膜上，需要离液盐的帮助。
绑定液（C4溶液）与溶解产物的比例是得率的又一关键点。
绑定液用太多，会导致降解RNA过多回收；要是太少，大分子量的基因组DNA回收率就不高。
四种提取土壤DNA的方法
四种提取土壤DNA的方法OMEGA试剂盒法1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。
加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。
2.加入100μl Buffer DS，震荡混匀。
3.70o C水浴10min,水浴过程中，轻轻震荡。
4.于室温离心（3000rpm）3min，上清吸取800μl至2ml离心管，加入270μl Buffer SP2，充分震荡混匀。
5.冰浴5min, 4o C、12000rpm离心5min。
6.小心将上清移至新的2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀（轻轻地20-30次），于室温放置30min。
7.4o C、12000rpm离心10min，以沉淀DNA。
8.弃上清，确保不将DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上1min，以流干液体。
9.加入200μl Elution Buffer于管内，轻轻震荡10s。
10.加入50-100μl HTR Reagent ,轻轻震荡10S。
11.室温放置2min，12000rpm离心2min。
12.将上清移至新的离心管中，加入等体积XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。
13.将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中，10000rpm室温离心1min，弃上清。
14.加入300μl XP2 Buffer， 10000rpm离心2min，弃收集管。
15.将柱子插入新的收集管，加入700μl SPW Wash Buffer（提前用无水乙醇配好）， 10000rpm离心1min，弃上清。
16.重复上一步。
17.弃液体，12000rpm室温离心2min。
18.将柱子插入新的离心管中，加入30-50μl Elution Buffer于柱子中央，65o C水浴10-15min。
19.12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱液保留。
20.重复步骤18、19。
周法1.称取5g土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2％CTAB提取液pH8.0）和50μl蛋白酶K（20mg／ml），置于37o C恒温摇床上（水平放置），150-180rpm摇1h。
土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明
土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D2600规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：D2600-50T D2600-100T溶液A25ml50ml溶液B3ml6ml溶液C5ml10ml溶液D10ml20ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个PCR增强剂500ul1ml说明书1份1份注：试剂盒开封后溶液A、B、C、D需在2-8℃保存。
PCR增强剂-20℃保存。
产品简介:本试剂盒适合于从褐土、淤泥、火山灰等各种极端土壤环境中提取微生物DNA。
对土壤中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多态性。
本试剂盒采用我公司特有的腐殖质吸附材料，可高效专一的去除各种腐殖质成分而丝毫不会影响DNA的产率，纯度较酚、氯仿抽提法提高数倍。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称取土壤样本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入450ul溶液A震荡混匀。
*也可直接称取样本0.1-0.5g于离心管(建议使用2ml圆底管)，加入450ul溶液A剧烈震荡混匀1-2min至没有固体块。
使用液氮研磨效果最佳。
2、加入50ul溶液B充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，65℃水浴6min，每2min充分颠倒混匀一次。
3、加入100ul溶液C充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，12000rpm离心10min。
4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min。
5、在吸附柱中加入200ul溶液D，将离心后的上清加入到带有溶液D 的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心1min。
mobioDNA提取试剂盒说明书翻译
1.加2g土壤到15mL Bead Tube中2.加入0.25mLSR1和0.8mLSR2之后，加入2.5mL Bead Solution到Bead Tube3.加入3.5mL酚：氯仿：异戊醇25:24:1到试管中，加盖后涡旋混合直到分层消失。
4.最大转速涡旋震荡15min5.室温，2500g离心10min6.取出后，小心地转移上层水相到干净的15mL收集管中，弃掉下层酚7.加1.5mL SR3到水相中，然后涡旋混匀，4℃孵育10min8.室温，2500g离心10min。
转移上清到一个新的15mL收集管中9.加入5mL SR4溶液到装有上清的收集管中，混匀，室温孵育30min10.室温，2500g离心30min11.倒掉上清，将收集管倒置在纸上5min12.震荡SR5混合。
加1mL SR5到15mL收集管中，并反复吹打使完全重悬。
13.为每一个RNA样品准备一个RNA Capture ColumnA．拿去15mL收集管的盖子，将RNA Capture Column放入15mL收集管中。
B．加2mL SR5到RNA Capture Column中，让其完全流尽。
14.从第12步加入RNA样品至RNA Capture Column中，然后让其在重力作用下流尽。
收集液体。
15.用1mLSR5清洗柱子。
重力流尽，收集洗脱液。
16.转移柱子到新的收集管，加入SR6震荡混合，然后加入1mL SR6到RNA Capture Column洗脱RNA到15mL收集管中，重力流尽。
17.转移洗脱的RNA到2.2mL收集管中，并且加入1mL SR4.颠倒至少一次混合，然后-20℃孵育最少10min18.室温13000g离心15min浓缩RNA19.倒掉上清并倒转收集管在纸上10min晾干20.用100μL SR7溶液重悬RNA沉淀，去除其中的基因组。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
一、试剂盒打开后需要准备的工作1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70C预热ElutionBuffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA
PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA1、加入0.25g 土壤样品到一个PowerBead Tubes中。
2、轻轻涡旋混匀。
3、检测Solution C1。
若出现沉淀，60℃水浴至全溶解。
4、加入60μl Solution C1，上下颠倒数次混匀。
5、把PowerBead Tubes固定在涡旋仪适配器上，最大转速（3200rpm，若涡旋仪达不到此速度，可适当延长5~10min）涡旋连续振荡10min。
6、室温10000g离心30s。
7、转移上清至一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。
8、加入250μl Solution C2到上清中，涡旋混匀5s。
4℃孵育5min。
9、室温10000g离心1min。
10、避开沉淀小珠，转移上清≤600μl 到一个新的收集管（2ml Collection Tube）中。
11、加入200μl Solution C3到上清中，涡旋混匀。
4℃孵育5min。
12、室温10000g离心1min。
13、避开沉淀小珠，转移上清≤750μl到一个新的收集管中。
14、Solution C4 使用前先摇匀。
加入1200μl Solution C4到上清中，涡旋混匀5s。
15、加载约675μl 上清到Spin Filter 中，室温10000g离心1min。
弃去滤液，继续加载675μl 上清，室温10000g离心1min。
重复直至过滤完所有上清。
（每个样品共需加载3 次。
）16、加500μl Solution C5到Spin Filter 中，室温10000g离心30s。
17、弃去上清18、室温10000g 离心1min。
19、小心转移Spin filter 到2ml Collection Tube 中，尽量避免Solution C5 污染。
20、加入100μl Solution C6到白色滤膜中心。
21、室温10000g 离心30s。
22、弃去Spin Filter。
DNA提取步骤中文版
一．DNA的抽提（QIAGEN试剂盒）。
（1）标记1.5mlEP管，吸取20ul蛋白酶K加入1.5mlEP管底部。
（2）加入200ul血清至1.5mlEP管。
若血清不足200ul，可加适量PBS 补充。
（余血清-20℃保存）（3）加200ul缓冲液AL至样品管，震荡混匀15s。
（4）56℃孵育10min。
（5）稍微离心，将EP管壁上的液体离心下去。
（6）加200ul无水乙醇至样品管中，震荡混匀15s，稍微离心。
（7）混合液转移至QIAamp螺旋住置于2ml收集管上，小心勿沾湿边缘。
（加样器垂直于螺旋住，将混合液慢慢加至滤膜中间）。
关盖，标记，8000rpm离心1min。
再将QIAamp螺旋住转移至一个清洁的2ml 收集管内，弃含滤液的收集管。
（8）打开QIAamp螺旋柱加入500ul缓冲液AW1，勿沾湿边缘。
关盖，8000rmp离心1min。
再将QIAamp柱转移至一个清洁的2ml收集管内，弃含滤液的收集管。
（9）打开QIAamp柱加入500ul缓冲液AW2，勿沾湿边缘。
关盖，全速12000rpm离心3min。
（10）标记1.5ml离心管，将QIAamp柱置于一个清洁的1.5mlEP管，弃含滤液的收集管。
打开QIAamp柱加入50ul缓冲液AE。
室温孵育3min。
12000rpm离心1min。
继续下一步实验操作或-20℃保存。
二：目的片段的扩增第一轮PCR反应体系30ul（要有一个阳性对照和一个阴性对照），n个标本10×Buffer 3n uldNTP（200ul/ml） 3n ulprimer 上游引物 0.3n ul下游引物 0.3n ulTaq酶 0.5n ulH2O 20n ul模板DNA 3 ul反应条件94℃ 1min94℃ 20sec55℃ 20sec72℃ 1min20sec反应35个循环注意：配体系时先配总反应体系（混匀），分装后，再加标本（一管一枪头）。
防止污染。
配置体系要在超净台内操作。
土壤DNA提取：常用土壤DNA分离试剂盒解决方案
土壤DNA提取：常用土壤DNA分离试剂盒解决方案土壤中的微生物资源非常丰富，但用传统技术培养的微生物仅占微生物总数的0.01％~10％，且大部分微生物处于不可培养的状态，使相当多的菌种不能被充分地开发和利用。
从土壤中提取的DNA，是微生物、动植物遗体等的总DNA。
由于土壤微生物成分复杂，常规提取总DNA的方法难以去除腐殖酸，而腐殖酸会抑制聚合酶链式反应（PCR）扩增中的TaqDNA聚合酶以及酶切反应的限制性内切酶活性。
另外，土壤质地和成分的差异也会影响土壤微生物DNA的提取效果。
因而，从土壤中提取DNA，腐殖物质等抑制因子的去除就成为了重中之重。
如何从土壤样本中提取纯化DNA？Norgen土壤DNA分离试剂盒为从土壤样本中检测微生物提供了一种方便、快速的方法。
所有类型的土壤样品均可使用该工具包进行处理，包括普通土壤样品和腐殖酸含量高的难处理土壤样品，如堆肥和粪便。
该试剂盒使用提供的OSR（有机物去除）溶液去除所有微量腐殖酸和PCR抑制剂。
然后使用一种简单快速的旋转柱程序进一步纯化DNA。
总基因组DNA可以从土壤中发现的各种微生物中分离和纯化，如细菌、真菌和藻类。
纯化的DNA质量最高，与下游PCR应用完全兼容，因为在分离过程中去除了所有腐殖酸物质和PCR抑制剂。
该土壤DNA分离试剂盒具有以下特点：1.快速简便的土壤样品中微生物检测方法；2.处理所有土壤类型，包括常见的土壤样品和腐植酸含量高的难处理的土壤样品，如堆肥和粪肥；3.使用OSR（Organic Substance Removal）溶液去除有机物质；4.从DNA样本中去除所有腐殖酸；5.使用快速离心柱形式进行快速简便的处理；6.从包括细菌、真菌和藻类在内的各种微生物中分离出高质量的总DNA；7.纯化的DNA质量很高，完全兼容下游PCR应用，因为在分离过程中去除了腐殖酸物质和PCR抑制剂。
从表层土壤和粘土样品中分离出的DNA浓度比较。
Norgen土壤DNA提取试剂盒和Competitor M的试剂盒用于从250 mg表层土壤和粘土样品中分离DNA。
FastDNA SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤
Fast DNA® SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤（没有FastPrep®仪器的情况下）（1）称取0.3 g~0.4 g样品加入Lysing Matrix E Tube 中。
（注意：需保证加完样品及所需溶液后，管中应留出不少于200 μL空间）（2）加入978 μL SPB，加入122 μL MT Buffer。
（3）盖紧Lysing Matrix E Tube的盖子，将离心管置于涡旋混合仪上，对管内物质进行震荡破碎均质化，时间设定为40 s~50 s。
（注意：时间不可过长，有可能打断基因组DNA片段降低提取质量）从各个角度都可以震荡一下，不要光是底部。
（4）在8000 r/min转速下离心15 min，有利于去除体积较大或具有复杂细胞壁结构的样品碎屑。
（5）将上清液用大口枪头吸出转入1.5 mL的微离心管中，加入250 μL PPS，手持离心管晃动10次以混匀。
（6）在8000 r/min下离心5 min，用大口枪头将上清液转移至5 mL离心管中。
（7）摇匀Binding Matrix后，吸取1.0 mL加入上一步离心管中。
（8）将离心管上下颠倒2 min后，静置3 min，使DNA附着于Bingding Matrix 上，并等待二氧化硅基质沉淀。
（这一步根据沉淀情况时间可以适当延长）（9）小心移除600 μL上清液，避免吸出沉淀物。
（10）将剩余的上清液与沉淀物重新混匀，吸取约600 μL混合液移入SPIN Filter中，8000 r/min下离心1 min。
（11）倒掉收集管中的液体，重复上一步操作直至5 mL离心管中的液体吸尽。
（12）加入已制备好的SEWS-M溶液500 μL，用小枪头小心混匀后，8000 r/min 下离心1 min后，弃去收集管中的液体。
（13）为更好的去除杂离子，重复第12步，更换为1.5 mL离心管。
（14）在8000 r/min下离心2 min，去除残留的SEWS-M溶液，然后更换为干净的1.5 mL离心管。
土壤DNA提取说明书
试剂盒22℃--25℃储存使用前：用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer1、0.5g玻璃珠加入15ml离心管中，加0.2-0.5g土样，加1ml Buffer SLX Mlus，涡旋3-5 min；2、加100微升Buffer DS，涡旋混合；3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋；（对于难提取样品可以在90℃水浴）4、3000r 室温离心3min，取800毫升上清液于2ml离心管中，加入270毫升Buffer SP2，涡旋混合；5、冰浴5 min，13000g 4℃离心5 min；6、取上清液于新2ml离心管，加入0.7个上清液体积的异丙醇，颠倒离心管20-30次以混合，（若样品DNA含量低，可以放置于-20℃1h ）;7、13000g 4℃离心10min，获得沉淀；8、弃上清，在吸水纸上倒置1min；9、加200毫升Elution Buffer,涡旋10s，65℃水浴10-20min至沉淀溶解；10、加500-100毫升HTR Reagent，涡旋10s（HTR Reagent使用前要摇匀）；11、室温静置2min后13000g 室温离心2min；12、取上清液于新2ml离心管中（若上清液有黑色则重复步骤10-12）；13、加上清液的等体积XP2 Buffer并涡旋；14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中，将上一步样品加入柱中，10000g 室温离心1min，弃流液，保留收集管；15、将柱移入上一步中的收集管，加入300毫升XP2 Buffer，10000g离心1min，弃流液和收集管；16、将柱移入新2ml离心管中，加入700毫升SPW Wash Buffer（用无水乙醇稀释过的）洗涤，10000g 离心1min，弃流液保留收集管；17、重复16步；18、弃流液，将柱插入空收集管中，13000g 室温离心2min；（是为了除去乙醇，乙醇对后续操作有影响）19、将柱移入干净1.5ml 离心管，将30-100毫升Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心，65℃水浴10-15min；20、13000g 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100毫升Elution Buffer，重复19-20步。
土壤DNA提取试剂盒说明书
土壤基因组DNA提取及PCR报告一、步骤试剂盒22℃--25℃储存使用前：用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer 1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中（15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮），加0.5g【0.4—0.5g】土样，加1ml Buffer SLX Mlus 【裂解菌体】，最高速度涡旋3-5 min；2、加100ul Buffer DS，涡旋混匀；3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋；（对于难提取样品可以在90℃水浴）4、3000rpm 室温【25℃】离心3min，转移800ul上清液于一新的2ml离心管中，加入270ul Buffer SP2，涡旋混匀；5、冰浴5 min，4℃，13000xg 离心5 min；6、小心转移上清液于一新的2ml离心管，加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇，反复颠倒离心管20-30次以混合，（若样品DNA含量低，可以放置于-20℃1h ）;7、13000xg 4℃离心10min，获得沉淀DNA；8、小心去除上清液，将离心管在吸水纸上倒置1min；9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s，溶解DNA，【预热EB，保存60℃，15min水浴】；10、加100ul HTR Reagent，涡旋10s混匀；（HTR Reagent使用前要摇匀，吸取时将枪头剪大一点儿）；11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min；12、取上清液于新2ml离心管中（若上清液有黑色则重复步骤10-12）；13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀；14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中，将上一步样品转移到柱中，10000xg 室温离心1min，弃流液，保留收集管；15、将柱移入上一步中的收集管，加入300ul XP2 Buffer，10000xg 离心1min，弃流液、收集管；16、将柱移入新2ml离心管中，加入700ul SPW Wash Buffer（用无水乙醇稀释过的）洗涤，10000xg 离心1min，弃流液保留收集管；17、重复16步；18、弃流液，将柱插入空收集管中，13000xg 室温离心2min，空甩干燥柱子；（是为了除去乙醇，乙醇对后续操作有影响）19、将柱移入干净1.5ml 离心管，将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心，65℃水浴10-15min，室温放置3—5min；20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100ul Elution Buffer，重复19-20步22、检测二、结果1、OD值Nanodrop 2000 analysis2、电泳：土样量6ul；1%琼脂糖凝胶分析3、PCR:20ul体系：PCR Mix：10ul 引物：0.3+0.3ul 模板：1ul 加水补齐预变性：94℃10 min变性：94℃20s退火：52℃20s延伸：72℃20s终延伸：72℃5minPCR电泳：上样量：8ul；1%琼脂糖凝胶分析。
环境微生物样品总群落基因组DNA提取(PowerSoil_DNA提取试剂盒)
环境微生物样品总群落基因组DNA提取（PowerSoil_DNA提取试剂盒）PowerSoil DNA Isolation Kit (MoBio)●PCR抑制物去除技术(Inhibitor Removal Technology, IRT)●适用于高腐殖酸环境样品(如堆肥、底泥和土壤等)●已被广泛用于PCR检测各种微生物，包括细菌、真菌、藻类和放线菌等●基本原理：细胞裂解->总基因组DNA与硅胶膜结合->DNA洗脱操作步骤：1.将0.25克土壤样品加入或转移至PowerBead Tube作用：在您的样品已被加载到PowerBead管，下一步是一个同质化和裂解过程。
PowerBead管包含了一个缓冲区，有三种功能（1）帮助分散的土壤颗粒（2）开始降解腐殖酸（3）保护降解核酸。
2.稍涡旋混匀3.检查Solution C1（裂解缓冲液）；若有沉淀，则在60oC加热溶解作用：C1的功能包含SDS和其他破坏需要完整的细胞溶解剂。
除了协助细胞裂解，SDS还是一种阴离子洗涤剂，分解脂肪酸和某些脂质与一些生物的细胞膜。
如果天气变冷，就会形成白色沉淀在瓶子里。
加热至60摄氏度将降解SDS而不会伤害SDS或其他干扰剂。
C1的可以使用，而它仍然适温，4.加60 ul Solution C1（裂解缓冲液），颠倒数次或稍涡旋混匀5.装上涡旋适配器并以最大速度涡旋10 min作用：该涡旋步骤是完全同质化和细胞裂解的关键。
细胞是由溶解从步骤1-4和机械振动在这一步引入组合化学药剂。
通过随机振动的干扰剂存在下，珠与珠碰撞微生物细胞会造成细胞破开。
钼生物涡适配器被设计成一个简单的平台，促进保持管紧紧贴在旋涡。
应该指出的是，尽管你可以用胶带连接管，往往是磁带变得松散，不是所有管会摇匀或有效。
这可能会导致或不一致的结果单产下降。
因此，对莫生物涡适配器是一个高度推荐使用和成本的获得最大的DNA产量有效途径。
6.10,000 g离心30 sec（注意：绝不能超过10,000 g!）7.将上清液（400-500 ul）转移至干净的2 ml收集管8.加250 ul Solution C2（抑制物去除液-1），涡旋5 sec后于4oC放置5 min作用：它包含一种试剂，该试剂由各种有机和无机材料组成，包括腐殖质，细胞碎片，和蛋白质。
土壤中DNA提取
DNA提取试剂盒操作步骤1、称取0.5g玻璃珠放入10ml的离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。
加入1ml buffer SLX Mμl s。
在涡旋震荡器上以最大速度震荡3-5分钟使裂解样品；2、向离心管中加入100μl bμffer DS并震荡混匀；3、在70℃水浴中温育10分钟在温育过程中快速进行一次涡旋震荡。
对一些难裂解的细菌，可将温度升高至90℃；４、室温下3000rpm离心3min，将800μl 的上清液转至一个新的1.5ml 离心管中，并添加270μl 的SP2 bμffer，涡旋振荡器震荡充分混匀样品；5、冰浴5min，4℃条件下，最大速℃（13000g）离心5min；6、小心将上清转至一个新的1.5ml离心管中，添加0.7倍体积的异丙醇，上下颠倒离心管约20-30次，以充分混匀。
如果土壤中DNA含量很低，可以将样品在-20℃孵育1h；7、4℃条件下，最大速℃（13000g）离心10min，得到DNA沉淀；8、小心弃上清，确保没有丢失DNA沉淀。
可以将管倒置在吸水纸上1min，以控干液体，没必要使DNA沉淀干燥；9、加200 μl Elμtion bμffer于离心管中，涡旋器震荡10秒。
65℃孵育10-20min，以溶解DNA沉淀；10、将50-100μl HTR Reagent。
涡旋10秒，彻底混匀。
注意：加HTR Reagent前，要摇晃瓶子，使溶液彻底溶解；11、室温孵育2min，最大速℃（13000g）离心2 min；12、将上清转移至一个新的离心管中。
注意：如果上清液中仍然含有来自土壤的黑色，重复HTR处理的步骤10-12；13、加等体积的XP2 bμffer，涡旋振荡器震荡充分混匀样品。
例如：如果从步骤12中得到250μl 样品，加入250μl的XP2 bμffer；14、将步骤13得到的液体带有2 ml离心管（试剂盒提供）的HiBind DNA 柱中。
室温下10000*g离心1min。
DNA试剂盒
（1）称取0.5g土壤样品添加到PowerBead管中，轻轻的涡旋混合；（2）检测C1溶液。
若出现沉淀，60℃至完全溶解；（3）加入60μl C1溶液至PowerBead管中，上下颠倒数次混匀；（4）将PowerBead管古锭刀涡旋仪适配器上，最大转速旋涡连续振荡10min；（5）室温下，10000×g离心30s；（6）避开土壤颗粒，转移上清至干净的2ml Collection Tube；（7）往2ml Collection Tube中加入250μl C2溶液，涡旋混匀5S后，4℃下孵育5min；（8）室温下10000×g离心1min；（9）避开沉淀小珠，转移上清液至新的2ml Collection Tube中；（10）加入200μl C3溶液至2ml Collection Tube中，短暂涡旋混匀后，在4℃下孵育5min；（11）室温下10000×g离心1min；（12）避开沉淀小珠，转移上清液至新的2ml往2ml Collection Tube中；（13）将C4溶液摇晃混匀后，取1200μl加入到2mlCollection Tube中，涡旋混匀5S；（14）加载约675μl上清液到Spin Filter中，室温下10000×g离心1min。
倒掉废液，继续加入675μl上清液到Spin Filter中，室温下10000×g离心1min。
倒掉废液，加入剩余的上清液到Spin Filter中，室温下10000×g离心1min；（15）加入500μl C5溶液至Spin Filter中，室温下10000×g离心30s；（16）弃去上清液，室温下，10000×g，空离心Spin Filter 1min；（17）小心转移Spin Filter放入干净的2mlCollection Tube中，避免C5溶液溅洒在Spin Filter上，引起污染；（18）加入100μl C6溶液于中央白色滤膜中心，洗脱Spin Filter膜；（19）室温下，10000×g，离心30s；（20）弃去Spin Filter，于-20℃保存管中DNA。
mobio土壤rna提取试剂盒原理
mobio土壤rna提取试剂盒原理
mobio土壤RNA提取试剂盒是一种专门用于从土壤样品中
提取RNA的试剂盒。
它基于一系列化学和物理原理，实现了
高效、快速且可靠的土壤RNA提取。
该试剂盒的原理主要包括以下几个步骤：
1. 破碎和均一化：首先，土壤样品需要经过破碎和均一化
处理，以确保样品中的生物学组分充分释放。
2. 细胞壁破裂：土壤样品中的微生物和真核细胞都具有细
胞壁，这些细胞壁需要被破裂以释放RNA。
试剂盒中的缓冲
液和研磨颗粒通过机械破裂和化学分解作用，有效地破裂了细胞壁。
3. RNA保护：为了保护提取的RNA不被降解，在破裂细
胞的同时，加入了RNA保护剂，能够迅速地与RNA结合，
保护其完整性。
4. 蓄集RNA：经过细胞破裂和RNA保护处理后，接下来
需要将释放的RNA从混合溶液中蓄集起来。
试剂盒中的柱子
或磁珠等载体材料能够选择性地结合RNA，并去除其他杂质，从而纯化RNA。
5. 洗脱：经过纯化后，RNA需要从载体材料上洗脱下来。
通过改变溶液的组成，使RNA能够迅速从载体材料上解离，
从而得到纯净的RNA。
mobio土壤RNA提取试剂盒根据土壤样品中生物学组分的
特点，采用一系列化学和物理原理，实现了高效、快速和可靠的土壤RNA提取。
这种试剂盒的使用使得研究人员能够从土
壤样品中提取到高质量的RNA，在分子生物学研究和环境科
学领域具有重要的应用价值。
试剂盒提取详细步骤
美国MOBIO土壤RNA提取试剂盒(RNA PowerSoil™ Total RNA Isolation Kit)Detailed Protocol (Describes what is happening at each step) Wear RNase-Free gloves (1555) at all times and remove RNase from the work area using Lab Cleaner (12095) for RNase Removal. Both of these products are available from MO BIO. Please see “Other Quality Products Available” section at the end of this manual.1. Add up to 2 g of soil to the 15 ml Bead Tube (provided). Note: Please refer to Hints and Troubleshooting Guide for information regarding the amount of soil to process. 1、加2g土壤到15ml磁珠管中。
注意：请参照提示和纠错指南确定加入土壤的量。
2. Add 2.5 ml of Bead Solution to the Bead Tube and vortex to mix.2、加2.5ml Bead Solution到磁珠管中并漩涡混合。
3. Add 0.25 ml of Solution SR1 to the Bead Tube and vortex to mix.What’s happening: The Bead Solution is a buffer used to disperse cells and soil particles. Solution SR1 contains SDS and other disruption agents which aid in complete cell lysis. In addition to aiding in cell lysis, SDS is an anionic detergent that breaks down fatty acids and lipids associated with the cell membrane of several organisms. Note: If it gets cold, it will form a white precipitate. Heating to 60ºC will dissolve the SDS and will not harm the other disruption agents.3、加0.25ml SR1到磁珠管并漩涡混合。
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UltraClean SoilDNA Isolation Kit Sample详细过程
全过程戴上手套
1、在2 ml Bead Solution Tubes 里加入0.25—1g 土样（注意：请参照提示和纠错指南确定
加入土壤的量）。
发生的反应：土样或废渣样本被装入到Bead Tube中。
这是溶解过程的第一步。
Bead Solution 是一种打散土壤颗粒的溶液并开始溶解腐殖酸。
2、轻微地漩涡混合。
发生的反应：混合样本和Bead Solution。
3、检查S1溶液，如果S1溶液有沉淀，使用前加热到60℃使沉淀溶解。
发生的反应：S1溶液中含有SDS。
如果冷却了就会产生沉淀。
加热到60℃会使SDS 溶解。
S1溶液在温热的时候可以使用。
4、加入60 μl S1溶液，漩涡几次或简短地漩涡（3-4s）。
发生的反应：S1溶液含有SDS。
这是一种帮助细胞溶解的洗涤剂。
这种洗涤剂可以破坏脂肪酸和几种微生物细胞膜相关的脂类。
5、加入200μl IRS溶液（抑制剂去除的溶液）。
只有当DNA要用于PCR时才进行此
步。
发生的反应：IRS是一种专门设计的用于沉淀腐殖酸和其他PCR抑制物的试剂。
DNA 要用于PCR时需要进行此步沉淀。
腐殖酸通常呈棕色。
他们属于有机化合物的一个大组分，存在于大多数富含有机质的土壤中。
6、确保使用MO BIO Vortex Adapter tube holder 进行漩涡时bead tube 是水平放置
的。
最大速度漩涡10min。
（更少量的DNA剪切见可选择的溶解方法）
注意：如果使用可放置多于12支试管的24空位的Vortex Adapter，增加5—10min 的漩涡时间。
发生的反应：略，见使用说明。
7、将试管在10000 × g离心30s。
注意：不能超过10000 × g 否则试管会坏。
发生的反应：此时细胞的残骸、土壤、珠子和腐殖酸等的微粒将结合成沉淀。
DNA在液体状的上清液中。
8、将上清液转移到另一支干净的2 ml Collection Tube中。
注意：根据不同土壤类型0.25g 土壤将会有400—450μl 上清液。
上清液中可能仍然包含一些土壤颗粒。
9、在Collection Tube 中加入250μl S2溶液漩涡5s。
4℃静置5min。
发生的反应：S2溶液中含有一种蛋白质沉淀试剂。
这一步对于移除可能降低DNA纯度和抑制后续DNA利用的污染蛋白十分重要。
10、10000 × g 离心1min。
11、为了避免聚集成团，将整个上清液转移到另一只干净的2 ml Collection Tube中。
发生的反应：此时的沉淀物包含了腐殖酸、细胞残骸和蛋白质的残渣。
为了获得最大量和质量最高的DNA，尽量避免将任何的团状物（颗粒）转移到试管中。
12、使用前摇晃S3溶液，加1.3 ml S3溶液到上清液中漩涡5s。
注意：大量的溶液将会漫到试管边缘，手拿试管时要小心。
发生的反应：S3溶液是一种使NA凝结的盐溶液。
DNA在高盐浓度中凝结在硅砂上
13、将700μl 上步的溶液转入Spin Filter 10000 × g 离心1min。
14、弃掉流出液将剩下的上清液加入Spin Filter，10000 × g 离心1min。
重复此步
知道所有的上清液都通过Spin Filter。
注意：每个样本需要三次添加过程。
发生的反应：DNA选择性地结合在spin filter的硅膜上。
几乎所有污染物都通过了过滤膜，只留下需要的DNA。
15、加入300μl S4溶液10000 × g 离心30s。
发生的反应：S4是一种用于进一步清洁附着在spin filter 硅膜上DNA的清洗溶液。
这种洗涤剂移除了使DNA粘附在硅膜上的盐、腐殖酸和其他污染物的残渣。
注意：如果需要可以进行一次以上的进一步DNA清洗。
在土壤中含有很高的腐殖酸成分时，重复清洗的步骤很有益。
16、弃掉2 ml Collection Tube中的上层洗涤流出液。
发生的反应：洗涤流出液只是包含了乙醇洗涤溶液和没有粘附到spin filter 膜上的成分的废物。
17、10000 × g 离心1min。
发生的反应：此步移除掉S4溶液。
移除所有的洗涤溶液是十分必要的，因为洗涤液将会影响DNA的下游反应。
18、小心地将Spin Filter放入新的干净的2 ml Collection Tube中。
避免S4溶液溅到Spin
Filter中。
19、加入500μl S5溶液到白色滤膜的中央。
20、10000 × g 离心 30s。
发生的反应：当S5溶液（洗脱缓冲液）通过硅膜时，DNA脱离下来流经滤膜进入collection tube中。
21、弃掉Spin Filter。
试管中的DNA可用于PCR了。
建议DNA冷冻在-80℃—-20℃中。