土壤DNA提取试剂盒(Soil
土壤试剂盒操作手册和常见问题
FastDNA Spin Kit for Soil实验步骤1.Add up to 500 mg of soil sample to a Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中最多加入500mg土壤样品。
注意：推荐最多加入500mg土壤样品，含水量比较多的土壤或者碎屑多的土壤可适量减少样品量。
2.Add 978 μL Solution Phosphate Buffer to sample in Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中加入978μl Sodium Phosphate Buffer3.Add 122 μL MT Buffer.What’s happening: Begin to solubilize membrane proteins with detergents as well asextra-cellular proteins and contaminations in soil.加入122μl MT Buffer发生的反应：用洗涤剂溶解细胞膜蛋白以及细胞外蛋白和土壤中的污染物。
注意：为了得到更好的样品处理效果，加入土壤样品及两个缓冲液后，在裂解介质管中仍能保留有250-500μl空间。
4.Homogenize in the FastPrep Instrument for 40 seconds at a speed setting of 6.0What’s happening: mechanical disruption of cell walls of soil organisms and releasing nucleic acids into the protective buffer.将样品置于FastPrep®仪器上匀浆40s，速度为6.0m/s发生的反应：机械破碎土壤微生物的细胞壁，将核酸释放入保护缓冲液中。
5.Centrifuge at 14,000×g for 5-10 minutes to pellet debris.14,000 x g离心5-10min至沉渣注意：如果把离心时间延长到15min，可以更好地使样品量较大的，或者细胞壁结构较复杂的细胞碎片沉降到管底。
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤1.准备样品：选择合适的土壤样品，将其称重至1g。
如果样品中有根、树枝等杂物，需要将其去除。
2. 加入试剂：将1g土壤样品加入50ml试样管中，然后加入4ml试剂A。
用旋转混合器将土壤样品和试剂彻底混合。
3.离心：将混合物离心10分钟，以去除土壤颗粒和杂质。
离心后，样品将分为上清液和沉淀。
4. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
5. 加入试剂：将2ml试剂B加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，使试剂B和上清液充分混合。
6. 震荡：将离心管放入震荡器中，以6000rpm的速度震荡10分钟，以充分裂解细胞。
7.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的土壤颗粒。
8. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
9. 加入试剂：将0.5ml试剂C加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
10.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
注意不要转移沉淀物。
12. 加入试剂：将0.8ml试剂D加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
13.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
14. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
15. 加入试剂：将0.5ml试剂E加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
16.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
17. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
18. 加入试剂：将0.5ml试剂F加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
19.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
20. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
21. 加入试剂：将0.5ml试剂G加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
土壤DNA提取
1 试验材料吉林省松江河镇人参栽培土壤。
每份土壤样品经多点取样后充分混匀，用前过10 目筛，去除土壤中的须根、枯枝等杂物[2]。
1 .2 仪器设备及药品电子分析天平、恒温水浴锅、紫外凝胶成像系统、电泳槽、电泳仪、高速冷冻离心机、微量加样器、PCR 仪等。
TENP 缓冲液（50 mmol/L Tris，20 mmol/L EDTA，100mmol/L Na Cl，1% PVP，pH 10.0）、CTAB 提取缓冲液（100mmol/L Tris，100 mmol/L EDTA，100 mmol/L Na3PO4，1.5mol/L Na Cl，1%CTAB，pH 8.0）、SDS 提取缓冲液（100 mmol/LTris，50 mmol/L EDTA，50 mmol/L Na Cl，pH8.0，灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L）、异丙醇、氯仿、异戊醇、无水乙醇、琼脂糖、EB、Taq DNA 聚合酶、d NTP、6×凝胶上样缓冲液、DNAMarker 等。
主要试剂有十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）、乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）、十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）、异硫氰酸胍，均为分析纯级。
1 .3 试验方法1.3.1 土壤微生物的洗涤取土壤样品2g，置于50m L 灭菌的离心管中；加入10m L TENP 缓冲液[3]悬浮土样，磁力搅拌器搅拌15 min；10000r/min 离心5min，弃上清，重复洗涤多次至上清基本无色；最后将沉淀收集至1.5ml 离心管中。
1.3.2 DNA 的提取1.3.2.1 CTAB 法按照李钧敏[4]的方法略作改动。
将沉淀重悬于500μl CTAB 提取缓冲液→65℃水浴2h→8000r/min，室温离心15 min，取上清→加入等体积氯仿：异戊醇（24∶1），12,000r/min 离心10 min，取上清→加入0.6 倍体积的异丙醇，4℃淀过夜→12000 r/min 4℃离心20min 收集DNA 沉淀→70%乙醇漂洗两次→干燥后将沉淀溶于100 μl p H 8.0 TE 缓冲液，备用。
四种提取土壤DNA的方法
四种提取土壤DNA的方法OMEGA试剂盒法1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。
加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。
2.加入100μl Buffer DS，震荡混匀。
3.70o C水浴10min,水浴过程中，轻轻震荡。
4.于室温离心（3000rpm）3min，上清吸取800μl至2ml离心管，加入270μl Buffer SP2，充分震荡混匀。
5.冰浴5min, 4o C、12000rpm离心5min。
6.小心将上清移至新的2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀（轻轻地20-30次），于室温放置30min。
7.4o C、12000rpm离心10min，以沉淀DNA。
8.弃上清，确保不将DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上1min，以流干液体。
9.加入200μl Elution Buffer于管内，轻轻震荡10s。
10.加入50-100μl HTR Reagent ,轻轻震荡10S。
11.室温放置2min，12000rpm离心2min。
12.将上清移至新的离心管中，加入等体积XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。
13.将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中，10000rpm室温离心1min，弃上清。
14.加入300μl XP2 Buffer， 10000rpm离心2min，弃收集管。
15.将柱子插入新的收集管，加入700μl SPW Wash Buffer（提前用无水乙醇配好）， 10000rpm离心1min，弃上清。
16.重复上一步。
17.弃液体，12000rpm室温离心2min。
18.将柱子插入新的离心管中，加入30-50μl Elution Buffer于柱子中央，65o C水浴10-15min。
19.12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱液保留。
20.重复步骤18、19。
周法1.称取5g土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2％CTAB提取液pH8.0）和50μl蛋白酶K（20mg／ml），置于37o C恒温摇床上（水平放置），150-180rpm摇1h。
dna提取试剂盒原理
dna提取试剂盒原理
DNA提取试剂盒的原理是利用化学方法和物理方法将细胞膜破坏、细胞蛋白质降解、DNA与其他细胞组分分离，从而获得纯净的DNA样品。
具体步骤如下：
1. 细胞破碎：将待提取DNA的样品加入溶解缓冲液中，通过机械破碎、超声处理或酶解等方法使细胞膜完全破裂，释放细胞内的DNA。
2. 蛋白质降解：加入蛋白酶K等蛋白酶，将细胞内的蛋白质降解为小分子物质，以便后续去除。
3. DNA与蛋白质的分离：加入乙酸酚-氯仿等有机试剂，通过离心将DNA和蛋白质、碎细胞残渣等分为两相，DNA富集于上层而蛋白质和细胞残渣富集于下层。
4. DNA析出：将上层液体转移至新离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，DNA会在其中沉淀出来。
5. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，以去除残留的盐类和杂质。
6. DNA溶解：用脱离蛋白质结构的缓冲液溶解DNA沉淀，得到所需的DNA提取物。
DNA提取试剂盒通过上述原理，能够高效、快速地提取出高
质量的DNA样品，适用于分子生物学、基因组学、遗传学、犯罪学等领域的研究和应用。
实验室土壤DNA提取方法
实验室土壤DNA提取方法1.样品收集和处理：首先，选择代表性的土壤样品进行采集。
可以使用一支消毒过的勺子或铲子，在表层土壤（0-10厘米深度）从多个点上采集土壤样品。
将采集的土壤样品放入带有滴涤酒精的消毒塑料袋中，密封并标记。
2.去除有机污染物：将收集的土壤样品放在室温下放置48小时，以除去土壤中的有机污染物。
然后，使用筛网（孔径为2毫米）将土壤样品筛选，以去除大颗粒物。
3.细胞破碎：将筛好的土壤样品放入5毫升的离心管中，加入细胞破碎缓冲液（含有Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K和SDS），并加入玻璃珠。
用震荡器将土壤样品在高速震荡下破碎数分钟，直至土壤样品完全均质。
4.DNA提取：将土壤样品离心10分钟，以除去残余的土壤颗粒物。
将上清转移到新的离心管中。
加入NaCl和CTAB（cetyltrimethylammonium bromide）缓冲液，并轻轻倒置混匀。
将样品在65摄氏度的水浴中孵育30分钟。
加入异丙醇并轻轻倒置混匀，然后继续孵育5分钟。
用塑料吸管吸取上层的异丙醇溶液，避免吸取到DNA混淆物。
将异丙醇溶液转移至新的离心管中，并加入冷异丙醇，使DNA沉淀。
将离心管放置在-20摄氏度的冰箱中，孵育至少2小时，以沉淀DNA。
使用离心机将混悬液离心10分钟，以将沉淀的DNA分离出来。
去除上清液，并用70%乙醇洗涤DNA沉淀，以去除异丙醇和其他杂质。
将洗涤后的DNA沉淀风干，然后加入含有TE缓冲液（含有Tris-HCl和EDTA）的管中重溶。
对DNA溶液进行浓度和纯度检测，可以使用比色法或分光光度计来确定DNA的浓度和 A260/A280比值。
将DNA溶液储存在-20摄氏度的冰箱中，以便后续分析。
土壤DNA提取具有许多优点，如操作简单、成本低廉，并且可以获得大量的DNA，适用于各种微生物的遗传分析。
然而需要注意的是，土壤样品中存在有机物和多种离子，可能会对DNA提取的效果产生影响，因此在提取过程中需要仔细操作，以确保提取到高质量的DNA。
SoilDNAKit步骤
SoilDNAKit步骤E.Z.N.A. Soil DNA Kit1、将500mg的玻璃珠转移到15mL离心管中2、加0.2-1.0g土壤样品到玻璃珠中3、加1mLSLX-Mlus Buffer，最大速度搅拌3-5分钟直到样品溶解注意：为达到最佳效果，需要用到搅拌磨，如Fastprep-24、Mixer Mill 3004、加入100uL DS Buffer，彻底震荡混匀5、70℃水浴10分钟，水浴过程中稍微震荡离心管注意：为将DNA从革兰氏阳性菌中隔离出来，第二次95℃水浴2分钟6、3000×g，室温离心3分钟7、转移800uL上清液到一个新的2mL离心管中8、加入270uL P2 Buffer，彻底震荡混匀9、冰浴5分钟10、≥13000×g，4℃离心5分钟11、小心转移上清液到一个新的2mL离心管中12、加入0.7体积的异丙醇，倒置离心管20-30次彻底混匀注意：如果土壤中含少量的DNA，-20℃孵育样品1小时13、≥13000×g，4℃离心10分钟14、小心弃掉上清液，不搅动DNA沉淀15、在吸水纸上倒置离心管1分钟，排干水分注意：不需要干燥DNA沉淀16、加入200uL Elution Buffer，震荡10秒17、70℃水浴10-20分钟，以溶解DNA沉淀18、加入100uL HTR Reagent，彻底震荡混匀注意：使用前摇动瓶子，充分悬浮HTR Reagent19、室温放置2分钟20、≥13000×g，离心2分钟21、转移清澈的上清液到一个新的2mL离心管中注意：如果上清液仍然呈土壤中的黑色，重复18-20步骤22、加入等体积的XP1 Buffer，彻底震荡混匀23、将一个HiBind DNA Mini Column插入2mL收集管中24、将22步的样品转移到HiBind DNA Mini Column中25、10000×g，室温离心1分钟26、弃去滤液，保留收集管27、加入300uL XP1 Buffer28、10000×g，离心1分钟29、弃去滤液和收集管30、将HiBind DNA Mini Column转移到一个新的2mL收集管中31、加入700uL SPW Water Buffer注意：SPW Water Buffer使用前用酒精稀释32、10000×g，离心1分钟33、弃去滤液，保留收集管34、重复31-33步35、≥13000×g，室温离心空的HiBind DNA Mini Column2分钟注意：这步是去除残余酒精的关键，36、转移HiBind DNA Mini Column到一个干净的1.5mL离心管中37、加入30-100uL 70℃Elution Buffer到HiBind膜中心上38、室温放置3-5分钟39、≥13000×g，离心1分钟40、重复37-39步41、弃去HiBind DNA Mini Column，-20℃保存洗提的DNA。
土壤总DNA的几种提取方法
土壤总DNA的几种提取方法1.CTAB法CTAB法是一种常用的土壤总DNA提取方法。
该方法使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）缓冲液，可以有效去除土壤中的蛋白质、多糖和有机酸等干扰物质。
首先将土壤样品与CTAB缓冲液混合，然后进行细胞破碎、去蛋白、去RNA等步骤，最后通过苯酚-氯仿提取和酒精沉淀来纯化土壤DNA。
2.醋酸盐法醋酸盐法是一种简单、快速的土壤DNA提取方法。
该方法通过醋酸盐缓冲液以及Tween 20和SDS等表面活性剂，可以迅速裂解土壤颗粒并去除蛋白质、多糖等杂质。
该方法的优点是操作简单、提取时间短，适用于大批量样品。
3.快速CTAB法快速CTAB法是对传统CTAB法的改进。
该方法中加入Na2EDTA可以有效去除DNA上的脱氧核酸酶，从而保护土壤DNA的完整性。
与传统CTAB法相比，快速CTAB法可以在较短的时间内提取优质土壤DNA。
4.商业化土壤DNA提取试剂盒近年来，越来越多的商业化土壤DNA提取试剂盒被开发出来。
这些试剂盒对土壤样品进行了优化处理，可以快速、高效地提取土壤总DNA。
商业化试剂盒通常使用快速离心和滤膜等技术，可提高DNA的纯度和产量，并且操作简单，适用于初学者和大批量样品处理。
5.玻璃珠法玻璃珠法是一种机械破碎法，适用于多样品同时提取。
该方法先将土壤样品与玻璃珠放在试管中，通过震荡破碎方式将细菌和DNA释放出来。
然后通过离心和滤膜等步骤来纯化土壤DNA。
6.CTAB-SDS混合法CTAB-SDS混合法是结合了CTAB法和SDS（十二烷基硫酸钠）法的优点的土壤DNA提取方法。
CTAB-SDS混合法使用CTAB缓冲液同时包含CTAB 和SDS两种表面活性剂，在去除蛋白质的同时也可以有效裂解囊泡等难以破碎的结构，提高土壤DNA的纯度和产量。
总之，土壤总DNA的提取方法有很多种，选择适合的提取方法需要考虑土壤样品的特性、实验目的以及实验室设备和经验等因素。
同时，为了保证提取的DNA质量，需要注意样品的保存和处理过程中的卫生和无菌操作。
土壤dna提取原理
土壤dna提取原理
土壤DNA提取是一种用于提取土壤中的DNA分子的技术。
它主要基于以下原理：
1. 细胞破碎：首先，土壤样品需要经过细胞破碎步骤，以使细胞膜破裂，使DNA能够被释放出来。
这可以通过物理或化学
方法进行，如震荡、振荡或使用酶解剂。
2. DNA纯化：一旦DNA释放，必须通过纯化步骤来去除其他的污染物，如蛋白质、RNA等。
这通常通过DNA的亲合性纯化或使用离心、过滤等方法来实现。
3. DNA溶解：在纯化步骤之后，DNA通常以溶液的形式存在。
这是为了方便后续的DNA分析，如PCR反应等。
4. DNA浓缩：土壤样品中的DNA通常量很低，因此在分析之前需要进行浓缩。
这可以通过吸附于胶体粒子上或使用商业化的DNA浓缩试剂盒来实现。
5. DNA保存：最后，提取的土壤DNA需要妥善保存以防止降解。
在-20°C或更低的温度下存储，并使用RNA酶抑制剂、
抗氧化剂等添加剂来保护DNA的完整性。
通过以上步骤，可以成功地提取出土壤样品中的DNA，并用
于后续的分子生物学研究，如环境监测、物种鉴定等。
土壤DNA提取方法汇总
碱液加热煮沸法（Direct Cellular Lysis/Protein Extraction Protocol for Soil）1、称取3g（可根据实际情况，按比例增减土样的用量）新鲜土样（采集后放于-4℃保存，一周内用于DNA提取），装于50ml离心管中，然后向装有土壤样品离心管中加入37℃预热的10mlDNA提取液（100mmol/LTris[pH8.0]，100mmol/L disodium EDTA，200mmol/L NaCl，2%[W/V] PVP，2%[W/V] CTAB，2%巯基乙醇[V/V]，6mg/ml溶菌酶）（1 2）2、漩涡振荡混匀，然后再37℃下水浴40min，水浴期间，每隔10分钟左右，混匀样品；3、水浴结束后，加入10ml SDS buffer（100mmol/L Tris [pH 8.0]，100mmol/L EDTA，200mmol/L NaCl，2%[W/V] SDS，160ug/ml的蛋白激酶K），65℃水浴1.5h，每隔20min上下颠倒混匀一次，注意不要剧烈的震荡，以免DNA断裂；4、室温下，6000g离心10分钟，收集上清液；5、按上述方法再将土样残渣抽提一次（重复2、3、4，提取液由10ml变为6ml），合并上清液；（以上步骤为细胞的裂解以及蛋白质、脂类以及腐植酸等杂质的去除）6、在上清液中加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）（去蛋白质以及直链淀粉），颠倒混匀放置10min，16000g 18℃离心20min，收集水相；7、再加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），抽提一次，颠倒混匀放置10min，16000g 18℃离心20min，收集水相；8、用加入0.6倍体积的预冷（-20℃）异丙醇和0.1倍体积的3M醋酸钠（pH5.2）室温沉淀1-2h（到有白色沉淀出现），16000g 25℃离心20min，弃上清液；9、用75%乙醇漂洗2-3次，真空干燥或者是冷冻干燥，或者是室温自然干燥，加dd水或者是TE缓冲液重悬浮（体积为100-500ul，根据DNA的量决定），备用（或者是根据实验需要过DNA纯化柱）。
Soil DNA Kit步骤
E.Z.N.A. Soil DNA Kit1、将500mg的玻璃珠转移到15mL离心管中2、加0.2-1.0g土壤样品到玻璃珠中3、加1mLSLX-Mlus Buffer，最大速度搅拌3-5分钟直到样品溶解注意：为达到最佳效果，需要用到搅拌磨，如Fastprep-24、Mixer Mill 3004、加入100uL DS Buffer，彻底震荡混匀5、70℃水浴10分钟，水浴过程中稍微震荡离心管注意：为将DNA从革兰氏阳性菌中隔离出来，第二次95℃水浴2分钟6、3000×g，室温离心3分钟7、转移800 uL上清液到一个新的2mL离心管中8、加入270 uL P2 Buffer，彻底震荡混匀9、冰浴5分钟10、≥13000×g，4℃离心5分钟11、小心转移上清液到一个新的2mL离心管中12、加入0.7体积的异丙醇，倒置离心管20-30次彻底混匀注意：如果土壤中含少量的DNA，-20℃孵育样品1小时13、≥13000×g，4℃离心10分钟14、小心弃掉上清液，不搅动DNA沉淀15、在吸水纸上倒置离心管1分钟，排干水分注意：不需要干燥DNA沉淀16、加入200 uL Elution Buffer，震荡10秒17、70℃水浴10-20分钟，以溶解DNA沉淀18、加入100 uL HTR Reagent，彻底震荡混匀注意：使用前摇动瓶子，充分悬浮HTR Reagent19、室温放置2分钟20、≥13000×g，离心2分钟21、转移清澈的上清液到一个新的2mL离心管中注意：如果上清液仍然呈土壤中的黑色，重复18-20步骤22、加入等体积的XP1 Buffer，彻底震荡混匀23、将一个HiBind DNA Mini Column插入2mL收集管中24、将22步的样品转移到HiBind DNA Mini Column中25、10000×g，室温离心1分钟26、弃去滤液，保留收集管27、加入300 uL XP1 Buffer28、10000×g，离心1分钟29、弃去滤液和收集管30、将HiBind DNA Mini Column转移到一个新的2mL收集管中31、加入700 uL SPW Water Buffer注意：SPW Water Buffer使用前用酒精稀释32、10000×g，离心1分钟33、弃去滤液，保留收集管34、重复31-33步35、≥13000×g，室温离心空的HiBind DNA Mini Column 2分钟注意：这步是去除残余酒精的关键，36、转移HiBind DNA Mini Column到一个干净的1.5mL离心管中37、加入30-100 uL 70℃Elution Buffer到HiBind膜中心上38、室温放置3-5分钟39、≥13000×g，离心1分钟40、重复37-39步41、弃去HiBind DNA Mini Column，-20℃保存洗提的DNA。
土壤DNA提取试剂盒说明书
土壤基因组DNA提取及PCR报告一、步骤试剂盒22℃--25℃储存使用前：用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer 1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中（15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮），加0.5g【0.4—0.5g】土样，加1ml Buffer SLX Mlus 【裂解菌体】，最高速度涡旋3-5 min；2、加100ul Buffer DS，涡旋混匀；3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋；（对于难提取样品可以在90℃水浴）4、3000rpm 室温【25℃】离心3min，转移800ul上清液于一新的2ml离心管中，加入270ul Buffer SP2，涡旋混匀；5、冰浴5 min，4℃，13000xg 离心5 min；6、小心转移上清液于一新的2ml离心管，加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇，反复颠倒离心管20-30次以混合，（若样品DNA含量低，可以放置于-20℃1h ）;7、13000xg 4℃离心10min，获得沉淀DNA；8、小心去除上清液，将离心管在吸水纸上倒置1min；9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s，溶解DNA，【预热EB，保存60℃，15min水浴】；10、加100ul HTR Reagent，涡旋10s混匀；（HTR Reagent使用前要摇匀，吸取时将枪头剪大一点儿）；11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min；12、取上清液于新2ml离心管中（若上清液有黑色则重复步骤10-12）；13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀；14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中，将上一步样品转移到柱中，10000xg 室温离心1min，弃流液，保留收集管；15、将柱移入上一步中的收集管，加入300ul XP2 Buffer，10000xg 离心1min，弃流液、收集管；16、将柱移入新2ml离心管中，加入700ul SPW Wash Buffer（用无水乙醇稀释过的）洗涤，10000xg 离心1min，弃流液保留收集管；17、重复16步；18、弃流液，将柱插入空收集管中，13000xg 室温离心2min，空甩干燥柱子；（是为了除去乙醇，乙醇对后续操作有影响）19、将柱移入干净1.5ml 离心管，将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心，65℃水浴10-15min，室温放置3—5min；20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100ul Elution Buffer，重复19-20步22、检测二、结果1、OD值Nanodrop 2000 analysis2、电泳：土样量6ul；1%琼脂糖凝胶分析3、PCR:20ul体系：PCR Mix：10ul 引物：0.3+0.3ul 模板：1ul 加水补齐预变性：94℃10 min变性：94℃20s退火：52℃20s延伸：72℃20s终延伸：72℃5minPCR电泳：上样量：8ul；1%琼脂糖凝胶分析。
土壤DNA提取实验报告
土壤DNA提取实验报告土壤DNA提取实验报告引言土壤是地球上最重要的自然资源之一，其中包含了丰富的微生物群落。
了解土壤中微生物的多样性和功能对于生态系统的健康和农业的可持续发展至关重要。
而土壤DNA提取是研究土壤微生物的关键步骤之一。
本实验旨在探究不同土壤样品中的DNA提取方法，以期获得高质量的土壤DNA。
材料与方法1. 土壤样品采集：在不同地点采集不同类型的土壤样品，包括农田土壤、森林土壤和草地土壤。
2. DNA提取试剂盒：使用商业化的土壤DNA提取试剂盒，根据说明书进行操作。
3. 实验仪器：离心机、PCR仪、电泳仪等。
实验步骤1. 样品处理：将采集的土壤样品进行处理，去除杂质和有机物质。
将土壤样品均匀混合，取出适量的土壤样品放入离心管中。
2. DNA提取：根据试剂盒说明书的指导，进行DNA提取操作。
主要步骤包括细胞破碎、蛋白质沉淀、DNA沉淀等。
3. DNA纯化：将提取得到的DNA进行纯化处理，去除杂质和残留试剂。
4. DNA浓度检测：使用分光光度计检测DNA的浓度，确保提取得到的DNA质量。
5. DNA质量检测：使用凝胶电泳技术检测DNA的质量和大小。
结果与讨论通过以上实验步骤，我们成功地从不同类型的土壤样品中提取到了DNA。
经过浓度检测，我们发现不同土壤样品中的DNA浓度存在一定差异。
农田土壤中的DNA浓度相对较高，而森林土壤和草地土壤中的DNA浓度较低。
这可能是由于不同土壤类型中微生物数量和种类的差异所致。
通过凝胶电泳检测，我们观察到提取得到的DNA片段大小也存在差异。
农田土壤中的DNA片段相对较大，而森林土壤和草地土壤中的DNA片段相对较小。
这可能是由于农田土壤中存在更多的微生物群落和高分子有机物质，导致DNA 片段较大。
实验结果表明，不同土壤类型中的DNA提取效果存在差异。
这可能与土壤中微生物的多样性、土壤性质和环境因素等相关。
因此，在进行土壤DNA提取时，需要根据具体的研究目的和土壤特点选择合适的提取方法，以获得高质量的DNA。
碧欧科土壤基因组 DNA 提取试剂盒-说明书
BioFast Soil Genomic DNA Extraction Kit BioFast土壤基因组DNA提取试剂盒TECHNICAL SUPPORT:For technical support, please dial phone number ：0086-571-87774567-5215 or 5211, or fax to0086-571-87774553************************.cn.Website: 试剂盒组成储存条件所有试剂可稳定保存18个月。
介绍本产品提供了一套从土壤样本中提取基因组DNA的简单、快速、经济的方法。
该方法以选择性的Biospin膜系统为基础，可以在半小时内完成基因组DNA这样的高分子量DNA的提取纯化。
该方法步骤简单，不需要液氮研磨，完全避免与酚、氯仿等接触，可一次同时提取多个样本。
提取纯化后的基因组DNA，可以直接用于PCR/Real-Time PCR,等下游应用实验。
原理首先取土壤样品到研磨管，在SP buffer和Lysis S Buffer作用下，通过剧烈振荡，基因组DNA被释放出来。
通过离心，去除大部分杂质。
加入独特的DA buffer，可以有效沉淀腐殖酸、蛋白质、多糖等杂质。
然后，由于加入的Binding缓冲液中适当的盐分及pH值的作用下，DNA被特异性吸附于Biospin膜上。
通过洗涤，可将蛋白质等残留的杂质去除。
最后使用Elution Buffer将DNA从膜上洗脱下来，从而获得基因组DNA。
需要的配套设备和材料* 无菌2.0ml离心管 * 各种规格移液器和无菌移液器吸头* 离心机(最大转速>14,000g) * 无水乙醇重要提示1.请在第一次使用前，向wash Buffer 中加入45ml 乙醇 (无水) 并混合均匀。
2.如果Lysis S Buffer 中出现浑浊，请于37-55°C环境中适当温育，待浑浊物质消失后再使用。
土壤DNA的提取方法
土壤DNA的提取方法1.CTAB法CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）法是最常用的土壤DNA提取方法之一，其基本步骤如下：(1) 取约10 g土壤样品，加入30 ml预先加热的CTAB提取液（CTAB、Tris-HCl缓冲液、EDTA、NaCl和β-巯基乙醇）。
(2) 将混合物在50°C水浴中孵育1小时，然后加入1.5 ml氯仿混合均匀，并离心10分钟。
(3)将上清转移到新离心管中，加入等体积的异丙醇混合均匀，然后离心10分钟。
(4)弃去上清，加入70%乙醇洗涤两次，离心10分钟，弃去上清后干燥沉淀。
(5)加入适量TE缓冲液重溶沉淀，取一小部分进行质检，其余分装入冻存管中保存。
2.快速提取法快速提取法是一种简化了传统CTAB法的土壤DNA提取方法，其基本步骤如下：(1) 取约2 g土壤样品，加入适量的提取缓冲液（包含Tris-HCL缓冲液、SDS、pH调节剂等）。
(2)将混合物在65°C水浴中孵育一定时间，加入异丙醇与沉淀。
(3)将混合物离心，弃去上清，加入70%乙醇洗涤，离心后弃去上清并干燥沉淀。
(4)加入TE缓冲液重溶沉淀，分装入冻存管中保存。
3.商用DNA提取试剂盒法商用DNA提取试剂盒法是一种简单、快速的土壤DNA提取方法，市面上有很多品牌可供选择。
通常的操作步骤如下：(1)取约0.5g土壤样品，加入适量的提取试剂缓冲液，根据试剂盒说明进行操作。
缓冲液中的成分通常包括维持DNA稳定性的蛋白酶抑制剂、表面活性剂和助提剂等。
(2)混合物经过一系列离心、洗涤和干燥步骤，最后加入适量的重溶缓冲液溶解DNA，并进行后续的质检和保存。
除了上述方法外，还有其他一些改进的土壤DNA提取方法被用于特定的研究需求，例如使用聚乙二醇（PEG）提取法、硅胶凝胶膜提示法等。
此外，在土壤DNA提取的过程中需要注意以下几点：-样品收集时应保持无污染状态，避免外源性DNA的污染。
-所选的DNA提取方法要符合研究需求，例如提取总DNA或特定微生物群体的DNA。
土壤dna提取方法
土壤dna提取方法土壤DNA提取是分子生物学研究和环境微生物学研究中的重要步骤，可以帮助我们了解土壤微生物的多样性和功能。
下面我将详细介绍几种常用的土壤DNA 提取方法。
1. 酚类方法酚类方法是最早采用的土壤DNA提取方法之一。
它利用酚和氯仿等有机试剂，通过物理和化学作用将细胞膜破裂，释放出DNA。
这种方法简单易行，但提取的DNA质量可能较差。
此外，酚类方法需要大量有害的有机溶剂，对环境和操作人员有潜在的危害。
2. 商业提取试剂盒方法随着分子生物学技术的进步，商业化的土壤DNA提取试剂盒逐渐出现。
这些试剂盒通常包含缓冲液、蛋白酶和柱式离心管等。
这种方法操作简单，操作时间短，并具有更高的DNA提取质量和稳定性。
而且，这些试剂盒被广泛应用于土壤微生物群落结构和功能的研究中。
3. 超声波方法超声波方法是利用超声波的机械震荡作用使细胞壁破裂，释放DNA。
这种方法操作简单，提取时间短，不需要有机试剂，且适用于多种土壤类型。
然而，超声波提取的DNA可能存在碎片化和氧化的问题。
此外，超声波震荡也可能导致DNA的降解。
4. 磁珠法磁珠法是一种新兴的土壤DNA提取方法。
它利用磁珠表面特异性的修饰物（如硅烷基或羧基）与DNA结合，然后通过磁力作用将DNA与其他成分分离。
这种方法有效地提取高质量的DNA，且可以通过调节磁珠表面的化学修饰来选择性地富集目标DNA。
磁珠法具有高效、高灵敏度和高特异性的特点，是目前土壤DNA提取的研究热点之一。
总结起来，土壤DNA提取方法种类繁多，每种方法都有其优缺点。
在选择合适的方法时，需要考虑实验目的、样本特性、实验设备和实验操作的复杂程度等多个因素。
此外，不同土壤样品可能需要不同的提取方法进行优化和比较，以获得高质量的土壤DNA。
因此，在进行土壤DNA提取实验时，我们应该结合实际情况选择合适的方法，并进行充分的前期准备、优化和实验控制，以确保提取到高质量、高纯度的土壤DNA。
土壤漆酶(Soil Laccase,SL)试剂盒说明书
第1页，共2页货号: QS2913 规格：50管/48样土壤漆酶（Soil Laccase ，SL ）试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：漆酶（Laccase ）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。
测定原理：漆酶分解底物ABTS 产生ABTS 自由基，在420nm 处的吸光系数远大于底物ABTS ，测定ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、震荡仪，甲苯。
试剂组成和配制：提取液：甲苯50mL×1瓶，4℃保存。
自备。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
工作液：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前每瓶加15mL 试剂一溶解。
样本处理：将新鲜土样过40目筛，按照土样质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5~10的比例（建议称取0.1g 土样，加入1mL 提取液）加入提取液，30℃震荡提取30min ，于4℃，10000g ，离心10min ，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 分光光度计预热30min ，调节波长到420nm ，蒸馏水调零。
2. 取1mL 玻璃比色皿，加入100μL 上清液，再加入600μL 工作液，立即于420nm 处测定吸光值，记为A1。
3. 记录完数据立即将反应液转移至1.5mL 棕色Ep 管，置于震荡仪上，30℃震荡反应5min ，取出反应液立即于420nm 处测定吸光值，记为A2。
△A=A2-A1酶活性计算公式：酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U ）。
SL 活性（nmol/min/g ）= dA ⨯∆ε×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 38.9×△A÷W ε：ABTS 毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm ；d ：比色皿光径，1cm ；V 反总：反应总体积，0.7mL ；V 样：反应中样本体积，0.1mL ；V 样总：加入提取液体积，1mL ； W ，样本质量，g ；T ：反应时间，5min注意事项：1. 工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。
FastDNA SPIN Kit for Soil中文说明书
FastDNA SPIN Kit for Soil中文说明书简介FastDNA ®SPIN Kit for Soil的目的是从土壤样品中提取基因组DNA 供PCR使用。
在不到30分钟内，快速DNA提取方法排除使用有害的有机溶剂，如苯酚和氯仿。
该工具包可在土壤社区从所有的细菌，真菌，植物和动物的基因组DNA提取。
该试剂盒包括三个部分：1.裂解Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子，旨在有效地溶解所有不同来源的微生物，包括真细菌孢子和芽孢，革兰氏阳性菌，酵母菌，藻类，线虫和真菌。
2.均质化试剂MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都经过精心挑选和准备，使完整的样本同质化和蛋白增溶。
试剂能够以最小的RNA污染提取基因组DNA。
3.DNA纯化和洗脱试剂GENECLEAN ®过程是他们用来纯化基因组DNA。
程序纯化DNA用专门的硅胶基质的同时消除污染物，抑制并发反应。
* Binding Matrix悬浮* SEWS-M（盐乙醇洗，用前加100ml乙醇）* DES（DNA洗脱液超纯水）试验方案样品处理：1.添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。
由于FastPrep ®仪器的移动，在管内看到大量的聚集。
相同Lysing Matrix不应超过管的体积的7 / 8。
留在管的空间，也提高了更好的同质化的机会。
[见注1]裂解：加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。
[见注1]2.在FastPrep ®仪器中混匀40秒的速度6.0。
3.14000 XG离心Lysing Matrix E Tubes 5-10分钟。
[见注2]4.上清转移到一个2ml干净的管。
加入250μlPPS试剂和混合，用手摇动管的10次。
5.14000 XG离心5分钟沉淀沉淀。
土壤宏基因组DNA提取方法(大量提取)
土壤DNA提取方法（大量提取）：1．取50g 土壤样本，加200ml TENP Buffer（0.5mL/L TritonX-100；50mM EDTA；200mM NaCl；1% PVPP；50mM Tris，pH8.0），涡旋振荡10 min（让管底的土壤振起来）；10,000rpm离心5 min，倒掉上清；2．加入150mL 70%乙醇，涡旋振荡1 min（让管底的土壤振起来），10,000rpm 离心5 min，倒掉上清，并用移液枪吸尽余液；3．土壤中加入100mL TENS Buffer（100mM Tris；100mM EDTA；200mM NaCl；10% SDS；1% CTAB；1% PVPP；100mM PBS，pH8.0），5~10g石英砂，涡旋振荡10 min（让管底的土壤振起来），然后置于-80℃冷冻30min，65℃水浴融化30 min（建议可每隔5 min涡旋振荡5 秒）；12,000rpm（~13,400×g）离心10 min，上清移至新的离心管中；4．上清液中加0.4倍体积3M的乙酸铵，颠倒混匀15~25 次，冰上放置10 min；室温12,000rpm（~13,400×g）离心 5 min；5．取上清，加入0.6倍体积异丙醇，室温放置15min，4℃，12000rpm离心20min，弃上清；6．加入500ul Buffer SL，涡旋震荡1~3min，65℃水浴20min；12000rpm离心3min，上清转移至新的1.5mL离心管。
7．加入等体积Buffer SGL，颠倒混匀15~25次，冰上放置5min；室温12000rpm 离心5min；8．上清转入Spin column DM 中（Spin column DM 事先放入1 个2ml collection tube，若一次不能加完溶液，可分多次转入），12,000rpm（~13,400×g）离心1 min，弃废液，将Spin column DM 重新放入2ml collection tube中；9．向Spin column DM 中加入500μl Buffer GWS，12,000rpm（~13,400×g）离心1 min，弃废液，将Spin column DM 重新放入2ml collection tube 中；10．向Spin column DM 中加入700μl Buffer GW1，12,000rpm（~13,400×g）离心1 min，弃废液，将Spin column DM 重新放入2ml collection tube 中；11．向Spin column DM 中加入500μl Buffer GW2，12,000rpm（~13,400×g）离心1 min，弃废液。
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技术咨询电话：400-607-9999
土壤DNA提取试剂盒（Soil DNAout）
货号: M090065
产品及特点：由于土壤中有机质含量丰富,尤其是其中的腐殖酸对PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从土壤微生物提取高纯度的DNA一直是十分棘手的问题。
本产品是本公司精心优化的专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。
1.去污染效果好，OD260/280一般都在1.8以上, OD260/340一般都在3.0以上(表示腐殖酸少),得到的
DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR等后续反应。
2.产量高，每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA，片段长度在30 Kb左右。
3.操作过程简单快速，只需要30分钟。
4.扩容性好，既可以在1.5 mL离心管中微量提取，也可以在50 mL离心管中进行大规模制备。
5.试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：
成份100 次包装
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
使用手册1份
注：溶液A和溶液B均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。
运输及保存：常温运输，4℃保存，保存期为一年。
使用方法：
1.65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃
待用。
2.称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。
如果是扩量
操作，可以使用更多土壤和较大离心管。
也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到
1.5 mL离心管中。
注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4.13000-15000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，具体取
决于腐殖酸的含量，上清的体积一般为300-400 µL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6.将离心管冰浴至少5分钟。
7.13000-15000 g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5 mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上
清的颜色稍淡，体积在0.7 mL左右。
8.加入0.2 mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9.13000-15000 g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。
说明：离心后两相交界面将有白色膜
状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。
上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
10.重复第8步和第9步一次。
最后将上清转移到新的1.5 mL离心管时，不要超过0.5 mL，否则没有空
间加两倍体积的乙醇。
如果有多余的可以弃之不用。
11.加入2倍体积的乙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀，15000 g离心5分钟,弃上清，管底将有微小DNA
沉淀，有时候呈棕色。
注意：不要用异丙醇代替乙醇，否则腐殖酸更容易于DNA共沉淀。
12.加入1mL 75%乙醇，震荡，13000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。
13.重复上步清洗一次。
注意：75%乙醇洗两次有助于去除部分腐殖酸。
技术咨询电话：400-607-9999
14.短暂离心，吸弃残留的75%乙醇（约50uL），室温晾干。
注意：一定要去除残留的75%乙醇，否则会
影响后续反应和电泳上样（样品会飘走）。
15.加入30 uL TE缓冲液溶解沉淀。
注意：不知道样品土壤DNA产率前最好不要加过多TE，如果DNA
浓度高，可以再加TE稀释。
DNA即可用于电泳、酶切和PCR等反应。
电泳时最好采取电泳后染色，因为实验发现，残留腐殖酸会吸附走大量的EB，使在腐殖酸后面的DNA不能染色。
PCR时，最好按终体积的1/10加入随赠的PCR抑制物清除剂（CAT#：M020007）。
疑难解答：
Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。
如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。
方法二是检测最大光吸收。
注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸（humic acid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在260 nm有最大吸收（见Appl.Environ. Microbiol., 63：4993, 1997），有的则在340 nm。
所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。
Sigma, Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q: 本产品是否彻底去除土壤DNA中的所有腐植酸?
A: 腐植酸（humic acid）是动、植物的残骸经过微生物的分解、转化和成千上万年的复杂化学反应而产生的特性各异的一大类物质，其含量和种类随土壤不同而不同。
本产品可以从大部分土壤样品中提取到无腐殖酸污染的DNA。
但对于腐殖酸含量特别高的土壤样品（如泥碳样品，含70%腐殖酸），可能还需要使用柱式腐殖酸清除剂（CAT#：M090146）以便清除DNA样品中残留的腐殖酸。
Q: 是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。
如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的DNA）能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果样品含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行PCR，抑制作用一般可以解除。
如果仍然抑制，可以使用天净沙的PCR Inhibitor Erasol（CA T#：M020007）。
如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂（CAT#：M090146）或先电泳，再用超大片段胶回收试剂Magic Gel DNABACK（CA T#：M060021）纯化土壤DNA，去除残留抑制剂。
其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了 E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。
建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。