《组织化学与免疫组织化学》实验教学大纲

白求恩医学班《组织化学与免疫组织化学》实验教学大纲

课程代码：10271815

课程名称：组织化学与免疫组织化学

英文名称：Histochemistry and Immunohistochemistry

课程类别：学科基础课

课程性质：选修课

授课对象：白求恩医学班

开课学期：第3短学期

课程学时：20学时

选用教材：《组织化学与免疫组织化学》（第1版）李和、周莉主编

人民卫生出版社 2008年8月

授课地点：形态学教学中心

执笔人：刘佳梅（教授）

审核人：周莉（教授）

编写日期：2010年9月

一、实验教学目标

组织化学与免疫组织化学是应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些多肽和蛋白质等大分子物质进行原位定性、定位或定量研究的技术，此技术已成为医学与生命科学研究中重要的研究手段之一。学生通过本课程掌握石蜡、冰冻组织切片标本制作和HE染色、碱性磷酸酶染色和免疫组织化学SP法染色技术，同时，在实验过程中学会发现问题，分析问题和解决问题。通过本课程的基本技能训练，掌握医学形态学研究思维方式和基本方法，并在实际工作中触类旁通，灵活运用。

二、实验学时分配

三、实验教学内容

实验一组织标本石蜡切片制备与HE染色（8学时）

Preparation and HE staining of paraffin tissue sections

【实验要求】

掌握：组织标本石蜡切片制作技术；组织切片HE染色技术。

了解：组织标本冰冻切片制作技术。

【实验内容】

1．组织标本石蜡切片和HE染色实验步骤原理

2．组织取材、固定、脱水和透明、浸蜡、包埋、修块、切片。

3．示教：组织取材、冰冻切片。

4．HE染色：烤片、脱蜡、梯度乙醇水化、苏木精染色，伊红染色、分色、上行梯度乙醇脱水、透明、封片。

5．光学显微镜观察结果并拍照

实验二碱性磷酸酶染色（4学时）

Alkaline phosphatase staining

【实验要求】

掌握：组织化学常用的碱性磷酸酶显示方法。

【实验内容】

1．碱性磷酸酶显示法实验步骤原理

2．使用含有氯化钙的孵育液孵育组织切片

3．硝酸钴置换

4．硫化铵处理

5．显色和封片

6．光学显微镜观察结果并拍照

实验三免疫组织化学染色SP法（5学时）

Immunohistochemistry staining:SP method

【实验要求】

掌握：免疫组织化学SP法的基本原理、实验步骤和注意事项；

了解：免疫荧光组织化学技术的基本原理、实验步骤和注意事项。

【实验内容】

1．免疫组织化学SP法实验步骤原理和注意事项

2．免疫荧光组织化学技术实验步骤原理和注意事项

3．示教：免疫荧光组织化学染色

4．烤片、脱水和水化

5．抗原修复、细胞膜打孔

6．封闭非特异性反应

7．第一抗和第二抗体孵育；显色剂显色

8．复染和封片

9．光学显微镜观察结果并拍照

实验四实验设计—课堂讨论（3学时）

Experiment design—discussion

【讨论要求】

掌握：通过设计自己感兴趣的小实验（全文不少于2000字），掌握实验设计的基本思路和方法。

熟悉：如何在实验中应用免疫组织化学技术。

了解：医学形态学的多种研究方法。

【讨论内容】

1．引言（研究背景）：包括该研究领域国内、外主要研究进展概要，本实验的目的和意义，

约500字。

2．实验材料与方法：包括实验对象（人或动物）；主要试剂和仪器设备；实验方法中免疫

组织化学或免疫荧光组织化学技术需有详细的操作流程）。

3．预期结果与结果分析。

4．学生分小组进行自讲、自评，最后教师总结和点评。

四、实验成绩考核与评定方式

本课程实验教学考核占总成绩的50%。

1．标本制备和染色：占总成绩30%，包括 HE染色标本、碱性磷酸酶染色和免疫组织化学染色各占10分。每位学生的三张染色切片标本经显微摄影后提供照片，成绩评价标准如下：照片显示的阳性结果与预期结果相符为4分；照片清晰为3分；照片颜色纯正、构图美观大方为3分。

2．实验设计：占总成绩的20%，成绩评价标准如下：

（1）引言（8分）：介绍研究背景简明而清晰 2分；实验目的明确 1分；实验结果有意义 5分。

（2）实验材料和方法（6分）：所用方法能达到实验目的2分；在免疫组织化学或免疫荧光组织化学方法中抗体选择正确2分；受试对象、一抗和二抗种属关系匹配 1分；整个技术流程准确无误1分。

（3）预期结果与结果分析（6分）：预期结果明确2分；结果分析全面而深入4分。

对实验成绩不合格者及实验缺席者，本课程将不准予通过。