酶标仪应用总结1-吸收光检测汇总.
酶标仪的应用原理及操作
酶标仪的应用原理及操作1. 引言酶标仪(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的生物化学分析方法,广泛应用于医学、生物学、农学等领域。
它通过检测酶与抗原或抗体的特异性结合来测定样品中的物质含量。
2. 原理酶标仪的应用原理基于酶与抗体或抗原的特异性结合,并利用酶的催化作用来进行定量检测。
2.1 抗原抗体反应酶标仪通常用于检测抗原或抗体的存在和浓度。
首先,将待测样品中的抗原或抗体与特异性的抗体或抗原结合,形成抗原-抗体复合物。
2.2 酶标记为了使抗原-抗体复合物可观察和测量,通常需要将酶标记与抗原-抗体复合物结合。
常用的酶标记物包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等。
2.3 底物催化酶标记与抗原-抗体复合物结合后,加入相应的底物进一步进行反应。
底物的选择取决于所使用的酶标记物。
酶通过催化底物的反应,产生可观察的信号,如颜色变化。
3. 操作步骤以下是酶标仪的一般操作步骤,具体步骤可能因不同设备而有所差异。
3.1 样品制备•收集样品,并按照实验要求进行处理,如稀释、预处理等。
3.2 板面涂布•将特异性抗体或抗原溶液均匀涂布在试验板上,然后将其孵育一段时间,使其与孔中的抗原或抗体结合。
3.3 样品加入•加入待测样品到试验板的相应孔中,并进行充分的混合。
3.4 孵育•将试验板放置于恒温箱或酶标仪内进行孵育,使样品中的抗原与抗体结合。
3.5 洗涤•倾倒试验板中的液体,然后用洗涤缓冲液或PBS洗涤试验板,去除未结合的物质。
3.6 酶标记物加入•加入含有酶标记物的溶液到试验板的相应孔中,并进行充分的混合。
3.7 孵育•将试验板再次孵育,使酶标记物与抗原-抗体复合物结合。
3.8 洗涤•重复步骤3.5,去除未结合的酶标记物。
3.9 底物加入•加入含有底物的溶液到试验板的相应孔中,并进行充分的混合。
3.10 信号测定•使用酶标仪测量反应后的信号,如光密度、发光强度等。
酶标仪常见技术和应用
细胞活力检测
细胞活性检测 – MTT、XTT法
• MTT-黄色染料 ↓被活体细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原 • 形成蓝紫色结晶-甲瓒 ↓DMSO溶解 检测OD570(OD630作为背景参照) 细胞质 线粒体 细胞核 cell
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光吸收的基本检测类型
• 特定波长检测: DNA、RNA及蛋白质浓度
• 比色测定: 检测反应的产物产生的颜色变化(450nm) 酶联免疫吸附试验(ELISA)
• 浊度检测: 检测样品中微颗粒产生的光的散射 细菌的生长(600nm)
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21/02/2014
Coቤተ መጻሕፍቲ ባይዱparison of Microplate Readers with Absorbance Detection
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酶标仪工作总结
酶标仪工作总结
酶标仪是一种用于测定酶活性的仪器,广泛应用于生物化学、生物学和医学领域。
它通过测定酶在特定条件下对底物的催化活性来评价酶的活性和浓度。
在实验室工作中,酶标仪扮演着至关重要的角色,为研究人员提供了精确、快速、可靠的数据。
首先,酶标仪的工作原理是基于底物与酶的反应。
当底物与酶结合时,产生的
产物可以通过特定的检测方法来测定,从而确定酶的活性。
酶标仪可以通过吸光度、荧光度等方法来测定产物的浓度,进而计算出酶的活性和浓度。
其次,酶标仪的工作流程通常包括样品处理、试剂添加、反应过程、数据采集
和分析等步骤。
在样品处理阶段,需要对待测样品进行预处理,以确保实验结果的准确性。
在试剂添加阶段,需要按照实验设计的要求向样品中添加特定的试剂,以促进酶与底物的反应。
在反应过程中,酶标仪会对样品进行恒温、振荡等处理,以保证反应条件的稳定。
在数据采集和分析阶段,酶标仪会自动记录产物的浓度,并通过内置的软件进行数据处理和分析,最终输出实验结果。
最后,酶标仪的工作总结需要对实验结果进行分析和总结。
通过对数据的分析,可以评估酶的活性和浓度,从而为后续的研究工作提供参考。
同时,也需要对实验过程中可能存在的问题和不确定性进行总结,为进一步改进实验方法和条件提供指导。
总之,酶标仪作为一种重要的实验仪器,在生物科学研究中发挥着不可替代的
作用。
通过对酶标仪工作原理、流程和实验结果的总结,可以更好地理解和应用这一技术,为科研工作的顺利进行提供支持。
吸收光酶标仪使用方法
吸收光酶标仪使用方法
吸收光酶标仪,那可是实验室里的一个厉害家伙呀!它就像是一个精准的测量大师,能为我们提供各种重要的数据呢!
那它到底怎么用呢?首先得把酶标仪打开,预热一会儿,让它进入工作状态。
然后把准备好的样本放到酶标板里,注意哦,可别放错了位置。
接着把酶标板放进仪器里,设置好测量的参数,比如波长啥的。
在测量的时候一定要小心,别碰到仪器啦,不然数据可就不准确咯!测量完成后,就可以得到我们需要的数据啦。
哎呀,听起来是不是挺简单的呀?但实际操作可得细心再细心呢!
在使用过程中,安全性那是相当重要的呀!这仪器可不能随便乱碰乱搞,得按照规定来操作。
稳定性也得有保障呀,不然一会儿测出来一个样,那可不行!就像我们走路一样,得稳稳当当的,不能东倒西歪的呀。
那它都有啥用呢?应用场景可多啦!比如在医学研究中,可以检测各种生物标志物;在食品检测中,可以检测有害物质的含量。
它的优势也很明显呀,测量速度快,结果准确,还能同时测量多个样本呢,多厉害呀!这就好比是一个高效的团队,一下子就能完成好多任务呢。
我就记得有一次在实验室里,我们用吸收光酶标仪来检测一种药物对细胞的作用。
哇塞,那结果出来得又快又准,一下子就为我们的研究提供了重要的依据呢!这效果,简直太棒啦!
吸收光酶标仪就是这样一个神奇又好用的仪器呀!它能为我们的科学研究和实际应用提供强大的支持呢!。
多功能酶标仪
多功能酶标仪设备用途:该酶标仪具有吸光、荧光、发光、时间分辨荧光等检测功能,可进行多时间点检测和动力学研究,用于酶活测定、蛋白互作和活性分子检测等。
一、技术指标(一)吸收光检测参数:*1.光源:高能量氙闪灯2.波长选择:单色器,一次最多可进行6种波长测量3.波长范围:230-999 nm, 1 nm 步进*4.带宽:4nm (230-285nm), 8nm(>285nm)5.测量范围:0-4.0 OD6. OD 准确性:< 1% @ 2.0 OD7. OD 重复性:< 0.5% @ 2.0 OD*8. OD分辨率:0.0001 OD9.散射光:< 0.03% @ 230nm*10.检测模式:终点法,动力学法,波长扫描及孔域扫描,检测速度可调;可实现孔板内的不连续跳跃检测;可实现随时选孔随时检测,便于根据实验结果随时进行检测孔的操作和检测调整;可实现模拟检测,预先进行程序操作的模拟演练,提高检测成功率。
*11.光路径校正:专利光路径长度校正功能,可将微孔板光路径长度转化为标准的1cm光路径长度,校正误差,无须标准曲线即可准确定量12.孔板类型:兼容6、12、24、48、96、384孔标准平底、圆底及V-型底微孔板,并可进行加盖检测。
(二)荧光强度检测参数:*1.光源:高能量氙闪灯(荧光强度检测,时间分辨荧光,光谱扫描),光源能量可根据样品信号强度进行调整,有低、高两种能量强度可选;能量低检测速度更快,能量高检测更为敏感。
2.波长范围:250-700 nm3.波长选择:单色器,一次最多可进行6种不同波长的检测4.带宽:激发16nm,发射16nm;*5.顶部检测灵敏度:2.5 pM 荧光素( 0.25 fmol/孔384孔板)*6.底部检测灵敏度:4 pM 荧光素( 0.4 fmol/孔384孔板)7.检测器:PMT8.荧光光谱扫描:可进行激发光及发射光扫描,1nm步进,绘制扫描曲线,确定荧光染料光谱特性*9.检测模式:终点法,动力学法,波长扫描及孔域扫描,单孔最多可进行225次检测;检测速度可调。
酶标仪测吸光度标准曲线
酶标仪测吸光度标准曲线一、引言随着生物技术的发展,越来越多的实验需要测定溶液中的物质浓度。
其中,酶标仪是一种常用的实验设备,通过测定吸光度来间接测定物质浓度。
在实验过程中,建立吸光度与物质浓度之间的标准曲线是必不可少的一步。
本文将详细探讨酶标仪测吸光度标准曲线的方法和步骤。
二、建立标准曲线的目的建立标准曲线的主要目的是为了将待测样品的吸光度值转化为相应的物质浓度。
通过测定一系列已知浓度的标准溶液的吸光度,并绘制吸光度与浓度之间的关系曲线,可以利用这条曲线来推断未知样品的浓度。
三、建立标准曲线的步骤3.1 准备标准溶液首先,准备一系列已知浓度的标准溶液,浓度应尽量覆盖待测样品的浓度范围。
标准溶液可以通过稀释已知浓度的物质制备,或者使用商业标准品。
确保标准溶液的稳定性和准确性。
3.2 准备工作区域在实验室里选择一个干净的、无尘的、光线充足的工作区域。
将酶标仪放置在水平台上,并连接所需的电源和电缆。
确保仪器处于正常工作状态。
3.3 设置仪器参数根据待测样品的特性,选择合适的波长和滤光片,并设置酶标仪的参数。
一般情况下,常用的波长为450 nm或490 nm。
3.4 检查光路在开始测量之前,确保酶标仪的光路是正常的。
可以使用空白溶液进行光路校准,确认仪器的零吸光度符合要求。
3.5 测量标准溶液的吸光度使用移液管将每个标准溶液分别移至相应的试管中,并放入酶标仪中进行测量。
确保每个标准溶液都有足够重复次数的测量值。
3.6 计算吸光度与浓度之间的关系将测得的吸光度值与相应的浓度值进行统计和整理。
可以采用计算机软件绘制标准曲线,也可以手工绘制,并拟合得到一个趋势线。
常用的拟合方法有线性拟合、对数拟合、多项式拟合等。
3.7 验证标准曲线的可靠性使用另外一组新的标准溶液进行测量,并根据已建立的标准曲线计算各样品的浓度。
将计算得到的浓度与实际浓度比较,判断标准曲线的可靠性。
3.8 利用标准曲线测定未知样品的浓度将待测样品的吸光度值测量并代入标准曲线,利用曲线的方程计算得到未知样品的浓度。
吸光光度法在体外诊断应用范围中的应用
吸光光度法在体外诊断应用范围中的应用吸光光度法是一种常用的分析方法,它利用溶液中化合物对特定波长的光的吸收来定量分析样品中的物质含量。
吸光光度法已广泛应用于体外诊断中,通过检测生物体内的代谢产物、蛋白质、药物及各种生物分子的浓度变化,可以辅助医生进行疾病的诊断、预防和治疗。
一、血清生化检测1.肝功能检测:利用吸光光度法检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等酶的活性,评估肝功能。
2.肾功能检测:通过检测血清中肌酐、尿素氮等物质的浓度,评估肾脏的排泄功能。
3.血糖检测:利用吸光光度法测定血液中葡萄糖的含量,用于诊断和监测糖尿病患者的血糖水平。
4.血脂检测:通过测定血清中胆固醇、甘油三酯等成分的含量,评估患者的血脂水平,预测心血管疾病的发生风险。
5.电解质检测:通过吸光光度法测定血液中的钠、钾、氯等电解质元素的含量,判断电解质平衡情况。
二、免疫学检测1.癌症标志物检测:通过测定血清或尿液中特定蛋白质(如癌胚抗原、前列腺特异性抗原等)的浓度,辅助癌症的早期筛查和诊断。
2.肝炎病毒检测:利用吸光光度法检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、抗乙型肝炎病毒表面抗体(anti-HBs)等标志物的浓度,评估病毒感染的程度及治疗效果。
3.自身免疫性疾病检测:通过检测血清中自身抗体(如抗核抗体、抗磷脂抗体等)的浓度,辅助早期诊断和治疗自身免疫性疾病。
4.风湿因子检测:通过测定血清中风湿因子的含量,辅助类风湿关节炎、强直性脊柱炎等风湿性疾病的诊断。
三、药物监测1.药物浓度监测:通过测定血液中药物的浓度,评估药物的疗效、副作用以及用药情况。
2.毒物检测:通过测定血液中毒物(如重金属、农药等)的浓度,评估中毒程度及指导解毒治疗。
诚然,吸光光度法在体外诊断中有许多优势。
首先,吸光光度法测定结果准确可靠,具有简便快速的特点,使其成为许多检测项目的首选方法。
其次,吸光光度法对样品的要求相对较低,适用于多种体液(如血液、尿液、体液等)的检测,便于临床的应用。
酶标仪使用详解范文
酶标仪使用详解范文酶标仪是一种常见的实验仪器,用于检测生物样本中特定分子的浓度。
它广泛应用于生物医学研究、药物研发和临床诊断等领域。
本文将详细介绍酶标仪的使用方法及注意事项。
一、酶标仪的基本原理酶标仪是通过光学测量来确定样本中特定分子浓度的仪器。
其工作原理是利用底物与酶的反应产生的物质颜色变化来测定样品中酶活性或者其中一种特定分子的浓度。
酶标仪通过测量底物产生的吸光度或荧光来确定管内样本中特定分子的浓度。
二、酶标仪的使用步骤1.准备工作:首先打开酶标仪电源,等待其预热。
然后根据需要选择合适的检测模式,如吸光度或荧光模式。
2.设定参数:按照实验要求,设定酶标仪的参数,包括波长、时间和增益等,这些参数取决于所使用的底物和样品类型。
通常需要根据实验所需设定不同的参数。
3.校准仪器:在进行测量之前,需要对酶标仪进行校准,以确保测量结果的准确性。
校准一般分为零点校准和标准曲线校准两个步骤。
零点校准是将酶标仪的读数归零,标准曲线校准则是使用已知浓度的标准样品制作标准曲线,以便后续测量时根据标准曲线确定待测样品中的物质浓度。
4.加样测量:用自动吸管器或移液器将样品加入酶标仪中,确保每个孔都有足够的样品进行测量。
加样完成后,将酶标板或孔板插入酶标仪的样品槽内,等待测量结果。
5.数据处理:酶标仪会自动测量各个孔的吸光度或荧光值,并将结果显示在仪器屏幕上。
根据实验要求,将数据导出并进行数据处理,如制作标准曲线、计算浓度等。
三、酶标仪使用注意事项1.酶标仪是一种精密仪器,使用前需仔细阅读使用说明书,并按照操作步骤进行操作。
2.操作时要注意保持操作平台的清洁和无尘,避免杂质对测量结果的影响。
3.底物的选取应根据实验目的和样品特性进行选择,不同底物对于不同物质浓度的测定有其特定的敏感性和检测范围。
4.样品的加入量需要根据实验要求准确控制,加样时尽量避免泡沫的产生。
5.酶标仪在校准时需要使用标准样品,为确保准确性应使用不同浓度的标准样品制作标准曲线。
酶标仪应用总结1-吸收光检测
生物大分子定量
Absorbance 260 nm
Absorbance 280 nm
核酸定量(A260)
原理:核酸的嘌呤和嘧啶环含有共轭双键,对260nm左右的紫外 光有较强的吸收;通过测量260nm的吸光值可计算出DNA、 RNA 、寡聚核苷酸的浓度。 检测实验: 260/280 Ratio Test Direct dsDNA Quantitation Direct Oligonucleotide Quantitation Direct RNA Quantification Particulate Test A320 Phenol Test EDTA Inhibition Assay
核酸定量定量(A260)
对于纯的核酸溶液,测定A260,即可利用核酸的比吸光系数计算 溶液中核酸的量,通常以1OD值相当于50μg/mL双螺旋DNA,或 40μg/mL单螺旋DNA(或RNA),或20μg/mL寡核苷酸计算。
260/280 Ratio Test: 用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样 品,纯的DNA A260/280比值为 1.8 ;纯的RNA A260/280比值为 2.0 。 样品中如含有杂蛋白及苯酚,A260/A280比值即明显降低。
核酸定量定量(A260)
Particulate Test A320:检查经纯化、离心后仍残留在溶液中的不溶性颗粒, 样本纯净时,扣除本底后的ODA320值应该为零。 Phenol Test:核酸样品的A260/A270>1,当比值<1时表示存在酚类污染, 酚类可使蛋白变性,影响酶反应活性。 EDTA Inhibition Assay:EDTA的存在会抑制二价金属离子,纯净DNA样 品的A260/A230 的比值应>2.0, 小于2.0 时表示存在EDTA污染。
酶标仪的原理应用
酶标仪的原理应用1. 酶标仪的原理酶标仪是一种用于测定酶活性的仪器,它基于酶的特异性反应原理进行操作。
下面是酶标仪的原理:•酶的特异性反应酶是一种生物催化剂,可以加速生物体内化学反应的速率。
它具有高度的特异性,只能与特定的底物结合,并催化其转化为产物。
•酶标仪的工作原理酶标仪的工作原理基于酶底物与底物之间的特异性反应。
具体步骤如下:1.首先,将待测样本添加到酶标仪中的反应孔中。
2.酶标仪通过自动混匀系统,将酶底物和底物与待测样本充分混合。
3.然后,酶底物与底物发生特异性反应,酶催化底物转化为产物。
4.酶标仪通过检测系统,监测底物或产物的吸光度或荧光强度的变化。
5.最后,根据吸光度或荧光强度的变化,酶标仪计算出待测样本中酶的活性。
2. 酶标仪的应用酶标仪具有广泛的应用领域,以下是酶标仪的常见应用:•生物医学研究酶标仪在生物医学研究中起着重要的作用。
它可以用于:–酶活性的测定:酶标仪可以测定细胞或组织中特定酶的活性,从而评估生物体内某一特定过程的变化。
–蛋白质测定:酶标仪可以用于测定样品中的蛋白质浓度,用于研究蛋白质的表达与功能。
–免疫学研究:酶标仪可以用于检测抗体与抗原的相互作用,从而评估免疫反应的强度和特异性。
•临床诊断酶标仪在临床诊断中被广泛应用。
它可以用于:–病毒检测:酶标仪可以检测体液中的病毒抗体或病毒核酸,用于判断感染的病毒种类和程度。
–药物浓度测定:酶标仪可以测定药物在体液中的浓度,用于判断药物的疗效和安全性。
–癌症标志物检测:酶标仪可以检测体液中的癌症标志物,用于早期发现和诊断癌症。
•食品安全检测酶标仪在食品安全检测中起着重要的作用。
它可以用于:–食品中毒素检测:酶标仪可以检测食品中的各种毒素,用于判断食品的安全性。
–食品成分检测:酶标仪可以测定食品中的营养成分或添加剂,用于评估食品的品质。
–食品标签检测:酶标仪可以检测食品中的标签成分,用于确认食品是否符合标签说明。
3. 酶标仪的优势酶标仪相比传统的方法具有以下优势:•高灵敏度酶标仪可以测定低浓度的分子,具有高灵敏度,能够检测微量的样品。
酶标仪使用
酶标仪使用实验二酶标仪检测金属离子对SOD 酶活性的影响一实验目的通过SpectraMax M5 酶标仪的演示使用,了解该型号酶标仪的结构;掌握酶标仪的操作步骤与softMax Pro v5.0.1版本软件的使用。
二实验指导要点1.酶标仪仪器安装连接2.仪器使用、保养注意事项3.软件操作步骤三仪器设备及实验材料SpectraMax M5 酶标仪、softMax Pro v5.0.1版本软件、SOD 提取液四仪器检测参数设定1 SpectraMax M5 酶标仪构造酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接,并有连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。
2仪器使用、保养注意事项电源要求:酶标仪对电源要求很高,我们要求的电源有接地,并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点,防止:1)大电流的冲击,2)电压不稳,3)突然断电。
保养要求:有良好的电源,保持24小时开机。
保持避光和干净的室内环境,维持一定的湿度(30%-80%)。
维持室内比较恒定的温度,以20-22度为最适宜。
适用6-384孔板。
96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液,最佳检测体积为200ul。
384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液,最佳检测体积为80ul。
检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中,检测完后就从仪器中取出,避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。
如果为有腐蚀性或挥发性溶液,请带盖检测。
对于可见光吸收检测,使用全透明微孔板;紫外光吸收检测,使用紫外可透全透明微孔板;荧光强度和荧光偏振,使用黑色不透明板,需要检测底读的用黑色底透微孔板;化学发光和时间分辨荧光,使用白色不透明微孔板。
3 softMax Pro v5.0.1版本软件使用双击图标即可打开以下软件操作界面:1)单击即可进入如下界面:首次使用该软件,在该界面可以填写Reader的型号,包括Molecular Devices所有类型(单功能和多功能)的酶标仪。
酶标仪基本知识及其检测原理
酶标仪基本知识及其检测原理2010-03-07 23:35:27 作者:佚名来源:互联网浏览次数:1 网友评论 0 条酶标仪基本知识及其检测原理,文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。
光是电磁波,波长100nm-400nm称为紫外光,400nm-780nm之间的光可被人眼观察到,大子780nm称为红外光。
人们只所以能够看到色彩,是为光照射到物上被物反射回来。
绿色植物之所以是绿色,是为植物吸收了光中的红色光谱。
酶仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。
检测单位:光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量定量系。
检测单位用OD值表,OD是opticaldelnsity(光密度)的缩写,表被检测物吸收掉的光密度,OD=10g(1/trans),其中trans为检测物的透光值。
根据Bouger-amberT-be er法则,OD值与光强度下述系:E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表被吸收的光密度,Ⅰ0为在检测物之前的光强度,Ⅰ为从被检测物出来的光强度。
OD值由下述公式计算:E=OD=C×D×E其中:C为检测物的浓度;D为检测物的厚度;E为摩尔子。
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。
如果选择其它的波长段,就会造检测结果的不准确。
此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。
在参照波长下,检测物光的吸收最小。
检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
Anthos酶仪检测值计算仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量,转换二进位数字信号,最大为4095.仪器定义没有光源下的透光值为0%,没有检测物的透光值为100%。
则实际检测中,检测物的透光值均在0%一100%之间。
酶标仪使用详解
CutOff公式
NC*2.1
控制界面
酶标板
酶标板
组成
酶标板是由12*8个孔组成的,每一个孔可以理 解为一个标本。每一板中还需要设置和阳性公 式相关的孔阳性、阴性、空白等。
酶标项目
每一行可以设置一个酶标项目(下拉方式), 可以设置为单板单项和单板多项。
MK3
PC
P 测量 测量结果
MK3
练习
按要求建立酶标项目。(见练习文档提纲 十)
酶标板项目设置
单板单项
一个酶标标只有一个项目,常用于标本量比较 大的时候。
单板多项
一块板可以做多个项目,注意项目是横向排列 的而且每个项目都必须设置公式中需要的阴性 阳性孔。
工作流程
PC
R 连接仪器 OK
MK3
PC
F2 设置波长 OK
MK3
PC
X1 振板频率 OK
MK3
PC
30 振板时间 OK
酶标仪使用详解
工作原理
酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测 被测物的吸光值。在特定波长下测定每一 种物质都有其特定的波长,在此波长下, 此物质能够吸收最多的光能量。如果选择 其它的波长段,就会造成检测结果的不准 确。因此,在测定检测物时,我们选择特 定的波长进行检测,称为测量波长。注意 这里提出了两个关键概念OD值(吸光值) 和波长。
酶标板
每一个孔代表可以设置的含意
普通(纯数字) = 标本号 空白孔=(BC+N) 阴性孔=(NC+N) 阳性孔=(PC+N) 质控孔=(QC+N)
酶标板
空白对照=(BC1+BC2+BC3…)/N
酶标仪工作原理及应用领域
酶标仪工作原理及应用领域酶标仪是一种常用的生物化学实验仪器,用于检测和测定生物样品中的特定物质。
它的工作原理基于酶的特异性反应,通过酶反应的底物与辅助物质的相互作用,产生颜色变化或发光来测定样品中特定物质的存在量。
酶标仪的工作原理基于酶的底物与辅助物质的相互作用,而这些底物和辅助物质通常是与酶的底物或酶反应产物结合并进一步转化为可测量信号的物质。
根据测定的特定物质不同,酶标仪可以使用各种不同的底物和辅助物质。
常见的酶标方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、辣根过氧化物酶标记法(HRP法)和碱性磷酸酶法(AP法)等。
在酶标仪的运行过程中,需要将待测样品加入含有酶反应物的孔板中,然后将孔板放入酶标仪中进行反应。
酶标仪通过内置的光学系统检测样品中的光学信号,并通过内部计算机系统进行信号分析和浓度计算,最终给出待测物质的浓度或存在量。
酶标仪的测量结果通常以定量浓度或阳性/阴性判断等形式呈现出来。
酶标仪的应用领域非常广泛。
在生物医学研究中,酶标仪可以用于疾病的诊断和预后评估。
例如,ELISA可以检测血清中的某种抗体或抗原,用于检测各种传染病、自身免疫性疾病等。
酶标仪还能够检测肿瘤标志物和生物分子,用于肿瘤筛查和早期诊断。
此外,酶标仪在药物研发、食品安全、环境污染检测等领域也有重要的应用。
酶标仪还可以用于学术研究,如蛋白质与蛋白质相互作用的研究和酶动力学的测定等。
总之,酶标仪通过酶的特异性反应原理,结合光学检测系统和计算机模型,可以准确、快速地监测和测定生物样品中的特定物质。
其应用领域广泛,包括医学诊断、药物研发、食品安全和环境监测等。
随着科技的发展和应用需求的增加,酶标仪的性能和功能也将不断提高,为科学研究和生物医学领域的进展做出更大的贡献。
酶标仪的常见功能
酶标仪的常见功能
酶标仪是一种常用的实验仪器,主要用于酶标的相关实验和分析。
以下是酶标仪的一些常见功能:
1. 光吸收测定:酶标仪能够测定不同物质在不同波长的光吸收情况。
这对于测定酶促反应产生的色素变化等非荧光信号很有帮助。
2. 荧光测定:酶标仪可用于测定与荧光染料反应产生的荧光信号。
这对于测量荧光染料标记的分子数量、监测细胞内活性小分子的浓度等非荧光信号很有帮助。
3. 发光测定:酶标仪能测定与化学荧光染料或发光底物反应产生的发光信号。
这适用于较低浓度的目标分子检测福利使用,以及对活性分子的连续监测和定量分析。
4. 温度控制:酶标仪可以通过内置或外接的温度控制系统对样品进行恒温控制。
这对于温度敏感性酶的活性保持很重要。
5. 吸光度校正:酶标仪可以进行吸光度校正,确保测量的准确性和精确性。
6. 数据处理和分析:酶标仪通常配备有自动数据处理和分析功能,包括曲线拟合、数据萃取、浓度计算等,简化实验操作,并提供实验结果的可视化和统计分析。
7. 多通道检测:一些酶标仪具有多个独立的检测通道,可以同
时测量多个样品,提高实验效率。
8. 自动化操作:高级酶标仪还具有自动操作功能,如自动吸孔板加载、液体的自动加样等,使实验操作更加方便和高效。
总之,酶标仪具有多种功能,可以广泛应用于酶标实验、分析和检测等领域,帮助研究人员获得准确、可重复的实验结果。
酶标仪测吸光度标准曲线
酶标仪测吸光度标准曲线酶标仪是一种广泛应用于分子生物学、生命科学等领域的分析仪器,一般用来测定生物分子的浓度。
而酶标仪测吸光度标准曲线则是在酶标仪实验过程中非常重要的一种实验方法,其用途是建立一个反应物浓度和吸光度的标准曲线,以便在实验中通过吸光度来测定分析物的浓度。
接下来,我们将分步骤阐述酶标仪测吸光度标准曲线的实验步骤。
第一步,制备反应物浓度不同的一系列标准品溶液。
这里所说的反应物,是指与目标分析物发生反应的物质,例如在测定蛋白质的浓度时,反应物可以是一种比色试剂。
根据测定的范围和精度的不同,需要准备一系列反应物浓度不同的标准品溶液,一般采用1倍、2倍、4倍等浓度倍数,以确保所检测的样品浓度落在标准溶液浓度范围之内。
第二步,选定一个波长并进行仪器校准。
仪器校准的目的是确保仪器的测量准确性,并且选取一个合适的波长以获得最佳的检测灵敏度。
一般来说, UV-Vis区域波长选择280nm以测定蛋白质样品为最佳,但也可以根据目标分析物的不同进行相应的调整。
第三步,滴加不同浓度的标准品溶液到酶标板上相应的孔中,同时用去离子水作为空孔对照,并复制3个平行孔以提高实验的准确性。
在一定温度下,加入反应试剂,并按照反应试剂说明书上所述的方法进行反应,一定时间后读取吸光度值。
第四步,将吸光度值绘制到一张反应物浓度-吸光度值的二维坐标图上,以获得标准曲线。
在绘图的时候可以采用线性插值法,求出浓度与吸光值的线性关系,从而绘制出反应浓度浓度-吸光度曲线。
第五步,在测定目标分析物时,依据测定的波长,将所得吸光率值代入标准曲线,求出目标物质的浓度。
总的来说,建立酶标仪测吸光度标准曲线是一项繁琐而又必要的实验工作,它的结果直接影响到后续实验数据的准确性和可靠性。
因此,在实验操作过程中,需要认真对待每一个细节,并严格遵守实验规范和操作规程。
通过这种方法,我们可以更准确地测定分析物的浓度,为生物学和生产等领域的研究和应用提供强有力的支撑。
全波长酵素标记仪光吸收型
全波长酵素标记仪光吸收型一、概述全波长酵素标记仪光吸收型是一种常用的生物分析仪器,可以用于测量蛋白质、核酸等生物大分子的浓度和纯度。
该仪器采用光吸收法进行测量,具有高灵敏度、高准确性和高稳定性等优点,广泛应用于生物学、医学、化学等领域。
二、工作原理全波长酵素标记仪光吸收型工作原理基于比尔-朗伯定律,即溶液中某种物质的浓度与其吸光度成正比。
在该仪器中,样品通过一个石英玻璃池(或石英玻璃管)流过,在池中通过一个特定波长的光束,被检测器所探测。
检测器将信号转换为电信号,并输出到计算机上进行数据处理。
三、主要组成部分全波长酵素标记仪光吸收型由以下主要组成部分构成:1. 光源:提供特定波长的光束;2. 石英玻璃池(或石英玻璃管):样品流经的容器;3. 检测器:将光信号转换为电信号;4. 计算机:进行数据处理和结果输出。
四、使用方法1. 准备样品:将待测物质溶解在适当的缓冲液中,使其浓度适宜于检测范围;2. 调节光源波长:根据待测物质的吸收特性,选择合适的波长;3. 将样品注入石英玻璃池(或石英玻璃管)中,启动仪器进行测量;4. 读取结果并记录。
五、注意事项1. 在使用前应对仪器进行预热和校准;2. 样品应避免受到外界干扰,如光线、震动等;3. 操作时应注意安全,避免接触有害物质和高温表面。
六、应用领域全波长酵素标记仪光吸收型广泛应用于以下领域:1. 生物学:用于蛋白质、核酸等生物大分子的定量和纯度检测;2. 医学:用于药物代谢动力学研究、肝功能评估等方面;3. 化学:用于化学反应动力学研究、物质浓度测量等方面。
七、总结全波长酵素标记仪光吸收型是一种常用的生物分析仪器,具有高灵敏度、高准确性和高稳定性等优点,广泛应用于生物学、医学、化学等领域。
在使用时应注意安全,并避免样品受到外界干扰。
酶标仪检测技术应用分析
酶标仪检测技术应用分析摘要:目的:探讨酶标法在血样检测中的作用。
方法:根据临床化学检查的操作规范,制定相应的工作流程。
建立血液采集、打印等全过程,探索酶标仪检测技术在血液样品检测中的应用。
结果:当相关样品中的病毒活力达到160 KU时,其检测呈非线性关系。
此时,用等渗盐水稀释样品,然后进行检验。
10-90分钟时,其稳定性很好。
最佳的方法是在显色10分钟后进行。
结论:采用酶标仪对血样进行检测,可以获得较好的结果。
该方法使用时间短、使用方便,在具体操作过程中,不需要花费太多的时间去学习,整体的操作是比较简单的,但是却有更高的精准度,整体的稳定性也比较强,进样微量。
从而大大提高了检测的效率,降低了检测费用。
该文章主要针对酶标仪检测技术进行了分析,并且探讨了其在应用过程中所起到的作用和效果,在此基础上还提出了相应的意见和建议,希望能给有关人员带来帮助和参考。
关键词:酶标仪;检测技术;应用引言临床上比较常见的是梅毒和艾滋病。
以上两种类型的传染病都是通过性传播的。
如果病人得了这种病,如果不及时进行有效的治疗,很可能会引发其他的病症。
如果病情严重的话,也会危及病人的生命。
全自动生化检测仪器已广泛用于临床检测。
该检测方法具有良好的应用前景,可以实现微量、快速的分析。
但需注意,这一方法对于医疗器械的需求较大,目前中国基层医院还难以普及。
1资料与方法1.1一般资料在具体操作过程中采用到了多种设备和仪器,其中包括DG-3022A酶标仪、量加样器、edp-2、SLT400SF酶标仪等。
1.2方法1.2.1实验准备根据有关规定,编写了符合规定的SLT400SF酶标仪。
通过编写的程序,对光度和测量值进行分析,并将其打印出来。
同时,DG-3022A型酶标仪的仪器,也要按照所检测的特定内容,对其进行有效的波长校准。
将空白试剂朝进行选择的酶标仪中添加,在酶标仪上进行染色。
印刷用于各个孔洞的吸收值。
对1edp-2型自动取样装置和微型加样机进行了标定。
最近频繁用到酶标仪,对OD值和吸光度值(abs)的概念和其线性范围不甚理
最近频繁用到酶标仪,对OD值和吸光度值(abs)的概念和其线性范围不甚明白得,查了很多资料,包括园子里先辈的总结和我从其他网站上取得的,也包括我个人的明白得,在此做更全面的总结(因为园子里的都是N年前的老帖子,且不是很全面,呵呵)希望能供战友们参考1、首先明白什么是朗伯比尔定律朗伯——比尔(Lambert-beer)光吸收定律:A=-lgT=εb cA——吸光度,又称光密度“”。
T——透光度,T=I / I。
,I。
——为照射到吸收池上的光强,I——为透过吸收池的光强。
ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数(L?mol-1?cm-1)。
b——样品光程(cm),通常利用1.0cm 的吸收地,b=1cm。
C?——样品浓度(mol/L)。
由上式可以看出:吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正比。
2、OD值定义OD值(optical density)表示某一物质在某一个特定波长下的吸光度;ABS是吸光值absorbance 的缩写. 在分析化学里,某一化学物质都可吸收一定波长的光,并且对光的吸收度与此化学物质的浓度成正比.因此可以利用吸光度的大小来测定某种物质的浓度.其中某物质在特定波长下对光的吸收度,就是OD值,一般用经过石英管后的光强比上照射到石英管前的光强来表示.3、吸光度值(abs/AU)定义吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数,影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等。
吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关,只要光的波长被固定下来,同一种物质,吸光系数就不变。
当一束光通过一个吸光物质(通常为溶液)时,溶质吸收了光能,光的强度减弱。
吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
吸光度用A表示。
A=abc,其中a为吸光系数,单位L/(g·cm),b为液层厚度(一样为比色皿的厚度),单位cm ,c为溶液浓度,单位g/L影响吸光度的因数是b和c。
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光路径长度校正-无需标准曲线定量核酸
OD=消光系数*样品浓度*光路径
DNA
我们知道,在260nm和1cm光路经下,1 OD 的DNA溶液的浓度是50 µg/ml
微孔板 光路径?DNA浓度?
光路径长度校正
ห้องสมุดไป่ตู้
纯水在977nm下有一个非常强的吸收峰,在1cm比色皿 中,其在977nm和900nm下的吸光度的差为0.18OD, 而在此波长下其他物质是没有吸收的,因此可以巧妙地 利用纯水的这一特性,来校正不同样品之间的光路径长 度。 核酸样品溶液中肯定含有纯水,先测定微孔板中待测样 品在977nm和900nm下的吸光度的差值ΔOD,然后根 据以下公式计算出光路径长度b:
生物大分子定量
生物大分子定量
Absorbance 260 nm
Absorbance 280 nm
核酸定量(A260)
原理:核酸的嘌呤和嘧啶环含有共轭双键,对260nm左右的紫外 光有较强的吸收;通过测量260nm的吸光值可计算出DNA、 RNA 、寡聚核苷酸的浓度。 检测实验: 260/280 Ratio Test Direct dsDNA Quantitation Direct Oligonucleotide Quantitation Direct RNA Quantification Particulate Test A320 Phenol Test EDTA Inhibition Assay
核酸定量定量(A260)
Particulate Test A320:检查经纯化、离心后仍残留在溶液中的不溶性颗粒, 样本纯净时,扣除本底后的ODA320值应该为零。 Phenol Test:核酸样品的A260/A270>1,当比值<1时表示存在酚类污染, 酚类可使蛋白变性,影响酶反应活性。 EDTA Inhibition Assay:EDTA的存在会抑制二价金属离子,纯净DNA样 品的A260/A230 的比值应>2.0, 小于2.0 时表示存在EDTA污染。
核酸定量定量(A260)
对于纯的核酸溶液,测定A260,即可利用核酸的比吸光系数计算 溶液中核酸的量,通常以1OD值相当于50μg/mL双螺旋DNA,或 40μg/mL单螺旋DNA(或RNA),或20μg/mL寡核苷酸计算。
260/280 Ratio Test: 用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样 品,纯的DNA A260/280比值为 1.8 ;纯的RNA A260/280比值为 2.0 。 样品中如含有杂蛋白及苯酚,A260/A280比值即明显降低。
1cm 0.18 = b ΔOD
b=
0.18 ΔOD
光路径长度校正
然后测定待测样品在260nm下的吸光度OD260nm,根据 朗伯比尔定律表达式,即可计算出样品的浓度:
OD260nm
OD260nm
CDNA =
=
0.020 × b 0.020 ×
0.18 ΔOD