活血散瘀灌肠液中丹参素的含量测定及原儿茶醛的薄层色谱鉴别_黄剑

品溶液在 24h 内稳定性良好。
2. 10 加样回收率试验〔3〕 精密量取已知含量（ 0. 528mg·mL － 1 ） 的
同一批样品共 6 份，每份 0. 50mL，分别置 10mL 容量瓶中，再精密加入 丹参素对照品溶液（ 0. 05mg·mL － 1 ） 各 5. 00mL，用流动相稀释至刻
度，摇匀，滤过，取续滤液，用 0. 45μm 微孔滤膜滤过，即得 6 份加样回
平均 回收率
/%
99. 88
RSD /%
1. 08
2. 11 样品含量测定 取 6 批样品，按供试品溶液制备法制备，并按
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海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 5 期
上述色谱条件测定（ 见表 2） 。 表 2 样品含量测定结果 （ n = 6）
批号
20100128 20100129 20100309 20100310 20100526 20100715
作者简介： 黄 剑，男（ 1977. 03 － ） 。毕业于浙江中医药大学药学系。 职称： 主管中药师。联系电话： 13566166551
系列对照品溶液，用 0. 45μm 微孔滤膜滤过，按上述色谱条件分别进 样 20μL，测定各系列溶液中丹参素的吸收峰面积。以峰面积 A 对浓 度 C 进 行 线 性 回 归，得 回 归 方 程 为 A = 14268340C － 10057 （ r = 0. 9999，n = 5） 。结果表明： 丹参素在 0. 01 ～ 0. 1mg·mL － 1 范围内与 峰面积积分值呈良好的线性关系。
作为阴性对照溶液。
3. 1. 4 鉴别方法： 取上述 三种 溶
液各 5μL，分别点于同一硅胶 G 薄
层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（ 8
∶ 1∶ 1） 为展开剂，展开，取出，晾干，
喷以 2% 三氯化铁乙醇溶液。
图 2 （ 1. 供 试 品 2. 对照品 3 3. 2 结果 供试品色谱中，在与
阴性对照品）
Extend-C18 ( 4. 6mm × 250mm，5μm) 高效液相色谱柱，流动相为甲醇-水-冰醋酸( 7∶ 92. 5∶ 0. 5) ，流速 1. 0mL·min － 1 ，检测波长 280nm。采用薄层色
谱鉴别方法鉴别处方中的原儿茶醛。结果 丹参素浓度在 0. 01 ～ 0. 1mg·mL － 1 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系 A = 14268340C － 10057( r = 0. 9999) ，平均回收率为 99. 88% ( RSD = 1. 08% ，n = 6) 。在 TCL 图谱中可检测出白术的特征斑点。结论 本方法简便、快速、准确，
版 . 北京： 中国医药科技出版社，2010，附录： 36-38. 〔2〕薛继雄，周辉，刘萌 . 高效液相色谱法测定消炎灌肠液中丹参水
溶性成分的含量〔J〕. 医药导报，2005，24（ 1） ： 66-67. 〔3〕黄仕孙，王艳宁，高桂娥，等 . 中药退黄外洗液质量标准研究〔J〕.
中国药房，2010，21（ 15） ： 1399-1400. 〔4〕张友芹，张春林，邵浩明，李百强 . HPLC 法测定丹参药材中丹参素
2. 7 精密度试验 精密量取丹参 素对 照 品 溶 液 （ 0. 02mg · mL － 1 ）
20μL，按上述色谱条件连续进样 5
次，测 定 丹 参 素 峰 面 积 的 RSD =
图 1 高效液相色谱图 A. 丹 参 素 对 照 品； B. 供 试 品； C. 阴性对照品； 1. 丹参素
0. 41% ，表明仪器精密度良好。 2. 8 重复性试验 取同批号的样 品，照“2. 3”项配制 6 份供试品溶 液，按上述 色 谱 条 件 分 别 进 样，测
收率试验溶液，再按上述色谱条件测定（ 见表 1） 。
表 1 加样回收率试验结果 （ n = 6）
取样量 / mL
0. 50 0. 50 0. 50 0. 50 0. 50 0. 50
样品 含量 / mg
0. 2640
0. 2640 0. 2640
0. 2640 0. 2640
0. 2640
对照品 加入量
Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 5 2013
活血散瘀灌肠液中丹参素的含量测定及原儿茶醛的薄层色谱鉴别
黄 剑1 ，徐肃仲2 ，郑宇红1 （ 1. 浙江省温州市中医院 温州 325000； 2. 温州医学院眼视光学院 温州 325000）
摘要： 目的 建立高效液相色谱法( HPLC) 测定活血散瘀灌肠液中丹参素含量的方法及建立活血散瘀灌肠液的定性鉴别方法。 方法 采用
对照品色谱相应的位置上，显相同
颜色的斑点。而阴性对照品在相
应的位置上没有出现斑点（ 见图 2） 。
4 讨论 4. 1 活血散瘀灌肠液为中药复方制剂，有一定的黏稠度，而待测成分 含量不高，丹参素含量测定时，供试品处理，我们用流动相稀释，采用 普通滤纸过滤以除去不溶性杂质和干扰物质，再用 0. 45μm 微孔滤膜 过滤，可得到较满意的澄清供试品溶液。也曾采用高速离心（ 5000r· min － 1 ） 后，再用微孔滤膜过滤，效果与前者相当，故采用前者处理。 4. 2 丹参素含量测定最关键的是确定流动相，参考相关的文献资 料〔4 ～ 6〕，比较了许多不同的流动相对样品的峰形和分离情况的影响， 最后确定本试验的流动相为甲醇-水-冰醋酸（ 7 ∶ 92. 5 ∶ 0. 5） 。若增加 甲醇的量，会加快出峰时间，因此我们用甲醇来清洗色谱柱，加速残留 杂质尽快出峰。而添加少量冰醋酸能使分离效果更好。 4. 3 活血散瘀灌肠液成分复杂，检测条件下温度对分离效果和保留 时间有一定的影响。经过比较试验，选择柱温 25℃ ，既避免出峰时间 过长又得到分离效果满意并稳定的色谱图。 4. 4 6 批样品测定结果表明活血散瘀灌肠液中丹参素的含量差异较 大，这一方面与每批原料差异有关，另一方面与生产工艺中浓缩定容 差异有关。样品中丹参素的平均含量为 0. 509mg·mL － 1 ，因此建议 活血散瘀灌肠 液 以 丹 参 素 为 定 量 标 准，即 每 1mL 含 丹 参 素 不 少 于 0. 4mg（ 0. 509 × 80% ≈0. 4） ，以保证其质量。 4. 5 我们采用薄层色谱法对活血散瘀灌肠液中的有效成份原儿茶醛 及丹参素进行定性鉴别研究，但由于丹参素其阴性对照品溶液对测定 有干扰，所以无法采用薄层色谱法鉴定丹参素。而活血散瘀灌肠液中 原儿茶醛的薄层色谱鉴别方法重现性好，专属性强，可以用本法鉴定。 参考文献 〔1〕国家药典委员会编 . 中华人民共和国药典 （ 一部） 〔S〕. 2010 年
3. 1. 1 对照品溶液的制备： 取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每
1mL 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液。
3. 1. 2 供试品溶液的制备： 取活血散瘀灌肠液 50mL，置水浴上蒸干，
残渣加水 10mL 使溶解，加稀盐酸调 pH 值至 2，加乙酸乙酯振摇 2 次，
每次 10mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇 1mL 溶
丹参素含量 / mg·mL － 1
0. 502 0. 542 0. 433 0. 411 0. 640 0. 528
RSD /%
1. 15 0. 90 2. 08 0. 28 1. 09 0. 79
丹参素平均含量 / mg·mL － 1 0. 509
3 原儿茶醛的薄层色谱鉴别方法与结果
3. 1 原儿茶醛的薄层色谱鉴别方法
定丹参素 的 含 量。结 果，样 品 中 丹 参 素 的 平 均 含 量 为 0. 640mg · mL － 1 ，RSD = 1. 09% （ n = 6） ，表明方法重复性良好。
2. 9 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0，6，12，18，24h 按上
述色谱条件进样，测定丹参素峰面积。结果，RSD = 1. 22% ，表明供试
/ mg
0. 2500
0. 2500 0. 2500
0. 2500 0. 2500
0. 2500
测得量 / mg
0. 5102 0. 5163 0. 5116 0. 5146 0. 5170 0. 5125
回收率 /%
98. 48 100. 92 99. 04 100. 24 101. 20 99. 40
可用于活血散瘀灌肠液中丹参素的含量测定及质量控制。
关键词： 活血散瘀灌肠液; 丹参素; 原儿茶醛; 含量测定; 高效液相色谱法; 薄层色谱鉴别
中图分类号： R927. 2； R927. 1 文献标识码： B 文章编号： 1006-3765（ 2013） -05-00药制剂，其处方由丹参、大 血藤、三棱、莪术等组成。经浸泡、蒸馏提取、浓缩、灭菌、灌装等工艺 而制成。具有活血化瘀、消肿止痛等功能，临床用于妇女盆腔炎性肿 块的灌肠治疗。该制剂目前尚未制定含量测定指标及定性鉴别方法。 本文采用高效液相色谱法〔1〕建立了活血散瘀灌肠液中丹参的水溶性 成分丹参素的含量测定 方 法〔2〕及 原 儿 茶 醛 的 薄 层 色 谱 鉴 别 方 法，以 确保该药的质量。 1 仪器与试剂 1. 1 仪器 Waters1525 高 效 液 相 色 谱 仪，Waters2487 紫 外 检 测 仪， Extend-C18 （ 4. 6mm × 250mm，5μm） 高效液相色谱柱，梅 特 勒-托 利 多 AB204 型分析天平，GZX-DH 电热恒温干燥箱，薄层层析硅胶 G 板，电 热恒温水浴锅。 1. 2 试 剂 丹 参 素 钠 对 照 品 （ 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所，批 号： 110855-200508） ； 原儿茶醛对照品（ 中国药品生物制品检定所，批号： 110810-200506 ） 活 血 散 瘀 灌 肠 液 （ 批 号： 20100128、20100129、 20100309、20100310、20100526、20100715 ） 及阴性对照品均由 我院制 剂室制备； 甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水。 2 丹参素的含量测定方法与结果 2. 1 色谱条 件 色 谱 柱： Extend-C18 （ 4. 6mm × 250mm，5μm） ； 流 动 相： 甲醇-水-冰醋酸（ 7 ∶ 92. 5 ∶ 0. 5 ） ； 流 速： 1. 0mL · min － 1 ； 检 测 波 长： 280nm； 柱温： 25℃ ； 进样量： 20μL。 2. 2 丹参素对照品溶液的制备 精密称取丹参素钠对照品适量，用 流动相稀释成含丹参素 0. 1mg·mL － 1 的溶液，即得。 2. 3 供 试 品 溶 液 的 制 备 精 密 量 取 活 血 散 瘀 灌 肠 液 1. 00mL，置 10mL 容量 瓶 中，用 流 动 相 稀 释 至 刻 度，摇 匀，滤 过，取 续 滤 液，用 0. 45μm 微孔滤膜滤过，即得。 2. 4 阴性对照品溶液的制备 按照活血散瘀灌肠液处方，除去丹参， 按活血散瘀灌 肠 液 制 备 法 制 得 阴 性 对 照 品。 精 密 量 取 阴 性 对 照 品 1. 00mL，按“2. 3”项下方法制成阴性对照品溶液。 2. 5 系统适用性试验 取上述丹参素对照品溶液（ 含丹参素 0. 1mg ·mL － 1 ） 、供试品溶液及阴性对照品溶液各 20μL，按“2. 1”项下的色 谱条件分别进样测定（ 见图 1） ，表明样品中其它成分对丹参素的测定 无干扰。根据图 1 计算色谱柱的理论板数 n = 9004，分离度 R = 2. 78 （ ＞ 1. 5） 。 2. 6 线性关系考察 精密量取丹参素对照品（ 0. 1mg·mL － 1 ） 1. 00、 2. 00、5. 00、7. 00、10. 00mL，分别置于 10mL 容量瓶中，加流动相稀释 至刻度，摇匀，得到含丹参素 0. 01、0. 02、0. 05、0. 07、0. 1mg·mL － 1 的