079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告

生物化学实验报告

姓名：符含敏

学号： 3140090079

专业年级： 2014级预防医学

组别：第三实验室

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量

实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室

合作者杨锐指导老师朱利娜

评分教师签名批改日期

格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验

二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。

2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。

3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。

4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。

三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂

普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板

2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂

四．实验步骤：

1.肝糖原的提取与鉴定：

鸡肝约1.5 g，剪碎

＋5%CCl

COOH 1 ml

3

研磨至乳状

＋5%CCl

COOH 3 ml

3

研磨成肝匀浆

3分钟（4000 r / min）

3 ml）

＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟

5分钟（4000 r / min）

＋蒸镏水1 ml

沸水浴2分钟，溶解沉淀

糖原溶液1ml

＋浓HCl 5滴

加碘试剂沸水浴

糖原溶液2滴滴呈色对比

＋班氏试剂4滴

沸水浴2分钟，观察变化

2.肝糖原的定量测定：

鸡肝0.15 g

＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)

沸水浴15分钟

冷却，全部转入100 ml容量瓶中

加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液

取3支试管，按下表操作:

试剂（ml）空白管标准管样品管

标准葡萄糖溶液— 1.0 —

糖原提取液—— 1.0

0.2%蒽酮溶液

2.5 2.5 2.5

（用吸量管）

混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。

五．实验结果的记录与分析：

1.

所测吸光度值记录表

标准管糖原提取液

吸光度值 0.693 0.763

2.肝糖原含量的计算：

肝糖原（g/100g肝组织）=0.763/0.693 ×0.05×100/0.12×0.1×1.11

=5.091

实验结果与预估值十分不符

3.实验过程中的主要图片：