WatersE型高效液相作业指导书精编版
waters-e高效液相色谱ppt课件
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
Waters高效液相色谱仪
1目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。
2适用范围Waters高效液相色谱仪的使用操作。
3责任者质管部QC检验人员。
4内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。
4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“ Program Ma nager ”窗口。
4.1.3 在“ Program Man ager” 窗口，双击“ Mille nn ium ”图标，进入相应窗口。
4.1.4 在“Millennium ”窗口，双击“ Session Manage” 图标，进入“ Millennium V2.10 ”窗口，进行内存自检。
4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login —Version2.10 ”窗口，在“User Name 输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“ Login ” 进入“Millinniam Versi on 2.10 —Sessi on Man age—User System” 窗口，双击所选“ Project ”图标，即进入“ Project ”窗口。
4.2 进样4.2.1 在“ Project ”窗口下，按“ Tools ”图标群中“ Quickset ”图标进入“System-open” 窗口，选择“ PCM-410”。
4.2.2 按“OK加以确认，该窗口自动退出，进入自检。
4.2.3 自检完毕，进入“ Quick Set”窗口，按“ Mode'选择“ Quick Start ”进入“ Method Set ”窗口，选择“ Using Exiting Method ”自动进入“ Quick Set Acquisition ”窗口，按“ Set Up Instrument ”，进入仪器安装状态。
4.2.4 安装完毕，按“ Can cel”，退出“ Quick Set Acquisiti on ”窗口，在样品登记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
Waters e 型高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程目的：建立Waters e2695高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪更规范，保证实验结果更精确。
范围：适用于Waters e2695高效液相色谱仪操作和维护保养。
职责:新药研发部人员、QC人员对本规程的实施负责。
1开机前的准备工作1.1检查设备电源、流路、信号连接是否完好。
1.2流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气5分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。
1.3样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。
2仪器的组成及开机平衡系统2.1仪器组成。
本仪器由waters e2695分离单元、2489紫外可见光检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
2.2开机。
先打开电脑，依次接通2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。
2.3脱气（Degasssger）。
按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
一般默认是开的。
2.4设定柱温及样品室温度（可选项）。
在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按“Enter”。
（可在工作站方法中设置）2.5灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）。
Waters高效液相色谱系统操作规程(入门)
1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。
5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
waters高效液相的标准操作规程（sop）
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）适用于所有使用此仪器者1 流动相的处理1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2 保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
1.3 保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于10ml/min，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。
沃特世 WaterE2695 SOP
1、程序1.1 仪器组成Waters E2695型高效液相色谱仪由Waters 2489紫外检测器、 Waters E2695分离单元【包括Waters E2695溶剂管理系统（四元梯度泵、四通道GPV、溶剂瓶、通道管路、泵头密封清洗系统、进样器清洗系统）、Waters E2695 样品管理系统（自动进样器、样品盘）】以及可控调节柱温箱、Empower2软件、HP计算机和共享HP-1800打印机、采集服务器、主服务器等组成。
1.2使用前的准备1.2.1首先，在开机前对被检测样品按检验标准进行制备、过滤等预处理；其次对该品种项下规定的流动相进行制备、过滤等前处理；按色谱条件及待检药物成分溶解性配制泵头清洗液和洗针溶液，比较通用的泵头清洗液为15%～20%的异丙醇溶液，洗针溶液为50%左右的甲醇溶液。
1.2.2在未接通电源前，检查柱温箱、检测器、输送泵等开关，应放置在“O”的位置。
1.2.3打开电路电源开关，开启UPS电源开关，使整个电路系统处于稳压状态。
开启主服务器，待主服务器自检完成，再开启各节点采集服务器，使局域网络处于正常链接状态。
1.2.4将配制好并经过预处理的流动相、泵头清洗液和洗针溶液放入溶剂托盘，将相配套的连接有过滤头的溶剂管路插入相应溶剂瓶中。
按流向安装好所需使用的色谱柱。
1.2.5将Waters E2695分离单元总开关和Waters2489紫外检测器开关置于“I”位置，开启分离单元和检测器。
仪器开始自检，自检完毕，分离单元控制面板显示区显示“Idle（空闲）”，检测器控制面板显示区显示上次检测波长和实时检测信号。
仪器开机完成。
1.2.6点击控制面板上“Menu/Status”键，进入Waters E2695分离单元控制模式。
按显示区“Direct Function”下方按钮，进入分离单元运行准备模式。
按控制面板上的“▲”、“▼”键将光标移动到“2.system prep”，点击“OK”下按钮，系统自动进行如下诊断操作：灌注和清洗泵头、灌注和清洗进样针、灌注和清洗注射器、逐个溶剂瓶管路排液。
WATERS高效液相的标准操作规程(SOP
WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）试用稿制定人：适用于本教研室所有使用此仪器者１流动相的处理１．１过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml 甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
１．２保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
１．３保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
１．４故障及解决方法１．４．１流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。
１．４．２流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于１０ｍｌ／ｍｉｎ，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（１）使用低流速；（２）换大孔径的过滤器；（３）增加进液管道内径；（４）抬高或加压储液器；（５）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（６）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。
Waters高效液相的标准操作规程(SOP)
Waters高效液相的标准操作规程（SOP）一、操作前准备1. 流动相准备：流动相所用试剂必须是色谱纯。
必须经过滤，脱气。
2. 检查色谱柱的链接：色谱柱出入口不能颠倒，出口螺帽必须拧紧防漏液。
二、色谱仪的启动、设置和应用操作流程图图1.开机进入breeze系统：依次打开泵以及检测器、柱温箱的电源，等到检测器自检完毕后，打开计算机登录windows，并进入breeze软件。
2.选择系统:在“选择项目和系统”对话框中，选择所需的项目和色谱系统，然后单击“确定”。
（色谱系统2489为紫外检测器；2414为示差折光检测器）3.创建方法:(1):管理→项目→创建项目→defaults→输入自建的项目名称和注释名→确定→项目创建完毕(2):切换系统：在窗口下切换系统→系统名称空白→确定管理→切换系统→系统名称（选择要用的检测器）→确定。
（可通过节点属性来检查和确定目标检测器是否处于在线状态）(3):调用方法组编辑器→新建→单击PCM泵按钮→高压限制:4000→泵模式（等度/梯度）→（设置各流动相流速）（C18反相柱总流速限定在2mL/min以内）单击TCM柱温箱按钮→区域1：设定柱温单击W2489：→设定波长（紫外可见光波长）→模式（单/双波长）→采样速率（1-2）文件→另存为→名称→保存。
新方法组→请选择用使用该方法组的数据有关的仪器方法→自建方法→下一步→完成。
4.灌注、清洗泵、清除系统、平衡系统4.1灌注和清除泵：1.在灌注和清洗泵之前的准备工作•如果泵处于干燥状态，在继续操作前应进行干灌注。
•将泵的参比阀旋钮向右旋转 1/2 圈，确保洗脱液流（绕过泵下游的所有连接组件）引至废液。
2.在“选择项目和系统”对话框中，确认色谱系统已完成配置并在线。
•确保已在“节点属性”中正确配置泵。
•将系统设置为在线。
3.在“运行样品”窗口中，单击“开始流量”图标，然后为泵流量和梯度设置输入适当的值。
提示：要快速灌注和清除以下型号的泵•对于 1525 泵，将流量设置为 4.0 毫升/分，并将梯度设置为 50% A、 50% B。
Waters高效液相色谱仪标准操作规程(格式排版)
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1W a t e r s H P L C的组成：贮液器→输液泵→自动进样器→分离柱(柱温箱)→紫外检测器→控制及数据处理系统(M i l l e n n i u m32化学工作站)。
6.2H P L C系统的打开及关闭顺序6.2.1 打开顺序对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开 Millennium 32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是 Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的 L 前有闪动的光标显示，按 键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45μm 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
Waterse2695高效液相色谱仪操作维护规程
1. 目的本标准操作规程（SOP）规范了Waters e2695型高效液相色谱仪的操作维护，以保证检验数据的准确性和仪器安全规范操作，保证测定结果的准确无误。
2. 范围本SOP适用于Waters e2695型高效液相色谱仪的操作维护。
3. 职责质量部QC主管、Waters e2695型高效液相色谱仪使用人员对本规程实施负责。
4. 定义无。
5. 程序5.1 对仪器的一般要求设备放在通风性好的房间，避免阳光直射。
5.2 操作前准备5.2.1 流动相：按方法要求配制流动相，超声波脱气2分钟左右。
缓冲盐流动相经用0.45μm相兼容材质滤膜过滤。
5.2.2 样品溶液：按方法要求配制样品溶液，并以过滤或10000转以上高速离心方式除去溶液中的固体微粒。
5.2.3 将e2695泵清洗管路（不通明管）、洗针管路（绿管）以及ABCD管路分别放入适当的溶剂中。
5.3 开机5.3.1 打开计算机，等操作系统启动完全。
5.3.2 打开仪器电源，待仪器各部分自检完成后进行以下操作：5.3.2.1 Prime seal wash：Diag →Prime seal wash，直至入口管没有可见气泡，按Halt键停止Prime，再按close关闭界面；5.3.2.2 Prime needle wash：Diag →Prime needl e wash，清洗进样针1-2此。
Close并Exit，退出Diag界面。
5.3.2.3 Dry Prime：打开泵抽液阀→Menu/Status →Direct Function →Dry Prime →依次选择A、B、C、D，同时用注射器抽取液体，结束后按cancel，切记完成后将抽液阀关闭；5.3.2.4 Wet Prime：依次将实验所涉及的流路设为100% →Direct Function →Wet Prime，确保流路中为新鲜溶剂；5.3.2.5 设定流速、柱温等参数，平衡系统约30分钟；5.3.2.6 Purge injection：Direct Function →Purge injection。
waters 高效液相操作规程
waters 高效液相操作规程
《waters高效液相操作规程》
在液相色谱分析中，waters高效液相技术被广泛应用。
为了保证色谱分析的准确性和可靠性，操作规程至关重要。
下面是waters高效液相操作规程的一般步骤：
1. 样品准备：准备样品并将其溶解在合适的溶剂中。
2. 色谱柱准备：根据分析的要求选择合适的色谱柱，并进行适当的洗涤和平衡。
3. 色谱条件设置：设置流速、温度、检测波长等色谱条件。
4. 样品进样：按照预定的体积和条件将样品进样进入色谱仪。
5. 色谱分离：启动色谱仪进行色谱分离，并记录相关数据。
6. 数据处理：对色谱数据进行处理和分析，得出结果。
7. 清洗设备：分析结束后，对色谱柱和仪器进行彻底的清洗。
以上是waters高效液相操作规程的一般步骤，具体操作还需根据实验室的具体情况和分析要求进行调整和完善。
这些步骤的严格执行和规范操作将有助于提高色谱分析的准确性和可靠性，确保实验结果的有效性和科学性。
waters高效液相色谱操作规程
Waters高效液相色谱操作规程1、用途：进行样品纯度和杂质的分析，可以满足双波长采集数据。
2、系统组成：本系统由2个Waters 515 HPLC Pump溶剂输送泵, 7725i手动进样阀、Waters2489紫外-可见检测器、Waters原装色谱数据工作站和电脑等组成，柱温箱、不间断电源等辅助设备。
3、准备3.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水膜，含有机相用有机膜），超声脱气20min。
3.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向，顺序是从进样器流经色谱柱进入检测器方向，色谱柱箭头方向为流速方向）。
3.3倒掉废液瓶中的废液。
3.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4、操作规程4.1启动仪器：4.1.1首先打开柱温箱并设置柱温箱温度为40℃按柱温箱控制界面上的ready键启动柱温箱。
4.1.2依次开启电脑、检测器和泵控开关。
4.1.3将泵1、泵2吸滤器相应的放入到准备好的流动相中。
4.1.4泵的排气：逆时针方向将泵前置阀门旋转180。
并用烧杯进行收集，按MENU键进入到PURGE状态，点击EDIT ENTER键进行脱气排空处理(约3-5分钟)，排空结束后再按RUN/STOP键关闭，顺时针方向将泵前置阀门旋转180。
拧紧。
4.1.5五分钟后打开电脑桌面上的Empower工作站，进行仪器与电脑的连接。
本机用户名：system 密码：manager。
4.2参数设置：4.2.1建立新的分析方法（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
若为已有方法的分析项目，直接调用即可（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
4.2.2泵的设置4.2.2.1等度洗脱：将泵1的吸滤器放入准备好的流动相的储液瓶中，设置流速，按RUN/STOP键开启流速。
4.2.2.2梯度洗脱：1、分别按照工作站设置将泵1、泵2的吸虑器放入到相应的准备好的流动相储液瓶中。
2、将两个泵的流速分别设置到初始流速相应的数值。
waters高效液相色谱[资料]
![waters高效液相色谱[资料]](https://img.taocdn.com/s3/m/fdf95fc3b8f3f90f76c66137ee06eff9aff8495e.png)
Waters高效液相色谱操作说明0一．简介0本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相0二．操作流程00.准备工作0确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误01.开机0打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。
检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。
待程序完全启动，整个开机过程结束。
系统默认进入上次使用的方案。
2.建立新方法和新方案02.1新建方案0方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。
2.1.1创建步骤0选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。
→单击"finish"02.1.2打开创建的方案0在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了02.2新建方法0在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。
试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。
02.2.1新建方法步骤0单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"3 02.2.2洗脱方式的设定（重要）0在programmed flow中可看到。
高效液相色谱仪期间核查作业指导书
高效液相色谱仪期间核查作业指导书1 目的为了使高效液相色谱仪保持良好的运行状态，确保检验结果的准确性和有效性。
2 职责仪器使用负责人负责按此规程对设备进行定期核查，并及时做好核查记录，并对此数据负责。
3 环境条件室温在 15-30 ℃，室内湿度在 10%-75%RH范围内；仪器应平稳放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。
4 使用的标准物质1× 10-4、1× 10-7 萘/ 甲醇溶液1× 10-3丙三醇/ 水溶液大豆油对照品5 核查依据JJG705-20146 核查方法6.1外观检查按要求，用目视、手动检查6.2.输液系统检查6.2.1.泵流量设定值误差 Ss、流量稳定性误差 SR检查按下表 2 的要求以纯化水为流动相，启动仪器，设定流量，待压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表 2 规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2）、式（3）计算Ss 和S RFm=(W2 -W1)/ ρr·t 式(1)S S=︱F-F S︱/F S× 100% 式(2)S R=(Fmax-F min ) /F × 100% 式(3)式中: F m: 流量实测值， ml/min ;W2 : 容量瓶+流动相的质量， g;W1 : 容量瓶的质量， g;ρr : 实验温度下流动相的密度，g/cm ;F S: 流量设定值， ml/min;T: 收集流动相的时间， min;Fmax: 同一组测量中流量最大值，ml/min;Fmin: 同一组测量中流量最小值，ml/min ;F: 同一组测量的算术平均值，ml/min ；表 2 泵流量设定值误差S s流量稳定性误差S R的技术要求6.3.检测器6.3.1.紫外检测器、二极管阵列检测器a.基线噪声和基线漂移将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，柱温35℃，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30分钟，计算基线漂移和噪声。
waters-2695-高效液相色谱仪操作规程(汇编)
Waters Alliance 高效液相色谱仪操作规程一、概述1.设备使用范围：主要用于样品中食品添加剂、农药残留、兽药残留、毒素、污染物、非法添加物测定。
2.设备主要技术/性能指标：四元溶剂混合支持等度和梯度应用，具有11个独特的梯度曲线。
自动混合持术能够以任何比例混合四种溶剂。
先进的溶剂分配功能。
串联流路具有无脉冲溶剂分配，无需使用湿润器。
在线溶剂脱气和溶剂自动压缩实现准确的流路。
集成的密封清洗实现稳定操作，并且所有溶剂类型均符合规格。
检测器包括光电二极管阵列、示差折光检测器。
二、使用要求1.存放环境温度10～30℃，湿度≤80%，电压220V。
2.流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
3.流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。
三、操作程序A：开机步骤1.打开计算机，进入Windows界面。
2.打开仪器电源，待仪器各部分自检完成。
3.将2695泵密封垫清洗管路、洗针管路以及ABCD管路分别放入适当的溶剂。
4.Prime seal wash：按2695面板Diag键，选择Prime SealWash，清洗泵头，直至出口管有液滴流出，按Halt，停止Prime，再按close关闭界面。
5.Prime needle wash：再选择Prime NdlWash，清洗进样针1-2次,直至黄管有液体喷出。
Close并Exit，退出Diag界面。
6.Dry Prime：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Dry Prime (注:此操作仅在管路中没有液体时执行,否则直接进入步骤6)。
Waters高效液相色谱Empower 工作站中文教程
WatersHPLC System Basic Teaching Material For Empower Software沃特斯高效能液相層析系統－資料處理軟體基礎操作指引文案大全Content一、電腦/層析軟體開機/開始操作畫面說明 (3)二、資料處理系統操作介面/畫面說明 (3)三、Project 之建立 (4)四、層析系統 (Chromatographic system)之建立 (8)五、使用者(User)之建立 (11)六、實驗開始 / 儀器方法 ( Instrument Method )之建立 (13)七、數據處理方法 ( Processing Method )之建立 (16)八、報表列印說明 (24)一、電腦/層析軟體開機/開始操作畫面說明a.打開電腦電源開關，進入作業系統，連續按兩下”EMPOWER LOGING”圖像。
b.輸入UserName(例如:System)、 Password(例如:Manager)，按OK。
c.進入EMPOWER畫面( Pro 或Quick Start介面，可依使用者設定而不同 )。
二、資料處理系統操作介面/畫面說明三、PROJECT 之建立a.打開電腦電源開關，進入作業系統，連續按兩下”EMPOWER LOGING”圖像。
b.輸入UserName以及Password，按OK。
c.進入EMPOWER Pro畫面，點選”Configure System”。
d.點選Project按滑鼠右鍵，選擇新增(New)項目。
e.選擇 NEXT 選項。
f.設定 Project 使用空間及稽核選項，完畢後按 Next鍵。
g.設定選項(Option)功能，完畢後按 Next鍵。
h.設定 Project 使用權限，完畢後按 Next鍵。
a.設定新Project原始數據、Custom Field等設定之來源，之後按 Next鍵。
b.設定 Project名稱。
四、層析系統 (CHROMATOGRAPHIC SYSTEM)之建立a.打開電腦電源開關，進入作業系統，連續按兩下”EMPOWER LOGING”圖像。
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W a t e r s E型高效液相作业指导书
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Waters E2695型高效液相作业指导书
1.目的
规范Waters E2695型高效液相色谱仪的操作，有利于仪器的使用和检测工作的开展。
使Waters E2695型高效液相色谱仪处于受控状态，保证检测结果的准确性和可靠性。
方便Waters E2695型高效液相色谱仪的日常维护及常见故障的检查和解决。
2.范围
本作业指导书适用于Waters E2695型高效液相色谱仪。
3.职责
检验室负责制定操作规程。
仪器负责人组织实施操作规程并保证仪器的有效使用。
质量员保证仪器处于受控状态并负责编写仪器的检定、期间核查计划并组织落实实施。
4.仪器组成
本仪器由waters2695分离单无、2489紫外可见光检测器、2424蒸发光散射检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
5.操作规程
开机
先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）。
接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。
溶剂管理系统的准备
流动相的脱气
确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。
启动溶剂管理系统
干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]。
待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。
样品管理系统的准备
A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为问冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水（1：1）。
将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门。
编辑分析方法及执行样品分析表
创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。
在菜单栏“管理”→创建新项目→选择父项目→下一步→输入表空间值→按“下一步”逐步设置→完成→管理→改变/项目，在该窗口切换项。
编辑方法组调用方法组编辑向导→新建→设置检测器参数｛2489检测器设置波长模式、波长、灯开启、采样速率；2424检测器[通用]里设置：检测器设置增益（0～1000）、数据率、灯开启，喷雾器设置模式（加热、关、冷却），漂
移管设置温度（5～100℃之间，常用50或60℃），气体压力设置好（通常设置为25psi～60psi）。
[数据通道]依据需要可勾选信号、信号-MBF、气体压力、喷雾器温度、漂移管温度）｝→2695主机参数（通用、流量、柱温、通道）→保存仪器方法→选择同使用该方法组的数据有关的仪器方法→选择处理方法、报告方法→下一步→完成。
监视基线和单次进样
点击平衡系统/监视基线图标→输入仪器方法→平衡监视器，开始按设置方法平衡基线。
待基线平衡、压力平稳后→单次进样，当要对分析方法做修改时，通过中断运行样→方法组仪器随时改变方法→另存覆盖→平衡监视→执行新方法，可重复至最佳分析方法确定。
运行样品组使用样品组向导逐步建立样品组表，可在编辑好的样品组表最后一行添加关机方法（功能为：平衡色谱柱）设置自动关机→保存样品组方法→运行当前样品组方法。
处理数据并打印报告
浏览项目→通道→双击打开图谱→文件→新建处理方法→逐步点击“下一步”选中所需参数→输入方法名→完成→处理参数→适应性→选中计算适应性结果、空体积时间（分）处输入、所需药典选择“全部”→保存处理方法→浏览项目→选中需处理的图谱→右击鼠标→选中使用指定的处理方法→确定→浏览项目→结果→更新。
选中图谱→预览→采用所需报告模板打印。
关机使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路，填写使用记录。
6.使用注意事项和日常维护
清洗流路系统：
如果流动相有无机盐或缓冲液，在开机后，排空前预先设置好低流速的纯水为流动相的分析方法，待排空气完成后，即可执行冲柱20分钟后,再换上并更改为应用的流动相平衡柱。
如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟。
如果使用有机溶剂，直接更换甲醇清洗50分钟即可。
2424检测器注意事项：
关闭2424检测器：
（1）从色谱柱和检测器中排除所有缓冲剂。
（2）让未经缓冲剂处理的流动相通过系统。
（3）关闭泵。
（4）让雾化气体通过检测器10分钟，以排干蒸发管和检测室。
（5）停止气体流动。
（6）关闭检测器的电源。
清洗漂移管
开启气体供应，设置漂移管温度100°C，用100% HPLC 级水整夜冲洗。
日常维护：
提示：为防止损坏色谱柱，在从液体通路中排除流动相之前，应移开色谱柱。
（1）将漂移管温度设置为适当的退溶温度。
提示：对于大多数溶剂来说，50℃(122°F) 就是适当的退溶温度。
（2）用 100% HPLC 级水替换缓冲流动相，然后以 3 mL/min 的流量将系统冲洗10分钟。
（3）清洗仪器方法
a.甲醇洗机方法LC时间程序
b.水-甲醇洗机LC时间程序（D管为纯水）。