BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
使用说明：
1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即 使用，也可以-20℃长期保存。
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20l 25mg/ml蛋白标准，加入980l稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
15. Zong-Chun Yi, Hong Wang, Guang-Yao Zhang, Bing Xia. Downregulation of connexin 43 in nasopharyngeal carcinoma cells is related to promoter methylation. Oral Oncol. 2007 Feb 14;
注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒BCA蛋白浓度测定试剂盒保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品内容：BCA产品简介：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白浓度测定试剂盒操作说明：一. 微孔酶标仪法1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。
将标准品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。
3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。
由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分钟。
用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二. 分光光度计法如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA蛋白浓度测定说明书
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒102ml包装清单：产品编号产品名称包装CHEM001A BCA试剂A 100mlCHEM001B BCA试剂B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml—说明书1份产品简介：增强型BCA蛋白浓度测定试剂(Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。
Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。
增强型BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。
增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。
检测灵敏度达到10μg/ml。
按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。
比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。
使用说明：A.比色杯法测定1、根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积（每个测定需0.7ml工作液），按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。
BCA工作液在室温可稳定24小时。
2、试管编号，按以下操作。
管号S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品xH2O （µl）20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（µl） 4 4 4 4 4 4 4 －蛋白标准液（µl）0 0.5 1 2.5 5 10 20 －样品体积－－－－－－－ 4反应体积24 24 24 24 24 24 24 24 BCA工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（µg/µl）0 1 2 5 10 20 40 待定注：1）标准曲线一般做4个点加一个空白。
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。
2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。
原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。
二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。
将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。
每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。
用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。
普利莱基因技术微量蛋白质定量试剂盒 (BCA 法) 使用说明说明书
微量蛋白质定量试剂盒(BCA法)使用说明P1513描述：Bicinchoninic acid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。
与Bradford 法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：(1)BCA Reagent100ml，室温保存；(2)Cu Reagent2.5ml，室温保存；(3)BSA standard4mg/ml1ml，−20ºC冻存。
1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1ml比色杯测定。
所需设备：比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562nm，可在540-590nm之间。
工作溶液(Working Reagent,WR)配制：将50体积BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色，立即使用或者4℃保存不超过一天。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释,得到BSA标准溶液80、40、20、10、5、2.5、1.25µg/ml。
蛋白测定微量蛋白质浓度线性检测范围为1-100µg/ml。
标准测定用1cm光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积1.2ml，用比色计测定。
微板测定用96孔板，反应终体积240µl，用酶标仪、微板比色仪测定。
1.标准测定：将0.2ml标准品或待测样本与1ml WR工作溶液混合。
微板测定：将40µl标准品或待测样本与200µl WR工作溶液混合。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
博迈德BCA试剂盒说明书
博迈德BCA试剂盒说明书产品简介蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。
博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchonicacid）是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。
该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。
BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA、)还原剂(DTT巯基乙醇)和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
基本原理碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
主要特点1.准确XX线性XX:BCA试剂的蛋白质测定范围是10-2000ug/ml;2.快速:45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
3.经济实用:在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存BCA试剂A70ml室温保存BCA试剂B1.4ml室温保存蛋白标准C0.5ml-20C保存(5mg/1mlBSA)本试剂盒自订购xx一年内有效。
注意事项1·在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37C温育使溶解，如发现细菌污染则应丢弃。
2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒;高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。
3.更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔均应做标准曲线。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的蛋白质浓度测定方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。
本试剂盒适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等多种样品中总蛋白浓度的定量测定。
二、试剂盒组成1、 BCA 工作液：A 液与 B 液按 50:1 的比例混合而成，现配现用。
2、蛋白标准品（2mg/ml）：牛血清白蛋白（BSA）溶液。
3、 96 孔板三、所需设备1、酶标仪（波长 562nm）2、移液器（量程分别为20μl、200μl、1000μl）3、涡旋振荡器4、离心机四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品（2mg/ml）用 PBS 或生理盐水稀释成一系列浓度梯度，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml。
（2）在 96 孔板中，每个浓度梯度设置 2 个复孔。
分别向孔中加入25μl 不同浓度的标准品溶液。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定吸光度值（OD 值）。
（5）以蛋白浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定（1）将待测样品用 PBS 或生理盐水适当稀释（若样品浓度过高，可能会超出标准曲线范围）。
（2）在 96 孔板中，设置样品孔和空白孔（仅加25μl 稀释液和200μl BCA 工作液）。
向样品孔中加入25μl 稀释后的样品。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定样品孔和空白孔的吸光度值（OD 值）。
（5）样品的蛋白浓度可根据标准曲线计算得出。
五、注意事项1、 BCA 工作液应现配现用，避免长时间放置导致失效。
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
注意事项
1•在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37C温育使溶解，如发现细
菌污染则应丢弃
2.样品中若含有EDT
A、EGT
A、DTT硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试
剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。
3.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔,每次
均应做标准曲线。
4•当试剂A和B混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭 情况下可保存1周。
5.需准备37C水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-
595nm之间，562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用分光光度计 测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应 注意防止因水粉蒸发影响检测结果。
3•加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加PBS到20微升。
4.各孔加入200微升BCA工作液，37C放置30分钟。
5•冷却到室温，用酶标仪测定A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
产品简介
蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的BCA蛋白质检测
试剂（bicinchonic acid是理想的蛋白质定量方法；是当前比Lowry法更优越的专用 于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白 质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。BCA法测定蛋白浓度不受绝
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南1.简介BCA蛋白定量试剂盒是一种用于测定蛋白质浓度的试剂盒。
该试剂盒采用双硫键还原法，可以通过比色法快速、准确地测定样品中的蛋白质浓度。
本使用指南将详细介绍BCA蛋白定量试剂盒的使用方法和相关注意事项。
2.实验前准备2.1 试剂准备根据试剂盒的说明书，准备好所需的试剂物品，包括BCA试剂、标准品、还原缓冲液、洗涤缓冲液等。
2.2 样品准备将需要测定的样品进行处理和提取，并根据实验要求进行稀释。
确保样品无杂质和干扰物，以免影响测定结果。
3.样品处理3.1 样品加标准曲线制备将已知浓度的标准品按照一定比例加入到已处理好的样品中，制备出一系列浓度梯度的样品。
3.2 样品处理步骤按照试剂盒说明书的要求，逐步进行样品处理，包括样品还原、洗涤等步骤。
确保每个步骤的操作正确，以获得准确的测定结果。
4.比色测定4.1 样品吸光度测定使用紫外-可见分光光度计测定各个标准品和待测样品的吸光度值。
记录吸光度值，以备后续计算使用。
4.2 绘制标准曲线将各个标准品的浓度与吸光度值进行统计和计算，绘制出标准曲线。
通过标准曲线，可以计算出待测样品的蛋白质浓度。
5.结果分析根据标准曲线计算出待测样品的蛋白质浓度，并进行结果统计和分析。
6.结论根据实验结果得出结论，并对实验过程中出现的问题进行总结和改进。
附件：1.BCA蛋白定量试剂盒说明书2.实验记录表格法律名词及注释：1.BCA蛋白定量试剂盒：BCA全称为Bicinchoninic Acid，是一种常用于蛋白质浓度测定的试剂盒。
2.双硫键还原法：一种用于将蛋白质中的二硫键还原为巯基的方法，常用于蛋白质结构研究和蛋白质定量实验中。
3.比色法：一种通过物质吸收或散射光线的特性，根据吸光度或透过率的变化来测定物质浓度的方法。
全文结束 \。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。
货号：BC1720规格：100T/96S产品内容：试剂A：液体×1瓶，4℃保存。
试剂B：液体×1支，4℃保存。
标准品：液体×1支，4℃保存。
产品说明：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm 处吸收峰最强。
自备仪器和用品：台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。
操作步骤：一、样品中可溶性蛋白质提取：1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
（动物样品常常需要稀释）3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定操作：1.可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562nm，蒸馏水调零。
2.工作液置于60℃水浴预热30min。
空白管标准管测定管蒸馏水（μL）4标准品（μL）4待测液（μL）4工作液（μL）200200200混匀后置于60℃保温30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定管。
BCA测蛋白浓度
BCA蛋白浓度测定2017.8.18一. 原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份组份Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL） 5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL三. 操作步骤A．酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg）0 0.5 1.02.0 4.0 6.0 8.0 10.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA 工作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
四. 注意事项1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。
BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。
BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。
Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。
Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。
试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。
试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。
Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。
有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。
试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。
BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
1•总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来：
（标准液+未知液）X（平行数目）X（每个样品中加入的WR体积）=总共所需 的WR体积
例如：标准的试管程序有三个未知液，每个样品做两组重复：
（标准液9mL+未知液3mL）X（平行数目2）X（2mL）二总共所需的WR体积48mL注意：试管程序中每个样品管加2.0ml WR
4、冷却到室温
5、用酶标仪测量在562nm或接近562nm的读数
注意：1)这种方法中波长在540-590nm的范围内都能被成功的测量
2因为读板器使用的光线长度比分光光度计的比色皿要短，所以微型板程序需 要使用样品比例比较大的工作试剂去获得与标准试管程序相同的灵敏度。如果需 要高于562nm的测量，要将培养时间增加到2h.
大分子结构的蛋白质，肽键的数量和存在的四个特定氨基酸（半胱氨酸,胱氨酸，色 氨酸和酪氨酸）据说是与BCA形成颜色产物的原因。因此，蛋白浓度的测量通常要 参照标准的一个常见的蛋白质如牛血清白蛋白。一系列已知浓度的蛋白质稀释液 是为与之相近的未知蛋白质浓度测定准备的。因为每一个未知浓度的测定都需要 基于标准曲线。如果需要将一个未知蛋白精确定量，选择一个与未知蛋白特性相 似的标准蛋白是可取的。例如，当测定免疫球蛋白时牛血清丙种球蛋白可以被当 做标准蛋白。以下给出了两种检测过程：
光度就不会引进明显的误差。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得
的所有空白标准品的吸光度平均值。
微型板程序(样品：WR=1:8)
1、用移液管移取25ul的WR到每一个标准品与未知样品所在的微型板中
(worki ng ran ge=20-2000ug/ml)
BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书(货号：G0418W微板法96样)一、产品简介：BCA蛋白含量试剂盒提供一种简单，快速，耐去污剂（最多5％）的检测蛋白质浓度的方法。
由于蛋白质能将Cu2+还原成Cu+；BCA可与Cu+结合生成紫蓝色复合物，在562nm 处有最大光吸光值，颜色的深浅与蛋白含量成正比，因此可根据吸光值测定蛋白质浓度。
二、试剂盒组分与配制:试剂名称规格保存要求备注试剂A液体25mL×1瓶4℃保存依据实验用量，临用前试剂A:B=50:1的比例混匀成反应mix试剂B液体0.5mL×1支4℃保存标准品液体1.5mL×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂三、所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅、移液器和蒸馏水。
四、蛋白含量测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL提取液（提取液可选用酶提取缓冲液、蒸馏水、生理盐水）冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如10倍。
实验前可以先选2个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
②细菌或细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细菌或细胞加入1mL提取液；超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），12000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
【注】：依据研究经验，一般需将样本粗提液稀释到适当倍数再进行测定，如10倍。
实验前可以先选2个样本测定，摸索确定适合本次实验的稀释倍数。
③液体样本：澄清无色液体样品可以直接测定。
若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长到562nm。
②反应mix置于60℃水浴预热30min（仅煮一次即可）。
BCA蛋白浓度测定说明书
BCA蛋⽩浓度测定说明书BCA法蛋⽩质浓度测定试剂盒BCA Protein Assay Kit产品编号：SK3021包装规格：500 Assays产品简介BCA法是理想的蛋⽩质定量⽅法，在碱性环境下蛋⽩质分⼦中肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA特异地与Cu1+结合形成稳定的紫蓝⾊复合物，在562 nM处有最⼤的光吸收值并与蛋⽩质浓度成正⽐，颜⾊的深浅与蛋⽩质的含量成正⽐，可以根据吸收值测定蛋⽩质浓度。
该测定⽅法灵敏度⾼，操作简单，试剂及其形成的颜⾊复合物稳定性俱佳，并且受⼲扰物质去垢剂等影响⼩。
产品特点1. 准确灵敏，线性范围⼴，BCA试剂的蛋⽩质测定范围是25－500 µg/ml。
2. 快速：45分钟内完成测定，⽐经典的Lowry法快4倍⽽且更加⽅便。
3. 不受样品中离⼦型和⾮离⼦型去污剂影响。
4. 检测不同蛋⽩质分⼦的变异系数远⼩于考马⽒亮蓝。
5. 可以酶标板法或分光光度计法。
运输和保存条件在常温下运输，收到后，将试剂A、试剂B 4℃保存，BSA蛋⽩标准液-20℃，保质期⼀年。
产品组成本试剂盒由溶液A、溶液B和BSA标准蛋⽩构成，酶标板法可以使⽤500次，分光光度计法100次。
SK3021-1 溶液A 100 mlSK3021-2 溶液B 2 mlBSA标准蛋⽩(5mg/ml) 1 ml使⽤⽅法A. 试剂准备1. 按照以下公式计算所需的BCA⼯作液总体积。
BCA⼯作液总体积=（标准曲线测定点数+样品数）×重复次数×每个样品所需的BCA⼯作液体积2. 根据所需的BCA⼯作液总体积，取50份溶液A和1份溶液B，混匀，制成BCA⼯作液。
3. 取⼀定量的BSA标准溶液，⽤1XPBS溶液稀释为500 µg/ml。
4. 取8⽀1.5 ml离⼼管，按照下表平⾏操作。
B. 分光光度法1. 制作标准曲线（离⼼管法的蛋⽩定量线性范围：25-500µg/ml）1）取8⽀1.5ml离⼼管，各管分别加⼊100µl相应浓度的标准蛋⽩质溶液。
BCA蛋白浓度测定
0.593667
0.3
16
0.736
0.738
0.732
0.735333
0.4
20
0.957
0.966
0.952
0.958333
0.5
用 Excel 或 orgin 作出吸光度对 BSA 浓度的关系曲线。
六、实验结果分析 得到的吸光度对 BSA 浓度的关系曲线 R2 值大于 0.99 的时数据较好。如果
BCA 蛋白浓度测定
一、实验原理：
BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混
合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，
蛋白质将 Cu2+还原为 Cu+，一个 Cu+螯合二个 BCA 分子，工作试剂由原来的苹
果绿形成紫色复合物，该水溶性的复合物在 562nm 处显示最大吸光性，吸光度
孔中，加标准品稀释液补足到20μL。 6. 加适量体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释补充到20μL。
注：测量浓度请需要对样品进行稀释，使其的浓度范围在0.5-5 mg/mL 之间，保证样品浓度在线性范围内，一般样品需要稀释5-10倍即可，根据 实际蛋白浓度适当调整。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
产品使用说明书BCA 蛋白定量试剂盒试剂盒简介以下货号试剂盒可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号TB380）。
BCA Protein Assay Kit ：500 / 2500 rxn 货号71285-3BCA 蛋白定量方法是基于双缩脲反应，即在碱性溶液中蛋白将Cu 2+ 还原成Cu 1+，而根据检测到的单价Cu 离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。
Bicinchoninic acid 是一种显色剂，可以螯合被还原的铜离子，产生一种在562nm 有强吸收的紫色复合物。
Novagen 的BCA 试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000µg/ml 范围内的蛋白的浓度，根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。
试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反应（50µl 蛋白样品加上1ml 反应试剂）或2,500次微型测定（25µl 蛋白样品加上200µl 反应试剂，可以在96孔板中进行高通量定量）。
试剂盒中提供的BSA （牛血清白蛋白，2mg/ml ）为用户制作标准浓度曲线提供了便利。
Novagen 的BCA 试剂盒准确度高，兼容性好，能与各种化学试剂和表面活性剂兼容，可以方便地配合默克Novagen 的BugBuster ®，PopCulture ®，CytoBuster™，Reportasol™和Insect PopCulture 抽提蛋白的细胞裂解试剂一起使用。
有些化学成分，例如螯合剂，强酸、强碱、还原剂等，可能会干扰BCA 法采用的还原及螯合定量过程，详细情况请看说明书后附列表。
试剂盒提供的组分500ml BCA 反应液（0.1M NaOH 缓冲的bicinchoninic acid ，碳酸钠，酒石酸钠，碳酸氢钠，pH11.25） 15ml 4% 硫酸铜3×1ml BSA 标准品（2mg/ml ）储存室温存放。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
BCA微量蛋白浓度测定试剂盒
货号：PC0050
规格：500微孔(500T)/1000微孔(1000T)/2000微孔（2000T）
保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
产品内容：
包装500微孔1000微孔2000微孔保存
BCA试剂100ml2×100ml4×100ml室温
Cu试剂3ml6ml12ml室温
PBS稀释液30ml60ml120ml室温
BSA蛋白标准
0.3ml0.5ml1ml-20℃
(5mg/ml BSA)
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一.微孔酶标仪法
1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工
作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：先用PBS将BSA标准品稀释至终浓度为0.8mg/ml备用。
再依次稀释至80、40、20、10、5、2.5ug/ml.。
3.高浓度蛋白可将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4.各孔加入200微升BCA工作液和40ul稀释后的蛋白或标准品溶液，对照孔加入PBS稀释液。
37℃放置4小时。
用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二.分光光度计法
如没有酶标仪，在离心管中混匀样品后加入比色皿，用分光光度计比色。
采用分光光度计测定蛋白浓度方法与酶标仪法相似，只需要按照分光光度计比色皿容量要求按照比例配置相应的BCA工作液和标准品溶液。
常规比色皿用量为200ul有样本加入1mlBCA工作液或400ul样本加入2mlBCA工作液。
微量比色皿用量为20样本加入100ul BCA工作液。
或根据仪器情况自行调整。
附：样本及标准品稀释示意图
样本管号A B C D E PBS稀释液用量180100100100……
标准品用量20（原液）
100
（从A管吸出）
100
（从B管吸出）
100
（从C管吸出）
……
终浓度（ug/ml）80402010……
注意事项：
1.长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。
BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解,不影响使用。
2.样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂：
PC0001BSA标准品（5mg/ml）
PC00155×G250(蛋白定量用)
PC0021BCA试剂
PC0030Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
PC0010Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
R0010高效RIPA组织/细胞快速裂解液
PR1600预染低分子量蛋白MARKER
R0050核蛋白抽提试剂盒
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
D106010×电泳转移缓冲液
PE0010ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)。