实验十五、石蜡切片法(四)染色、封藏(附：冰冻切片法)
实验技术：免疫学常用技术之----免疫组化（石蜡切片冰冻切片）
实验技术：免疫学常用技术之----免疫组化（石蜡切片冰冻切片）免疫组化的原理说起来其实挺简单的，抗原抗体反应嘛，通过采用显色剂来标记抗体，进行化学反应后便能显色，从而确定出组织细胞中的抗原。
可以进行定位、定性以及定量。
石蜡切片或者冰冻切片均可以做免疫组化的实验，前期的过程会有所不同：石蜡切片：取出需要实验的石蜡切片，先进行脱蜡处理，最后置于自来水中备用。
对于冰冻切片，无需上述步骤，直接从-20℃冰箱中取出即可进行后续的操作啦~~~接下来的步骤就全部一样啦~~~抗原修复：由于我们在制备石蜡切片或者冰冻切片时，采用福尔马林进行固定，会使得组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成醛建，使得不少抗原决定簇被封闭；采用多聚甲醛会具有聚合作用，均阻碍了抗原和抗体的结合。
所以我们怎么着都要进行这步哒，虽然比较耗时。
言归正传，具体的抗原修复液为：0.51 g 柠檬酸钠0.095 g 柠檬酸双蒸水定容至250 mL偷偷告诉你可以偷懒的，配置为10×抗原修复液后，每次实验稀释后使用就可以了。
配置好修复液后，将切片置于其中，采用微波修复法修复（中火，5 min），取出后冷却至室温（一般放在4℃冰箱冷却更快），再进行如上微波修复后冷却，一共三次。
阻断内源性过氧化物酶：将切片置于3%过氧化氢（30%过氧化氢，采用甲醇稀释10倍即可得到）中10 min即可。
随后采用1×PBS洗三次，每次5 min。
抗原抗体反应步骤：这部分内容就会因使用的试剂盒的不同而略有差异了，我使用的是中杉金桥的二步法试剂盒，过程比较简单，接上一步骤后直接加一抗（1×PBS稀释）4℃孵育过夜。
第二天洗一抗（1×PBS洗三次，每次5 min）后加二抗室温孵育半小时后，同上洗三次。
Tips: 有些试剂盒会需要先用血清封闭后再加一抗孵育的。
还有哦，孵育要在湿盒中哦，不然全挥发咯会。
DAB显色：这步挺关键的，显色的时间把握很重要，显色过度会颜色太深而观察不到有效的结果，时间过短也会显色不完全。
石蜡切片免疫荧光染色方法完整版
石蜡切片免疫荧光染色方法HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】对于石蜡切片：1、烤片：60℃ 60分钟2、脱蜡：二甲苯中Ⅰ脱蜡15分钟→二甲苯Ⅱ脱蜡15分钟→无水乙醇Ⅰ5分钟→无水乙醇Ⅱ5分钟→90%乙醇Ⅰ5分钟→90%乙醇Ⅱ5分钟→70％乙醇5分钟→蒸馏水5分钟→蒸馏水5分钟。
3、抗原修复：高压修复，事先烧开锅中的水，修复盒中加入l柠檬酸钠，(柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g加入1000ml蒸馏水中)，上汽后加热10分钟，关火。
修复盒取出，放入装有自来水的瓷缸中缓慢冷却至室温。
2. 去除内源性酶：玻片取出放入湿盒，加3%H2O22(2ml H2O22加入18ml蒸馏水中，现配现用，避光)，室温孵育10分钟，PBS洗3次，每次5分钟。
（也可不用去除内源性酶）。
3. 封闭(Blocking)加10%正常驴血清（原液100ul+900ulPBS,1ml够用30张片子），室温孵育封闭30分钟。
如果背景较高，可以4℃封闭过夜。
不用洗，用滤纸吸干周边水分。
从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。
4. 一抗孵育(Primary antibody incubation)参考一抗的说明书，按照适当比例用（10%山羊血清PBS或1%BSA-PBS）稀释一抗。
立即加入稀释好的一抗， 4℃过夜，第二天取出复温45分钟。
PBS洗3次，每次5分钟。
5. 二抗孵育(Secondary antibody inucubation)按照适当比例用稀释荧光标记的二抗，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。
PBS洗涤3次。
每次5分钟。
如果结果背景较高，可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
6. 蛋白检测(Detection of proteins)7. 复染用DAPI对细胞核进行染色，室温10分钟，PBS冲洗5分钟×3次，封片（封片剂或分析纯的甘油与碳酸缓冲液1：1混合）显微镜观察，染色后为蓝色荧光。
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
石蜡切片法
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。
石蜡切片的实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。
3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。
二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。
其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。
2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。
4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。
5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。
6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。
石蜡切片免疫荧光染色方法
石蜡切片免疫荧光染色方法1.组织固定将待染的组织标本取出，用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行冲洗，以去除血液和其他污染物。
然后用组织固定剂（如4%的多聚甲醛）进行固定，时间一般为12-24小时。
固定后，将组织转移到30%蔗糖缓冲液中，保持在4°C下过夜。
2.组织包埋将固定后的组织进行脱水和透明化处理。
首先用70%乙醇进行脱水，然后使用95%和100%的乙醇进行脱水，每个浓度的乙醇浸泡时间为30分钟。
接下来，用细胞脱水剂（如xylene）进行透明化处理，每次浸泡30分钟。
最后，将组织置于石蜡中，使其逐渐浸透，浸泡时间一般为12-24小时。
3.组织切片将石蜡浸透的组织取出，固定在切片架上。
使用旋转切片机将组织切成5-10微米厚的切片。
切好的切片用除去石蜡的溶剂（如xylene）处理，然后通过悬浮在磷酸盐缓冲液中移至玻璃切片上。
4.抗原修复在切片上涂抹抗原修复液，将其加热至适当温度进行修复，以恢复组织中的抗原活性。
不同的修复条件适用于不同的抗原修复液，一般修复温度为95°C，时间为20-30分钟。
修复后，将切片用磷酸盐缓冲液冲洗数次。
5.抗体染色在切片上涂抹首要抗体（抗体与所要检测的抗原有特异性结合）。
将切片置于湿润箱中，室温孵育1小时，或在4°C下孵育过夜。
然后，用PBS缓冲液冲洗切片，以去除未结合的抗体。
接下来，涂抹荧光标记的二抗（与首要抗体结合的二抗），并孵育30分钟。
6.荧光显微镜观察将切片加装到玻璃片上，并用适当的荧光封装剂封盖。
使用荧光显微镜观察切片，观察和记录荧光信号和组织结构。
注意事项：1.在操作过程中，要严格避免组织检测和悬浮液受到光照。
2.切片机和刀片必须保持清洁和尖锐，以确保切片的质量。
3.在染色过程中，要注意温度和时间的控制，以保证染色效果。
4.切片和显微镜观察时，要确保显微镜的光源和滤光片与所使用的荧光标记相匹配。
5.进行染色之前，要检查抗体的适用性和浓度，以确保染色结果的准确性和可靠性。
石蜡切片免疫组化实验方法
石蜡切片免疫组化实验方法预处理：1.收集组织样品：选择实验需要的组织样品，如病变组织或动物组织，固定在4%的中性缓冲福尔马林溶液中，通常时间为24小时。
2.脱水：将固定的组织样品进行脱水处理，使用升级的乙醇浓度，如70%乙醇、85%乙醇和95%乙醇各浸泡5-10分钟，然后在无水乙醇中浸泡2-3次，每次浸泡时间为10分钟。
3.渗透剂处理：将组织样品置于染料渗透剂（如苯酚甲醛、苯酚）中进行渗透处理。
渗透剂的选择根据实验需要的类型来确定。
4.包埋：将已经渗透处理的组织样品放入合适大小的模具中，加入石蜡进行包埋，通常使用两次石蜡浸渍15-20分钟，然后定位标本，放入包埋模具中。
切片：1.切片机调节：根据具体的切片机和刀片的不同，调节适当的角度和切片速度。
2. 切片：将包埋好的组织块放入切片机的切片盘中，以适当的角度切出厚度约为4-6um的石蜡切片，切片时需要保持刀片的清洁，避免刮伤组织。
3.切片回收：使用刀片回收装置将切下的切片轻轻回收至水中，再将切片转移到预处理盒中。
染色：1. 去蜡：将石蜡切片放入脱蜡溶液（如xylene）中进行脱蜡处理，每个浸泡站点持续3-5分钟。
2.脱水：将石蜡切片从脱蜡溶液中取出，放入浓度递减的乙醇溶液中，分别浸泡5分钟，如95%乙醇、70%乙醇和纯水。
3.抗原修复：为恢复组织切片的抗原表位，可以选择酶消化、高压加热或微波处理等方法来进行抗原修复，常用的抗原修复方法包括热处理和酶切法。
4.屏障消除：为了阻止非特异性结合，需要进行屏障消除，使用5%非脂干奶粉或血清进行预阻断，通常需要在37°C孵育1小时。
5.一抗处理：将相应的一抗加入切片上，覆盖玻璃片，通常需要在4°C下孵育过夜。
6.洗涤：用洗涤缓冲液对切片进行洗涤，通常重复3次，每次5分钟。
7.二抗处理：将荧光标记的二抗加入切片上，覆盖玻璃片，通常需要在室温下孵育1小时。
8.洗涤：用洗涤缓冲液对切片进行洗涤，通常重复3次，每次5分钟。
实验十五、石蜡切片法(四)染色、封藏(附：冰冻切片法)
(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液1~5min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯5—10min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。
2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。
四、注意事项 1、脱蜡应彻底； 2、水洗时水流不能太急； 3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好； 4、脱水要彻底； 5、适量滴加封藏剂。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
五、实验结果 细胞核蓝色，细胞质粉红色。
六、思考题 1. 在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？ 应如何解决？
附：冰冻切片法 冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等） 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优 点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的 制片。 制片。
一、操 作 程 序 1. 取 材：取新鲜的组织。 取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林 冰冻切片。 中性福尔马林,冰冻切片 组织固定于 中性福尔马林 冰冻切片。 3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 调整切片角度，安装切片刀。 调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定， 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 将样品放到样品头上， 近刀口，利用慢进按钮开始修片， 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝， 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出 后染色观察。 后染色观察。
石蜡切片的实验报告
石蜡切片的实验报告石蜡切片的实验报告石蜡切片是生物学和医学领域中常用的技术手段，它可以将组织样本固定在切片上，以便于观察和分析。
本次实验旨在探究石蜡切片技术的原理、步骤和应用。
一、石蜡切片技术的原理石蜡切片技术是一种常用的组织学研究方法，它的原理基于石蜡的透明性和稳定性。
石蜡是一种具有较高熔点的蜡状物质，具有良好的剪切性和切片稳定性。
在进行石蜡切片前，需要将组织样本进行固定、脱水和浸渍处理，使其具备适合切片的性质。
然后，将固定好的组织样本浸入石蜡中，石蜡渗透进入组织细胞中，将其包裹在石蜡中形成固定的切片。
最后，使用显微镜对切片进行观察和分析。
二、石蜡切片的步骤1. 组织样本的固定：将组织样本取出后，迅速进行固定处理。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，可以使组织样本保持原有的形态结构。
2. 脱水处理：将固定好的组织样本进行脱水处理，以去除组织中的水分。
脱水过程中，需要逐渐使用浓度递增的酒精进行浸泡，使组织逐渐脱水至无水状态。
3. 浸渍处理：将脱水后的组织样本浸泡在石蜡溶液中，使其充分浸渍。
浸渍时间根据组织样本的大小和类型而定，一般需要数小时至数天。
4. 石蜡包埋：将浸渍好的组织样本放入石蜡模具中，加热使石蜡融化，将组织样本包裹在石蜡中。
包埋过程中需要控制温度和时间，以确保石蜡充分渗透到组织中。
5. 石蜡切片：使用石蜡切片机将包埋好的组织样本切割成薄片。
切片时需要调整切片机的切割速度和刀片的角度，以获得理想的切片质量。
6. 切片染色：将切好的石蜡切片进行染色处理，以增强组织结构的对比度和可见性。
常用的染色方法有血液学染色、组织学染色等。
7. 显微镜观察：将染色好的石蜡切片放置在显微镜下进行观察和分析。
通过显微镜的放大功能，可以清晰地观察到组织样本的细胞结构和组织构成。
三、石蜡切片技术的应用石蜡切片技术在生物学和医学领域中有广泛的应用。
首先，它可以用于病理学研究，帮助医生诊断和治疗疾病。
通过观察石蜡切片下的组织结构，医生可以了解病变的类型、程度和分布情况，从而制定相应的治疗方案。
石蜡切片制作和he染色实验报告
石蜡切片制作和he染色实验报告石蜡切片制作和HE染色实验报告摘要：本实验旨在了解石蜡切片制作和HE染色技术的基本原理和步骤，并通过实验验证其在组织学研究中的应用效果。
实验结果表明，石蜡切片制作和HE染色技术能够有效地显示组织细胞的形态结构和染色特性。
一、引言组织学研究是生物学和医学领域中的重要分支，它通过研究组织细胞的结构和功能来揭示生物体内部的机理和疾病发生的原因。
石蜡切片制作和HE染色是组织学研究中常用的技术手段，它们能够使组织切片具备一定的透明度和染色特性，从而方便观察和分析组织细胞的形态结构。
二、材料与方法1. 实验材料：新鲜组织样本、10%缓冲福尔马林、乙醇、石蜡、甘油、HE染色液等。
2. 组织固定：将组织样本放入10%缓冲福尔马林中固定24小时。
3. 组织脱水：将固定的组织样本依次脱水处理，使用不同浓度的乙醇洗涤。
4. 组织浸透：将脱水的组织样本浸入石蜡中，进行多次浸透处理，确保组织样本被石蜡充分浸透。
5. 组织包埋：将浸透后的组织样本放入石蜡模具中，加热使石蜡固化。
6. 切片制作：使用石蜡切片机将石蜡块切割成薄片，厚度一般为4-6微米。
7. 切片染色：将切片放入HE染色液中浸泡一定时间，然后进行漂洗和脱水处理。
8. 封片与观察：将染色后的切片放置于显微镜玻片上，加入甘油封片，观察组织细胞的形态结构。
三、结果与讨论经过石蜡切片制作和HE染色处理后，观察到切片中的组织细胞呈现出明显的染色效果。
HE染色液中的酸性染料溶液（伊红）染色细胞核呈红色，而碱性染料溶液（伊红）染色细胞质呈蓝色。
这种染色方式能够清晰地显示组织细胞的核与质的结构特征，有助于观察和分析细胞的形态和组织结构。
石蜡切片制作是为了使组织样本具有一定的刚性和透明度，便于切割和观察。
石蜡能够渗透并包裹组织样本，使其变得坚硬而易于切割。
切片厚度一般为4-6微米，这样可以保证切片的透明度和细胞结构的清晰度。
HE染色技术是组织学研究中最常用的染色方法之一。
实验二十一石蜡切片法(四)——染色、封藏
实验二十一石蜡切片法（四）——染色、封藏
仪器设备：显微镜
器具：盖玻片、载玻片、滤纸、镊子、吸水纸、剪刀、解剖盘、棕色滴瓶、染色缸、一次性针筒、培养皿。
材料：石蜡切片
试剂及其配置：各级乙醇（50%、70%、85%、95%、100%）、1/2二甲苯+1/2无水乙醇、二甲苯、埃利希氏苏木精染液、0.2%曙红水溶液、中性树胶
附：埃利希氏苏木精配方
苏木精 1克
纯乙醇（或95%乙醇） 50毫升
冰醋酸 5毫升
钾矾（硫酸铝钾）约5克（饱和量）
甘油 50毫升
蒸馏水 50毫升
配法：
①将苏木精溶与约15毫升的纯乙醇中，再加冰醋酸后搅拌。
②当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的乙醇。
③将钾矾在研钵中研细并加热，然后将它溶解于水中。
④将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。
⑤此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方，并经
常摇动以促进它的成熟。
成熟时间约3-4周。
若加入0.2克碘酸钠，可立刻成熟。
此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期储备无妨。
此液可分别与伊红（Enosin 曙红）、橙黄G、番红进行三重染色。
实验时间石蜡切片及染色过程
实验时间石蜡切片及染色过程
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验步骤及注意事项
一、石蜡切片
1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm 为宜. 取材时间越快越好.
2. 固定: 组织取下后应立即放入 10%福尔马林(相当于 4%甲醛)固定.
注意：
(1) 固定液量应为组织块体积的 40 倍.
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等
有关. 一般为 3—24h.
(3) 固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.
(4) 固定容器应大些.
3. 漂洗: 流水冲洗 2—10h.。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片是一种常用的组织学实验技术，已经被广泛应用于医学、生物学等领域。
本实验报告将详细介绍石蜡切片实验的步骤、原理以及实验中可能遇到的问题和解决方案。
第一部分：实验步骤石蜡切片实验的步骤主要包括标本制备、石蜡浸渍、切片和染色几个关键环节。
首先，我们需要收集适当的组织标本，如动物器官或植物组织。
这些标本需要经过固定处理，通常使用福尔马林进行固定，然后进行脱水和透明化处理，最终被浸渍进入石蜡中。
在石蜡浸渍的过程中，我们需要将标本逐渐浸入温度逐渐升高的石蜡中，以使其充分浸渍并软化。
这个过程中需要注意温度的控制，同时还要避免气泡的产生。
一旦标本被完全浸渍在石蜡中，我们可以使用石蜡切片机进行切片。
在切片过程中，我们需要调整切片机的切片厚度，通常为4-6微米。
此外，为了得到较好的切片质量，我们还需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当。
切片完成后，我们需要将切片置于载玻片上，并进行染色处理。
染色可以提高组织的对比度，使细胞和组织结构更加清晰可见。
常用的染色方法包括血液学染色、核染色和生物标记染色等。
第二部分：实验原理石蜡切片实验的原理是基于石蜡的高渗透性和易于切割的特点。
通过浸渍和固化过程，标本会充分浸泡在石蜡中，使其变得坚硬而易于切割。
切片机通过旋转刀片来切割标本，形成薄而均匀的切片。
石蜡切片实验的目的是为了观察和研究细胞和组织的结构。
通过切片和染色，我们可以清晰地看到细胞的形态、组织的排列以及细胞内的细胞器结构。
这对于研究疾病的发生机制、药物治疗的效果评估以及生物学基础研究等方面都具有重要意义。
第三部分：实验问题与解决方案在石蜡切片实验中，可能会遇到一些常见的问题，如切片不均匀、切片断裂或组织变形等。
这些问题可能会影响实验的结果和观察效果。
为了解决这些问题，我们可以在实验过程中采取一些措施。
首先，在标本制备过程中，我们可以控制好固定时间，避免过长或过短的固定时间导致的组织变形。
其次，在切片机操作过程中，我们需要确保刀片的锋利度和切片机的切片速度适当，以避免切片不均匀或切片断裂的问题。
石蜡切片法四染色、封藏一、实验原理1染色细胞教学提纲
(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液1~5min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯5—10min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。
2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。
石蜡切片法四染色、封藏一、实 验原理1染色细胞
2．封藏：封藏是使已经透明的材料保存在适合折光率 的封藏剂中，使材料能在显微镜下清晰的显Байду номын сангаас出来， 并能长期保存。
二、试剂与器材 1.试剂：各级酒精（50%、 70%、 85%、 95%、
100%）、1/2二甲+1/2无水乙醇、二甲苯、 埃利希氏苏木精染液、1%曙红水溶液、 中性树胶. 2.器材： 镊子、 解剖针、 染色缸、显微镜。
三、实验程序
1. 染色的一般方法 由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又 常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石 蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至 水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。
苏 木 精——伊 红 （简称 H.E）对染法 (1) 二甲苯脱蜡5-10min。 (2) 二甲苯与纯酒精等量混液5min。 (3) 纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。 (4) 蒸馏水2min。 (5) 埃利希氏苏木精染色液20-30min。 (6) 水洗(换几次，共约5min)。 (7) 1%盐酸酒精分化数秒钟(如染色合适，此步可取消)。 (8) 自来水洗数秒至1min。 (9) 氨水中“蓝化”3~4s。
石蜡切片实验报告
石蜡切片实验报告石蜡切片实验报告石蜡切片是一种常见的实验技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本实验旨在探索石蜡切片的制备方法、切片技术以及应用领域。
一、石蜡切片的制备方法石蜡切片的制备方法主要包括固定、脱水、浸渗和包埋四个步骤。
首先，需要将待切割的样本进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定和乙醛固定等。
固定处理的目的是保持样本的形态结构和化学组成，以便后续的处理。
接下来，进行脱水处理，将固定的样本逐渐置于浓度递增的酒精溶液中，以去除样本中的水分。
然后，进行浸渗处理，将脱水后的样本逐渐浸渗于石蜡中，以增加样本的硬度和刚性。
最后，进行包埋处理，将浸渗后的样本置于石蜡中，使其完全包裹。
制备好的石蜡块可以进行切片处理。
二、石蜡切片的切片技术石蜡切片的切片技术主要包括石蜡块修整、切片机操作和切片收集三个步骤。
首先，需要对石蜡块进行修整，将其切割成适当大小的块，以便放置于切片机中。
修整过程需要注意保持切片块的平整和规整，以确保切片的质量。
接下来，进行切片机操作，将石蜡块固定在切片机上，并设置好切片机的切割参数，如切片厚度和切割速度等。
切片机通常使用旋转刀片进行切割，通过旋转刀片与石蜡块的接触，将石蜡块切割成薄片。
最后，进行切片收集，将切割好的石蜡切片收集起来，可以用于后续的染色、观察和分析。
三、石蜡切片的应用领域石蜡切片在生物学、医学和材料科学等领域有着广泛的应用。
在生物学研究中，石蜡切片可以用于组织学研究，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析生物组织的形态结构和细胞组织的分布情况，从而揭示生物组织的功能和病理变化。
在医学诊断中，石蜡切片可以用于病理学检查，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析患者组织样本中的异常变化，为医生提供诊断依据。
在材料科学研究中，石蜡切片可以用于材料分析，通过切割和染色石蜡切片，可以观察和分析材料的微观结构和组分分布，从而揭示材料的性质和特性。
总结起来，石蜡切片是一种重要的实验技术，具有广泛的应用领域。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色一、目的要求：简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、伊红染色法（简称H.E染色法），借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。
二、实验原理：易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性;而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
三、实验用具：单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、染色缸、树胶瓶、毛笔、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、烤片盒、切片托盘。
石蜡切片技术实验报告
题目：石蜡切片技术实验报告学院：农学院，专业：植物学，姓名：张永丰，学号：2011202010目的掌握石蜡切片技术，为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。
并观察植物叶的横切面内部结构。
材料：已经固定好的女贞叶方法与操作步骤一、脱水：依次使用下列浓度的乙醇脱水50%乙醇一70%乙醇一85%乙醇一95%乙醇一100%乙醇一100%乙醇每步两个小时。
二、透明：依次通过下列试剂进行透明1、1/2无水乙醇1/2二甲苯（加少许番红粉末，对材料进行附染）两个小时2、二甲苯两个小时3、二甲苯一个小时三、浸蜡：浸蜡步骤如下1、将材料瓶中的二甲苯取出1/2,加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36C 温箱中处理35小时2、换用纯石蜡液于60 T温箱中处理2小时，再换一次纯石蜡液处理2小时四、包埋与切片1、在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。
2、片刻后放入材料，避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。
3、及时将蜡块冷却，防治形成结晶。
4、修块与粘连：将多余的石蜡切除，使蜡块成为梯形；将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。
5、切片：利用切片机将蜡块切成薄片。
切片厚度为8〜10卩m,以每分钟40〜50转为宜。
6、粘片与展片：在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀，将蜡带光面朝下固定于载玻片上，放到展片台上经加温使其充分展开。
7、干燥：将展好的片放于36 E温箱中干燥16小时五、脱蜡：切片分别经过下列步骤进行脱蜡二甲苯30min 1/2二甲苯1/2无水乙醇5min无水乙醇5min 95%乙醇5min85%乙醇5min 70%乙醇5min六、染色：染色分为番红染色和固绿染色两步1、番红染色：将载玻片放入盛有番红染液（1%番红，70%乙醇）的染缸中染色22小时2、固绿复染：载玻片依次经过一下处理70% 1min 85% 1min 95% 1min 固绿染液（0.1%固绿，95%L醇）20 秒3、脱水：95% 1min 100% 1min 100%1min4、透明：1/2二甲苯1/2无水乙醇1min二甲苯1min二甲苯七、封片中性树胶封片，干燥八、镜检将封好的装片在显微镜下观察，并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。
石蜡切片的步骤实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉石蜡切片的制作流程。
2. 掌握石蜡切片的基本操作步骤。
3. 了解石蜡切片在组织学、病理学等领域的应用。
二、实验器材与试剂1. 实验器材：- 组织切片机- 石蜡切片机- 脱水机- 摊片机- 载玻片- 烤片机- 石蜡- 二甲苯- 无水乙醇- 4%多聚甲醛- 70%、85%、95%、100%乙醇- 75%、85%、90%、95%酒精- 0.1mol/L盐酸- 苏木精- 伊红- 柠檬酸缓冲液- HE染色试剂三、实验步骤1. 取材与固定- 将新鲜组织固定于4%多聚甲醛24小时以上。
- 将组织从固定液中取出，在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
- 将修切好的组织和对应的标签放入脱水盒内。
2. 脱水- 将脱水盒放入吊篮里，于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
- 脱水过程：75%酒精1小时，85%酒精1小时，90%酒精1小时，95%酒精1小时，无水乙醇I 30分钟，无水乙醇II 30分钟，醇苯5-10分钟，二甲苯I 5-10分钟，二甲苯II 5-10分钟，蜡I 1小时，蜡II 1小时，蜡III 1小时。
3. 包埋- 将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋。
- 先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出，按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
- 于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4. 切片- 将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4微米。
- 切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
- 待水烤干蜡烤化后取出，常温保存备用。
5. 脱蜡至水- 依次将切片放入二甲苯30分钟，二甲苯30分钟，无水乙醇10分钟，无水乙醇10分钟，95%酒精5分钟，90%酒精5分钟，80%酒精5分钟。
- 苏木精染色：将切片放入苏木精染液中染色5-10分钟。
- 水洗：将切片放入清水中清洗。
- 伊红染色：将切片放入伊红染液中染色1-2分钟。
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苏 木 精——伊 红 （简称 H.E）对染法 伊 (1) 二甲苯脱蜡5-10min。 (2) 二甲苯与纯酒精等量混液5min。 (3) 纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。 (4) 蒸馏水2min。 (5) 埃利希氏苏木精染色液20-30min。 (6) 水洗(换几次，共约5min)。 (7) 1%盐酸酒精分化数秒钟(如染色合适，此步可取消)。 (8) 自来水洗数秒至1min。 (9) 氨水中“蓝化”3~4s。
一、操 作 程 序 1. 取 材：取新鲜的组织。 取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林 冰冻切片。 中性福尔马林,冰冻切片 组织固定于 中性福尔马林 冰冻切片。 3. 切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 调整切片角度，安装切片刀。 调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定， 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 将样品放到样品头上， 近刀口，利用慢进按钮开始修片， 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝， 板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出 后染色观察。 后染色观察。
二、试剂与器材 1.试剂：各级酒精（50%、 70%、 85%、 95%、
100%）、1/2二甲+1/2无水乙醇、二甲苯、 埃利希氏苏木精染液、1%曙红水溶液、 中性树胶. 2.器材： 镊子、 解剖针、 染色缸、显微镜。
三、实验程序
1. 染色的一般方法 由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又 常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石 蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至 水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。
四、注意事项 1、脱蜡应彻底； 2、水洗时水流不能太急； 3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好； 4、脱水要彻底； 5、适量滴加封藏剂。
五、实验结果 细胞核蓝色，细胞质粉红色。
六、思考题 1. 在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？ 应如何解决？
附：冰冻切片法 冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等） 胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优 点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的 制片。 制片。
实验十五
石蜡切片法（四） 染色、封藏
一、实验原理 1. 染色：细胞和组织的不同结构之所以能被染成各 种不同的颜色，是由于染料对它们所起的物理与化学 综合作用的结果。 (1) 物理作用：如渗透作用、吸收作用、吸附作用等。 (2) 化学作用：是因为细胞内含有酸性和碱性物质可 分别与染料中的阳离子和阴离子互相结合，这种反应 使组织细胞染上颜色。
(10) 蒸馏中漂洗5min(换一次)。 (11) 1%伊红水溶液1~5min。 (12) 70%酒精数秒。 (13) 80%、95%、纯酒精(2次）各2min。 (14) 纯酒精与二甲苯等量混合液5min。 (15) 二甲苯5—10min。 (16) 封藏: 封藏于中性树胶中。
2. 封藏的方法 在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从 二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在 切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再 进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧， 稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下， 避免产生气泡。
以常用的苏木精-伊红对染法为例：细胞核内含有酸 性物质，易与碱性染料苏木精中有染色作用的阳离子结 合，细胞核被染上蓝色。细胞质含有碱性物质，易与酸 性染料伊红中有染色作用的阴离子结合，细胞质被伊红 染上粉红色。
2．封藏：封藏是使已经透明的材料保存在适合折光率 的封藏剂中，使材料能在显微镜下清晰的显示出来， 并能长期保存。
4. 染色 显示脂类的苏丹黑 法： 染色—显示脂类的苏丹黑 显示脂类的苏丹黑B法
(1)组织固定于 组， 组织固定于 中性福尔马林或 钙福尔马林液 冰冻切片。 冰冻切片。 (2) 于70%酒精略洗。 酒精略洗。 酒精略洗 (3) 苏丹黑 染液 苏丹黑B染液 染液5-15分钟。 分钟。 分钟 (4) 70%酒精洗去多余染料。 酒精洗去多余染料。 酒精洗去多余染料 (5) 稍水洗。 稍水洗。 (6) 甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖。 甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖。 结果：脂滴染为蓝至黑色。 结果：脂滴染为蓝至黑色。