几种水质指示微生物检测方法的研究进展

几种水质指示微生物检测方法的研究进展

发表时间：2016-02-01T16:26:25.957Z 来源：《健康世界》2015年11期供稿作者：孙菊华帕提古丽.要力大西[导读] 新疆阿图什市疾病预防控制中心本文就大肠杆菌。产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述

新疆阿图什市疾病预防控制中心 845350

摘要：检测水中指示微生物是估计污染状况的重要途径，本文就大肠杆菌。产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述

关键词：大肠杆菌；产气荚膜梭菌；脊髓灰质炎病毒；检测方法

水中致病微生物种类繁多，现在还不能用单一方法来分离和鉴定水中微生物，也没有课从饮用水中定量分离出数量很少病原体的有效方法，所以，通常以水中指示微生物代替致病微生物进行检测，从而估计污染状况，已提出的指示微生物包括大肠杆菌，细菌总数，产气荚膜梭菌、大肠杆菌噬菌体及枯草芽孢黑色变种、脊髓灰质炎病毒，其中大肠杆菌一直被作为常规水质细菌学指标；产气荚膜梭菌为厌氧菌，用做指示菌有其独特之处；脊髓灰质炎病毒近年来微生物被提出有可能成为水病毒的较好指标，故本文选择这三种指示微生物，对他们的检测方法及其优缺点和进展进行综述。

1.大肠菌群

大肠菌群作为粪便污染及评价消毒效果的指标已有80余年的历史，目前各国水质卫生标准将其作为水细菌群的常规检测方法比较普及1.1 经典方法

1.1.1 多管发酵法将适量水样接种于一系列有培养基的试管中进行培养，根据产生阳性反应的试管数量来估计原始水样中菌的最大可能数（MPN），其中培养基主要有：矿质改良的谷氨酸盐培养基（MMGM），麦康凯氏胆盐肉汤。此法可用于各种类型的水，特别是浊度较高的水，而且所需设备价廉、简便，阳性结果易于辨认；又受固有误差的限制，在确定阳性结果之前还要做确证试验，故费事（约72h）、费力。

1.1.2 滤膜过滤法 100ml水样通过滤膜过滤后，将滤膜置于选择性培养基表面进行培养，然后计数并鉴定滤膜上的菌落。其中选择性培养基主要有：伊红美蓝琼脂、品红亚硫酸钠琼脂，此法能迅速的获得结果（48h）手续简便，尤其在检查大量水样时可现场过滤，将滤膜放于培养基上带回实验室，不仅可避免携带水样等繁琐手续，而且缩短时间；但此法不能分辨发酵乳糖的细菌是否产气，其次如果非大肠菌群生长过多，则会干扰大肠菌群生长，此外它不适用于混浊度高的水。

2.产气荚膜梭菌

产气荚膜梭菌属于梭状芽孢杆菌属，为革兰氏阳性短粗杆菌，专性厌氧，有荚膜，芽孢椭圆形，一般位于次极端，但很少见，由于产气荚膜梭菌的特性，作为水质污染微生物，但产气荚膜梭菌的检测方法得以解决。

2.1 经典方法

2.1.1 MPN 法将适量水样接种于一系列有培养基（增菌性梭状芽孢杆菌培养基）的试管中进行厌氧培养48h，根据产生阳性反应（培养管变黑）的试管数量来估算原始水样中的MPN此法可用于各种类型的水；但仅能提供水样中含菌量的估计值，易受固有误差限制，在确定阳性结果前还需做确证实验故费（约72h）费力。

2.1.2 倾注法将0.5ml水样接种于有选择性培养基的培养皿中，干燥倾注上层选择培养基，凝固后进行厌氧培养24h，然后计数并鉴定培养基上生长的菌落，选择性培养基主要有：SFP培养基，TSC培养基等，此法能较迅速地获得结果，较简单，尤其在大量水样检查时可现场完成，从而避免携带水样等繁琐手续，但不适于浑浊度较高的水。

2.2 其他方法

2.2.1 免疫学方法 Bartholomew[8]用ELISA方法检测产气荚膜梭菌，以兔抗体产气荚膜梭菌外毒素（CPE）血清与产气荚膜梭菌反应，结果表明该法较敏感（检出5ng/g）特异性强，而且仅需24h；但需要专业人员和特殊设备。Berry[9]提出用反相被动乳胶凝集试验（LAT）检测产气荚膜梭菌，试验结果发现LAT与ELIAS敏感性和特异性相似，却省时。无需特殊设备。但需孵育过夜。以后又有学者[10]报道用竞争性红细胞免疫法（ELIAS）法更敏感，（检出2ug/L），且方法为用免疫学检测环境水中产气荚膜梭菌提供条件。

2.2.2 分子生物学方法有报道[11]用合成的DNA探针检测肠毒性产气荚膜梭菌；Fach 和Guillon[12]用PCR法扩增产气荚膜梭菌的α-外毒素基因，凝胶电泳进行检测，发现PCR法特异性，敏感（检出250fg/g）快速（约4h）；产气荚膜梭菌外毒素基因已被克隆，核酸测序表达于E.coli中，这分子生物方法为水中产气荚膜梭菌的检测开辟了新途径，使敏感.特异、快速地检测中产气荚膜梭菌为可能。

脊髓水质炎病毒呈园颗粒，核心为单分子正链RNA，病毒RNA蛋白衣壳所包围，无囊膜，蛋白衣壳由60非共价键连接的衣壳子粒组成，构成一个方对称的20面体，PV在天然水中存在相对比较普遍[13]抵抗力较其它肠道病毒强。被提出可能作为水病毒污染的指示微生物，检测水中PV前一般要经过水样的浓缩，浓缩方法常用的有微孔滤膜吸附洗脱法，氢化铝吸附沉淀和聚乙二醇脱水透析法，它的检测方法主要有以下几种。

2.1 蚀斑试验法

繁殖20-40瓶Hep-2或RD细胞，将瓶中的液体吸出，加浓缩后的病毒悬液于每瓶细胞面上，并使其均匀分布，放置1-2h，然后倒置于35°C培养一周，观察蚀斑形成，进行计数，此法相对简单易做，可以定量，但耗费力，不经济。

检测水中指标微生物方法很多，一般分为经典方法。免疫学方法、分子生物学方法三类；经典方法历史悠久，比较熟悉且克精确计数，但费时费力；免疫学方法和分子生物学方法发展迅速，逐步应用，这两种方法都能缩短检测时间，但不能准确计数，分子生物学方法更敏感、特异、简便、随着新技术的不断发展，将会为水中指示微生物提供更迅速可靠的检测手段，从而更有效地确定污染状况。以保证水质卫生安全。

参考文献：

[1]Federal Register.Fed Regist，1990；55：22752-22756

[2]Hubner I et.Appl Environ Microbiol，1992；58.（9）3187 -3191

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[4]Bej AK et al.Appl Environ Microbiol.1991；57（8）2429-2432

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[7]Hauschild AHW and Hilsheimer p.Appl Mi-crobiol，1974；27：28-82

[8]Bartholomew Ba et al.J Clin Pathol，1985；38（2）：222-8

[9]Berry PR er al Appl Microbiol，1986；2：101-102

[10]Germani Y et al Res Microbiol，1990；141：563-571