HRP标记链霉亲和素
Streptavidin链霉亲和素CAS：9013-20-1
Streptavidin链霉亲和素CAS：9013-20-1
链霉亲和素（Streptavidin）是从链霉菌（Streptomyces sp.）中纯化出来的一种四聚体蛋白，它与维生素生物素结合紧密，Kd约为10-14mol/l，对生物素和生物素化分子的高亲和力识别使其成为诊断和实验室试剂盒中最重要的成分之一。
中文名称：链霉亲和素
英文名称：Streptavidin
外观：白色固体
分子量：60kda
规格：ml
纯度：≥95%
溶解度：water
CAS号：9013-20-1
质量控制：95%
储存条件：4℃
保存时间：1 year
用途：荧光标记等
产地：西安
注意事项:仅用于科研，不用于人体
Streptavidin-CY5.5
Streptavidin-CY5
Streptavidin-CY3
Streptavidin-TRITC
Streptavidin-FITC
Streptavidin-thiol
Avidin-CY3
Avidin-CY5
Avidin-CY5.5
Avidin (without modification)
Avidin-Sepharose
Avidin-thiol
Avidin-FITC
Avidin-TRITC
温馨提示：西安瑞禧生物供应产品仅用于科研，不能用于人体（YQ2020.11）。
Streptavidin-HRP说明书
产品简介
链霉亲和素（Streptavidin）是一种分子量 60kDa 左右的四聚体蛋白，一分子链霉亲和素 可以高度特异性地与四分子生物素结合，链霉亲和素可用于检测和分离生物素化蛋白。辣根 过氧化物酶（HRP）是一种含亚铁血红素的糖蛋白，与底物孵育，能产生一种着色、荧光或 发光标记的分子衍生物。Streptavidin-HRP 是由链霉亲和素和辣根过氧化酶交联所得，与 生物素化蛋白和特定化学发光底物结合产生光信号，因此可用于生物素化抗体、蛋白、组织、 细胞、核酸等样品的检测。
储存缓冲液
1XPBS, 50%甘油。
储存温度
2-8℃保存一个月，-20℃保存一年，避免反复冻融。
产品应用
具体工作浓度按实际实验样品调整。稀释倍数受多种因素影响，包括一抗和二抗浓度、孵育 时间等，我们推荐稀释比例如下：
Immunocytochemistry Western Blot ELISA
1:200-1：500 1:1000 - 1:10000 1:5000 - 1:20000
订购信息
产品名称
Streptavidin-HRP
货号 SLP001H SLP001HC
规格 100µl 1ml
1/1
常州天ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ人和生物科技有限公司
亲和素（Avidin）和链霉亲和素（Streptavidin）的特性
亲和素（Avidin）和链霉亲和素（Streptavidin）的特性亲合素( A/ AV)和链霉亲合素(SA)是生物素的天然特异性结合物。
（实际应用中多用链霉亲合素)二者均为大分子蛋白，目前所有用于标记的物质均可与亲合素(AV）或链酶亲合系(SA编OsineHOu2能与生物活性分子抗原、抗体结合，也能与示踪物结合。
多与酶、荧光素及胶体金偶联。
提示：SA的pI低，表面所带正电荷少，且不含糖基，非特异性结合远低于AV，目前以SA标记的酶结合物更为常用小稻草相关推荐Streptavidin(链霉亲和素)Streptavidin-thiol(巯基化链霉亲和素)链霉亲和素修饰的上转换纳米粒子（40nm）Streptavidin Polystyrene Particles, 1% w/v, 1.5-1.9um(链霉亲和素包被的聚苯乙烯微球)Streptavidin coated glass slides(链霉亲和素修饰的载玻片)SA链霉亲和素Streptavidin-QD510SA链霉亲和素Streptavidin-QD530SA链霉亲和素Streptavidin-QD550SA链霉亲和素Streptavidin-QD610DSPE-PEG-Streptavidin 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-链霉亲和素NH2-PEG-Streptavidin MW:2K 氨基-聚乙二醇2000-链霉亲和素链霉亲和素修饰四氧化三铁（100nm）ICG-Streptavidin吲哚菁绿标记的链霉亲和素链酶亲和素修饰的CdSe/ZnS量子点链霉亲和素修饰金纳米簇SA链霉亲和素Streptavidin-QD630链霉亲和素修饰四氧化三铁（1μm）链霉亲和素标记PS微球（1μm）。
临床免疫学：第十三章 生物素-链霉亲和素标记免疫技术
3、按BNHS：抗体1：8 ～1：15（体积比）混合， 室温搅拌下反应2 ～4小时；
4、装入透析袋，用0.05mol/L、pH7.2 PBS，4 ℃ 透析过夜；
5、结合物内加等体积甘油，小量分装，-20℃冻 存备用。
2、与其他标记物（如酶、荧光素、胶体金）结合制成 新的标记物。
10
3、生物素标记抗体（IgG）的制备 基本原理 生物素N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）分子酯键中的-
C=O基团可与蛋白质分子中的氨基在碱性条件下形成肽 键，从而使其标记上生物素。
11
4、实验流程
1、用二甲基甲酰胺（DMF）将BNHS配成1mg/ml溶 液；
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素 -过氧化物酶复合物，再与生物素化的抗（抗）体接触， 将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体，称为 ABC法。
29
17第三节生物素和亲和素系统的技术方法一桥联亲和素生物素法bridgedavidinbiotintechnologybab法lymphocytebab法直接法检测原理示意图18二标记亲和素生物素法labelledavidinbiotintechlab间接法lab法直接法检测原理示意图20abc双抗体夹心elisa检测原理示意图三亲和素生物素化酶复合物法abcpapabc复合法检测原理示意图四酶抗酶亲和素生物素化酶复合物法papabc23第四节技术评价与应用领域1生物素b和亲和素a之间的高亲和力使反应试剂经得起高度稀释降低或避免了非特异性结合
的羧基经活化修饰 后形成的衍生物， 只有活化生物素才 能偶联各种其他生 物大分子，如蛋白 质、多糖、荧光素 等。
过氧化物酶标记亲和素使用说明
过氧化物酶标记亲和素使用说明
HRP-Avidin
货号：SE065
规格：0.1ml
保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。
2-8℃可保存3-6个月。
产品说明：
HRP标记亲和素是采用进口亲和素和高活性过氧化物酶HRP，用改良过的碘酸钠氧化法制成复合物，可广泛用于免疫病理、酶联免疫测定、基因探针及其他学科的放大检测系统。
过氧化物酶标记亲和素每毫升含有 1.5-2mg的Avidin和HRP，3mgBSA。
工作效价：
ELISA法：1：500～1000
组织化学：1：30～100
免疫印迹：1：200～500。
斑点免疫：1：200～500。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
相关产品：
SP034兔IgG免疫球蛋白抗原
SPA131羊抗小鼠IgG(纯化)
SA134羊抗兔IgG(免疫血清)
SF134羊抗兔IgG-FITC
SE237兔抗猪IgG-HRP
A1800抗体稀释液。
链霉亲和素Streptavidin 说明书
链霉亲和素Streptavidin说明书货号：S9170规格：1mg/5mg/10mg保存：-20℃干燥保存，有效期至少保持2年。
纯度：≥95%活性：≥15Units/mg，（Green改良法测定）。
产品来源：大肠杆菌发酵工程菌株。
分子大小：60kDa产品简介：链霉亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一种同型四聚体蛋白。
与生物素具有很高的亲和力，本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12-15 U/mg。
SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6小时，而AV半衰期仅为1小时。
由于SA不含糖基且等电点接近于中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。
本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备SA偶联酶制剂（如SA-HRP、SA-AP等），SA偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。
使用方法：一、微孔板包被1.用碳酸钠缓冲溶液（pH9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液。
2.用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；3.洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干4.后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。
包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。
二、SA偶联磁珠2.1NHS活化1.充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5ml离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；2.取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。
亲和素和生物素系统
链霉亲和素（streptavidin ）是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量60000，且不含糖链。 此方法与ABC 法相比，不需A、B 两液提前混合，操作者容易掌握，稳定性高，由于采用了低等电点的链霉亲和素，其内源性生物素 干扰要低于ABC 法。 将亲和素与标记酶（HRP）结合，一个亲和素可结合多个HRP
链霉亲和素结合位点，可以和各种生物素标记抗体结合。
生物素（biotin ），也称维生素H，是一种分子质量为244Da 的小分子维生素。
避免了组织中的非特异性染色。 标记链霉亲和素-生物素法（Labelled streptavidin biotin ，LSAB）
同亲和素一样，链霉亲和素也具有4个生物素结合位点，亲和力高达10－15 mol/L，是一种更完美的生物素结合蛋白。 同亲和素一样，链霉亲和素也具有4个生物素结合位点，亲和力高达10－15 mol/L，是一种更完美的生物素结合蛋白。 同亲和素一样，链霉亲和素也具有4个生物素结合位点，亲和力高达10－15 mol/L，是一种更完美的生物素结合蛋白。 亲和细胞化学不同于免疫细胞化学，亲和细胞化学是利用两种物质之间的高度亲和能力而相互结合的化学反应。
• 抗体分子经生物素化后，其结合抗原的能 力不受损失，细胞经生物素化后仍能保持 正常的分裂、增殖能力，因此被用作抗体、 细胞的标ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
亲和素
• 亲和素（avidin）是一种分子质量为 68000Da的一种碱性糖蛋白。亲和素具有 与其他示综物质，如，荧光素、酶、胶体 金等，结合的能力。
• 生物素和亲和素之间有极强的亲和力，比 抗体对抗原的亲和力要高出100 万倍。
TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结
TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结TUNEL法检测细胞凋亡成功的经验与失败的教训总结1. ⼏种细胞凋亡检测⽅法中TUNEL法的优点和缺点是什么？2. TUNEL法的实验原理是什么？3. TUNEL实验中⼏个关键步骤是什么？4. 如何减弱⾮特异性染⾊？5. 细胞通透的时间如何选择？6. 内源性过氧化物酶的封闭时间和封闭液的浓度如何确定？7. TUNEL反应混合液的孵育时间可以调整吗？8. DAB的显⾊时间和条件如何把握？9. ⾸次做TUNEL实验的注意事项？10. PBS浸洗在TUNEL法中的作⽤和⽅法分别是什么？11. 脱蜡和⽔化在TUNEL法中的作⽤和⽅法分别是什么？针对问题3（TUNEL实验中⼏个关键步骤是什么？）：1. 充分脱蜡和⽔化。
脱蜡可以先60度20min，再⽤⼆甲苯两次5~10min；⽽⽔化⽤梯度⼄醇从⾼浓度到低浓度浸洗，这些以便后⾯的结合反应充分、均匀；2. 把握好细胞通透的时间。
⼀般根据切⽚的厚薄，选择蛋⽩酶k的孵育时间，常⽤10~30min，⼏um切⽚⽤短时间；⼏⼗um切⽚⽤长时间，通过摸索达到既不脱⽚，有能够使后⾯的酶和抗体进⼊胞内。
3. 适当延长TUNEL反应液的时间。
⼀般是37度1h，你也可以根据你的凋亡损伤程度，选择更长的时间，可长⾄2h，但要结合你最终的背景着⾊。
4. DAB显⾊条件的选择。
⼀般DAB反应10分钟左右，结合镜下控制背景颜⾊，最长不超过30min；我不喜欢⽤promega公司提供的DAB液（桃红⾊），不利于辨认棕褐⾊。
5.PBS的充分清洗。
我个⼈认为，在TUNEL反应后和酶标反应后的清洗应⼗分严格，可增加次数达5次，因为这些清洗直接决定最后切⽚的⾮特异性着⾊。
6. 此外，内源性POD的封闭也⼗分关键。
对于肝脏、肾脏等⾎细胞含量多的组织，我的经验是适当延长封闭时间和升⾼过氧化氢的浓度，可以达到很好的封闭效果，且不影响最终的特异性染⾊。
针对问题2（ TUNEL法的实验原理是什么？）：基本原理：对不同组织切⽚先增加细胞膜通透性，然后让rTDT和bio标记的dTUTP进⼊细胞内，在rTDT的辅助下dTUTP与核断裂的DNA 3’-OH结合，再⽤HRP标记的链霉亲和素与dTUTP上的biotin结合（每个链霉亲和素⾄少可以再结合3个biotin分⼦），最后⽤DAB、过氧化氢与SP上的辣根过氧化物酶HRP发⽣氧化、环化反应，形成苯⼄肼聚合物⽽呈现棕褐⾊，最终通过计数每张切⽚上不同视野中TUNEL阳性细胞的⽐例来判断细胞凋亡发⽣情况。
hrp标记的亲和素
hrp标记的亲和素
HRP标记的亲和素是指将过氧化物酶（HRP）与链霉亲和素结合在一起，形成的复合物或共轭物。
其中，HRP是一种常用的酶，能够催化多种底物的氧化反应，产生可检测的荧光或发光信号；链霉亲和素是一种来自链霉菌的蛋白质，具有高度的亲和力，能够与Biotin 结合形成强大的生物素-链霉亲和素相互作用。
这种HRP标记的亲和素常被用于immunity染色、immunity印迹、immunity层析、ELISA 等实验中，其中生物素与链霉亲和素的相互作用用于特异性捕获和检测生物素标记的分子或分析物质。
免疫双标技术资料-酶标
免疫双标技术资料：（酶染色法——一般选择HRP和AP）1.石蜡片先脱蜡至水。
2、将切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中15分钟，PBS冲洗2分钟×3次3.根据抗原和标本需要进行适当修复。
4、加血清封闭溶液，室温孵育20分钟，孵育后甩掉多余液体即可。
5、加入一抗一般4度过夜。
6、使用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗8分钟×3次7、加入生物素化的二抗，37度孵育30分钟8、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗5分钟×3次9、加入链霉亲和素-AP（Avidin-AP），37度孵育20-30分钟10、使用含有0.05％吐温20的TBS（PH 7.2-7.4）冲洗5分钟×3次11、加配好的AP底物溶液，镜下检测孵育时间12、使用去离子水冲洗终止反应13、加双染阻断剂，室温孵育15分钟。
14、用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗2分钟×3次15、加血清封闭溶液，室温孵育20分钟，孵育后甩掉多余液体即可。
16、滴加稀释好的一抗，可以选择37度孵育2个小时。
17、用含有0.05％吐温20的PBS，冲洗5分钟×3次18、加生物素化的二抗，室温孵育30分钟19、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗5分钟×3次20、加链霉亲和素-HRP（Avidin-POD），室温孵育20-30分钟21、使用含有0.05％吐温20的PBS冲洗7分钟×3次22、加DAB，镜下观察，控制显色时间23、显色后去离子水冲洗终止反应24、使用复染试剂染色（根据需要选择）25、脱水，透明，封片，显微镜观察结果。
大鼠心内神经节雌激素受体和免疫因子白介素6的共存[摘要] 目的：研究雌激素受体(ER)和免疫因子白介素6(IL广6)在心内神经节的表达，并证实它们共存的可能性。
方法：免疫细胞化学双重标记技术。
结果：切片上观察到3种细胞：①ER单标细胞，胞核呈棕褐色；②IL-6单标细胞，胞浆呈红色；③ER／IL-6双标细胞，胞核棕褐色，胞浆为红色。
链酶亲和素
实用标准文案链霉亲和素商品化应用简介一、链霉亲和素性质streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，）是由链霉菌streptavidin，SA链霉亲和素（条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨4分子量为65kD。
链霉亲和素分子由链霉亲和素是一种稍而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；酸的含量较大，）的蛋白质，并且不带任何糖基。
偏酸性（pH6.0链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素）亦为个生物素分子，二者亲和常数（K分子也能结合4间断裂，和Ｃ端19-2112N端10～L10／mol。
在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在15链霉亲和素的活性单位也是以结形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。
18U。
生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达μ合1g二、亲和素和链霉亲和素的比较相同点14~18U：，SA生物素结合能力：、AV：13~15U1两个位点有110-111和懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70-2、活性中心依赖于色氨酸懒氨两个位点含有色氨酸-120-121-色氨酸懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和酸。
不同点：AV=66KD, SA=54KD分子量：、1精彩文档．实用标准文案带正电较多，非特异性结合较强。
等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV2、深，位阻效应较强，长臂生物素更适合。
SA的生物素结合位点较AV3、位阻效应：协同结合。
随机结合，SA4、生物素的结合：AV SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二硫键。
10%氨基酸序列：AV 含二硫键和糖，5、ELISA中的应用三、链霉亲和素在）可用于测定抗原，，ELISA酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标也可用于测定抗体。
在这种测定方法中有3可根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，记的抗原或抗体，③酶作用的底物。
临床免疫学：第十三章 生物素-链霉亲和素标记免疫技术
生物素（biotin，B）, 又称维生素H 、B7,动 植物中广泛存在，卵黄 和肝中含量高；
MW244.31D,有两个环状 结构；
Ⅰ环为咪唑酮环，为与 亲和素结合部位；
Ⅱ环为噻吩环，含一个 戊酸侧链，其末端可与 生物大分子连接，形成 生物素标记物。
咪唑酮环 噻吩环
羧基
3
活化生物素 噻吩环上戊酸侧链
第十三章
生物素－链霉亲 和素标记免疫技术
Biotin-Avidin Labelling Immunoassay Tech
1
第一节 生物素和亲和素 第二节 生物素和亲和素标记物的制备 第三节 生物素和亲和素系统的技术方法 第四节 技术评价与应用领域
2
T lymphocyte
第一节 生物素和亲和素
PAP-ABC复合法检测原理示意图
第四节 技术评价与应用领域
一、技术评价 1、生物素（B）和亲和素（A）之间的
高亲和力，使反应试剂经得起高度稀 释，降低或避免了非特异性结合； 2、二者均可偶联蛋白质、核酸、多糖 等活性物质； 3、具有多级放大作用，使其具有高灵 敏性；
23
二、应用领域 1、BAS与免疫标记技术 适用于微量抗原、抗体及其他生物活性物质
可影响标记物活性，如碱性磷酸酶标记 后活性会降低；
5
亲和素（avidin,A） 从蛋清中提取的一种碱性糖蛋白，耐热及多种
蛋白水解酶作用，每个分子由4条相同亚基组 成，每个亚基都可以结合一个生物素分子。 与生物素结合的特异性高、稳定性好。
K=1015L/mol（BA），K=105～11L/mol（antigen-antibody）
12
二、亲和素标记物的制备 1、几乎所有用于标记的物质均可与亲
人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA 试剂盒 使用说明书
人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒使用说明书产品编号：D711286包装规格：48 TESTS / 96 TESTS声明：使用前仔细阅读本说明书。
只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途用于人血清、血浆或其他相关生物液体中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的测定。
工作原理本试剂盒采用的是双抗夹心酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。
测定样品中人甘油醛-3-磷酸脱氢酶水平。
向预先包被了抗人甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入生物素标记的抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体。
再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，样本中的人甘油醛-3-磷酸脱氢酶浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人甘油醛-3-磷酸脱氢酶的浓度。
1 / 262 / 26原理图：试剂盒组成说明书1份1份封板膜5片5片预包被酶标板8孔X 6条8孔X 12条-20°C 标准品1瓶2瓶-20°C 标准品/样本稀释液SD120 mL X 1瓶20 mL X 1瓶2-8°C 浓缩生物素标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体（100X ）60 μl120 μl-20°C生物素标记抗体稀释液SD214 mL X 1瓶14 mL X 1瓶2-8°C浓缩HRP 标记链霉亲和素（100X ）60 μl120 μl-20°C （避光）HRP标记链霉亲和素稀释液SD314 mL X 1瓶14 mL X 1瓶2-8°C显色剂10 mL X 1瓶10 mL X 1瓶2-8°C （避光）终止液10 mL X 1瓶10 mL X 1瓶2-8°C浓缩洗涤液（25×）30 mL X 1瓶30 mL X 1瓶2-8°C需要而未提供的试剂和器材1.37°C恒温箱2.酶标仪（450 nm波长滤光片）3.精密移液器及一次性吸头4.去离子水或蒸馏水5.一次性试管6.洗板机或洗瓶，吸水纸注意事项1.试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
小鼠总胆红素TB检测试剂盒说明书
小鼠总胆红素(TB)检测试剂盒说明书该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性CD40 抗原。
该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。
在所用的CD40 一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
小鼠总胆红素(TB)检测试剂盒试剂盒所含试剂：试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）试剂B 封闭缓冲液（封闭用）20 mL试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型CD40 一抗（2.5ml）试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL试剂F DAB 显色液5ml用户自备试剂：1．10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml3. 缓冲甘油封固剂10 mL4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85% 乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。
生物素-链霉亲和素,作为荧光标记
生物素-链霉亲和素，作为荧光标记一、生物素-链霉亲和素的定义生物素-链霉亲和素是一种用于标记生物分子的荧光标记物。
它是由生物素和链霉亲和素组成的复合物。
生物素是一种维生素B7，也称作维生素H，它与链霉亲和素的结合具有较高的亲和力。
链霉亲和素则是一种可以与生物素结合并发出荧光的物质。
将生物素-链霉亲和素与所需标记的生物分子结合后，可以利用链霉亲和素的荧光发射信号来对生物分子进行检测和观察。
二、生物素-链霉亲和素的制备生物素-链霉亲和素通常通过化学合成的方式进行制备。
首先需要合成生物素分子和链霉亲和素分子，然后将两者进行反应结合，得到生物素-链霉亲和素复合物。
制备好的生物素-链霉亲和素可以在实验室中用于各种生物标记的研究工作。
三、生物素-链霉亲和素的特性1. 高亲和力：生物素和链霉亲和素之间的结合具有较高的亲和力，能够稳定地结合在一起，确保标记物在实验过程中不会轻易分离。
2. 显著荧光特性：生物素-链霉亲和素复合物具有明显的荧光特性，可以在适当的荧光激发条件下发出强烈的荧光信号，便于实验者进行观察和测量。
3. 稳定性：生物素-链霉亲和素复合物在适当的条件下具有良好的稳定性，可以在实验室中长时间保存和使用。
四、生物素-链霉亲和素在生物学研究中的应用1. 蛋白质标记：生物素-链霉亲和素可以用于标记目标蛋白质，通过观察蛋白质的荧光信号，可以研究蛋白质在细胞中的表达和定位等信息。
2. 细胞标记：生物素-链霉亲和素可以用于标记细胞膜表面的生物分子，有助于研究细胞相互作用和信号传导等生物学过程。
3. 分子探针：生物素-链霉亲和素作为一种标记物，可以用于研究分子间的相互作用和结构等相关信息。
4. 荧光显微镜：生物素-链霉亲和素标记的细胞和分子可以在荧光显微镜下观察，进一步拓展了荧光显微镜技术在生物学研究中的应用。
五、结语生物素-链霉亲和素作为一种荧光标记物，在生物学研究中发挥着重要的作用。
它具有高亲和力、显著的荧光特性和良好的稳定性，能够在生物标记的实验中提供可靠的信号和结果。
生物素-亲和素免疫放大技术
第十一章生物素 -亲和素免疫放大技术一、生物素 - 亲和素系统的特点灵敏度高，特异性好，稳定性高，适用广泛。
二、生物素的理化性质与标记（一）生物素及其活化1.标记蛋白质氨基的活化生物素N- 羟基丁二酰亚胺酯（ BNHS）2. 标记蛋白质醛基的活化生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）3.标记蛋白质巯基的活化生物素3- （ N-马来酰亚胺 - 丙酰） - 生物胞素（ MPB）4.标记蛋白质核酸的活化生物素常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和 BHZ。
（二）生物素标记蛋白质生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
标记方法：（ 1）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是BNHS；对于偏酸性的抗原，标记时多采用 BHZ。
（ 2）标记酶：以生物素标记HRP为例。
标记注意事项：（ 1）应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件；（2）标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；（3）为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；（4）生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。
三、亲和素、链霉亲和素理化性质与标记1.亲和素及其活性：活性基团 - 色氨酸。
2.链霉亲和素及其活性：活性基团- 色氨酸。
3.亲和素、链霉亲和素的标记：最常用的是酶、FITC 和胶体金。
亲和素的标记（链霉亲和素的标记）（1） HRP-亲和素结合物的制备：改良过碘酸钠法，戊二醛法；（2）亲和素 - 生物素化HRP复合物的制备；（3）亲和素 - 生物素化碱性磷酸酶复合物的制备。
四、生物素 - 亲和素系统的应用1.生物素 - 亲和素系统基本类型及原理：基本类型有两种，一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶复合物技术（ ABC）。
hrp标记方法
hrp标记方法HRP标记方法呀，可有趣啦。
HRP呢，就是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase）的简称哦。
HRP标记方法有好几种呢。
其中一种直接标记法，就像是给HRP这个小机灵鬼直接穿上一件带有特殊标记的小衣服。
不过这种方法有时候不是那么好操作，就像给一个调皮的小孩直接套上一件复杂的衣服，得小心翼翼的。
还有间接标记法。
这就像是找了个小助手来帮忙给HRP做标记。
先把一种物质和HRP连接起来，然后再通过这个中间的小助手把标记传递给目标分子。
这个方法就比较灵活啦，就像搭积木一样，可以通过不同的小助手来达到标记的目的。
在进行HRP标记的时候呢，有好多需要注意的小细节。
比如说反应的条件，就像做菜一样，温度、酸碱度这些条件都得合适。
如果温度太高或者太低，HRP可能就不乐意好好工作啦，就像我们人在不舒服的环境里也会没干劲一样。
酸碱度不合适的话，那整个标记过程可能就会变得乱七八糟的。
标记的试剂也很关键哦。
要选择质量好的试剂，不然就像是用了不好的颜料画画，画出来的效果肯定不好。
而且在操作过程中，要特别小心，避免有杂质混进去。
杂质就像是捣蛋鬼，会破坏整个标记的过程。
HRP标记方法在很多领域都有大用处呢。
在生物检测方面，它就像是一个小小的侦探。
可以通过标记特定的生物分子，然后检测这些分子的存在和数量。
比如说在检测某种疾病的标志物的时候，HRP标记就可以大显身手啦。
它能让我们清楚地看到那些隐藏在身体里的小秘密。
HRP标记方法虽然看起来有点复杂，但是只要我们掌握了其中的小窍门，就像掌握了一个好玩的游戏技巧一样，就能很好地利用它啦。
希望大家对HRP标记方法有了一个更亲切的认识哦。
HRP与AP酶促发光体系比较
通用模式灵敏度及量程比较
通用模式比较:链霉亲和素（SA）包被，生物素交联AP或HRP，考量发光法检出灵敏度及量 程。 HRP AP
检测本底（Rlu）
小于100
200左右酶量检出灵Fra bibliotek度5pg左右
小于5pg
测试量程
10pg～10ng
5pg～100ng
原始光信号（RLU）与酶量之 间的响应关系
在一定底物浓度范围内，RLU 在一定底物浓度范围内，低浓 度HRP其测试RLU随测试时间 与AP酶量之间有着良好的比例 延长而升高，高浓度HRP其测 关系 试RLU随测试时间延长而降低， 测试结果难于控制
在量程内无严格意义的平台期 10～15分钟
达到平台时间（室温）
CA125(液相)性能比较
HRP AP 检出灵敏度（IU/ml） 1 1
测试准确度
反应难控制造成不准确
准确
测试量程（IU/ml）
1～1000
1～5000
原始光信号（RLU）与CA125 测试浓度之间的响应关系
在一定底物浓度范围内，RLU 在一定底物浓度范围内，低浓 度标品其测试RLU随测试时间 与CA125浓度之间有着良好的 相应关系 延长而升高，高浓度标品其测 试RLU随测试时间延长而降低， 测试结果难于控制
30000000 25000000 20000000 15000000 10000000 5000000 0
2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 25 27.5 30 时间（min）
相对光子数（Rlu）
相对光子数（Rlu）
50ng 10ng 5ng
3
6 8.5 11 13.5 16 20 22.5 25 27.5 30 时间（min）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Abbkine, Inc • Redlands, CA • USA •
Not for further distribution without written consent. Copyright © Abbkine, Inc. HRP, Streptavidin
# A21400
Product Information
Product Name: HRP Conjugated Streptavidin
Catalog Number: A21400 Lot Number: Refer to vial Formulation: Liquid Size: 100ul/500ul
Storage:
Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles.
Note: None
Background: Abbkine's secondary antibodies are available conjugated to enzyme, biotin or fluorophore for use in a variety of antibody-based applications including Western Blot, ImmunoHistoChemistry, ImmunoFluorescence, Flow Cytometry and ELISA. We offer high quality secondary antibodies from goat, rabbit and donkey sources for your each application. Serum adsorbed secondary antibodies are also available and are recommended for use with immunoglobulin-rich samples.
Application Notes: Optimal working dilutions should be determined experimentally by the investigator. Suggested starting dilutions are as follows: WB (1:10,000-1:100,000), IHC (1:500-1:1,000) and ELISA (1:1,000-1:10,000).
Storage Buffer: 100 mM phosphate, 150 mM NaCl, 50% Glycerol pH 7.4.
Stabilizer: 1% Bovine Serum Albumin (IgG and Protease Free).
Preservative: None.
Storage Instructions: Stable for one year at -20°C from date of shipment. For maximum recovery of product, centrifuge the original vial after thawing and prior to removing the cap. Aliquot to avoid repeated freezing and thawing.
Note: The product listed herein is for research use only and is not intended for use in human or clinical diagnosis. Suggested applications of our products are not recommendations to use our products in violation of any patent or as a license. We cannot be responsible for patent infringements or other violations that may occur with the use of this product.。