屋尘螨诱导气道上皮炎症介质的表达机制及醛糖还原酶抑制剂的调控作用
重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究
重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究喻海琼;刘志刚;于琨瑛;许卓谦;丘劲【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2006(24)6【摘要】目的观察以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料为佐剂制备的重组屋尘螨2类变应原(rDerp2)纳米微粒疫苗(DEPN)对小鼠过敏性气道炎症的影响,并探讨其免疫治疗机制。
方法制备PLGA-rDerp2纳米粒子并鉴定其特性。
40只BALB/c 小鼠随机分为5组,A组(对照组)均给予生理盐水(100μl)。
B、C、D和E组腹部皮下注射屋尘螨粗浸液(10μg)免疫小鼠致敏,然后分别用PBS(100μl)、2mg空白PLGA粒子(emptyPLGA,EP)、100μgrDerp2、2mg的DEPN纳米疫苗(载有100μgrDerp2)皮下注射进行免疫治疗,连续免疫治疗3d,1次/d,各组用rDerp2(50μg)滴鼻激发,激发后第2天剖杀,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行总计数和分类计数;HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-SchiffStain)观察小鼠肺部组织炎症和支气管黏液分泌;用ELISA检测BALF和脾细胞培养上清的细胞因子(IL-4、IFN-γ)和血清中变应原特异性IgG2a和IgE抗体浓度。
结果B、C组肺部呈明显的变态反应性炎症,D、E组变应原诱导的肺部嗜酸粒细胞浸润和黏液分泌比B、C组显著减轻。
BALF中的细胞总数B组比A组明显增多,分类细胞以中性和嗜酸粒细胞为主,超过50%。
rDerp2特异性IgE抗体水平,D组(0.93±0.04)和E 组(0.77±0.10)均低于B组(1.14±0.10)(P<0.01);特异性IgG2a抗体水平,D组(1.02±0.01)和E组(1.17±0.46)均高于B组(0.14±0.01)(P<0.01)。
屋尘螨变应原制剂脱敏治疗儿童支气管哮喘的临床效果分析
药物与临床DOI：10.16662/ki.1674-0742.2023.11.122屋尘螨变应原制剂脱敏治疗儿童支气管哮喘的临床效果分析李伟1，尹莉莉2，赵茜叶11.扬州大学医学院连云港市妇幼保健院儿科，江苏连云港222000；2.扬州大学医学院连云港市第二人民医院新生儿科，江苏连云港222000［摘要］目的探究支气管哮喘患儿皮下注射屋尘螨变应原制剂脱敏治疗的临床效果。
方法方便选取2017年12月—2018年12月于连云港市妇幼保健院儿童哮喘专科门诊诊治的118例患儿作为研究对象，随机分为治疗组与对照组，均为59例。
对照组中患儿进行吸入性激素抗炎治疗，治疗组患儿除了抗炎治疗，还予屋尘螨变应原制剂脱敏治疗，比较两组治疗总有效率以及治疗前后肺功能第1秒用力呼气量占预计值的百分比（FEV1%），儿童哮喘控制测试（C-ACT）评分，呼出气一氧化氮（FeNO）的变化以及不良反应发生情况。
结果治疗组临床总有效率（94.92%）高于对照组（83.05%），差异有统计学意义（χ2=4.236，P<0.05）；对照组治疗后FEV1%（91.31±12.95）%、C-ACT评分（18.98±2.14）分低于治疗组治疗后的（101.39±9.25）%、（23.14+2.93）分，差异有统计学意义（t=-4.867、-8.800，P<0.05）；对照组治疗后FeNO测量值（12.71±3.78）ppb高于治疗组治疗后的（10.54±3.97）ppb，差异有统计学意义（t=3.038，P<0.05）；两组患儿不良反应发生率比较，差异无统计学意义（χ2=0.100，P>0.05）。
结论皮下注射屋尘螨变应原制剂脱敏治疗儿童支气管哮喘有明显效果，安全性高，值得广泛推广及应用。
［关键词］儿童支气管哮喘；屋尘螨变应原制剂；脱敏；免疫治疗；疗效［中图分类号］R4 ［文献标识码］A ［文章编号］1674-0742（2023）04(b)-0122-05Clinical Analysis of House Dust Mite Allergen Preparation Desensitization in Children with Bronchial AsthmaLI Wei1, YIN Lili2, ZHAO Qianye11.Department of Pediatrics, Lianyungang Maternal and Child Health Hospital, Yangzhou University School of Medi⁃cine, Lianyungang, Jiangsu Province, 222000 China;2.Department of Neonatology, the Second People's Hospital of Li⁃anyungang, Yangzhou University School of Medicine, Lianyungang, Jiangsu Province, 222000 China[Abstract] Objective To explore the clinical effect of subcutaneous injection of house dust mite allergen preparation for desensitization in children with bronchial asthma. Methods From December 2017 to December 2018, 118 children who were diagnosed and treated in the Pediatric Asthma Specialist Clinic of Lianyungang Maternal and Child Health Hospital were conveniently selected as the research subjects. They were randomly divided into a treatment group and a control group, both of which were 59 cases. The children in the control group received inhaled steroid anti-inflammatory treatment, and the children in the treatment group received desensitization treatment of house dust mite allergen preparations in addition to anti-inflammatory treatment. The total effective rate of treatment, determination of the percentage of forced expiratory volume in one second (FEV1%) of lung function before and after treatment, chil⁃dren's asthma control test (C-ACT) score, exhaled nitric oxide (FeNO) changes and occurrence of adverse reactions of the two groups were compared. Results The total effective rate in the treatment group (94.92%) was higher than that in the control group (83.05%), and the difference was statistically significant (χ2=4.236, P<0.05). After treatment, FEV1% [作者简介] 李伟（1984-），男，硕士在读，主治医师，研究方向为儿童呼吸。
激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白5AC基因表达的调控作用
激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白5AC基因表达的调控作用余红梅;周向东【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(35)11【摘要】目的:了解激活蛋白-1(AP-1)参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白(MUC)5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径. 方法:体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物(CSE)刺激,干预实验用c-Jun的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)的活性.以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化ERK( p-ERK)和磷酸化P38( p-P38)含量,RT-PCR检测MUC5AC mRNA表达水平,EMSA测定AP-1的 DNA结合活性. 结果:CSE(1 g/L)刺激后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组(均P＜0.01),AP-1 的DNA结合活性也明显强于对照组(P＜0.01),伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01),而P38含量无明显变化(P＞0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量均显著降低 (P＜0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的DNA结合活性 (均P＜0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达(均P＜0.05). 结论:AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1 DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的.【总页数】6页(P1150-1155)【作者】余红梅;周向东【作者单位】重庆医科大学附属第二医院呼吸内科,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院呼吸内科,重庆,400010【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.磷脂酰肌醇3激酶对哮喘大鼠气道上皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达的调控作用[J], 夏晓东;徐慧;吴立琴;戴元荣;杨雷;徐正行2.蛇床子素预处理对卵清蛋白诱导的小鼠哮喘气道炎症及黏液高分泌的调控作用[J], 屈朔瑶;欧阳海峰;赵峰;吴运福;陈洁;吴朔;宋立强3.甘草酸对炎性刺激诱导气道黏蛋白5AC高表达的抑制作用 [J], 肖清容;周向东4.血栓素A2受体拮抗剂SQ29548对香烟烟雾提取物刺激人气道上皮细胞表达MUC5AC的调控作用 [J], 安静;汪涛;文富强5.N-乙酰半胱氨酸对香烟烟雾提取物诱导的气道上皮细胞线粒体过氧化损伤的保护作用 [J], 张明;张莉;杨侠;单虎;张秋红;张红妮;张洁;李雅莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用
屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用李鸿佳;周明香;孙文青;王维瑄;王庆;郭鹏;刘春利;曹晓青;陈海荣;李冲;吴金香;董亮【期刊名称】《中国呼吸与危重监护杂志》【年(卷),期】2011(10)1【摘要】目的研究屋尘螨(HDM)对于气道上皮Toll样受体4(TLR4)表达及T淋巴细胞分化的影响,以进一步探讨其在哮喘小鼠气道炎症中作用。
方法雌性BALB/c 小鼠30只随机分为OVA哮喘模型组(OVA组)、HDM组和生理盐水对照组(对照组)。
OVA组用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型,HDM组给予HDM 提取液替代OVA致敏与激发,对照组用生理盐水替代OVA。
观察小鼠气道及肺组织病理炎症浸润情况,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数。
ELISA 检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ和IL-17的含量。
实时荧光定量PCR法测定气道上皮TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法测定气道上皮TLR4蛋白的表达。
流式细胞技术检测小鼠外周血Th1、Th2及Th17淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分率情况。
结果 OVA组支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,以嗜酸粒细胞为主的炎症细胞浸润;HDM组出现肺泡腔及间质充血,中性粒细胞等炎症细胞浸润;对照组小鼠气道上皮无增厚,无炎症细胞浸润,肺泡壁完整。
与OVA组比较,HDM组BALF细胞总数及分类计数除嗜酸粒细胞无显著差异外(P>0.05),其余均显著升高(P<0.05);HDM组BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平较OVA组明显增高(P<0.05),IFN-γ的表达无显著差异(P>0.05);HDM组气道上皮TLR4 mRNA 及TLR4蛋白的表达明显增高(P<0.05),OVA组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
与OVA组比较,HDM组外周血Th2、Th17细胞显著增高(P<0.05),而Th1细胞无明显变化(P>0.05)。
屋尘螨变应原结膜激发试验在上下气道变态反应性疾病的临床比较
屋尘螨变应原结膜激发试验在上下气道变态反应性疾病的临床比较李晓鸾;孟文霞;王燕;刘艳梅;孙长春【摘要】目的比较在上、下气道变态反应性疾病患者中屋尘螨变应原结膜激发试验(CPT)结果的差异,为在下气道变态反应性疾病诊断中屋尘螨变应原结膜激发试验的临床应用提供依据.方法选择2006至2008年在我科就诊的符合变应性鼻炎、结膜炎和(或)支气管哮喘诊断的患者178例,分为3组:单纯支气管哮喘组45例、支气管哮喘+变应性鼻炎和(或)结膜炎组50例、变应性鼻炎和(或)结膜炎组83例.所有入选者均进行屋尘螨变应原结膜激发试验,采用北京协和医院眼结膜激发试验评估标准分别记录,同时进行屋尘螨变应原皮肤点刺试验(SPT)以及血清屋尘螨变应原特异性免疫球蛋白E(d1-sIgE)检测.结果 3组随着皮肤点刺试验"+"的递增,屋尘螨变应原结膜激发试验结果+++以上患者比例逐渐增加,差异无统计学意义(P>0.05).结论屋尘螨变应原结膜激发试验不受变应性疾病累及器官的影响,在不伴上气道变态反应性疾病的下气道变态反应性疾病的诊断中亦存在一定的诊断价值.种【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2010(032)006【总页数】2页(P663-664)【关键词】变应原;尘螨;结膜激发试验;变应性鼻炎;结膜炎;支气管哮喘【作者】李晓鸾;孟文霞;王燕;刘艳梅;孙长春【作者单位】050031,石家庄市,河北医科大学第一医院变态反应科;050031,石家庄市,河北医科大学第一医院变态反应科;050031,石家庄市,河北医科大学第一医院变态反应科;050031,石家庄市,河北医科大学第一医院变态反应科;050031,石家庄市,河北医科大学第一医院变态反应科【正文语种】中文【中图分类】R392.8结膜激发试验是一种在人为严格控制下用少量可疑致敏物激发临床症状,以观察试验物与变应病相关性的方法,较支气管激发试验更加安全,易于操作及观察。
mTORC1
mTORC1/2双重抑制剂OSI -027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化*吴黎虹， 唐坤， 党红星△， 符跃强， 刘成军， 李静， 许峰（重庆医科大学附属儿童医院重症医学科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014）［摘要］ 目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ， mTOR ）复合物1/2（mTORcomplex 1/2， mTORC1/2）双重抑制剂OSI -027对高体积分数氧（高氧）所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。
方法：高氧（95% O 2）处理人胚肺成纤维细胞MRC -5建立增殖分化模型，分为对照组、高氧组、高氧+OSI -027组和高氧+雷帕霉素组。
Western blot 检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ， α-SMA ）、I 型胶原蛋白（collagen type I ， Col I ）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、RhoA 、Rho 相关含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rho -associated coiled -coil -containing protein kinase 1， ROCK1）、蛋白激酶B （protein kinase B ， PKB/AKT ）、p -AKT 和mTOR 的表达； CCK -8实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期。
结果：与对照组相比，PCNA 、cyclin D1、Col I 和α-SMA 表达随高氧处理时间增加而增加（P <0.05）。
与高氧组相比，OSI -027及雷帕霉素干预后，细胞活力下降，细胞周期被抑制在G 1期（P <0.05）。
上皮间质转化与哮喘气道重塑的研究进展
上皮间质转化与哮喘气道重塑的研究进展魏盼;李恋曲;吴鹏;贾志荣;王晓钰;洪敏;江国荣【摘要】Bronchial asthma is a respiratory system disease char-acterized by airway remodeling as a pathological basis. Repeated inflammatory infiltration and tissue damage repair can lead to airway remodeling. At present,the mechanism of airway remod-eling is not comprehensive. Studies have shown that epithelial-mesenchymal transition (EMT) plays an important role in the genesis and development of airway remodeling. Airway epithelial cells can be induced to mesenchymal transition through a variety of secretion factors and signaling pathways,leading to airway re-modeling in asthma. This review summarizes the study of EMT and airway remodeling in asthma,providing a reference for clini-cal follow-up treatment and research.%支气管哮喘是一类以气道重塑为病理基础的呼吸道疾病,反复的炎性浸润与组织损伤修复可导致气道重塑,目前有关气道重塑形成的机制尚不全面.研究表明,上皮间质转化在气道重塑的发生和发展过程中发挥重要作用.气道上皮可通过分泌多种因子及信号通路诱发间质转化,进而导致哮喘气道重塑.该文对上皮间质转化与哮喘气道重塑之间的研究进行综述,为临床后续哮喘治疗和研究提供参考.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2018(034)005【总页数】4页(P600-603)【关键词】气道重塑;上皮间质转化;哮喘;结构蛋白;表型转化;气道炎症【作者】魏盼;李恋曲;吴鹏;贾志荣;王晓钰;洪敏;江国荣【作者单位】南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京210023;南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京 210023;南京中医药大学药学院,科技部国家规范化中药药理实验室,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏南京210023;南京中医药大学附属苏州市中医医院苏州市吴门医派研究院,江苏苏州215003【正文语种】中文【中图分类】R-05;R322.33;R329.24;R318.02;R562.25据Global Burden of Disease Study资料显示，全世界约有2.4亿哮喘患者，且有增加趋势，预计到2025年将达到3亿。
屋尘螨2种致敏方式诱导的小鼠气道炎症表型的比较分析
屋尘螨2种致敏方式诱导的小鼠气道炎症表型的比较分析赵敏;范秋淋;刘维薇;陈春球;李智【摘要】目的比较屋尘螨(house dust mite,HDM)2种不同致敏方式对小鼠气道炎症表型的不同影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为3组,每组8只,PBS组和鼻滴法组小鼠于实验第1天、第7天、第14天、第21天经鼻腔分别滴注50 μl PBS液或HDM液(100 μg).经腹腔注射组小鼠于实验第1、14、21天经腹腔注射50 μl HDM液(40 μg),于实验第26天、第27天、第28天雾化吸入HDM液(40 μg)20 min.采用头体积描记法测量小鼠的气道反应性;对支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BAL)进行细胞计数和分类;ELISA法检测BAL中CXCL1、CXCL2、CCL11、IL-5、IFN-γ、IL-10和IL-17的表达及血清免疫球蛋白(HDM-IgG1、HDM-IgG2a、HDM-IgE)的含量;对肺组织PAS染色后进行病理学观察.结果鼻滴法诱导了以中性粒细胞为主的气道炎症并伴CXCL1蛋白水平升高、血清HDM-IgG1含量增加及肺组织高脚杯细胞增多等病理学改变,但血清HDM-IgE的含量和气道反应性未见改变.经腹腔注射法则诱导了更加剧烈的气道炎症反应(以嗜酸性粒细胞为主)、BAL中CXCL1、IL-5蛋白水平升高、血清免疫球蛋白(HDM-IgG1、HDM-IgG2a、HDM-IgE)含量增加、气道反应性下降以及肺组织病理学改变.结论 HDM鼻滴法和经腹腔注射法诱导了不同类型的小鼠气道炎症反应.【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(036)004【总页数】6页(P38-42,52)【关键词】屋尘螨;气道炎症;鼻滴法;经腹腔注射法;小鼠【作者】赵敏;范秋淋;刘维薇;陈春球;李智【作者单位】同济大学附属第十人民医院检验科,上海200072;苏州大学医学部,江苏苏州215000;同济大学附属第十人民医院检验科,上海200072;同济大学附属第十人民医院胃肠外科,上海200072;同济大学附属杨浦医院检验科,上海200090【正文语种】中文【中图分类】R562屋尘螨(house dust mite, HDM)是常见的过敏原，与人类哮喘的发生密切相关，其致敏作用已在动物模型中得到较多的研究。
长短链TSLP在屋尘螨诱导的哮喘气道上皮屏障破坏中的作用机制研究
长/短链TSLP在屋尘螨诱导的哮喘气道上皮屏障破坏中的作用机制研究研究背景及目的:哮喘是一种常见的气道慢性非特异性炎症性疾病,近年来由于人们生活环境的改变,在全球范围内哮喘的发病率和病死率明显增加,在全世界已影响了近3亿人。
气道上皮细胞是机体和环境之间的第一道防线,它的主要功能是作为物理屏障抵御外部环境中微生物,气体和过敏原等的侵袭。
而气道上皮细胞的物理屏障功能是依赖于细胞的完整性和细胞间连接蛋白的相互作用。
我们的课题组前期研究已证明屋尘螨可以破坏气道上皮屏障功能,而如何改善过敏原所致的气道上皮的损伤已经成为哮喘防治研究的关注重点。
研究表明胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在哮喘的预防和治疗中扮演重要的角色。
新近研究发现TSLP有不同的两个亚型即长链TSLP(1fTSLP)及短链TSLP(sfTSLP),近年来有关sfTSLP和1fTSLP的不同作用已引起了关注,然而,sfTSLP和1fTSLP在哮喘中是否也发挥着不同的作用,现在尚未见到报道。
针对上述问题,本课题拟在体内和体外实验探讨:1.1fTSLP是否促进了HDM 诱导的气道上皮屏障破坏?2.合成的sfTSLP是否可以保护HDM诱导的气道上皮屏障破坏?3.进一步明确在HDM所导致的哮喘性气道上皮屏障破坏中,1fTSLP发挥破坏作用和sfTSLP发挥保护作用的可能机制。
研究方法1.体外实验:1.1人正常支气管上皮细胞系(16HBE)的培养。
1.2使用Western blot、RT-PCR、TER、FITC和免疫荧光检测不同时间点及不同浓度的HDM对16HBE细胞的影响。
1.3 使用 RT-PCR、TER、FITC 和免疫荧光检测 1α,25-Dihydroxyvitamin D3(1,25D3)对细胞sfTSLP表达及HDM导致的气道上皮细胞屏障的破坏的影响。
1.4使用Western blot检测HDM是否通过MAPK通路引起1fTSLP的增高。
屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制
第48卷第1期第63页2019年2月㊀㊀㊀㊀华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n g㊀㊀㊀㊀V o l .48㊀N o .1㊀P .63F e b .㊀2019∗武汉市卫生计生委科研基金资助项目(N o .WX 17Q 12)林㊀玫,女,1979年生,主治医师,医学博士,E -m a i l :287443396@q q.c o m ә通讯作者,C o r r e s p o n d i n g a u t h o r ,E -m a i l :562979572@q q.c o m 屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制∗林㊀玫,㊀甄海宁,㊀鲍㊀敏ә,㊀方㊀思,㊀何㊀芳,㊀丁㊀敏,㊀袁竹青,㊀陈亚隽,㊀薛欣欣武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)呼吸内科,武汉㊀430061摘要:目的㊀通过测定N F -κB /p65s i R N A 对屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞N F -κB 及I L -6㊁I L -29表达水平的影响,探讨屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制㊂方法㊀将人支气管上皮细胞分为A 组(空白对照组)㊁B 组(300n g /m L 屋尘螨)㊁C 组(300n g /m L 屋尘螨+N F -κB -s i R N A )㊁D 组(300n g/m L 屋尘螨+s i R N A 阴性对照)㊁E 组(N F -κB -s i R N A )㊂检测各组细胞N F -κB /p 65核蛋白㊁I L -6㊁I L -29㊁N F -κB /p65m R N A 的相对表达量及细胞上清液中I L -29及I L -6的蛋白含量㊂结果㊀C 组经N F -κB /p 65s i R N A 转染后,N F -κB /p 65核蛋白㊁N F -κB /p65m R N A ㊁I L -6m R N A ㊁I L -29m R N A 及细胞上清液中I L -6及I L -29的蛋白含量仍然高于A 组,但低于B 组及D 组,组间差异有统计学意义(F 值分别为169.564㊁204.442㊁144.995㊁54.499㊁147.983㊁116.825,均P <0.01)㊂结论㊀N F -κB /p 65s i R N A 有效地抑制人支气管上皮细胞N F -κB /p 65的表达后,炎症因子I L -6㊁I L -29表达亦减少㊂屋尘螨可能通过激活N F -κB 信号通路,引起炎症因子I L -29㊁I L -6的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程㊂关键词:屋尘螨;㊀核因子-κB ;㊀白细胞介素-29;㊀白细胞介素-6中图分类号:R 562.2㊀㊀D O I :10.3870/j.i s s n .1672-0741.2019.01.012M e c h a n i s mo fH o u s eD u s tM i t e -I n d u c e d I n f l a m m a t o r y Me d i a t o r s i nH u m a n B r o n c h i a l E pi t h e l i a l C e l l s L i n M e i ,Z h e nH a i n i n g,B a oM i n әe t a l D e p a r t m e n t of R e s p i r a t o r y M e d i c i n e ,T o ng r e nH o s p i t a l o f Wu h a n U n i v e r s i t y &W u h a nT h i r d H o s pi t a l ,W u h a n430061,C h i n a A b s t r a c t ㊀O b je c t i v e ㊀T od e t e r m i n e t h e i nf l u e n c e o fN F -κB /p 65s i R N Ao n t h e e x p r e s s i o no f I L -29,I L -6a n dN F -κB i nh u -m a nb r o n c h i a l e p i t h e l i a l c e l l s (H B E C s )s t i m u l a t e db y h o u s e d u s tm i t e s a n d t o e x p l o r e t h em e c h a n i s mb y wh i c hh o u s e d u s tm i t e s i n d u c e t h e s e c r e t i o no f i n f l a m m a t o r y m e d i a t o r sb y H B E C s .M e t h o d s ㊀H u m a nb r o n c h i a l e p i t h e l i a l c e l l sw e r ed i v i d e d i n t o g r o u pA (b l a n kc o n t r o l g r o u p ),g r o u pB (300n g /m Lh o u s ed u s tm i t e s ),g r o u pC (300n g/m Lh o u s ed u s tm i t e s +N F -κB -s i R N A ),g r o u p D (300n g /m Lh o u s e d u s tm i t e s+s i R N An e g a t i v e c o n t r o l ),a n d g r o u p E (N F -κB -s i R N A ).T h e r e l a t i v e e x pr e s s i o n o fN F -κB /p 65n u c l e a r p r o t e i n ,I L -6,I L -29a n dN F -κB /p 65m R N Aa n d t h e p r o t e i n c o n t e n t o f I L -29a n d I L -6i n t h e s u pe r n a t a n t sw e r e d e t e c t e d .R e s u l t s ㊀Af t e r c o -s t i m u l a t i o nw i t hH D Ma n dN F -κB /p 65s i R N Af o r 24h ,t h e e x p r e s s i o no fN F -κB /p65n u c l e a r p r o -t e i n ,N F -κB /p 65m R N A ,I L -6m R N A ,I L -29m R N A ,I L -6p r o t e i na n d I L -29p r o t e i n i n g r o u p Cw e r e s i g n i f i c a n t l yl o w e r t h a n i n g r o u p Ba n d g r o u p D ,b u t h i g h e r t h a n i n g r o u p A .T h e d i f f e r e n c e sb e t w e e n t h e g r o u p sw e r e s i gn i f i c a n t (F =169.564,204.442,144.995,54.499,147.983,116.825,r e s p e c t i v e l y ,P <0.01).C o n c l u s i o n ㊀A f t e rN F -κB /p 65s i R N Ae f f e c t i v e l y in h i b i t e d t h e e x -p r e s s i o no fN F -κB /p 65i nH B E C s ,t h e e x p r e s s i o no f i n f l a m m a t o r y fa c t o r s I L -6a n d I L -29w a s a l s od e c r e a s e d .H o u s e d u s tm i t e s m a y i n c r e a s e t h e e x p r e s s i o n o f i n f l a m m a t o r y c y t o k i n e s I L -29a n d I L -6b y ac t i v a t i n g N F -κB s i g n a l i n g p a t h w a y ,w h i c h p a r t i c i pa t e s i n t h e d e v e l o p m e n t o f a i r w a y i n f l a m m a t i o n c a u s e db y ho u s e d u s tm i t e s .K e y wo r d s ㊀h o u s e d u s tm i t e s ;㊀n u c l e a r f a c t o r k a p p aB ;㊀i n t e r l e u k i n -29;㊀i n t e r l e u k i n -6㊀㊀迄今为止,支气管哮喘的发病机制尚不是十分清楚,没有某个单一的假说能阐明,但各假说都将气道炎症作为基础,从不同方面和角度,探索哮喘发病的病理机制㊂屋尘螨(h o u s ed u s tm i t e ,H D M )是最常见的诱导哮喘气道炎症的环境因素之一,也是引起气道高反应性的重要因素之一,研究表明屋尘螨可直接引起气道上皮损伤脱落,激发上皮细胞合成大量炎性介质而参与气道的慢性炎症㊂核因子κB(N F -κB )可能是各种细胞信号转导通路的相同靶蛋白,它的激活能导致多种炎症因子㊁趋化因子㊁炎性细胞生长因子等的合成与释放,从而参与哮喘的气道炎症过程㊂有证据表明,I L -29有以下作用[1-2]:调控C D 4+T 细胞功能,促进C D 4+T 细胞分泌促炎因子如I L -6和T N F 等,增强单核细胞对脂多糖的反应,这些均提示I L -29可能参与了免疫性炎症的发生发展过程㊂I L -6有多种生物学功能,是一个与哮喘气道炎症关系密切的细胞因子[3-4],它可调节T h1/T h2㊁T h17/T r e g介导的免疫应答平衡[5-6],在树突状细胞(D C细胞)摄取变应原,并启动T h2/ T h17细胞介导的气道炎症中有非常重要的作用[7-8]㊂有研究提示了N F-κB对I L-29㊁I L-6的调控作用[9-10],但三者的关系尚不十分清楚,为进一步阐明N F-κB信号通路与屋尘螨诱导气道上皮细胞表达炎症因子I L-29㊁I L-6的关系,我们设计了以下的实验㊂1㊀材料与方法1.1㊀主要仪器H e t t i c h U N I V E R S A L32R台式离心机(E p-p e n d o r f,德国),电热干燥箱(G Z X-D H-30X35-S,上海),微量加样器㊁微量加样管(E p p e n d o r f,德国),超净工作台(智城,上海),恒温二氧化碳培养箱(K f l o w,美国),热循环仪(E p p e n d o r f,德国),奥林巴斯倒置显微镜(O L YM P U S,I X70,日本),细胞培养皿(100m m㊁35m m㊁48孔板㊁24孔板㊁12孔板, C o r n i n g公司),荧光定量P C R仪(T y p eE C O,美国),酶标仪(S a t o r i u s,美国),恒温摇床(N e w B r u n-s w i c hS c i e n t i f i c,美国),蛋白电泳仪(北京六一生物科技有限公司)㊂1.2㊀细胞及主要试剂健康人支气管上皮细胞株16-H B E购自武汉大风生物科技有限公司,R P M I-1640培养液(G i b c o-I n v i t r o g e n,U S A)㊁胎牛血清购自美国I n v i t r o g e n公司,屋尘螨抗原(A L K,H o r s h o l m,D e n m a r k),R N A 提取试剂盒购自T a K a R a公司,逆转录酶(M-M L V-R T)㊁基因引物购于英骏生物工程有限公司,P C R 试剂盒购自T a K a R a公司,E L I S A试剂盒购自武汉博士德生物科技公司,L i p o f e c t a m i n e T M2000㊁O p t i-M E M购自上海拓然生物科技有限公司,核蛋白提取试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司㊂1.3㊀细胞培养将复苏后的16-H B E细胞用含12%小牛血清的R P M I-1640培养液,置于37ħ㊁5%的二氧化碳培养箱中培养,每日更换培养液㊂约2d后传代㊂1.4㊀细胞分组分组如下:培养板中的细胞分为A㊁B㊁C㊁D㊁E5组,每组分别于12个培养孔中培养,A组为空白对照组,B组为300n g/m L屋尘螨,C组为300n g/m L 屋尘螨+N F-κB/p65s i R N A,D组为300n g/m L屋尘螨+s i R N A阴性对照,E组为N F-κB/p65s i R-N A㊂A组空白对照不加入刺激物,培养24h㊂B组加入屋尘螨刺激,培养24h㊂C组及D组经s i R N A 转染,并屋尘螨刺激24h㊂E组以s i R N A转染,但不加入屋尘螨㊂1.5㊀转染溶解s i R N A于去R N A酶水中,使其终浓度为20m m o l/L,分装并置于-80ħ备用㊂s i R N A的序列如下:N F-κB/p65s i R N A,正义链5ᶄ-G G A C A U-A U G A G A C C U U C A A d T d T-3ᶄ,反义链5ᶄ-U U G-A A G G U C U C A U A U G U C C d T d T-3ᶄ;s i R N A阴性对照,正义链5ᶄ-U U C U C C G A A C G U G U C A C G U-d T d T-3ᶄ,反义链5ᶄ-A C G U G A C A C G U U C G G A G-A A d T d T-3ᶄ㊂用50μL O p t i-M E M稀释1.25μL s i R N A,将1.0μLL i p o f e c t a m i n e T M2000稀释于50μLO p t i-M E M,混合s i R N A稀释液和转染试剂,转染复合物加入到24孔细胞板中,置于37ħ㊁5% C O2培养箱中培养㊂转染6h后换新鲜培养液,继续培养㊂48h后,加入屋尘螨继续培养24h㊂1.6㊀提取核蛋白每毫升缓冲液A中加入5μL100m m o l/L P M S F㊁1μL蛋白酶抑制剂㊁1μL D T T;收集细胞,根据细胞压积,按体积比,细胞压积ʒ缓冲液A=1ʒ1.5,加入上述准备好的预冷的150μL缓冲液A,以最大转速进行涡旋剧烈振荡15s,并置于冰上10 m i n;加入12.5μL缓冲液B,快速振荡混匀,放置冰上1m i n后,4ħ,16000r/m i n,离心30s㊂收集上清至新的离心管㊂于每毫升缓冲液C中加入1μL蛋白酶抑制剂㊁5μL100m m o l/LP M S F㊁1μLD T T,在离心沉淀物中加入上述准备好的预冷的100μL B u f f e rC,以最大转速进行涡旋剧烈振荡15s,并置于冰上30m i n,每间隔10m i n进行涡旋剧烈振荡15s;于4ħ以16000r/m i n离心10m i n,把上清转入预冷的离心管;进行蛋白浓度测定,并保存于-80ħ冰箱㊂1.7㊀样品蛋白浓度的测定用考马斯亮蓝溶液测量各样品蛋白的浓度㊂1.8㊀W e s t e r nb l o t测N F-κB/p65核蛋白表达取出P A G E胶,装入电泳槽,点样,进行电泳;将滤纸和用甲醇活化的P V D F膜一起放入转膜液中10m i n;取出电泳完的凝胶玻璃板,切割目的蛋白所在区域凝胶;将目的蛋白凝胶置于滤纸上,将P V D F膜置于凝胶之上,盖上滤纸;于200m A转膜60m i n㊂在室温下,将P V D F膜放入封闭液,孵育1 h;稀释一抗(兔抗小鼠N F-κB/p65多克隆抗体,兔抗小鼠H i s t o n eH3抗体);将膜放于加好一抗的小㊃46㊃华中科技大学学报(医学版)㊀㊀2019年2月第48卷第1期塑料袋中;室温下孵育1h;洗膜㊂稀释二抗(辣根过氧化物酶标记羊抗兔I g G),把膜移到已经加好二抗溶液的小塑料袋中,于室温孵育1h;洗膜㊂以H i s t o n eH3蛋白作为对照,各组中N F-κB/p65蛋白的面积灰度值与H i s t o n eH3蛋白的比值即为表达强度㊂1.9㊀提取细胞总R N A吸除各培养板中的细胞培养液,在每孔中加入l m LT r i z o l,室温放置5m i n,收集至去R N A酶的1.5m LE P管中;12000r/m i n离心5m i n,弃去沉淀;加入氯仿0.2m L,振荡15s,静置于室温15 m i n;4ħ12000r/m i n离心15m i n;将上层水相转至另一E P管中,加入异丙醇0.5m L,颠倒混匀,室温下静置10m i n;于4ħ12000r/m i n离心10m i n,弃去上清,R N A沉淀沉于管底㊂1.10㊀逆转录根据以下配比配制反应体系:d N T P m i x4μL, P r i m e r2μL㊁R N A模板2μg,5ˑR T缓冲液4μL, R N A酶抑制剂2μL,M-M L V逆转录酶1μL,无R N A酶水补充反应体积至20μL㊂42ħ孵育50 m i n,72ħ孵育5m i n,反应结束后,置于冰上冷却,置于-20ħ冰箱保存㊂1.11㊀实时荧光定量P C R检测各组细胞炎症介质的相对表达量㊀㊀P C R反应体系:2ˑU l t r a S Y B R混合物(T a q D N A聚合酶和d N T P s)10μL,上游引物(10μm o l/L)0.4μL,下游引物(10μm o l/L)0.4μL, D N A模板0.8μL,无R N A酶水8.4μL,总体积20μL㊂设定反应条件如下:95ħ10m i n预变性,变性95ħ15s,退火60ħ1m i n,后两步重复40个循环;熔解曲线分析程序:95ħ15s,61ħ55s,95ħ15s㊂N F-κB/p65上下游引物分别是:5ᶄ-A T G T G-G A G A T C A T T G A G C A G C-3ᶄ,5ᶄ-C C T G G T C C T-G T G T A G C C A T T-3ᶄ;I L-29上下游引物分别为:5ᶄ-T A T C C A G C C T C A G C C C A C A-3ᶄ,5ᶄ-T C A G A C A-C A G G T T C C C A T C G-3ᶄ;内参G A P D H上下游引物分别是:5ᶄ-G T C A G T G G T G G A C C T G A C C T-3ᶄ,5ᶄ-T G C T G T A G C C A A A T T C G T T G-3ᶄ;I L-6上下游引物分别为:5ᶄ-A T G A G G A G A C T T G C C T G G T G-3ᶄ,5ᶄ-G C A T T T G T G G T T G G G T C A G-3ᶄ㊂将目的基因C t值用G A P D H的C t值标准化,用2-ΔΔC t表示基因表达的相对量㊂为进一步观察产物的表达情况,将P C R产物进行琼脂糖凝胶电泳㊂1.12㊀酶联免疫吸附试验(E n z y m e-l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s-s a y,E L I S A)㊀㊀检测细胞上清液中I L-29㊁I L-6的浓度,参照试剂说明书进行实验操作㊂1.13㊀统计学方法数据采用S P S S19.0统计软件进行分析,呈正态分布的计量资料,以均数ʃ标准差(ʏxʃs)表示;采用L e v e n e检验进行方差齐性检验;多组样本均数间的比较采用单因素方差分析(O n e-w a y A N O V A);采用L S D检验进行方差齐者的两两比较,用D u n-n e t t sT3检验进行方差不齐者的两两比较,以P< 0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀N F-κB/p65m R N A相对表达水平比较经方差分析发现,各组间N F-κB/p65m R N A 相对表达水平差异有统计学意义(F=204.442,P< 0.01);进一步两两比较发现,B组人支气管上皮细胞的N F-κB/p65m R N A水平明显高于A组,C组经N F-κB/p65s i R N A转染后,人支气管上皮细胞的N F-κB/p65m R N A水平仍然高于A组,但低于B 组及D组,差异均有统计学意义(均P<0.01),D组与B组之间差异无统计学意义(P=0.261),E组与A组之间差异无统计学意义(P=0.890)(表1㊁图1)㊂表1㊀各组细胞N F-κB/p65相对表达水平的比较(ʏxʃs)T a b l e1㊀C o m p a r i s o no f t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l so fN F-κB/p65b e t w e e n g r o u p s(ʏxʃs)组别n N F-κB/p65m R N A N F-κB/p65核蛋白A121.11ʃ0.210.29ʃ0.03B123.24ʃ0.38∗1.04ʃ0.15∗C121.58ʃ0.20∗ә0.55ʃ0.09∗әD122.96ʃ0.18∗#0.96ʃ0.09∗#E121.09ʃ0.210.28ʃ0.03㊀㊀与A组比较,∗P<0.01;与B组比较,әP<0.01;与C组比较,#P<0.012.2㊀N F-κB/p65核蛋白水平比较经方差分析发现,组间N F-κB/p65核蛋白水平差异有统计学意义(F=169.564,P<0.01);进一步两两比较发现,B组N F-κB/p65核蛋白水平明显高于A组,C组经N F-κB/p65s i R N A转染后,人支气管上皮细胞的N F-κB/p65核蛋白水平仍然高于A 组,但低于B组及D组,差异均有统计学意义(均P <0.01),D组与B组之间差异无统计学意义(P= 0.745),E组与A组之间差异无统计学意义(P= 0.999)(图2㊁表1)㊂2.3㊀I L-6m R N A相对表达水平的比较经方差分析发现,组间I L-6m R N A相对表达㊃56㊃林㊀玫等.屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制水平差异有统计学意义(F =144.995,P <0.01);进一步两两比较发现,B 组I L -6m R N A 相对表达水平明显高于A 组,C 组经N F -κB /p65s i R N A 转染后,人支气管上皮细胞的I L -6m R N A 相对表达水平仍然高于A 组,但低于B 组及D 组,差异均有统计学意义(均P <0.01),D 组与B 组之间差异无统计学意义(P =0.990),E 组与A 组之间差异无统计学意义(P =0.940)(图3㊁表2)㊂M :M a r k e r ;A :空白对照组;B :300n g /m L 屋尘螨;C :300n g /m L 屋尘螨+N F -κB /p 65s i R N A ;D :300n g /m L 屋尘螨+s i R N A 阴性对照;E :N F -κB /p65s i R N A 图1㊀各组细胞N F -κB /p 65m R N A 相对表达水平的比较F i g.1C o m p a r i s o no f t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l so fN F -κB /p 65m R N Ab e t w e e n g r o u ps A :空白对照组;B :300n g /m L 屋尘螨;C :300n g /m L 屋尘螨+N F -κB /p 65s i R N A ;D :300n g/m L 屋尘螨+s i R N A 阴性对照;E :N F -κB /p65s i R N A 图2㊀各组细胞N F -κB /p65核蛋白的表达F i g.2E x p r e s s i o no fN F -κB /p 65n u c l e a r p r o t e i n i ne a c h g r o u p M :M a r k e r ;A :空白对照组;B :300n g /m L 屋尘螨;C :300n g /m L 屋尘螨+N F -κB /p 65s i R N A ;D :300n g /m L 屋尘螨+s i R N A 阴性对照;E :N F -κB /p65s i R N A 图3㊀各组细胞I L -6m R N A 相对表达水平的比较F i g.3C o m p a r i s o n o f t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f I L -6m R N A b e t w e e n g r o u ps 2.4㊀I L -29m R N A 相对表达水平的比较经方差分析发现,组间I L -29m R N A 相对表达水平差异有统计学意义(F =54.499,P <0.01);进一步两两比较发现,B 组I L -29m R N A 相对表达水平明显的高于A 组,C 组经N F -κB /p65s i R N A 转染后,人支气管上皮细胞的I L -29m R N A 相对表达水平仍然高于A 组,但低于B 组及D 组,差异均有统计学意义(均P <0.01),D 组与B 组之间差异无统计学意义(P =0.090),E 组与A 组之间差异无统计学意义(P =0.901)(图4㊁表2)㊂表2㊀各组细胞I L -29㊁I L -6的m R N A 相对表达水平的比较(ʏx ʃs)T a b l e 2㊀C o m p a r i s o no f t h em R N Ae x pr e s s i o no f I L -29a n d I L -6b e t w e e n g r o u ps (ʏx ʃs )组别n I L -29m R N A I L -6m R N A A 121.09ʃ0.311.11ʃ0.26B 122.35ʃ0.27∗4.70ʃ0.75∗C 121.55ʃ0.20∗ә2.02ʃ0.31∗әD122.15ʃ0.26∗#4.44ʃ0.70∗#E 121.08ʃ0.311.09ʃ0.25㊀㊀与A 组比较,∗P <0.01;与B 组比较,әP <0.01;与C 组比较,#P <0.01M :M a r k e r ;A :空白对照组;B :300n g /m L 屋尘螨;C :300n g /m L 屋尘螨+N F -κB /p 65s i R N A ;D :300n g /m L 屋尘螨+s i R N A 阴性对照;E :N F -κB /p65s i R N A 图4㊀各组细胞I L -29m R N A 相对表达水平的比较F i g.4C o m p a r i s o no f t h e r e l a t i v ee x p r e s s i o n l e v e l so f I L -29m R -N Ab e t w e e n g r o u ps 2.5㊀细胞上清液细胞因子蛋白水平的比较经方差分析发现,组间细胞上清液I L -6蛋白水平差异有统计学意义(F =147.983,P <0.01);进一步两两比较发现,B 组细胞上清液I L -6蛋白水平明显的高于A 组,C 组经N F -κB /p 65s i R N A 转染后,人支气管上皮细胞的细胞上清液I L -6蛋白水平仍然高于A 组,但低于B 组及D 组,差异均有统计学意义(均P <0.01),D 组与B 组之间差异无统计学意义(P =0.998),E 组与A 组之间差异无统计学意义(P =0.922)(表3)㊂表3㊀细胞上清液细胞因子蛋白水平的比较(ʏx ʃs)T a b l e 3㊀C o m p a r i s o no f t h e p r o t e i n l e v e l s o f c yt o k i n e s i nc e l l s u s p e n s i o n s (ʏx ʃs )组别nI L -6蛋白水平(p g /m L )I L -29蛋白水平(p g/m L )A 12104.41ʃ15.2455.08ʃ13.53B 12297.25ʃ36.23∗158.83ʃ20.63∗C 12198.83ʃ24.21∗ә77.16ʃ9.36∗әD12286.91ʃ35.41∗#143.91ʃ20.72∗#E 12103.33ʃ14.5054.58ʃ12.41㊀㊀与A 组比较,∗P <0.01;与B 组比较;әP <0.01;与C 组比较;#P <0.01㊃66㊃华中科技大学学报(医学版)㊀㊀2019年2月第48卷第1期经方差分析发现,组间细胞上清液I L-29蛋白水平差异有统计学意义(F=116.825,P<0.01);进一步两两比较发现,B组细胞上清液I L-29蛋白水平明显高于A组,C组经N F-κB/p65s i R N A转染后,人支气管上皮细胞的细胞上清液I L-29蛋白水平仍然高于A组,但低于B组及D组,差异均有统计学意义(均P<0.01),D组与B组之间差异无统计学意义(P=0.569),E组与A组之间差异无统计学意义(P=0.939)(表3)㊂3㊀讨论慢性气道炎症是支气管哮喘的基本特征之一,屋尘螨作为空气中普遍存在的常见的一类过敏原,它在诱发和加重气道炎症和气道高反应性中发挥着重要的作用,呼吸道上皮细胞是人体抵御各种吸入性变应原的第一道黏膜屏障,屋尘螨通过侵犯人体的防御屏障,引起人体的免疫系统功能紊乱[11]㊂研究显示,屋尘螨通过激活经典的N F-κB信号通路,促进了气道过敏性炎症的发生㊂在被单一的屋尘螨刺激后,野生小鼠支气管上皮中前炎症因子的m R N A表达显著升高,协同核R e l A和R e l B的增加,导致了N F-κB经典通路和旁路的激活,并在气道过敏性炎症㊁气道高反应性㊁气道重塑过程中发挥了重要作用[12]㊂我们的实验结果显示:在屋尘螨刺激24h后,B 组人支气管上皮细胞的N F-κB/p65核蛋白水平㊁N F-κB/p65m R N A水平㊁I L-6水平㊁I L-29水平均明显高于A组,提示屋尘螨诱导了人支气管上皮细胞N F-κB/p65㊁I L-6㊁I L-29的表达,进一步提示I L-29㊁I L-6及N F-κB的活化与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程关系密切㊂C组经N F-κB/p65s i R N A转染后,人支气管上皮细胞的N F-κB/p65核蛋白水平㊁N F-κB/p65m R-N A水平㊁I L-6㊁I L-29仍然高于A组,但明显低于B 组,我们的实验显示N F-κB/p65s i R N A有效地抑制人支气管上皮细胞N F-κB/p65的表达后,炎症因子I L-6㊁I L-29的表达亦减少㊂实验证实N F-κB信号通路是屋尘螨诱导气道上皮细胞产生炎症因子I L-29㊁I L-6的通路之一㊂最新的研究也发现,I L-6也可促进T h17细胞增殖㊁分化[13],在调节炎性和免疫反应中发挥了重要作用[14]㊂也有研究提示屋尘螨诱导的过敏性哮喘小鼠的肺组织中I L-6浓度明显升高,且与支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞总数相关[4]㊂基因敲除或中和抗体介导的I L-6信号转导功能的丧失可以消除嗜酸性粒细胞的升高及中性粒细胞细胞因子㊁趋化因子的募集和变应原诱导的小鼠气道炎症[15]㊂研究提示,健康对照组的痰液中I L-29m R N A 水平明显低于经类固醇治疗的哮喘患者[16]㊂另外有研究提示:哮喘患者加重期病毒感染的程度㊁肺功能下降的程度与I L-29的水平呈现正相关,显示I L-29可能与哮喘的发病有关[17]㊂在过敏性哮喘急性发作期患者的血浆中检测到高水平的I L-29,大多数上气道组织的I L-29+细胞也是C D14+细胞,暴露于特定的抗原使这些细胞释放I L-4,进而释放I L-29,并引起I L-6的释放[18]㊂我们前期的实验也显示屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞I L-29的表达明显升高,且其可以被地塞米松所抑制[19]㊂这些结果均与我们此次的研究结论一致㊂综上所述,我们认为:屋尘螨可能通过激活N F-κB信号通路,引起炎症因子I L-29㊁I L-6的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程㊂参㊀考㊀文㊀献[1]㊀J o r d a n W J,E s k d a lEJ,S r i n i v a sS,e ta l.H u m a n i n t e r f e r o nl a m b d a-1(I F N-l a m b d a1/I L-29)m o d u l a t e st h e T h1/T h2r e-s p o n s e[J].G e n e s I m m u n,2007,8(3):254-261.[2]㊀J o r d a n W J,E s k d a l eJ,B o n i o t t o M,e ta l.M o d u l a t i o no f t h eh u m a n c y t o k i n e r e s p o n s eb y i n t e r f e r o n l a m b d a-1(I F N-l a m b-d a1/I L-29)[J].Ge n e s I m m u n,2007,8(1):13-20.[3]㊀刘艳明,农光民,李树全.哮喘小鼠气道I L-6㊁信号转导和转录激活因子-3的表达与活化及其与气道炎症的关系[J].临床儿科杂志,2011,29(2):165-169.[4]㊀V e r h e i j d e nK A,W i l l e m s e nLE,B r a b e r S,e t a l.T h e d e v e l o p-m e n t o fa l l e r g i ci n f l a m m a t i o ni na m u r i n eh o u s ed u s t m i t ea s t h m am o d e l i s s u p p r e s s e db y s y n b i o t i cm i x t u r e so f n o n-d i-g e s t i b l eo l i g o s a c c h a r i d e sa n d b i f i d o b 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屋尘螨诱导气道上皮炎症介质的表达机制及醛糖还原酶抑制剂的调控作用
屋尘螨诱导气道上皮炎症介质的表达机制及醛糖还原酶抑制剂的调控作用第一部分屋尘蟎刺激的人支气管上皮细胞表达炎症介质的改变目的通过测定人支气管上皮细胞在被屋尘螨和地塞米松刺激前后,IL-29、IL-6及NF-κB的表达情况,及相互关联,进一步探讨三者与屋尘螨引起的气道炎症的关系。
方法将人支气管上皮细胞分为A组(空白对照组)、B组(300ng/mL屋尘螨)、C组(100ng/mL屋尘螨)、D组(3000ng/mL屋尘螨)、E组(300ng/mL屋尘螨 +100 ng/mL 地塞米松),检测各组细胞IL-29、IL-6及NF-κB/p65的mRNA相对表达量及上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。
结果屋尘螨刺激24小时后,B组、C组、D组的IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显的高于A组,并且,E组经屋尘螨和地塞米松共刺激24小时后,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显低于那些仅被屋尘螨刺激的组别,但高于空白对照组,各组间差异有统计学意义(F值分别为191.983;415.311;65.377;283.037;294.367;P值均<0.01),且屋尘螨浓度越高,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达水平增高越明显。
且各组IL-29 mRNA、IL-6mRNA均与NF-κB/p65mRNA水平呈现正相关(r=0.899,P=0.000;r=0.883,P=0.000)。
结论屋尘螨可能通过激活NF-κB炎症信号通路,进而引起IL-6、IL-29的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程。
第二部分屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制目的通过测定NF-κB/p65 siRNA对屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞的NF-κB及IL-6、IL-29的表达水平的影响,探讨屋尘螨致气道炎症的发生机制。
屋尘螨提取液对哮喘气道上皮细胞间质转化的影响
屋尘螨提取液对哮喘气道上皮细胞间质转化的影响穆丹;陈荣娟【摘要】目的探究屋尘螨提取液(House dust mite extracets,HDM)对人支气管上皮16-HBE细胞间质转化(Epithelia-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法以16-HBE细胞株为研究对象,分别加入HDM和转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1),应用MTT法和Western blot法,检测细胞增殖情况以及EMT过程中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果①HDM刺激后,16-HBE细胞形态改变不显著,同时对细胞增殖无显著影响;与TGF-β1联合作用后,细胞形态发生EMT变化,并且显著促进细胞增殖(P＜0.05).②HDM刺激对16-HBE细胞中E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达均无显著影响;与TGF-β1联合作用后,E-cadherin蛋白表达显著降低(P＜0.05),Vimentin和α-SMA蛋白表达升高(P＜0.05),效果较TGF-β1单独应用更为明显.结论 HDM不能直接刺激上皮细胞发生EMT改变,但可通过促进TGF-β1诱导的上皮细胞EMT改变而发挥作用.%Objective To explore the role of house dust mite extracts (HDM) in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) of human bronchial epithelial (16-HBE) cells.Methods Human bronchial epithelial cells (16-HBE) were treated with HDM and transforming growth factor-β1 (TGF-β1).After treatment for 72 h,the morphology and proliferation capacity of 16-HBE cells were investigated with light microscope and ~ method,and the expression of E-cadhedn,Vimentin and α-SMA was tested by western blot.Results①Treatment with HDM did not induce significant morphological change and proliferation of 16-HBE cells;HDM combined with TGF-β1 inducedsignificant morphological changes and proliferation of 16HBE cells (P ＜0.05).②Treatment with HDM induced no significant change in E-cadherin,vimentin and α-SMA expression,but the expression of E-cadherin,vimentin and α-SMA changed significandy after the combination use of HDM and TGF-β1 (P ＜ 0.05).Conclusion HDM has no significant effect on EMT process of 16-HBE,but it can significandy enhance TGF-β1-induced EMT process.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2017(020)007【总页数】4页(P789-792)【关键词】屋尘螨提取液;哮喘;气道上皮细胞;间质转化;转化生长因子β1【作者】穆丹;陈荣娟【作者单位】辽阳市中心医院呼吸内三科,辽宁辽阳111000;辽阳市中心医院呼吸内三科,辽宁辽阳111000【正文语种】中文支气管哮喘(简称哮喘)是一种严重危害人类健康的常见病，以气道炎症、气道高反应性和气道重塑为主要特点，其中气道重塑最为重要，其与哮喘严重程度密切相关，同时也是哮喘气道病理改变的基础[1-2]。
HSP90α通过调控气道上皮细胞内质网应激加重屋尘螨诱导的哮喘气道炎症
支气管哮喘是一种常见的慢性、非传染性的异质性疾病，以慢性气道炎症为特点［1,2］。
随着城市化和生活方式改变，哮喘发病率逐年上升［3］，应用糖皮质激素可控制气道炎症和高反应性，但该治疗伴随多种不良反应［1,4］。
哮喘的有效防治，是临床上亟待解决的难题。
哮喘是基因异质性与环境共同作用的结果［5］，屋尘螨（HDM ）是最常见的致敏原之一［6］。
致敏原引起气道上皮细胞受损、分泌炎症因子，营造气道炎症微环境［7,8］，与哮喘的发生发展密切相关［6,9］。
关注气道上皮细胞对于寻找有效、精准的哮喘治疗具有重要意义。
热休克蛋白90（HSP90）作为一种损伤修复分子，发挥分子伴侣功能修饰客户蛋白底物［10,11］，包括多种炎症相关蛋白［12-14］。
有研究表明HSP90诱导气道杯状细胞HSP90αexacerbates house dust mite-induced asthmatic airway inflammation by upregulating endoplasmic reticulum stress in bronchial epithelial cellsHUANG Haohua,QIAO Yujie,HUANG Yi,DONG HangmingDepartment of Respiratory and Critical Care Medicine,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China摘要：目的探讨热休克蛋白90（HSP90α）参与屋尘螨（HDM ）诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞内质网应激的机制。
方法人气道上皮细胞HBE 体外培养，由HDM 诱导哮喘体外模型，浓度梯度刺激24h ，分为正常对照组；200U/mL 组；400U/mL 组；800U/mL 组。
随后分别使用siHSP90α干扰序列转染及HSP90抑制剂17-AAG 干预，分为HBE 正常对照组、HBE+HDM 组（800U/mL ，24h ）、HBE+HDM （800U/mL ，24h ）+siHSP90α（50nmol ，12h ）组、HBE+HDM （800U/mL ，24h ）+17-AAG （900nmol ，6h ）组，测定HSP90α以及内质网应激标志物的表达水平。
气道上皮细胞的抗氧化损伤保护及微环境调控
〃博士之窗〃气道上皮细胞的抗氧化损伤保护及微环境调控3秦晓群(湖南医科大学生理学教研室,长沙410078)秦晓群,男,生理学专业。
导师: 徐有恒教授、孙秀泓教授。
论文答辩日期:1998 年6 月24 日,答辩委员会主席:王迪浔教授。
摘要本工作建立了臭氧对原代培养的兔支气管上皮细胞(B EC) 损伤模型,观察到血管活性肠肽( V I P) 、表皮生长因子( E GF) 、热应激等微环境理化因子可减轻细胞损伤,具有细胞保护作用。
其保护机制与提高还原型谷胱甘肽( G S H) 含量有关,并依赖于蛋白激酶的磷酸化调节及基因转录。
B EC 细胞在基础情况下有bcl22 基因的低水平表达,V I P 和E GF 可促进bcl22 基因转录,增强B EC 的抗氧化损伤能力。
E GF 或热应激促进B EC 自分泌V IP ,并上调B EC 表达V IP 受体( V IP R) ,可放大V IP 的局部保护效应。
论证了气道上皮存在抗损伤自我保护机制,受到局部微环境中调节肽及外源性刺激的适应性调控。
关键词气道上皮细胞;血管活性肠肽;表皮生长因子;热应激;细胞保护Protect i on f r om Oxidant I njury on Air w ay Epit hel i al Cell s an d t he Local Microenvi2ron m ent Modulat i on Q IN Xiao2Q u n ( De p a r t m e n t of Physiol ogy , H u n a n M e d ical U 2ni ve rsi t y,Changsha 410078)Abstract A n cellular injury m o d el of p r imary cult u red rabbit bro n chial epit h elial cells(B EC) e xpo s ed to oz o n e was established in t h is st u dy and cytop r otective effect s of f a c2to r s in l ocal microenviro n ment of airway such as vasoactive intestinal pep t ide ( V I P) , epider m al growt h f a cto r( E GF ) and heat st r ess were o b served. These f a cto r s co u ld lighten damage in cell and elevate t h e level of glutashi o n e (GSH) , w h ich depended upo np h o s p h o r ylati o n m o d ulat i o n by p r otien kinases and gene t r anscrip t i o n. A l ow level ofbcl22 gene e x p r essi o n co u ld be detected in B EC at basic state , and eit h er V IP o r E GF stimulated t h e t r anscrip t i o n of bcl22 , w h ich im p roved t h e capabilit y of B EC to resist o x2 idant injury. Ot h erwise , E GF and heat st r ess increased V IP autocrine f ro m B EC andup r egulated t h e ex p ressi o n of V I P recep t o r o n B EC , so t h at t h e p r otective effect of V IP3 国家自然科学基金资助课题(39400108)can be ampli f ied in l ocal sites. This st u dy co n fir m ed t h at t h ere is an anti2injury p r otecti o n o n air2 way epit h elium and t h e p rotecti o n can be adap t ively m o d ulated by t h e regulato r y pep t ides in l ocal microenviro n ment and e x ogeno u s stimulus.K ey w ords Airway epit h elial cells ; Vasoactive intestinal pep t ide ; E pider m al growt h f a cto r ; Heat st r ess ; Cytop r otecti o n气道上皮不仅充当机械屏障,还具有对化学性毒物或药物的转化代谢作用,可通过自分泌或旁分泌对邻近细胞的活动进行调控。
013_尘螨抗原的蛋白酶活性
国外医学呼吸系统分册２００１年第２１卷第ｌ期·３７０１３尘螨抗原的蛋白酶活性河北医科大学第二医院（０５００００）扬红申袁雅冬综述石玉珍马傻义审校摘要尘螨抗原除有一般抗原的共同特性外，尚具有蛋白酶水解作用。
尘螨蛋白酶抗原能够裂解Ｂ细胞和巨噬细胞膜表面某些受体分子如ＣＤ皂３和ＣＤ２５，酶解上皮细胞问的紧密联接，诱导支气管上皮细胞释放前炎症介质。
尘螨抗原的蛋白酶作用在吸入抗原致敏及特应性疾病的病理生理过程中起重要作用。
关键词尘螨；蛋白酶；ＩｇＥ受体；哮喘目前发现螨虫（ｄｅｍｌａｔｏｐｈａ９０ｉｋｅｓ）共有５０００多种，其中诱发过敏性哮喘者主要是表皮螨属（ｐｙｒ。
ｇｉｔｐｈｉｄａｅ），该螨属共有４７种，６种与过敏性哮喘关系最密切者：屋尘螨（ｄｅｎｍｔｏｐｈｇｏｉｄｅｓｐｔｅｒＤｎｙ西ｎｕｓ［）ｅｒＰ）、粉尘螨（ｄｅｎｎａ的ｐｈａｇｏｉｄｅｓｆａｒｉＴｌａｅＤｅｒｆ）、微角尘螨（ｄｅＨｍｔｏｐｈａ９０ｉｄｅｓｍｉｃｒ。
ｃｅｒａｓＩ）盯Ｍ）、内宇尘螨（ｅｕｒ（】９１ｙｐｈｕｓｍａｙｎｅｉＥＭ）、害鳞嗜螨（ｋｐｉ如ｇｌ冲ｈｕｓｄｅｓｔｒａｃｔｏｒＬｅｐｄ）；多毛螨（ｈｉｒｓｔｉａ）。
研究表明某些尘螨抗原除一般抗原所具有的免疫原性外尚具有蛋白酶的特性，此种蛋白酶抗原（ｐｒｏｔ酬ｙｔｉｃａｌｌｅｒｇｅｎ）在尘螨诱发哮喘和过敏性疾病中起重要作用。
本文拟对尘螨抗原蛋白酶作用的研究作一简述。
ｌ尘螨蛋白酶抗原的来源尘螨抗原存在于尘螨的任何生理状态、分泌物及其粪便中。
ＤｅｒＰ１抗原是屋尘螨诱导过敏性哮喘的主要抗原，存在于尘螨粪便微粒中，占其总蛋白１５％～２０％。
每个微粒中含有Ｏ．１ｒ培的Ｄ时Ｐ】…，在居室中大量存在可达３０旭儋，并且尘螨非常细小只有１０～２０舯，其粪便微粒可悬浮在空气中直接进入呼吸道。
尘螨过敏的哮喘患者肺泡灌洗液中可测得微量的【）ｅｒＰ１Ｌ…，推测其在支气管粘液层以微克数量级存在。
ＤｅｒＰ１可于１分钟之内从粪便微粒中自然释出，２５℃～３７℃不易分解，ｐＨ中性时活性最强，并且活性状态维持有赖于支气管粘液层中丰富的谷胱甘肽存在【“。
IRAK-M在尘螨诱导的哮喘中的免疫调节作用及嗜酸性粒细胞性肺部疾病患者临床特征分析
IRAK-M在尘螨诱导的哮喘中的免疫调节作用及嗜酸性粒细胞性肺部疾病患者临床特征分析目的:本研究旨在探讨IRAK-M在尘螨暴露诱导的肺部炎症中的作用及机制。
方法:哮喘模型:使用6-8周雌性IRAK-M-/a及野生型小鼠建立HDM致敏及激发的急性(18天)哮喘模型,并分为四组:野生型对照组(WT-PBS)、IRAK-M-/-对照组(KO-PBS)、野生型哮喘组(WT-HDM)、IRAK-M-/-哮喘组(KO-HDM)。
使用无创式动物肺功能仪检测小鼠特异性气道阻力。
通过HE染色观察肺部形态、炎症,并进行病理评分;masson染色观察气道及血管周围胶原沉积情况;AB-PAS染色观察气道粘液分泌及杯状细胞化生;分别采用α-SMA、IRAK-M免疫组化观察平滑肌增生及野生型小鼠中IRAK-M蛋白表达的变化。
通过qRT-PCR检测肺组织炎症因子、转录因子及野生型小鼠中IRAK-M mRNA 表达水平。
使用ELISA检测血清Ig及BALF炎症因子蛋白表达水平。
流式细胞术检测小鼠BALF中炎症细胞计数、分类,Mac、DCs表面共刺激分子的表达水平及Mac抗原吞噬功能。
结果:(1)IRAK-M表达:与WT-PBS小鼠比较,WT-HDM小鼠肺部IRAK-M mRNA水平升高2倍,且IRAK-M蛋白在气道上皮及肺泡壁表达增多。
(2)气道阻力:HDM暴露增加小鼠气道阻力,但WT-HDM组与KO-HDM组无统计学差异。
(3)肺病理:BPS组肺组织结构正常,HDM组肺组织炎症明显,KO-HDM小鼠炎症细胞浸润半定量评分较WT-HDM明显升高。
(4)BALF炎症细胞计数及分类:与PBS组比较,HDM组炎症细胞总数明显升高(P<0.01):与WT-HDM组比较,KO-HDM组细胞总数无差异,但EOS、Th2、B细胞白分比明显升高。
(5)BALF或肺组织炎症因子:与WT-HDM比较,KO-HDM 组 BALF及肺组织中 IL-4,BALF 中 IL-5、IL-13、IFNγ、IL17A 及上皮因子IL-25、IL-33、TSLP均明显升高;(6)肺组织T细胞转录因子:与WT-HDM组比较,KO-HD组Treg-Foxp3mRNA表达水平降低,Th2-GatamRNA水平升高。
胰高血糖素样肽-1调节Th细胞分化对屋尘螨诱导小鼠过敏性气道炎症的影响
胰高血糖素样肽-1调节Th细胞分化对屋尘螨诱导小鼠过敏性气道炎症的影响马东霞;黄南;李文静;杨雅琪;蒋晴;陈浩;张书辰;汪茵;杨林;祝戎飞【期刊名称】《中华临床免疫和变态反应杂志》【年(卷),期】2022(16)3【摘要】目的探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对屋尘螨(house dust mite,HDM)诱导小鼠过敏性气道炎症的作用,并探讨其作用机制。
方法将24只SPF级C57 BL6小鼠随机分为对照(Con)组、GLP-1组、屋尘螨(HDM)组、屋尘螨+GLP-1(HDM+GLP-1)组。
用HDM建立小鼠过敏性哮喘模型,选用临床常用的GLP-1类似物利拉鲁肽干预小鼠。
HDM组,给予鼻腔滴注HDM诱导小鼠气道过敏性炎症,并给予等体积生理盐水皮下注射;HDM+GLP-1组,给予HDM 鼻腔滴注,同时给予利拉鲁肽皮下注射;GLP-1组,给予利拉鲁肽皮下注射,并给予等体积生理盐水鼻腔滴注;Con组给予等体积生理盐水鼻腔滴注及皮下注射。
通过HE 染色观察肺组织病理学变化,流式细胞仪检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中不同Th细胞的比例,ELISA检测IL-4、IL-5、IL-13炎性因子的浓度。
结果HDM组小鼠肺组织病理损伤明显,GLP-1抑制屋尘螨诱导的小鼠气道过敏性炎症,降低Th2细胞比例(Th2,CD4+IL-4+:HDM20.2±2.06%vs.HDM+GLP-19.57±3.66%,P<0.05),促进Th1 Th2细胞平衡。
结论GLP-1负向调节Th2细胞形成,促进T细胞向Th1细胞方向分化,从而抑制屋尘螨诱导的小鼠气道过敏性炎症。
【总页数】6页(P246-251)【作者】马东霞;黄南;李文静;杨雅琪;蒋晴;陈浩;张书辰;汪茵;杨林;祝戎飞【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科【正文语种】中文【中图分类】R58【相关文献】1.FasL基因和屋尘螨过敏原基因共表达质粒DNA疫苗对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用2.重组屋尘螨2类变应原疫苗免疫治疗小鼠过敏性气道炎症的研究3.屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用4.屋尘螨过敏原DNA疫苗对哮喘模型小鼠Foxp3^＋调节性T细胞功能的影响5.FasL基因转染树突状细胞对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症影响的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
表皮生长因子受体参与屋尘螨诱导的气道上皮屏障破坏的机制
表皮生长因子受体参与屋尘螨诱导的气道上皮屏障破坏的机制乐艳青;董航明;王燕红;赵海金;蔡绍曦【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2017(037)006【摘要】Objective To investigate the role of epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling pathway in bronchial epithelial actin stress fiber (F-actin) rearrangement induced by house dust mite (HDM). Methods Normal human bronchial epithelial cells (16HBE) were stimulated with HDM with or without pretreatment with AG-1478, an EGFR inhibitor. The levels of phospho(p)-EGFR, F-actin, E-cadherin and β-catenin in the cell cultures were detected with Western blotting. The localizations of F-actin, E-cadherin and β-catenin in the bronchial epithelial cells were determined with immunofluorescence assay, and the transmembrane electrical resistance (TER) and FITC-dextran flux (FITC-DX) in the cells were measured to assess the barrier function of the bronchial epithelia. Results HDM stimulation of the cells for 10 min resulted in significantly increased p-EGFR expression (P<0.05) without causing obvious changes in the expression of E-cadherin (P>0.05) orβ-catenin (P>0.05). Immunofluorescence assay revealed delocalization of E-cadherin and β-catenin in HDM-treated 16HBE cells, shown by their diffusion from the cell membrane to the cytoplasm. In HDM-treated cells, the TER wassignifica ntly decreased to (70.00±4.33)%and the FITC-DX was significantlyincreased to (115.98±4.34)%;Inhibition of EGFR reversed the delocalization of E-cadherin and β-catenin, improved the TER to (90.00 ± 3.75)% and lowered the FITC-DX to (101.10 ± 2.10)%. HDM in duced increased expression and rearrangement of F-actin, which was obviously inhibited by pretreatment of the cells with AG-1478 (P<0.05). Conclusion EGFR signaling pathway mediates HDM-induced F-actin rearrangement in human bronchial epithelial cells to contribute to epithelial barrier dysfunction.%目的探讨屋尘螨(HDM)对肌动蛋白应力纤维(F-actin)重新排布的影响及表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路在其中的作用.方法选取正常人支气管上皮细胞系16HBE细胞为研究对象,以HDM刺激细胞,予EGFR抑制剂AG-1478进行预处理,实验分为4组:Control组,AG-1478组,HDM组,AG-1478+HDM组,应用Western blotting检测HDM对磷酸化(p-)EGFR、F-actin 及粘附连接蛋白E-cadherin和β-catenin表达的影响,应用免疫荧光技术观察F-actin、E-cadherin及β-catenin的分布变化,并测量16HBE细胞层的跨上皮电阻(TER)值和右旋糖苷(FITC-DX)的透过率.结果 HDM刺激细胞10 min时,p-EGFR 表达明显增多(P<0.05),E-cadherin(P>0.05)及β-catenin(P>0.05)蛋白表达无明显改变,免疫荧光示HDM刺激后E-cadherin及β-catenin均发生分布异常,由胞膜向胞浆弥散.HDM组TER值(70.00±4.33)%显著下降,FITC-DX透过率(115.98±4.34)%明显增加,加入EGFR抑制剂后E-cadherin和β-catenin的分布异常及TER值(90.00±3.75)%、FITC-DX(101.10±2.10)%透过率均明显改善.HDM刺激后促进F-actin表达增多并出现重新排布,而EGFR抑制剂可明显抑制这一过程(P<0.05).结论表皮生长因子受体相关信号通路参与了屋尘螨介导肌动蛋白应力纤维的重新排布,并导致气道上皮屏障破坏.【总页数】7页(P737-743)【作者】乐艳青;董航明;王燕红;赵海金;蔡绍曦【作者单位】南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科,慢性气道疾病实验室,广东广州 510515;南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科,慢性气道疾病实验室,广东广州 510515;南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科,慢性气道疾病实验室,广东广州 510515;南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科,慢性气道疾病实验室,广东广州 510515;南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科,慢性气道疾病实验室,广东广州 510515【正文语种】中文【相关文献】1.Lyn对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞中MUC5AC表达的影响及其机制 [J], 王孝芸;蓝楠;唐红梅;袁谢芳;王星;李国平2.活性维生素D3下调屋尘螨诱导的气道上皮细胞胸腺基质淋巴生成素蛋白释放[J], 周丽芹;董航明;赵海金;邹梦晨;姚利红;邹飞;蔡绍曦3.屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制 [J], 林玫;甄海宁;鲍敏;方思;何芳;丁敏;袁竹青;陈亚隽;薛欣欣4.干扰S100A4在屋尘螨诱导的哮喘气道上皮屏障功能的作用 [J], 黄超文; 赵强; 钟雪莺; 温玉婷; 梁丽萍; 黄炎明5.屋尘螨诱导气道上皮TLR4表达和影响T淋巴细胞分化在哮喘气道炎症中的作用[J], 李鸿佳;周明香;孙文青;王维瑄;王庆;郭鹏;刘春利;曹晓青;陈海荣;李冲;吴金香;董亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
屋尘螨疫苗治疗儿童哮喘2年肺功能和激素用量的动态观察
屋尘螨疫苗治疗儿童哮喘2年肺功能和激素用量的动态观察叶泽慧;黄英;王莹;龚财惠;蒋永惠【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2012(032)011【摘要】Objective To observe the dynamic changes of pulmonary function and inhaled corticosteroid (ICS) doses during subcutaneous immunotherapy (SCIT) with standardized house dust mite vaccine (Alutard) in children with mild to moderate allergic asthma. Methods One hundred children with mild to moderate allergic asthma were randomized into SCIT group and control group for treatment with SCIT plus ICS and with ICS only, respectively. The pulmonary function and ICS doses were evaluated before and every 3 months during the 2 years of treatment. Results No significant difference was found in the pulmonary functions between the two groups before the treatment (P>0.05). After 3 months of treatment, FEV1% and PEF% in SCIT group were significantly higher than those in the control group [(103.19±2.07)% vs (97.52±1.92)%, and (105.56±3.21)% vs (96.35±2.7)%, respectively]; at 21 months, FEF50% and FEF25% were significantly higher in SCIT gro up than in the control group [(105.69±3.29)% vs (94.61±3.12)%, and (106.60±3.71)% vs (92.92+3.31)%, respectively]. A significant difference was found in ICS doses between SCIT group and the control group after 9 months of treatment (147.14±6.41 us 170±4.95μg/day, P<0.05), and the difference increased as the treatment prolonged.Conclusion SCIT combined with ICS can improve the ventilation function of the large airways early after the commencement of treatment, but its effect on small airways can be delayed. SCIT for 2 years shows a good therapeutic effect and can reduce the doses of ICS in children with mild to moderate allergic asthma.%目的观察分析标准化屋尘螨疫苗(Alutard)免疫治疗儿童轻-中度哮喘2年,肺功能和吸入激素用量动态变化情况.方法 100例屋尘螨过敏性哮喘患儿分为试验组(50例)和对照组(50例),试验组采用标准化屋尘螨疫苗脱敏联合吸入激素治疗,对照组采用吸入激素治疗,连续治疗2年,每3个月对肺功能和吸入激素用量进行评估.结果治疗前试验组和对照组肺功能各指标无统计学差异(P ＞0.05).治疗3月后大气道通气功能开始出现差异,试验组FEV1％、PEF％[(103.19±2.07)％、(105.56±3.21)％]较对照组[(97.52±1.92)％、(96.35±2.7)％]明显升高；治疗21月后小气道通气功能开始出现差异,试验组FEF50％、FEF25％[(105.69±3.29)％、(106.60±3.71)％]较对照组[(94.61±3.12))％、(92.92±3.31)％]明显升高.治疗9月,试验组吸入激素每周日均用量(147.14±6.41)μg较对照组(170±4.95)μg明显减少,有统计学差异(P＜0.05),随着观察时间的越长,两组差异逐渐增大.结论标准化屋尘螨疫苗免疫治疗儿童过敏性哮喘2年,早期即显著改善大气道通气功能、对小气道通气功能改善较迟缓,明显减少吸入激素用量,并能维持较好疗效.【总页数】4页(P1632-1635)【作者】叶泽慧;黄英;王莹;龚财惠;蒋永惠【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心//儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心//儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心//儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心//儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心//儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室,重庆400014【正文语种】中文【中图分类】R563【相关文献】1.儿童哮喘患者屋尘螨变应原集群免疫治疗与常规免疫治疗起始阶段的安全性 [J], 孙月眉;刘丽萍;邢海燕;贺宁;田丰英;丁娟;唐宁波2.FasL基因和屋尘螨过敏原基因共表达质粒DNA疫苗对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用 [J], 王彦;林科雄;王长征;吴奎;毕玉田3.屋尘螨变应原特异性免疫治疗儿童哮喘的临床效果观察 [J], 张庭辉;4.屋尘螨变应原特异性免疫治疗儿童哮喘的临床效果观察 [J], 张庭辉5.屋尘螨皮下特异性免疫治疗儿童哮喘和/或变应性鼻炎致全身不良反应 [J], 容嘉妍;黄东明;王桂兰;张莉;王冰洁;黄娟;刘翔腾;林嘉镖;魏可英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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屋尘螨诱导气道上皮炎症介质的表达机制及醛糖还原酶抑制剂
的调控作用
第一部分屋尘蟎刺激的人支气管上皮细胞表达炎症介质的改变目的通过测定人支气管上皮细胞在被屋尘螨和地塞米松刺激前后,IL-29、IL-6及NF-κB的表达情况,及相互关联,进一步探讨三者与屋尘螨引起的气道炎症的关系。
方法将人支气管上皮细胞分为A组(空白对照组)、B组(300ng/mL屋尘螨)、C组
(100ng/mL屋尘螨)、D组(3000ng/mL屋尘螨)、E组(300ng/mL屋尘螨 +100 ng/mL 地塞米松),检测各组细胞IL-29、IL-6及NF-κB/p65的mRNA相对表达量及上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。
结果屋尘螨刺激24小时后,B组、C组、D组的IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显的高于A组,并且,E组经屋尘螨和地塞米松共刺激24小时后,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显低于那些仅被屋尘螨刺激的组别,但高于空白对照组,各组间差异有统计学意义(F值分别为
191.983;415.311;65.377;283.037;294.367;P值均<0.01),且屋尘螨浓度越高,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达水平增高越明显。
且各组IL-29 mRNA、IL-6mRNA均与NF-κB/p65mRNA水平呈现正相关
(r=0.899,P=0.000;r=0.883,P=0.000)。
结论屋尘螨可能通过激活NF-κB炎症信号通路,进而引起IL-6、IL-29的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程。
第二部分屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制目的通过测定NF-κB/p65 siRNA对屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞的NF-κB及IL-6、IL-29的表达水平的影响,探讨屋尘螨致气道炎症的发生机制。
方法将人支气管上皮细胞分为A组(空白对照组)、B组(300ng/mL屋尘蟥)、C组(300ng/mL屋尘螨+NFκB-siRNA)、D组(300ng/mL屋尘螨+siRNA阴性对照)。
检测各组细胞IL-6、IL-29、NF-κB/p65mRNA、NF-κB/p65核蛋白的相对表达量及细胞上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。
结果C组经NF-κB/p65 SiRNA转染及屋尘螨作用24小时后,NF-κB/p65mRNA、NF--κB/p65核蛋白、IL-6mRNA、IL-29mRNA及细胞上清液中IL-6及IL-29的蛋白含量仍然高于A组,但低于B组及D组,各组间差异有统计学意义(F值分别为193.456;228.565;135.168;55.725;162.279;108.313;P值均<0.01)。
结论
NF-κB/p65 siRNA有效的抑制人支气管上皮细胞NF-κB/p65的表达后,炎症因
子IL-6、IL-29表达亦减少。
实验进一步证明NF-κB信号通路是屋尘螨诱导气道上皮细胞产生炎症因子
IL-6、IL-29的通路之一。
第三部分醛糖还原酶抑制剂对屋尘螨诱导的气道炎症及炎症介质的调控目的测定醛糖还原酶抑制剂对屋尘蟥诱导的人支气管上皮细
胞及小鼠气道的NF-κB及细胞因子的表达水平的影响,并观察其对小鼠气道炎
症的影响,探索气道炎症新的干预措施。
方法细胞实验:将人支气管上皮细胞分为A组(空白对照)、B组(屋尘螨)、C 组(屋尘螨+醛糖还原酶抑制剂Zopo),检测各组细胞NF-κB/p65mRNA的相对表达量、NF-κB/p65核蛋白、上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。
动物实验:小鼠
随机分为3组:A组(对照组),B组(屋尘螨组)和C组(Zopo组),采用屋尘螨变应
原制剂致敏和激发建立小鼠气道炎症模型。
用小鼠肺功能仪无创肺阻抗法检测小鼠的气道反应性变化,苏木素伊红(HE)染色方法观察小鼠气道及肺组织炎症浸润情况,细胞计数板对小鼠支气管肺泡灌
洗液(BALF)中各细胞分类及计数,检测各组小鼠BALF中IL-6、IL-8,IL-29,TNF-α的表达;测定小鼠肺组织NF-kB/p65 IL-6、IL-8、IL-29、TNF-α的mRNA相对表达水平;检测小鼠肺组织中NF-kB/p65核蛋白的表达强度。
结果细胞实验显示:C组经屋尘螨及醛糖还原酶抑制剂共同作用24小时后,人支气管上皮细胞的NF-κB/p65mRNA水平、NF-κB/p65核蛋白水平、IL-6蛋白水平、IL-29蛋白水平均明显的低于B组(F值分别为159.909;233.350;167.999;127.196;P值均
<0.01)。
动物实验显示:病理检查示Zopo组经醛糖还原酶抑制剂干预后,炎症细胞浸润较屋尘螨组明显减轻,支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均较屋尘螨组降低(F值分别为100.179;698.70;157.260;P值均<0.05),且当乙酰甲胆碱浓度增加至25mg/ml、50mg/ml时,Zopo组小鼠的气道反应性较屋尘螨组明显降低,差异有统计学意义(F值分别为51.899;60.486;P 值均<0.05),进一步分析发现,Zopo组小鼠肺组织的NF-kB/p65mRNA、NF-κ
B/p65核蛋白水平均明显的低于屋尘螨组(F值分别为124.176;188.517;P值均<0.05),且IL-6、IL-8、IL-29、TNF-α的mRNA相对表达水平及蛋白水平均明显的低于屋尘螨组(F 值分别为
75.162;172.151;59.133;68.042;92.659;133.655;102.864;79.230;P值均
<0.05)。
结论醛糖还原酶抑制剂zopolrestat调控了 NF-κB介导的炎症信号,明显减少了人支气管上皮细胞炎症因子的表达,明显减轻了小鼠气道高反应性及炎症细胞的浸润,减少了小鼠气道炎症因子的表达,减轻了屋尘螨诱导的小鼠气道炎症反应。