最新植物组培外植体消毒详解
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程请介绍初代培养时，外植体灭菌的一般操作流程植物组织培养是一种重要的研究手段，可以用于植物生长发育、基因转化、基因功能研究、药用植物繁殖等方面。
其中，外植体灭菌是非常重要的一步，它可以有效地消除外植体表面的细菌、真菌等微生物，保证培养过程的纯净性。
本文将介绍初代培养时，外植体灭菌的一般操作流程。
一、实验室准备1.1 器材准备灭菌器、无菌工作台、移液器、吸头、无菌超声波清洗器、电子天平、无菌手套、无菌培养皿、无菌离心管、无菌注射器、无菌玻璃棒、无菌滤纸、无菌酒精灯等。
1.2 试剂准备70%乙醇、84消毒液、无菌蒸馏水等。
二、外植体处理2.1 采集外植体采集适合培养的植物外植体，如茎尖、叶片、花器官等，根据不同的外植体类型选择不同的处理方法。
2.2 去皮、消毒去掉外植体表面的皮、毛等杂质，然后将外植体放入无菌离心管中，加入70%乙醇或84消毒液，用移液器充分淋洗，消毒时间不少于3min。
2.3 洗涤将消毒液倒掉，加入无菌蒸馏水，用移液器充分淋洗，洗涤时间不少于3次。
2.4 剪切将外植体剪成适当大小，以便于培养时的生长和观察。
三、培养基处理3.1 培养基配制根据所需的外植体类型、培养目的等不同因素，选择适当的培养基配方，如MS培养基、B5培养基等。
将培养基配制好，并调节pH 值至适宜范围。
3.2 过滤用无菌滤纸将培养基过滤，以去除其中的微生物。
四、外植体接种4.1 灭菌台消毒打开灭菌台，用酒精灯对其进行消毒。
4.2 工具消毒将需要使用的工具放入灭菌器中进行消毒，如无菌注射器、无菌玻璃棒等。
4.3 培养皿消毒将需要使用的培养皿放入灭菌器中进行消毒，消毒时间不少于30min。
4.4 外植体接种将消毒好的外植体取出，用无菌注射器或无菌玻璃棒将其接种到培养皿中，然后加入适量的培养基。
五、培养过程5.1 培养条件将接种好的培养皿放入无菌培养箱中，保持适宜的温度、光照和湿度等条件。
最新植物组培外植体消毒详解
精品文档植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
(1)常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75% 酒精杀菌效果最好，95% 或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+ 可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2] ，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭精品文档这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
附录4植物组织培养中外植物表面的消毒-苏教版选修1生物技术实践教案
附录4：植物组织培养中外植物表面的消毒1. 背景外植物表面的杂菌、病毒等微生物对于植物组织培养非常不利，它们会繁殖并感染外植物，造成组织失去生长能力，从而导致培养失败。
所以在植物组织培养过程中，对于外植物表面进行消毒是必不可少的环节。
2. 消毒步骤2.1 选择适宜的消毒剂消毒剂的选择至关重要，不同的消毒剂对于不同的微生物有不同的消毒效果。
但总的原则是：选择高效广谱的消毒剂，并严格按照说明书使用。
•原液消毒剂常用的有石灰作为消毒剂，石灰的作用是增加培养环境的碱度，增加微生物的灭菌率。
•75%酒精酒精具有快速杀灭菌的作用，对于大部分的微生物有效。
•过氧化氢过氧化氢是一种氧化性消毒剂，可以对细菌、病毒等具有破坏作用。
常用浓度为0.5%。
2.2 材料准备一些常见的材料包括：•消毒液：按照说明书配制消毒液；•安全剪刀和镊子：用于在消毒盘中拿取（转移）外植物；•换酒精棉或棉签：用于在操作过程中对镊子、剪刀等工具进行消毒。
2.3 操作步骤•步骤1：将待消毒的组织（或植株）用干净的剪刀切割成小块，接下来严格实行消毒操作；•步骤2：取出消毒液，倒入消毒盘中准备使用；•步骤3：将需要消毒的部分逐一刀除，镊子夹取，浸泡消毒液内约5min，或按要求局部消毒；•步骤4：消毒后再挑开，洗2~3遍净草,放入干净培养瓶中即可。
3. 注意事项为了确保消毒的效果，需要注意以下几点：•操作前必须认真阅读消毒剂说明书，按说明书的要求配制消毒液；•操作时要佩戴手套，避免消毒剂对皮肤造成损害；•注意安全，要将消毒液、手套等放在固定的地方，以免造成不必要的伤害；•操作时保证环境清洁，避免再次感染。
4. 结束语对于植物组织培养实验，消毒步骤是必不可少的环节，正确地进行消毒可以最大限度地避免微生物对于实验结果的影响。
希望通过这个附录，对大家关于植物组织培养中的消毒有更深入的了解。
不同外植体的消毒方法
不同外植体的消毒方法1茎段和叶片的消毒植物的茎和叶多暴露于空气中，并且常带有毛、刺等附属物，在栽培上又受到泥土、肥料中杂菌污染，因此在消毒前要用自来水流水冲洗较长时间，然后用沾有肥皂粉或洗洁精的软毛刷刷洗，吸干水分后，再用75%的酒精浸泡10~30s，立即用次氯酸钠溶液浸泡10~15min消毒（按照材料的老嫩和枝条的坚实程度而定）；或用0.1%的升汞浸泡5~12min。
如果材料表面不平或者有绒毛，可在灭菌液中加几滴Tween-80以强化灭菌效果。
材料灭菌后应立即取出，用无菌水冲洗3~5次，用升汞处理的冲洗5~8次，然后用无菌滤纸擦拭干净或沥干，再进行切割和接种。
2果实及种子的消毒消毒前，果实或者种子先用自来水清洗，清洗时间根据材料的洁净程度而定。
一般10~20min，然后用纯酒精迅速漂洗一次。
果实用2%的次氯酸钠溶液浸泡10min后反复用无菌水冲洗，再剖出内部的种子或组织进行接种。
对于单个的种子灭菌时先用10%次氯酸钠溶液浸泡20~30min，再用10g/L溴水浸泡5min，然后用无菌水漂洗几次，最后剖出胚或胚乳进行接种。
3根及地下储藏器官的消毒这类材料可先用自来水冲洗干净，然后用软毛刷刷洗，用滤纸吸干后再用纯酒精漂洗，接着用20g/L次氯酸钠溶液浸泡20~30min消毒，最后用无菌水漂洗3~4次，滤纸吸干后即可进行接种。
4花药的消毒用于组织培养的花药，按小孢子发育时期要求，实际上大多数没有成熟，花药外面有萼片、花瓣或颖片保护着，通常处于无菌状态。
所以一般只对整个花蕾或幼穗进行表面消毒。
消毒时先去掉花蕾的萼片，用70%酒精擦洗花瓣，然后将整个花蕾浸泡在饱和漂白粉上清液中10min，再经无菌水清洗2~3次，即可接种。
文章来自《植物组织培养》，由易生组培整理。
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外植体的消毒与无菌苗的培养
外植体的消毒与无菌苗的培养一、目的通过在超净工作台上进行无菌操作训练，初步掌握组织培养的无菌操作技术及外植体的消毒灭菌技术二、原理灭菌是组织培养中重要的工作环节之一，是指采用理化手段杀死物体表面及其孔隙内的一切微生物，包括细菌的芽孢和真菌的孢子。
组织培养中要求无菌室、超净工作台达到无菌状态，植物材料也要经过消毒灭菌后再接种，接种人员的双手同样如此。
无菌室和超净工作台可采用甲醛、高锰酸钾混合薰蒸，结合紫外灯照射20～30分钟；外植体可采用70%酒精和10%的次氯酸钠杀菌；双手可用70%的酒精棉球擦拭；接种工具可采用70%酒精棉球擦拭，再经火焰灼烧灭菌。
MS培养基中包含有植物生长所需的各种营养元素，可为离体培养的生物材料提供近似于生物体内及外界生长生存的营养环境。
当植物材料灭菌后即可在适宜的培养基、适宜的温度条件下生长。
三、试剂及器材超净工作台、酒精灯、镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、无菌蒸馏水、无菌小烧杯、10%次氯酸钠、70％乙醇、废液缸、酒精棉球、打火机四、操作（1）准备工作：配制MS基本培养基，备用。
（2）用酒精棉球将超净台的操作表面擦拭干净。
（3）将实验器材及试剂放入超净工作台中，紫外灭菌25－30min。
（4）灭菌后打开超净风，吹5min。
（5）洗净双手，进入无菌室。
在超净台内点燃酒精灯，用酒精棉球反复擦拭双手，尤其要注意关节部位；超净台的表面也要用酒精棉球单方向擦拭（一般由里到外）。
（6）取适量种子置于100/50ml烧杯中，用70%的乙醇消毒30s-1min，然后将酒精倒入废液缸中，加入无菌水，轻轻晃动，清洗1-2min后，将无菌水倒入废液缸中。
（7）将10%次氯酸钠(NaClO)加入烧杯中，消毒10 min，期间不时晃动烧杯，使种子充分接触消毒剂；然后将NaClO溶液倒入废液缸中，加入无菌水，轻轻晃动，清洗3-4min后倾去，如此重复3-4次。
（8）将种子置于垫有滤纸的无菌培养皿中，吸干种子表面的水分。
外植体消毒方法比较
外植体消毒方法比较组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室日常管理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量高低。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生伤害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比较，为组培实验室的科学管理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包括紫外线照射法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比较新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照射法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照射时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照射对人体有一定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等症状。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严重时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛注视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯打开消毒时，应避免将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
植物外植体消毒、接种及愈伤组织(芽)诱导
常用消毒剂的区别：
植物细胞工程原理与技术实验
仪器、器具、试剂等：
超净工作台、养基、无菌水、镊子、培养皿、大烧杯、一块脱脂棉、酒 精灯、喷壶、火柴、2%次氯酸钠、75%乙醇、95%乙醇,无菌滤纸等
植物细胞工程原理与技术实验
操作步骤：
1 培养基、用具灭菌（实验一已完成） 2 将所用物品放出超净台中（除实验材料外），打开超净工作台的紫外灯，照射
实验二 植物外植体消毒、接种及愈伤组织（芽）诱导
• 实验目的： • 通过亲自操作掌握外植体接种的无菌操作技术。 • 领会无菌培养对实验材料消毒、接种的要求。 • 学习观察记载的方法。
植物细胞工程原理与技术实验
实验原理：
外植体消毒：外植体接种前要保证外植体处于无菌状态，因此，对于带菌的植物 材料，要进行植物外植体表面消毒。消毒既要使材料表面细菌除去，又要保证植 物材料的活性，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。 接种：已消毒的外植体经无菌操作，接到培养基上，这一过程叫做接种。
愈伤组织诱导：根据植物细胞的全能性，即分化细胞保留着全部的基因组，具有生 长发育所需的全部遗传信息，具有在适宜条件下发育成完整个体的潜能。
外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构的 功能的细胞团------愈伤组织。
影响外植体形成愈伤组织和愈伤组织分化的重要因素是植物生长调节剂。
实验中的注意事项 ：
75%乙醇30s
植物细胞工程原理与技术实验
实验中的注意事项 ：
次氯酸钠10min
旋转
无菌水洗4-5次
取出成熟胚
打开培养基
植物细胞工程原理与技术实验
接种
封口并标记
观察记录：
外植体消毒的一般步骤
外植体消毒的一般步骤在植物组织培养中，外植体消毒是非常重要的一步，它关系到实验的成败。
以下是外植体消毒的一般步骤：1.剪取外植体在消毒前，需要选取健康、无病虫害的外植体。
剪取时要保证无菌操作，避免污染。
一般选取植物的新鲜、幼嫩的部分作为外植体。
2.清洗外植体剪取后的外植体需要用无菌水或酒精进行清洗。
要多次清洗，以去除表面的杂质和细菌。
在清洗时，应注意不要损伤外植体。
3.切除两端为了防止两端感染，在外植体两端用火焰消毒或75%酒精浸泡2-3分钟。
然后切除两端，减小接触面积，避免污染。
4.浸泡在酒精中将外植体完全浸泡在75%酒精中，取出后用无菌水冲洗。
这样可使外植体表面的细菌和病毒失去活性，提高消毒效果。
5.取出并用无菌水冲洗将外植体从酒精中取出，用无菌水冲洗干净。
在冲洗时，要确保每个外植体都冲洗到位，以避免残留物影响培养效果。
6.消毒剂处理在外植体上涂抹一层消毒剂，进行进一步的杀菌处理。
涂抹时要适量，避免过度使用导致外植体损伤。
7.无菌水冲洗用无菌水冲洗外植体，重复多次，确保外植体表面没有消毒剂残留。
在冲洗时，要注意更换无菌水，以确保冲洗效果。
8.滤纸吸干表面水分在外植体表面用滤纸吸干水分，确保外植体保持干燥。
这一步可以有效避免培养过程中出现水分过多导致霉变的情况。
9.接种到培养基中将外植体轻轻插入培养基中，注意不要损坏外植体和培养基。
接种时需要保证无菌操作，避免带入新的污染源。
以上就是外植体消毒的一般步骤，希望能对你有所帮助。
在进行实验时，一定要注意无菌操作，确保每个步骤都符合要求，以获得良好的实验效果。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。
因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。
植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌
植物组织培养室及培养用具的消毒与灭菌一、目的要求1、通过实验，培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识。
2、掌握组织培养室的消毒及灭菌方法。
3、掌握培养用具的干热灭菌的一般操作技术。
二、仪器与用具1、用具：喷雾器、工作服、口罩、手套等。
2、药品：2%新洁尔灭，高锰酸钾，甲醛，70%酒精。
三、方法步骤（一）植物组织培养室的灭菌1、地面、墙壁和工作台的灭菌：用2%新洁尔灭喷雾。
（1）配方：取新洁尔灭原液20ml，加水980ml，配成2%新洁尔灭溶液。
（2）方法：将配好的2%新洁尔灭溶液倒入喷雾器内，进行均匀喷雾。
（3）注意事项：①墙壁、角落、地面喷雾要均匀，不要遗漏；②注意安全，在喷房顶时，要特别小心，防止药液雾滴掉入眼睛。
2、无菌室和培养室的灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸，1年中熏蒸1-2次。
（1）配方：每立方米空间用甲醛10ml加高锰酸钾5g的配比液熏蒸。
（2）方法：首先房子要密封。
然后在房子中间放一口缸或大烧杯，将称好的高锰酸钾放入缸内，再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入缸内，完毕，人迅速离开，并关上门，密封3天。
（3）注意事项：①操作前要戴好口罩及手套；②倒入甲醛时要小心，因为甲醛遇到高锰酸钾会迅速沸腾，并产生大量烟雾。
操作时人要迅速避开烟雾；③3天后，打开房间，搬走费液缸；一周后，方可进入操作。
3、在已经熏蒸过的房间内，用70%酒精纱布擦洗培养架、工作台。
4、用紫外灯照射20—30min。
5、使用前，再用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。
（二）培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）（1）洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。
自然晾干或烘箱干燥。
（2）包扎：用牛皮纸、报纸、纱布或锡箔纸把玻璃器皿和金属器械分别包扎好。
（3）装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水（水要淹没电热丝）。
（切忌干烧！）（4）装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶、装蒸馏水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金属器械等。
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程
请介绍初代培养时,外植体灭菌的一般操作流程植物组织培养技术是一种重要的生物技术，它可以利用植物体内的细胞分裂和分化的特性，实现对植物的无性繁殖、基因转化和育种等方面的研究和应用。
在进行植物组织培养时，为了避免外源微生物的污染和干扰，需要对外植体进行灭菌处理。
下面将介绍初代培养时外植体灭菌的一般操作流程。
一、外植体的选择和处理在进行组织培养前，需要从植物体中选取适合的外植体。
通常选择的外植体包括叶片、茎段、根尖等。
外植体的选择应该注意到其发育状态、大小、形态等因素。
同时，在选择外植体的过程中，需要注意对其进行清洗和表皮去除的处理，以保证灭菌的效果。
二、灭菌方法的选择在进行外植体灭菌时，需要选择适合的灭菌方法。
常用的灭菌方法包括化学灭菌和物理灭菌两种。
化学灭菌主要是通过使用消毒剂，如酒精、过氧化氢、次氯酸钠等，来杀灭外植体表面的微生物。
物理灭菌主要是通过高温、紫外线、电离辐射等方式来灭菌。
在选择灭菌方法时，需要考虑到其对外植体的影响，以及灭菌效果等因素。
三、灭菌操作流程1. 准备消毒液：根据选择的灭菌方法，准备相应的消毒液。
如果是化学灭菌，可使用70%的酒精或0.1%的次氯酸钠溶液；如果是物理灭菌，可使用高压蒸汽或紫外线灭菌设备。
2. 外植体的处理：将选好的外植体进行清洗和表皮去除的处理，以去除表面的微生物和杂质。
3. 外植体的浸泡：将处理好的外植体放入消毒液中浸泡，时间一般为5-10分钟。
4. 消毒液的去除：将浸泡好的外植体取出，用无菌的纸巾将其表面的消毒液吸干。
5. 外植体的干燥：将去除消毒液的外植体放在无菌的工作台上，用吸水纸或干燥器将其表面的水分吸干。
6. 灭菌：将处理好的外植体放入灭菌器中进行灭菌。
灭菌时间和温度根据灭菌方法和外植体的特性而定，通常为20-30分钟。
7. 储存：将灭菌好的外植体放在无菌的保存袋中，储存在无菌的环境中，以待后续的组织培养操作。
四、注意事项在进行外植体灭菌时，需要注意以下事项：1. 消毒液的选择和浓度应该适当，避免对外植体产生不良影响。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。
因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。
简述外植体消毒的一般步骤
简述外植体消毒的一般步骤外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体在植入过程中的安全性和生物相容性。
在外植体操作中，消毒程序的正确执行可以减少感染的风险，并提供一个理想的环境来促进愈合和整合。
下面是一般的外植体消毒步骤：第一步：准备工作在进行外植体消毒之前，首先要准备所有必要的工具和消毒剂。
工具包括外植体引导针、外植体引导模板、外植体钻头等。
消毒剂可以使用酒精、碘酒或含氯消毒液。
第二步：清洁工具在进行消毒之前，必须确保所有工具和设备都是清洁的。
可以用去菌刷或者清洁剂将工具进行清洗，以去除残留的血液、唾液和细菌等。
第三步：保证无菌操作为保证无菌操作，必须穿戴无菌手套和洁净实验服。
同时，确保工作台面干净，并使用消毒液擦拭。
第四步：消毒外植体在进行消毒之前，需要将外植体从原包装中取出，并将其置于无菌的容器中。
然后，使用适当的消毒剂将外植体进行浸泡。
消毒剂的种类和浸泡时间取决于外植体的材料和厂家的建议。
第五步：清洗外植体在消毒的过程中，外植体可能残留一些消毒剂。
为了去除这些残留物，需要将外植体用无菌生理盐水进行彻底的冲洗。
第六步：储存外植体一旦外植体经过消毒和清洗，就可以将其用无菌盒子或包装进行储存，以防止再次受到污染。
同时，标记每个外植体的型号和日期，以便追踪外植体的使用情况。
第七步：临床操作在外植体植入时，需要遵循严格的无菌操作规范。
医生必须穿戴干净的手套，将外植体直接植入预定的位置。
在植入之前，可以使用适当的锥形钻头进行预钻。
第八步：术后护理植入外植体后，术后护理也非常重要。
医生会提供一些口腔护理产品和建议，以帮助患者恢复和维护口腔的卫生。
总结起来，外植体消毒是一项非常重要的步骤，它能够保证外植体的安全性和生物相容性。
在进行消毒之前，必须做好准备工作，清洁工具和保证无菌操作。
然后，将外植体进行消毒和清洗，并妥善储存。
在临床操作中，要遵循无菌操作规范。
术后护理也非常重要。
通过正确的外植体消毒步骤，可以减少感染的风险，并提供一个良好的环境来促进愈合和整合。
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植物组培外植体消毒详解
外植体的消毒
植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂
常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果
①酒精
酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞
又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠
次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢
也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭
这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法
①茎尖、茎段及叶片等的消毒
消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。
消毒时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10~15min 或用0.1%升汞浸5~10min。
消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触。
若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴Tween-20，最后用无菌水冲洗3~5次。
②果实及种子的消毒
先用自来水冲洗10~20min，再用酒精迅速漂洗一下。
果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗2~3次。
种子则先用10%次氯酸钠浸泡20~30min，难以消毒的可用0.1%升汞消毒5~10min。
对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡8~10min。
③花药的消毒
用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。
消毒时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗2~3次。
④根及底下部器官的消毒
由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。
可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸钠中浸10~15min，最后用无菌水冲洗3次。
在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的消毒剂种类、浓度和消毒时间，切不可生搬硬套。
消毒的最佳效果应以最大限度地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好。