灵芝多糖提取
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
灵芝多糖的提取
灵芝多糖的提取方法
• 1. 溶剂提取法 水提醇沉法、酸提法、碱提法、超临界流体萃取法
• 2. 酶解提Fra Baidu bibliotek法
单一酶解法、复合酶解法 • 3. 强化提取法
超声波辅助提取法、微波辅助提取法、高压脉冲法
水提醇沉法流程
• 赤灵芝 烘干 粉碎 过筛 水浴提取 真空抽滤 浓缩 除 蛋白 醇沉多糖 脱色 干燥 多糖
多糖纯化
• 超滤法
• 季胺盐沉淀法
• 柱层析法
• 色谱法 • 其他方法
纤维素柱层析
柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内 纤维素平衡好, 然后将多糖混合物全部沉淀 于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水 溶液(如80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脱, 则 不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是分 子量最小的多糖, 最终洗脱的是分子量最大 的多糖。在洗脱过程中, 由于各种多糖在柱 上进行无数次的溶解和沉淀过程, 最终将各 种多糖分离开来。
• 一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。
Sevage 法优缺点
• 此种方法只能除去少量蛋白质，须反复多次，多糖有损失， 得率不高, 且氯仿对人体也有一定毒性, 操作时应注意。 • 该法优点是条件温和, 可避免多糖的降解。利用蛋白酶可
水解蛋白质的特性, 在多糖样品溶液中加入一些蛋白质水
解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶, 再用Sevage 法效果更佳。 • 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分 浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离
带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
谢谢观看
纤维素柱层析优缺点
• 这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其
为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流
出液的纯度高。
• 但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别
是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过
慢。
多糖纯度鉴定
• • • • 超离心 高压电泳 凝胶层析 HPLC 法
水提醇沉法的优缺点
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固 液比、提取时间以及提取次数等。 • 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，
灵芝多糖提取工艺
• 赤灵芝 心分离 蛋白 沉淀 预处理 传统水提 离 收集上清液 Seavage法除 透析 乙醇沉淀 离心收集 冷冻干燥 灵芝多糖
多糖的提取
•（1）原料的处理 •灵芝中的多糖存在于细胞壁中，粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出，但给后面的分离过滤造成 困难，使粗多糖溶液大量流失，造成多糖得率不高。 •（2）原料的复水 •加水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，便于多糖的浸出，减少蒸煮的时间。 •（3）多糖的浸提 •从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大，如用酸处理降低了多糖的含量； 用碱处理使多糖量增加，但寡糖含量则相对减少，且提取后液体需中和，程序繁琐；水提取成本低，方便实用，因此在 实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水，沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来，然后冷却，将浸提液离心。1）离心 与脱色 •（4）将蒸煮离心，然后加热浓缩， H202加热脱色。 •（5）除蛋白
常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。
• 除蛋白的方法传统上有 Sevage 法、三氯乙
酸法、三氟三氯乙烷法等。
Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特
点，用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或
4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质
变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶
剂层交界处的变性蛋白质。
•灵芝子实体蛋白质含量较高，不除去蛋白质，导致粗多糖含量升高，产生偏差，所以在醇析之前，必须除去蛋白质。将
脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。 •（6）多糖的醇析和干燥 •萃取液中加入乙醇，使多糖与乙醇生成水不溶性化合物，离心，用丙酮漂洗沉淀，除去其中的脂类和色素，然后干燥。
除蛋白
• 采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中
灵芝多糖的提取方法
• 1. 溶剂提取法 水提醇沉法、酸提法、碱提法、超临界流体萃取法
• 2. 酶解提Fra Baidu bibliotek法
单一酶解法、复合酶解法 • 3. 强化提取法
超声波辅助提取法、微波辅助提取法、高压脉冲法
水提醇沉法流程
• 赤灵芝 烘干 粉碎 过筛 水浴提取 真空抽滤 浓缩 除 蛋白 醇沉多糖 脱色 干燥 多糖
多糖纯化
• 超滤法
• 季胺盐沉淀法
• 柱层析法
• 色谱法 • 其他方法
纤维素柱层析
柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内 纤维素平衡好, 然后将多糖混合物全部沉淀 于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水 溶液(如80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脱, 则 不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是分 子量最小的多糖, 最终洗脱的是分子量最大 的多糖。在洗脱过程中, 由于各种多糖在柱 上进行无数次的溶解和沉淀过程, 最终将各 种多糖分离开来。
• 一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。
Sevage 法优缺点
• 此种方法只能除去少量蛋白质，须反复多次，多糖有损失， 得率不高, 且氯仿对人体也有一定毒性, 操作时应注意。 • 该法优点是条件温和, 可避免多糖的降解。利用蛋白酶可
水解蛋白质的特性, 在多糖样品溶液中加入一些蛋白质水
解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶, 再用Sevage 法效果更佳。 • 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分 浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离
带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
谢谢观看
纤维素柱层析优缺点
• 这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其
为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流
出液的纯度高。
• 但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别
是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过
慢。
多糖纯度鉴定
• • • • 超离心 高压电泳 凝胶层析 HPLC 法
水提醇沉法的优缺点
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固 液比、提取时间以及提取次数等。 • 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，
灵芝多糖提取工艺
• 赤灵芝 心分离 蛋白 沉淀 预处理 传统水提 离 收集上清液 Seavage法除 透析 乙醇沉淀 离心收集 冷冻干燥 灵芝多糖
多糖的提取
•（1）原料的处理 •灵芝中的多糖存在于细胞壁中，粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出，但给后面的分离过滤造成 困难，使粗多糖溶液大量流失，造成多糖得率不高。 •（2）原料的复水 •加水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，便于多糖的浸出，减少蒸煮的时间。 •（3）多糖的浸提 •从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大，如用酸处理降低了多糖的含量； 用碱处理使多糖量增加，但寡糖含量则相对减少，且提取后液体需中和，程序繁琐；水提取成本低，方便实用，因此在 实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水，沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来，然后冷却，将浸提液离心。1）离心 与脱色 •（4）将蒸煮离心，然后加热浓缩， H202加热脱色。 •（5）除蛋白
常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。
• 除蛋白的方法传统上有 Sevage 法、三氯乙
酸法、三氟三氯乙烷法等。
Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特
点，用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或
4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质
变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶
剂层交界处的变性蛋白质。
•灵芝子实体蛋白质含量较高，不除去蛋白质，导致粗多糖含量升高，产生偏差，所以在醇析之前，必须除去蛋白质。将
脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。 •（6）多糖的醇析和干燥 •萃取液中加入乙醇，使多糖与乙醇生成水不溶性化合物，离心，用丙酮漂洗沉淀，除去其中的脂类和色素，然后干燥。
除蛋白
• 采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中