灵芝多糖提取
灵芝多糖的提取
灵芝多糖的提取近年来，药理学和免疫学的多方研究表明，灵芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有广泛的药理活性，排毒、抗放射，提高肝脏、骨髓合成dna、bna的能力，抗肿瘤增强机体免疫等效果。
因此多糖的提取为广大科研人员药研制者所重视，他们不断研究和探索灵芝多糖提取的方为弄清灵芝多糖的化学成分提供有力的理论依据，同时为许多疾病患者带来福音。
一、灵芝茵丝体多糖的提取（一）材料1.菌种：湖南省食用菌研究所提供的韩国灵芝母种。
2.种子培养基：玉米粉2％大米粉2％蔗糖2％磷酸二氢钾o.1g硫酸镁0.05％ph值自然3.发酵培养基：麦麸浸出液10％葡萄糖2％硫酸铵0.2％磷酸二氢钾0.2％ph值自然（二）方法1.种子培养：2.发酵培养生产菌丝体。
3.测定干、湿菌丝体。
将发酵液进行离心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，进行高速（3000转／分）密度梯度离心5分钟，取上层菌丝体，洗净蔗糖再压干，即得湿菌体，然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。
分别称取其重量。
4.多糖的提取。
（1）菌丝体预处理。
取适量的灵芝湿菌体，用乙醇等有机溶剂进行处理，以除去湿菌体中的脂类物质，同时使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。
（2）用热水提取多糖。
取上面经预处理的灵芝湿菌体，放人1：20的热水（95℃）中浸提，一次3小时，连续浸提3次，合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积，再用3倍体积的95％乙醇混合，静置10－12小时，再离心，最后加入75％的乙醇反复洗涤，以沉淀多糖。
此沉淀物为粗多糖，其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质，一般要经过纯化。
（3）多糖的纯化，去蛋白质和deae纤维素柱层析。
去蛋白质一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离，直至氯仿与水的界面无沉淀为止，且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。
多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法：取脱蛋白后的多糖，分别以0.025mol／l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱，然后用0.2％恿铜硫酸液比色测定吸收度，收集有多糖的洗脱液，再浓缩脱盐即得所需的多糖。
灵芝多糖实验报告
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。
- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。
- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。
- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。
- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。
- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。
- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。
- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。
- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：
1. 材料准备：选择新鲜的灵芝或者灵芝干燥品作为原料，将其进行切碎或研磨，以增加提取效果。
2. 提取溶剂的选择：常用的提取溶剂有水、乙醇、甲醇等。
具体选择溶剂需要根据灵芝多糖的性质和应用需求来确定。
3. 提取方法：常用的提取方法有水煮提取法、连续提取法、酸提取法、超声波提取法等。
不同的提取方法对灵芝多糖的提取效果有所差异。
4. 温度和时间控制：提取温度和时间对灵芝多糖的提取效果也有影响。
一般来说，较高的温度和较长的提取时间可提高灵芝多糖的提取率，但同时也可能损失一部分活性成分。
5. 过滤和浓缩：将提取好的液体进行过滤去杂质，然后使用浓缩设备，如旋转蒸发器、真空浓缩器等，将溶剂去除或浓缩。
6. 干燥和粉碎：将浓缩后的灵芝多糖进行干燥，使其转化为粉末或颗粒状。
7. 质量控制：对提取得到的灵芝多糖进行质量检测，包括测定灵芝多糖的含量、
分子量、结构等。
需要注意的是，提取灵芝多糖的工艺可以根据具体需要进行调整和改进。
不同的提取工艺可能会有不同的影响，因此在实际操作过程中，需要根据实际情况来选择适合的提取工艺。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵的中药材，被认为具有多种生物活性成分，如多糖、蛋白质、三萜类及其衍生物等。
其中，多糖是灵芝中最为活性的成分之一，被广泛研究并应用于治疗多种疾病。
因此，有效提取灵芝多糖成分成为目前研究的热点之一。
灵芝多糖是一种大分子水溶性多糖，其化学结构较为复杂。
因此，灵芝多糖的提取方法需要考虑多种因素，如提取剂种类、浸提时间、浸提温度、提取pH值等。
以下将介绍几种常见的灵芝多糖提取方法。
1. 热水浸提法热水浸提法是目前最为常见的灵芝多糖提取方法之一。
该方法需要将干燥的灵芝粉末放入锅中，加入水（一般为灵芝粉末重量的10倍），加热至沸腾，然后继续煮沸2~3小时。
提取过程中可以根据需要调整pH值。
接下来，将提取液过滤并浓缩，随后加入适量的乙醇，混合后反复沉淀，干燥即可得到灵芝多糖。
酸性水提法是利用酸性水溶解灵芝中多糖，并进一步提取的方法。
先将灵芝粉末放入锅中，加入酸性水（如2%的HCl），在40~60摄氏度下回流约2~3小时，再过滤获得提取液，使用乙醇或丙酮沉淀得到灵芝多糖。
4. 超声波提取法超声波提取法是一种无机溶剂、无紧密块质量平衡的物质传递技术，可以提高灵芝多糖的提取率和产量。
该方法需要将灵芝粉末与提取剂（一般为水或酒精）混合，放入超声波提取器中，以适当频率、功率和时间进行超声波处理，进而将多糖分子破坏释放。
提取后用纸滤掉残渣，浸提液中加上酒精反复沉淀、洗涤，最后干燥即可得到灵芝多糖。
总之，不同的提取方法对灵芝多糖的提取效率和产量具有影响，需要根据研究目的和设备条件合理选择。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝是一种珍贵的中草药，在传统中医药和现代药物领域都有重要的应用价值。
灵芝
中的有效成分主要包括多糖、三萜类化合物和蛋白质等。
提取这些有效成分可以增强灵芝
的药用价值，下面将介绍一些灵芝中有效成分的提取方法。
一、多糖的提取方法：
1. 热水提取法：将灵芝切碎，加入适量的开水，水温保持在80-100℃之间，连续浸
泡2-3小时。
之后，过滤得到提取液，再用醇沉淀得到多糖。
2. 酶解法：将灵芝粉末加入含有酶的溶液中，温度保持在50℃左右，酶解2-3小时。
之后通过离心或过滤，得到多糖的提取液。
二、三萜类化合物的提取方法：
1. 乙醇提取法：将灵芝切碎，加入适量的乙醇中，浸泡12-24小时。
之后，过滤得到提取液，再用乙醇沉淀得到三萜类化合物。
2. 超临界流体萃取法：利用超临界二氧化碳作为溶剂，将灵芝粉末加入超临界流体
萃取设备中，进行高温高压的提取。
之后通过减压，得到三萜类化合物的提取物。
需要注意的是，在提取灵芝中有效成分的过程中，应根据具体成分的性质和目的选择
合适的提取方法。
提取过程中也需要控制温度、时间、浓度等条件，以保证提取效果和成
分的纯度。
为了确保提取物的质量和安全性，提取过程中还要注意卫生和消毒，以防止细
菌和其他有害物质的污染。
灵芝中有效成分的提取方法多种多样，选择合适的提取方法可以充分发挥灵芝药用价值。
在提取过程中要严格控制条件，确保提取物的纯度和质量。
提取物的应用还需要进一
步研究和开发，以发挥其在医药和保健品领域的作用。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法
灵芝是一种珍贵的中药材，其含有许多有益健康的营养成分，如多糖、三萜类化合物、酚类化合物以及脂肪酸等。
目前，灵芝的提取方法主要有水提法、乙醇提法、超声波提法、微波提法、辅助酶法以及超高压萃取法等多种类型。
下面我们将介绍其中几种常用的灵芝
有效成分提取方法。
1.水提法
水提法是制备灵芝多糖类成分的一种常见方法，同时还可以提取出其它生物活性成分。
常规操作流程如下：将灵芝粉末或切碎的灵芝样品加入蒸馏水中，加热提取并进行过滤、
浓缩和干燥等步骤。
此方法简单易行，操作步骤少且成本低，但是水提法中提取出来的成
分比较复杂，同时对提取温度、提取时间等因素的要求较高。
2.乙醇提法
3.超高压萃取法
超高压萃取法是一种较新的灵芝有效成分提取方法，具有其它提取方法所不具备的优点。
它利用高压下超临界CO2来提取灵芝中的生物活性成分。
操作流程如下：将灵芝样品
放入超高压萃取仪中，在高压CO2下进行提取，然后进行分离、过滤、收集和浓缩等步骤。
超高压萃取法能够高效地提取出多种灵芝成分，同时操作过程中不需要使用有毒有害的溶剂，减少了对环境的污染。
此外，这种方法也具有灵敏度高、操作流程简单等优势。
4.微波提法
除此之外，灵芝有效成分还可以通过超声波提法、辅助酶法等方式进行提取。
不同的
提取方法具有不同的特点和优劣势，我们需要结合实际情况进行选择。
总之，选择合适的
灵芝有效成分提取方法对保证提取效果和成本控制非常重要。
灵芝多糖研究实验报告
灵芝多糖研究实验报告灵芝多糖研究实验报告实验目的：1. 测定灵芝多糖的含量；2. 研究灵芝多糖对人体免疫功能的影响。
实验材料：1. 灵芝提取物；2. 高效液相色谱仪；3. 免疫功能检测试剂盒；4. 实验动物，如小鼠。
实验步骤：1. 提取灵芝多糖：取一定量的灵芝样品，加入适量的水，用超声波浸泡2小时，过滤获得灵芝提取液；2. 测定灵芝多糖含量：用高效液相色谱仪测定灵芝提取液中多糖的含量；3. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：将实验动物分为实验组和对照组，实验组给予灵芝多糖，对照组不给予。
观察两组动物的免疫功能指标，如白细胞计数、淋巴细胞活性等。
实验结果：1. 测定灵芝多糖含量：灵芝提取液中多糖的含量为X g/L（样品浓度）。
2. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：实验组动物的白细胞计数为X（单位），对照组动物的白细胞计数为X（单位）。
实验组动物的淋巴细胞活性为X（单位），对照组动物的淋巴细胞活性为X（单位）。
结论：1. 灵芝中含有一定量的多糖，通过高效液相色谱仪可以测定其含量；2. 灵芝多糖可以提高人体免疫功能，表现为增加白细胞计数和提高淋巴细胞活性。
讨论：本实验结果表明灵芝多糖对人体免疫功能具有一定的影响，但还需要进一步研究来确定具体的机制和效应。
此外，本实验只使用了动物作为实验对象，将来还可以考虑人体试验的进行，以进一步验证实验结果。
此外，对于灵芝样品的提取方法，还可以考虑使用其他技术来进行提取，以提高多糖的得率和提取效果。
感想：通过本次实验，我对灵芝多糖的研究有了更深入的了解。
灵芝多糖作为一种天然产物，具有重要的药用价值。
通过研究其免疫功能，可以为人类的免疫调节和疾病治疗提供有益的启示。
希望未来能有更多的研究报道，以推动灵芝多糖的应用和发展。
灵芝多糖提取
灵芝多糖提取工艺
赤灵芝 离心分离 除蛋白 收集沉淀
预处理
传统水提
收集上清液
Seavage法
透析 乙醇沉淀 离心
冷冻干燥 灵芝多糖
多糖的提取
（1）原料的处理 灵芝中的多糖存在于细胞壁中，粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出，但给后面的分离过滤造 成困难，使粗多糖溶液大量流失，造成多糖得率不高。 （2）原料的复水 加水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，便于多糖的浸出，减少蒸煮的时间。 （3）多糖的浸提 从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大，如用酸处理降低了多糖的含量 ；用碱处理使多糖量增加，但寡糖含量则相对减少，且提取后液体需中和，程序繁琐；水提取成本低，方便实用，因此 在实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水，沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来，然后冷却，将浸提液离心。1）离 心与脱色 （4）将蒸煮离心，然后加热浓缩， H202加热脱色。 （5）除蛋白 灵芝子实体蛋白质含量较高，不除去蛋白质，导致粗多糖含量升高，产生偏差，所以在醇析之前，必须除去蛋白质。 将脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。 （6）多糖的醇析和干燥 萃取液中加入乙醇，使多糖与乙醇生成水不溶性化合物，离心，用丙酮漂洗沉淀，除去其中的脂类和色素，然后干燥 。
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纤维素柱层析优缺点
这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其 为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流 出液的纯度高。
但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别 是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过 慢。
多糖纯度鉴定
超离心 高压电泳 凝胶层析 HPLC 法
水提醇沉法的优缺点
除蛋白
采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中 常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。
浅谈四种方法提取灵芝粗多糖的得率试验
心１ ０ ｍｉ ｎ， 去 掉上 清 。 用１ ０ ｍｌ 乙醇 溶液 将 剩 下 的沉 淀 物洗 涤 、 离
心。 用 水 将 其转 入 到 圆 底烧 瓶 ， 加 入５ ０ ｍｌ 蒸馏 水 ， 装上 冷凝 管 ， 放入 沸 水 浴 中提 取 ２ ｈ， 待 冷 却 到 室温 后 ， 过滤， 将 上 清液 再 转 移 到１ ０ ０ ｍｌ 的容量 瓶 中 ， 洗 涤残 渣 ２ —３ 次， 最 后 将洗 涤 液转 移 到 容 量瓶中 ， 加水， 定容 。 此溶液就是等待检测的粗多糖溶液。
００ ８ ５ ６ ±０ ． ０ ０ ６ ４
．
钠溶液定容到５ ０ ｍｌ 。 然 后 后 面 的 操 作 跟沸 水 提 取 法 就 一 样 了 。
１ ． ４ 稀 碱 法２
罄
鼎
操作方法基本与第三种类似 ， 只是 在 最 后 ， 用 无 水 乙醇 沉
黪
淀 的时候 ， Ｌ 的盐 酸 并将ｐ Ｈ控 制在 ６ ． ０
指， 下 面 就 对 灵 芝 中粗 多 糖 四种 提 取 方 法 的得 率 进 行 分 析 。
１ ． ２行 标 法
１灵芝粗 多糖的提取方法
１ １沸 水 提 取 法
将０ ． ５ ｇ 一１ ｇ 灵芝 超 细粉 末加 入 到５ ０ ｍｌ 的离 心管 中， 用５ ｍｌ 水 浸泡 ， 再缓 慢 加 入 ２ ０ ｍｌ 无水乙醇 ， 摇匀 ， 是其充分混合， 然 后 放 置在 超声 提取 器 中 ， 待超 声 提 取３ ０ ｍｉ ｎ 后， 以４ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 的速 度离
将１ ｇ 灵 芝超 细粉 末 ， 加入５ ０ ｍｌ 的离 心 管 中 ， 在 其 中加 入
２ ５ ｍｌ 双 蒸馏 水 ， 是 灵 芝超 细 粉 末 能 够 充分 的浸 泡 ， 然 后 放 置 在 沸 水 浴 中２ ｈ， 离 心 后 收集 上 清 ， 待其 沉 淀 后 ， 再 加入 ２ ５ ｍｌ 双 蒸馏 水， 放置 在 沸 水浴 中 １ ｈ， 离 心后 收 集 上清 ， 将 两次 得 到 的上 清溶 液混 合 ， 用双 蒸 馏 水将 其 定容 ｇ １ ］ ５ ０ ｍｌ ， 从 中取 出 １ ｍｌ ， 加入５ ｍｌ 无 水 的 乙醇 ， 摇 匀 后放 置 在４ ℃的环 境 中 １ ２ ｈ ， 待 其 取 出后 以４ ０ ０ ０ ｒ ／
正交试验优选灵芝多糖的提取工艺
正交试验优选灵芝多糖的提取工艺陈乃东;陈琼;何健【摘要】[目的]对灵芝多糖的提取工艺进行优选.[方法]将灵芝在50℃条件下干燥恒重,过40目筛,用无水乙醇对灵芝干粉进行脱脂预处理,脱脂完毕风干后在不同的料液比、温度、提取时间的条件下进行单因素试验,并在单因素试验的基础上进行正交试验获得最佳提取工艺.[结果]灵芝多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶20(W/V,g/ml,下同),提取时间为3h,提取温度为90℃；在此条件下,灵芝多糖得率可达1.61％.[结论]该方法优选了灵芝多糖的提取工艺条件,为灵芝多糖的进一步开发利用提供了依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)019【总页数】3页(P8146-8148)【关键词】灵芝(GANODERMA);多糖;正交试验【作者】陈乃东;陈琼;何健【作者单位】皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012;皖西中药与天然药物工程技术研究中心,安徽六安237012;皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012;皖西学院生物与制药工程学院,安徽六安237012【正文语种】中文【中图分类】S567.3+1灵芝(GANODERMA)是多孔菌科真菌赤芝［Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.］或紫芝［Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang］的干燥子实体［1－2］，全国大部分地区均有分布，多生于栎树及其他阔叶树的腐木上。
商品用灵芝大多为人工培养，全年采收，除去杂质，剪除附有朽木、泥沙或培养基质的下端菌柄，阴干，然后在40～50℃烘干［3］。
灵芝首载于东汉时期我国最早的本草学专著《农本草经》，历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，故将其列为上品［4］。
灵芝多糖为灵芝的主要成分之一，微溶于水，在热水中溶解度较大，不溶于乙醇等有机溶剂。
灵芝味甘性平，归心、肺、肝、肾经，能补气安神、止咳平喘。
灵芝多糖超声提取工艺流程
灵芝多糖超声提取工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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灵芝多糖快速提取工艺
正交实验法优化灵芝多糖快速提取工艺目的: 对灵芝多糖的快速提取工艺方法进行了优化，为工业化生产提供可靠的实验数据和理论依据。
方法: 采用正交试验设计提取方法，氧化酶反应比色法测定多糖含量。
结果最佳提取工艺为A3B2C3。
影响因素的大小依次为：脉冲数、料液比、电场强度。
此法提取的灵芝中多糖含量为0.416% ，得膏率达6.23%。
结论: 本提取工艺可行，经济、省时、回收率高。
灵芝提取物含有灵芝多糖、三萜类、蛋白质、微量元素、氨基酸等成分。
多糖能强化人体的免疫系统，是灵芝治疗各种疾病的主要成分[1]。
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。
因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力、提高机体耐缺氧能力、消除自由基、抑制肿瘤、抗辐射、延长寿命等。
灵芝多糖的提取方法多为加热浸提或超声提取等，费时、费力，耗能较大。
本试验以灵芝多糖和浸膏得率为指标，采用正交试验法优化高频电场提取工艺，具有快速、节能、低温提取等特点。
1 仪器与试药1.1 仪器LDT-100/4-25.2型中药高压脉冲电场提取装置（长春华迪生物科技开发有限公司）；OSB-2000旋转蒸发器（日本东京理化株式会社）；电子天平ALC-210.4（Sartorius group）；DZKW-D恒温数显水浴锅（河北黄骅市航天仪器厂）；101-3C型烘箱（上海实验仪器厂）；754型紫外可见分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）1.2 试药灵芝购于吉林市，经中国农业科学院特产研究所常维春研究员鉴定为赤芝；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 正交实验2.1.1 因素水平设计从安全性和灵芝多糖的特性考虑，采用水为提取溶剂；由于是连续流动进样提取，不需考虑提取温度、提取时间和提取次数的影响；又因为流速与脉冲数成相关，所以影110响提取的因素主要有：电场强度、脉冲数、料液比。
采用L9(34)正交表优化提取条件，重点考察上述3个因素，以浸膏得率和灵芝多糖为考察指标，见表1。
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灵芝多糖的提取方法
• 1. 溶剂提取法 水提醇沉法、酸提法、碱提法、超临界流体萃取法
• 2. 酶解提取法
单一酶解法、复合酶解法 • 3. 强化提取法
超声波辅助提取法、微波辅助提取法、高压脉冲法
水提醇沉法流程
• 赤灵芝 烘干 粉碎 过筛 水浴提取 真空抽滤 浓缩 除 蛋白 醇沉多糖 脱色 干燥 多糖
• 一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。
Sevage 法优缺点
• 此种方法只能除去少量蛋白质，须反复多次，多糖有损失， 得率不高, 且氯仿对人体也有一定毒性, 操作时应注意。 • 该法优点是条件温和, 可避免多糖的降解。利用蛋白酶可
水解蛋白质的特性, 在多糖样品溶液中加入一些蛋白质水
解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶, 再用Sevage 法效果更佳。 • 此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
•灵芝子实体蛋白质含量较高，不除去蛋白质，导致粗多糖含量升高，产生偏差，所以在醇析之前，必须除去蛋白质。将
脱色液用Sevage圈法除去蛋白质。 •（6）多糖的醇析和干燥 •萃取液中加入乙醇，使多糖与乙醇生成水不溶性化合物，离心，用丙酮漂洗沉淀，除去其中的脂类和色素，然后干燥。
除蛋白
• 采用醇沉或其它溶剂沉淀得到的粗多糖中
灵芝多糖提取工艺
• 赤灵芝 心分离 蛋白 沉淀 预处理 传统水提 离 收集上清液 Seavage法除 透析 乙醇沉淀 离心收集 冷冻干燥 灵芝多糖
多糖的提取
•（1）原料的处理 •灵芝中的多糖存在于细胞壁中，粉碎处理子实体多糖得率大。较细的颗粒有利于多糖的浸出，但给后面的分离过滤造成 困难，使粗多糖溶液大量流失，造成多糖得率不高。 •（2）原料的复水 •加水浸泡，使粉末充分吸水膨胀，便于多糖的浸出，减少蒸煮的时间。 •（3）多糖的浸提 •从灵芝中提取多糖的提取剂有酸液、碱液、酶及热水。不同提取液多糖得率差异较大，如用酸处理降低了多糖的含量； 用碱处理使多糖量增加，但寡糖含量则相对减少，且提取后液体需中和，程序繁琐；水提取成本低，方便实用，因此在 实验中用水作提取剂。将复水的浆体里加入水，沸水蒸煮使菌多糖被充分浸提出来，然后冷却，将浸提液离心。1）离心 与脱色 •（4）将蒸煮离心，然后加热浓缩， H202加热脱色。 •（5）除蛋白
多糖纯化
• 超滤法
• 季胺盐沉淀法
• 柱层析法
• 色谱法 • 其他方法
纤维素柱层析
柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内 纤维素平衡好, 然后将多糖混合物全部沉淀 于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水 溶液(如80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脱, 则 不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是分 子量最小的多糖, 最终洗脱的是分子量最大 的多糖。在洗脱过程中, 由于各种多糖在柱 上进行无数次的溶解和沉淀过程, 最终将各 种多糖分离开来。
常含有较多的蛋白质, 需要除蛋白。
• 除蛋白的方法传统上有 Sevage 法、三氯乙
酸法、三氟三氯乙烷法等。
Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特
点，用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或
4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质
变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶
剂层交界处的变性蛋白质。
适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分 浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离
带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
谢谢观看
纤维素柱层析优缺点
• 这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其
为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流
出液的纯度高。
• 但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别
Байду номын сангаас
是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过
慢。
多糖纯度鉴定
• • • • 超离心 高压电泳 凝胶层析 HPLC 法
水提醇沉法的优缺点
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固 液比、提取时间以及提取次数等。 • 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，