色谱柱冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书;色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督;总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好;对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考;min缓慢升高到min不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例如80%、50%、10%甲醇或乙腈各冲洗至少30分钟;若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂将缓冲盐溶液换成水冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析;样品分析完后,色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相;如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里;对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统水：90-10；乙腈：10-90冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈;需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间1小时以上冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱;大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~8,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱;在每次进行样品分析时,要保证流动相包括盐、缓冲盐、酸等与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂不低于10%或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子;硅胶柱、正相手性色谱柱包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA 系列如OA-3100、OA-3300对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速流速为~min冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析;硅胶柱及正相手性柱不能过水相对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相有机相不低于50%,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相如是不含盐的反相溶液如水/乙腈；水/甲醇,先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇,先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱;使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,或者直接用正己烷－异丙醇90：10冲洗,并保存在正己烷－异丙醇90：10中;如长时间未用,则保存在正己烷中;需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱,最后保存在纯的有机溶剂中;在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子;反相手性色谱柱如：CHIRALCEL OZ-3R：同C18柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有waters IC-Pak TM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱钙型;对于waters IC-Pak TM anion 和waters阳离子交换柱钙型,新柱子使用前用高纯水小流速min缓慢升高到min冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱;在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相;对于磺酸基阳离子柱含有硅胶基柱的,使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱;分析完样品后,对于waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中;对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中参照柱子说明书;冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整;需要特别强调的是waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型是不能过有机相纯有机溶剂或有机溶液,否则会损坏色谱柱;氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同;对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析;液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水有时候用温水效果更好冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗;若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中; 2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇；清洗柱塞杆的溶剂为了清洗流动相中析出的盐,一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈;3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路包括进样器和检测池若被污染,系统应做清洗和钝化处理;一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化;清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢;钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜;30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀;6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀;方法：将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以min流速过渡至少30分钟,待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7用pH试纸测试,清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7,钝化完成;用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路,备用;。
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书、色谱柱维护保养就是很重要得,关系到色谱柱得使用寿命与检测结果得准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员与使用者互相监督。
总得原则就是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料;另外没有使用得情况下,一定要保证两端得堵头封好、对于具体得色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养得具体方法与注意事项,以便使用者参考。
(0.2mｌ/min缓慢升高到0.5ml/miｎ)不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为1。
0ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相得比例(如80%、5０％、1０%甲醇或乙腈)各冲洗至少３0分钟。
若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中(如８0%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议得溶剂中);色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例得有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水)冲洗色谱柱１5分钟,然后再换成流动相进行样品分析。
样品分析完后,色谱柱维护与保养方法:流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,1、０ｍl/ｍin得流速冲洗至少30min,再用8０％甲醇或乙腈冲洗至少30ｍin,柱子保存在80％甲醇或乙腈里(具体问题具体分析,洗脱程序可以就是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存得就是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相)。
如柱子长时间未用,则柱子保存在1０0％得甲醇或乙腈里。
对于含有离子对试剂得流动相如庚烷磺酸钠与十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统(水:９0-１0;乙腈:10－90)冲洗时间要稍长些,然后保存于90％乙腈。
需要特别强调得就是,目前所有得C18柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上)冲洗,除非有专门耐水得专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱得固定相流失与相塌陷,损坏色谱柱。
大多数反相色谱柱得pH稳定范围就是２～8,有得ｐＨ稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件得pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽得柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱。
C18色谱柱保存、清洗、再生
C18色谱柱保存、清洗、再生方法
一、色谱柱的保存方法
1. 纯乙腈或甲醇保存色谱柱（当使用流动相中含有盐时，注意首先用20倍柱体积的
5 %-10%的乙腈-水或5 %-10%甲醇-水流动相过渡）。
二、色谱柱的清洗方法
1. 以乙腈:水（1 : 9,v/v）→乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）依次冲洗，然后进行使用。
2.多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上，引起柱压升高伴随峰形展宽的现
象。
此时，可将色谱柱与检测器断开，将色谱柱反接后进行冲洗。
三、色谱柱的再生方法：
1. 一般污染再生：乙腈:水（1 : 9,v/v）→ 乙腈→ 氯仿（或异丙醇）→ 乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）→流动相，分别冲洗10～20倍柱体积。
2. 蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈：异丙醇（1 : 2,v/v,
内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。
（注意每项过渡时，压力的控制，压力最好控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。
色谱柱清洗及保存方法
色谱柱清洗及保存方法1、尺寸排阻色谱柱：（1）树脂基质分子尺寸排阻色谱柱①离子性吸附：对于阳离子性吸附物质，通过提高盐浓度进行过柱清洗（1mol/L的醋酸缓冲液）②疏水性吸附：对于疏水性吸附物质，可通过提高有机溶剂的浓度（PW·PW XL：50%、α及SuperAW：100%可）进行过柱清洗。
③复合吸附：对于阳离子性·疏水性物质的去除，可提高盐浓度进行过柱，水洗后，提高有机溶剂浓度进行过柱。
（2）硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱①碱性物质的去除（离子性吸附）：通过提高淋洗液的盐浓度（通常0.5mol/L）进行过柱清洗。
②疏水性吸附的去除（疏水性吸附）：在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。
本法请注意缓冲液中盐的析出。
③在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂：在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性剂（Triton、Tween、Brij等）后进行过柱清洗。
但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。
2、离子交换色谱柱、（1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。
如果经过冲洗效果没有得到明显改善，则需要更换预柱滤片或保护柱。
对于Proteomix阴离子交换色谱柱，清洗溶液为含150mM硝酸钾的75%乙腈溶液（用HCl调节pH至2）。
对于Proteomix阳离子交换色谱柱，清洗溶液为含1.0M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。
（2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。
当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高，色谱峰形也会出现展宽。
这时就需要清洗色谱柱了。
下面是色谱柱清洗的基本步骤：①将色谱柱与检测器断开；②将色谱柱反接后进行冲洗；③将流速设置到所推荐的最大流速的50%进行冲洗。
注意柱压的变化。
色谱柱冲洗方法
色谱柱冲洗方法（最新版4篇）篇1 目录1.色谱柱冲洗的必要性2.色谱柱冲洗的方法2.1 水冲洗法2.2 有机溶剂冲洗法2.3 缓冲盐冲洗法2.4 反冲法3.色谱柱冲洗的注意事项篇1正文色谱柱是液相色谱系统中的核心部件，它在样品分离过程中起着至关重要的作用。
然而，在色谱柱使用过程中，柱内可能会积累一些脏物或盐析物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
下面我们将介绍几种常见的色谱柱冲洗方法。
首先，水冲洗法是最常用的色谱柱冲洗方法。
此方法操作简便，只需将色谱柱连接到水流系统上，使用纯水进行冲洗。
篇2 目录一、色谱柱冲洗的必要性二、色谱柱冲洗的方法1.水冲洗法2.纯有机相冲洗法3.缓冲盐冲洗法4.反冲法5.专用清洗剂冲洗法三、不同类型色谱柱的冲洗方法1.反相色谱柱2.正相色谱柱3.离子交换色谱柱4.凝胶渗透色谱柱四、色谱柱冲洗的注意事项篇2正文色谱柱是高效液相色谱系统中的核心部件，其在样品分离过程中起到关键作用。
然而，在长时间的使用过程中，色谱柱内部可能会积累一些脏物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
色谱柱冲洗的方法有很多种，下面我们分别进行介绍：1.水冲洗法：这是一种最常用的色谱柱冲洗方法。
使用纯水或含有少量缓冲盐的水进行冲洗，可以有效去除色谱柱内部的脏物。
对于反相色谱柱，可以使用纯水或甲醇/水混合溶液进行冲洗。
2.纯有机相冲洗法：在冲洗色谱柱时，可以使用纯有机溶剂（如乙腈、甲醇等）来代替水相。
这种方法适用于具有疏水性的色谱柱，如 C18、C8 等。
3.缓冲盐冲洗法：在冲洗过程中，可以加入一定浓度的缓冲盐，以保持色谱柱内部的离子强度。
这种方法适用于离子交换色谱柱和凝胶渗透色谱柱。
4.反冲法：这是一种比较彻底的冲洗方法，可以有效去除色谱柱内部的沉淀物。
在反冲过程中，需要将色谱柱的流动相改为反向，并提高流速。
然而，反冲过程可能会对色谱柱造成一定程度的损伤，因此需要谨慎操作。
如何清洗和保存反相色谱柱
如何清洗和保存反相色谱柱？如何清洗和保存反相色谱柱？怎样处理新买来的色谱柱？用水来冲洗色谱柱有什么后果？分析结束后如何冲洗？这些问题是HPLC分析人员常常面对的。
本文就这些问题介绍一些色谱柱的维护和保养经验。
新色谱柱的处理对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的溶剂中，通常是60-80%的甲醇/水，这与在反相色谱中使用的流动相是兼容的，所以可以直接转换到所要使用的流动相。
另外，也可以先用20-30ml流动相中的强溶剂甲醇、乙腈或者四氢呋喃冲洗色谱柱，然后再转换到所需流动相。
需注意的是，在冲洗或平衡色谱柱时，重要的是溶剂的体积而不是冲洗时间。
提高流速可以缩短冲洗平衡时间。
如果使用有机溶剂和水或缓冲溶液，10倍柱体积的流动相可以使色谱柱达到冲洗平衡。
如果流动相使用离子对试剂，则需20-50倍柱体积的流动相。
对于直径4.6mm的色谱柱，其柱体积可以按下式估算：Vm=0.1L其中，Vm为柱体积（ml），L为色谱柱的长度（cm）。
故一个15cm x 4.6mm色谱柱大概的柱体积为1.5ml。
直径2.1mm的色谱柱的柱体积大约为4.6mm的20%，所以5cm x 2.1mm 的色谱柱含溶剂为100uL。
对于B型高纯硅胶基质填料的色谱柱，色谱柱的再现性很规范，这与15年前普遍使用的、不是很纯的A型硅胶基质填料的色谱柱形成鲜明对比，但很多用来分析产品和原料的“流传”下来的HPLC方法仍沿用这种色谱柱。
有的时候，新的色谱柱需要运行几针分析样品才能使保留时间和峰面积保持稳定。
这种情况对于新型的色谱柱比较好一些，但仍需一段时间的磨合。
有时可以通过运行高浓度的样品或对照品来加速最初的色谱柱平衡。
例如，如果你看到运行了几针50ng的对照品，其保留时间和峰面积有所飘移，试一试运行1ug的对照品。
这种方法常常可以加速柱平衡的时间。
用水冲洗色谱柱我们常常会被问到这样一些问题：“我的样品是水溶性的，流动相中含有缓冲盐和甲醇，我不能用水来冲洗所有水溶性的污染物吗？”回答是：“不可以”。
液相色谱柱的清洗
新柱使用前的冲洗
新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告, 了解柱子的性能指标。分析用的流动相往往与柱子 的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的 试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用 的流动相与保存溶剂的相溶性。
1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可
用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流 速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,10～15min后可慢 慢加快。
色谱柱常见问题的成因
3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲 盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进 行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子 中的微环境是高有机相、低水相。这时流动 相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞 ,使柱压升高,柱效下降。 4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使 色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干, 造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
对色谱柱进行适当清洗的意义
以上提到的部分故障可以通过适时、适当的 清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色 谱柱的使用寿命。 下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗 方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际 情况作适当的选择和调整。当然，不同的用 户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽 相同的处理方法。
色谱柱常见问题的成因
1、硅羟基的死吸附 ：硅胶粒子表面存在硅 羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的 很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效 下降、峰形劣化的现象。有些吸附是可逆的， 可以通过清洗解决。 2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式 残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容 易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造 成峰形劣化。
反相柱日常清洗
关于纯水的问题：纯水极性很强,ODS等填料的硅烷 键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水作用而 改变空间构型, 使柱效很快降低。很多公司推出可 以使用100%纯水进行冲洗的柱子,原理是键合基团互 相之间有排斥力,这类柱子一般键合相比较丰富，游 离硅羟基比较少，从而阻止了键合基团性能的改变。 能否用纯水冲洗要参考该色谱柱的说明书。
液相色谱柱的清洗(活动za)
液相色谱柱的清洗一、液相色谱柱按基体成分的分类、硅胶基体：不键合任何化学基团的为硅胶柱，键合的化学基团有、、、氨基、氰基、苯基等。
、聚合物基体：常见的聚合物基体为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。
聚合物上再键合化学基团。
根据填料基体的成分不同可以分为：二、色谱柱常见问题的成因、硅羟基的死吸附：硅胶粒子表面存在硅羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效下降、峰形劣化的现象。
有些吸附是可逆的，可以通过清洗解决。
、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造成峰形劣化。
、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
三、对色谱柱进行适当清洗的意义以上提到的部分故障可以通过适时、适当的清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色谱柱的使用寿命。
下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际情况作适当的选择和调整。
当然，不同的用户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽相同的处理方法。
四、新柱使用前的冲洗新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告,了解柱子的性能指标。
分析用的流动相往往与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。
要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。
、反相柱如岛津、等柱保存在甲醇中,可用～倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。
流速应缓慢提高,如开始～后可慢慢加快。
、正相柱或称极性色谱柱一般保存在正庚烷或正己烷中。
如果分析时的流动相含有极性溶剂,应使用乙醇或异丙醇冲洗,流速～ ,将保存液冲洗干净后,再用流动相平衡。
色谱柱冲洗方法
色谱柱冲洗方法是指在色谱分析中，为了清洗色谱柱，去除残留的样品和杂质，保护色谱柱的使用寿命，而采取的一系列操作。
常用的色谱柱冲洗方法包括以下几种：
1. 洗脱剂冲洗法：用洗脱剂反复冲洗色谱柱，以去除残留的样品和杂质。
常用的洗脱剂有甲醇、乙醇、乙酸乙酯等。
2. 水冲洗法：用纯水反复冲洗色谱柱，以去除残留的盐类和其他水溶性杂质。
3. 酸碱冲洗法：用酸或碱溶液反复冲洗色谱柱，以去除残留的有机酸、有机碱和其他酸碱性杂质。
4. 溶剂冲洗法：用纯溶剂反复冲洗色谱柱，以去除残留的样品和杂质。
常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
在进行色谱柱冲洗时，需要注意以下几点：
1. 冲洗时要注意保护色谱柱，避免使用过于强烈的冲洗剂或过于频繁的冲洗，以免损坏色谱柱。
2. 冲洗时要注意洗脱剂的选择，根据不同的样品和分析要求
选择合适的洗脱剂。
3. 冲洗后要及时检查色谱柱的状态，如有异常应及时更换或修复。
色谱柱假如受到污染该怎么办 色谱柱维护和修理保养
色谱柱假如受到污染该怎么办色谱柱维护和修理保养色谱柱在日常使用过程中，尽管保护严格，样品和流动相尽管经过前处理，但经过长时间的使用，仍旧难以完全避开柱子受到污染，固定相流失、板结、柱床塌陷以及柱效下降等。
有些可以通过维护和修理，使部分柱效恢复。
1.柱污染再生技术色谱柱污染后，可以用合适的溶剂冲洗，使柱效再生。
C18柱常规的再生洗涤方法是：分别用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60 mL 依次通过色谱柱，再用100%甲醇60 mL平衡色谱柱后封存，柱效将恢复正常。
必要时，依据柱污染性质（如有机污染、盐类污染等），接受0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA钠盐冲洗，然后再用水冲洗，后用100%甲醇平衡色谱柱后封存。
对于严重污染的C18柱，可接受水、甲醇、氯仿、乙烷依次冲洗后，按次序倒过来再冲洗1次，每次所用溶剂60 mL，不接检测器，后用100%甲醇平衡色谱柱封存。
2.柱污染的修复在柱污染再生无效或已知柱污染严重时，可以接受柱修补的方法解决，但柱污染深度不宜超过 5 mm。
方法是将特制小铲将污染部分挖去，再用与柱填料相同的固定相与流动相混合制成浆状，然后将浆状固定相认真补入被挖去的部分（尽量使后填补的固定相接近原装的紧密程度），修平端面即可。
修好的柱子假如柱头两端的筛板的孔径是一致的，可将柱子颠倒过来使用一般时间，目的是借助流动相冲洗作用，恢复柱床紧密程度。
3.柱塌陷的修复柱塌陷的原因很多。
对于塌陷不太严重时，假如柱头两端的筛板孔径是一致的，可将柱颠倒使用一般时间，即可恢复性能。
当塌陷严重（5 mm左右）时，可接受柱污染的修复方法修补即可。
缓冲盐不当使用对色谱柱有哪些影响？在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调整流动相的pH值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压上升、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1、柱压上升；原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻拦流动相质，引起柱压上升。
色谱柱清洗与再生 色谱柱常见问题解决方法
色谱柱清洗与再生色谱柱常见问题解决方法色谱柱清洗与再生除非特别说明，在全部情况下，所用溶剂的体积应当是色谱柱体积的40—60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保试验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。
1.正相填料用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2.反相填料用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3.阴离子交换填料用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4.阳离子交换填料用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO 四氢呋喃冲洗。
5.蛋白质凝胶过滤填料去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6.多孔石墨化碳多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法倚靠于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min 流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水（1:1）溶液1ml/min 流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
强有机溶剂再生适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用水冲冼至平衡。
正相再生适合于紧要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
色谱柱冲洗程序
以以是色谱柱的冲洗程序:
1.用纯水冲洗柱子，每次冲洗50毫升，共冲洗两次。
这一步主要是去除柱子内的杂质和残留物。
2.用甲醇冲洗柱子，每次冲洗50毫升，共冲洗两次。
这一步主要是去除柱子内的水分，因为甲醇可以很好地清除水分。
3.如果需要进一步清洁柱子, 可以用异丙醇或正己烷等有机溶剂进行冲洗。
每次冲洗50升，共冲洗两次。
这一步主要是去除柱子内的有机杂质。
4.如果是反相色谱柱，分别用甲醇:水=90: 10、纯甲醇(HPLC级)、异两醇(HPLC级)、二氯甲烷(HPLC级)等溶剂作为流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积，然后再以相反的次序冲洗。
5.如果是正相色谱柱，分别用正己烷(HPLC级)、异丙醇(HPLC级)、- =氯甲烷(HPLC级)、甲醇(HPLC级)等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高)。
注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷，所有的流动相必须严格脱水。
6.如果是离子交换色谱柱，长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
以上信息仅供参考，如果还有疑问，建议咨询专业人士。
gpc 凝胶色谱柱 反冲
gpc 凝胶色谱柱反冲
GPC（凝胶渗透色谱法）凝胶色谱柱是一种用于分析高分子样品的有效工具。
在使用GPC
凝胶色谱柱时，反冲（冲洗）是一个重要的步骤，其主要目的是清除残留的样品和溶剂，以保证色谱柱的稳定性和下一次分析的准确性。
以下是关于GPC凝胶色谱柱反冲的一些建议：
1. 选择合适的溶剂：反冲时，应选用与样品溶剂相容的溶剂，以避免对色谱柱造成损害。
常见的反冲溶剂有正己烷、庚烷、甲苯等。
2. 反冲流速：反冲流速应适当，不宜过快。
通常建议的反冲流速为0.5-1mL/min，具
体可根据色谱柱的尺寸和实验室条件进行调整。
3. 反冲时间：反冲时间需要足够长，以确保色谱柱内的残留样品和溶剂被有效清除。
一般建议的反冲时间为10-30分钟，也可以根据实际情况进行调整。
4. 循环次数：为了确保色谱柱彻底清洁，可以进行多次反冲。
一般建议的反冲次数为
3-5次，也可根据需要进行更多次的反冲。
5. 观察色谱柱状态：在反冲过程中，应密切观察色谱柱的状态。
如果发现色谱柱出现压力波动、基线不稳等情况，可能需要延长反冲时间或增加反冲次数。
6. 储藏条件：反冲完成后，应将色谱柱妥善保存，以延长其使用寿命。
色谱柱应存放在密封容器中，并存放在干燥、避光的环境中。
总之，GPC凝胶色谱柱反冲是一个关键步骤，正确地进行反冲可以确保色谱柱的稳定性和
分析结果的准确性。
在实际操作中，需要根据样品和色谱柱的实际情况，选择合适的溶剂、流速、时间和次数等参数。
用溶剂冲洗色谱柱
用溶剂冲洗色谱柱中国色谱网(2008-2-13 15:38:46) 文章作者：未知用溶剂清洗色谱柱包括将色谱柱从GC上卸下来，并将几毫升溶剂至于色谱柱中。
任何可溶于清洗剂的残留物就会从色谱柱中去除。
如果未卸下色谱柱就注入大量溶剂，将不能清洗色谱柱，也不能从色谱柱中去除任何污染物。
毛细管GC色谱柱必须具有键合和交联的固定相才可以使用溶剂进行清洗。
使用溶剂清洗非键合的固定相会严重损坏色谱柱。
可使用色谱柱清洗装置来将溶剂注入色谱柱中，溶剂冲洗装置会连接到有压力的气源（N2或He），并把色谱柱插入到清洗装置中。
把溶剂加入样品瓶中，然后使用气源对溶剂瓶回压。
压力会强制溶剂流过色谱柱。
残留物将溶解到溶剂中，并随溶剂反冲出色谱柱。
然后将溶剂吹扫出色谱柱，并对色谱柱进行适当的老化。
清洗色谱柱前，从色谱柱的前端将其切去半米（即靠近进样器的一端）。
将色谱柱连接检测器的一端插入清洗装置中。
通常使用多种溶剂来清洗色谱柱。
后面继续使用的溶剂必须与前面的溶剂互溶。
一定不要使用高沸点溶剂，特别是不要用作最后使用的溶剂。
溶解样品的溶剂通常是不错的选择。
建议使用甲醇、二氯甲烷和已烷，它们在大多数情况下都不错。
可使用丙酮替代二氯甲烷、以避免使用含氯溶剂，但是二氯甲烷是最好的清洗溶剂之一。
如果注射的是水性样品（例如生理体液或组织），则请在使用甲以前先使用水来冲洗。
某些来自于水性样品残留物只能溶于水中而不溶于有机溶剂。
应使用水和醇类（例如甲醇、乙醇和异丙醇）来清洗键合的聚乙二醇基固定相，但一般不建议采用该方法。
下表列出了针对各种直径的色谱柱，建议使用的溶剂的体积。
使用大量溶剂虽无害，但效果不会好很多，并且还十分浪费。
加入第一种溶剂后，对清洗装置加压，但要低于20psig。
使溶剂流速低于1ml/min。
除大多数0.53mm内径的色谱柱外，在流速达到1ml/min之前清洗装置的压力将先达到20psi。
如果使用的是比重较大或粘度较大的溶剂，或色谱柱长度长或内径小，则需要较长的清洗时间。
液相色谱柱清洗和再生
高效液相色谱柱的清洗和再生1. 清洗反相色谱柱使用一段时间后，通常总会育一些物质吸附于柱子上，造成柱效下降，选择性改变，甚至柱压也会稍稍上升。
这时，可以以20倍柱体积或更多一些的强溶剂加以清洗。
例如，90%~100%的甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃等。
如果效果仍不理想，则可换用更强的溶剂清洗，例如，将系统逐步置换至乙酸乙酯、异丙醇、氯仿、烃类（如己烷、庚烷等）。
也可以在甲醇、乙腈等水溶性溶剂之后，改用50%DMSO或DMF水溶液加以清洗。
清洗几十倍柱体积后，在逐步置换返回原系统。
（常用的标准HPLC柱为Φ4.6mm×250mm，其内腔体积约为4.2mL）对于使用过缓冲液的柱子，必须先将体系中盐分去除干净，然后再以强溶剂清洗。
通常可以同浓度但不含缓冲液成分的流动相洗20倍柱体积，亦可直接以纯水洗至柱内无盐后再改换成强溶剂洗脱。
如使用了有UV吸收的溶剂（如氯代烃等），则需以低紫外吸收性的溶剂逐步置换，并在得到稳定的基线后才能正常使用。
有一些强溶剂，如DMSO、DMF等，黏度较高，使用时可能会造成较高的柱压，应注意不使其超过仪器的压力范围。
2. “掉头使用”由于柱子入口端的污染较为常见，因此，有时可以“掉头使用”，以便将固体污染物冲洗至柱外。
但是，新柱子不宜进行此操作，使过一段时间的柱子用用无妨。
但要注意：若入口端滤片孔径较大，则不可掉头使用，以免将填料冲走，破坏柱床结构；此外，掉头使用时宜卸下检测器，以免冲出来的污染物污染检测器。
3. 蛋白质分离用柱子清洗蛋白质分离用的柱子有其特殊性。
蛋白质分子量大，带有电荷，分子既有疏水部分也有亲水部分，对很多物理和化学因素敏感而易变性，也容易受霉菌和细菌的浸染而变性或分解。
因此，蛋白质分离用的柱子的损坏和性能降低也更为复杂。
一般情况下，蛋白质柱可用20倍体积以上的1%乙酸水溶液、0.1%三氟乙酸-丙醇（或异丙醇）（V/V, 40/60）、50%DMSO或DMF水溶液冲洗，若不奏效，则以水置换后改用0.5~1.0mol/L的中性盐（如NaCl或KCl溶液等）往往可以有效。
色谱柱的冲洗
色谱柱的冲洗：1.色谱柱使用后，总是需要进行冲洗吗？如果未出现柱压或色谱峰形异常等现象，不冲洗色谱柱更能延长柱的寿命。
如果实验间隔为1～2日，请降低流速并连续通液。
短期保存（数日～1个月）时，流动相只要不是强酸强碱，就不需要冲洗，拧紧堵头后放到温度变化小的地方保存。
长期保存（数个月～1年）时，请将流动相置换为含50%以上有机溶剂的溶液（NH2柱请置换成100%CH3CN来保存，SCX柱请使用出厂时的封存液200mmol/L的NH4H2PO4保存，置换时请注意盐析)。
2.不同粒径色谱柱的冲洗方法会有区别吗？3μm色谱柱和5μm色谱柱在冲洗方法上基本相同。
通常，我公司的色谱柱除了在强碱性或TFA等强酸性条件下使用之后需要冲洗以外，一般不建议对色谱柱进行冲洗。
请将充分净化的样品通过滤膜过滤以后，再注入色谱柱。
冲洗液请使用能将色谱柱中残留物质溶解的溶剂。
因此，请根据需要冲洗物质的性质选择不同的冲洗液。
3.反相系色谱柱该如何冲洗？针对强疏水性化合物在反相系色谱柱上的吸附问题，请按以下步骤进行色谱柱的冲洗。
1.当流动相中含有盐时，请使用不含盐的流动相；2. 100% CH3CN 或100% CH3OH；3.H2O : CH3CN = 1 : 1或H2O : CH3OH = 1 : 1进行整夜冲洗。
如果还未冲洗干净，再用90% H2O进行冲洗。
通常，不建议对色谱柱进行冲洗，只有当色谱峰形及柱压发生变化时才需要冲洗。
4.NH2色谱柱的冲洗方法请使用80% CH3CN(pH11、氨水)冲洗NH2柱1～2小时。
通过冲洗，在酸性流动相下产生的质子化氨基可能会回到初始状态。
5.MF色谱柱的冲洗方法不建议使用有机溶剂来进行冲洗。
虽然使用碱性溶液进行冲洗略有效果，但会造成色谱柱的劣化。
如果色谱峰变宽，请及时更换新色谱柱。
毛细柱的清洗工作有几步
毛细柱的清洗工作有几步毛细柱是一种常见的色谱柱，用于分离和分析复杂的化合物混合物。
为了确保色谱柱的稳定性和分离效果，定期进行清洗是必要的。
以下是如何清洗毛细柱的详细步骤：准备工作：在清洗毛细柱之前，首先需要准备好以下工具和材料：乙腈或甲醇：作为常用的清洗溶剂。
纯水：用于冲洗柱子。
移液器或注射器：用于加入溶剂。
实验室胶手套和安全眼镜：确保操作人员的安全。
清洗溶剂的储存容器：用于保存溶剂。
清洗步骤：注意：在清洗毛细柱之前，请仔细阅读毛细柱的使用说明书，以了解该特定柱子的清洗指导。
以下是一般情况下的清洗步骤：步骤 1：将毛细柱从色谱仪中取下，并用纸巾轻轻擦拭柱子外表面，除去灰尘和杂质。
步骤 2：将柱子的两端用塑料帽盖或胶塞密封起来，以防止溶剂蒸发和污染。
步骤 3：填充一个装有乙腈或甲醇的洗涤瓶。
注意：某些柱子可能需要使用特定的清洗溶剂，请根据说明书中的指导进行操作。
步骤 4：将毛细柱的一端插入洗涤瓶中的溶剂中，并使用适当的夹子固定。
步骤 5：通过使用适当的移液器或注射器，将溶剂缓慢地经柱内注入，让其自由流过整个柱子。
如果使用气泡降低流速，可以通过在移液器上轻轻敲击来除去气泡。
步骤 6：完成溶剂的通入后，保持柱子处于浸没状态，让溶剂在柱子内停留一段时间(通常为10-30分钟)，以清洗柱子内部。
步骤 7：将溶剂从柱子中排出，可以直接放入废液容器中。
步骤 8：重复步骤 5-7 几次，直到溶剂从柱子中排出时不再显示颜色或杂质。
步骤 9：最后，用纯水冲洗柱子。
将纯水缓慢地通过柱子流动，并确保冲洗溶剂残留物和盐分。
步骤 10：排空柱子中的水，并在纸巾上轻轻擦拭柱子外表面。
步骤 11：将柱子重新安装回色谱仪中，用胶带固定好。
正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法
正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法正相柱一般包括硅胶、CN基、Diol和氨基柱。
最好是事先采用预防性的措施，如样品过滤、用预柱和保护柱的方法，以尽可能的减少色谱柱的污染。
下面的方法有助于延长正相色谱柱的使用寿命，运用方法中的理念，也可以用来诊断解决色谱柱使用中的疑难问题。
清洗步骤1. 每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。
2. 先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。
3. 再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。
4. 100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。
如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。
色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。
正相柱除水分诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的变化，而填料可能还是完好的。
在正相色谱中，固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数。
大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分(正己烷20摄氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色谱柱中水分含量随时间的不同是导致选择性变化的最普通的一个因素。
用含2.5 % 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5 % 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性。
考虑到从流动相和色谱柱中完全去除水分非常困难，还有个尚有争议的简单方法可以采用。
使用水分含量可控的流动相(譬如和水半饱和)以一直保持最初的方法选择性，而不需要每次进行冗长的除水分步骤。
不管何种情况，最重要的都是保持水分条件的一致性。
TSK HILIC,AFC,HIC, IEX系列色谱柱使用冲洗方法
HILIC,AFC,HIC, IEX系列色谱柱使用维护一、正相/亲水柱（Amide-80,氨基柱）1. 色谱柱启用将系统管路用纯水冲洗，然后换出厂溶剂（以出厂报告中出厂溶剂为准）冲洗系统后连接色谱柱，以0.1ml/min流速缓慢增大流速，冲洗10-20倍柱体积。
2. 色谱柱清洗溶液（1）疏水性杂质的清洗水溶性有机溶剂，如含70～95 %乙腈或甲醇的溶液。
（2）亲水性杂质的清洗水溶性有机溶剂，如含5～10 %乙腈或甲醇的溶液二、亲和色谱1.TSK gel FCR-IIIA-NPR1. 启用：不连接色谱柱，将HPLC系统预清洗。
使用前对系统内部进行清洗（在连接色谱柱前进行）1）系统内部已充分清洗的系统以1.0 mL/min的流速注入0.1 mol/L 柠檬酸水溶液大约30分钟，对系统内部进行清洗。
2）旧系统、系统内部清洗不到位的系统①以1.0 mL/min的流速注入0.1 mol/L 氢氧化钠水溶液约30分钟。
②以1.0 mL/min的流速注入纯水约30分钟。
③以1.0 mL/min的流速注入0.1 mol/L 柠檬酸水溶液大约30分钟。
在1）、2）全都用上清液洗后，请替换成洗脱溶液A，以1.0 mL/min 的流速注入约15分钟后执行空白梯度。
之后连接色谱柱，执行平衡、空白梯度，再开始测量。
2. 色谱柱清洗：请用注射器分多次注入含0.5 mol/L NaCl 的洗脱溶液或是含20 % 乙醇的洗脱溶液。
3. 保存：请替换成出厂溶剂（0.025 % ProClin® 300 + 0.65 mmol/L 柠檬酸+ 9.35mmol/L 柠檬酸三钠（pH 6.5））后冷藏保存（2～8 ℃）。
2.Protein A-5PW, TSKgel Chelate-5PW, TSKgel Heparin-5PW, TSKgelBoronate-5PW, TSKgel Tresyl-5PW1. 启用：先不接色谱柱，清洗系统，然后连接色谱柱先用超纯水清洗色谱柱，然后使用其他溶剂替换超纯水。
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目前，看到园子谈到色谱柱冲洗的问题。
我来谈谈我自己的一点意见，主要针对的反向色谱柱而讲的。
1.色谱柱简介
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。
孔径在15nm（1 nm=10埃）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。
当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
2.色谱柱的冲洗体积确定
一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。
短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。
举例：内经为4. 6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。
3.色谱柱冲洗
冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。
然后用100有机溶剂冲洗。
最好是梯度变化冲洗。
分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。
如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。
色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。
虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。
4.色谱柱维护冲洗
常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相；b、过滤样品；c、运用在线过滤或保护柱。
柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）；b、使用保护柱；c、使用预柱（饱和色谱柱）。
前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。
当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。
然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。
5.特殊冲洗强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。
由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法：
1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
3.补救方法：
水——乙腈——氯仿（或异丙醇）——乙腈——水
每一步以1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱60min。