细胞线粒体分离试剂盒
细胞线粒体分离试剂盒经验
细胞线粒体分离试剂盒经验细胞线粒体是细胞内的一个重要器官，负责细胞内能量的生产和调控。
由于其结构特殊且与细胞核分离，为了研究线粒体的功能和机制，科学家们开发了一种称为细胞线粒体分离试剂盒的工具。
本文将介绍细胞线粒体分离试剂盒的使用经验，为科研工作者提供参考。
细胞线粒体分离试剂盒的选择非常重要。
市面上有多种品牌的试剂盒可供选择，但不同试剂盒的分离效果和操作方法可能有所不同。
因此，在选择试剂盒时，需要根据具体实验需求和文献研究，选择适合的试剂盒。
准备工作要做好。
在使用细胞线粒体分离试剂盒前，需要准备好所需的实验材料和设备。
常用的实验材料包括培养细胞、培养基、缓冲液等，而设备则包括离心机、显微镜、离心管等。
确保实验材料和设备的质量和干净程度对于细胞线粒体的分离至关重要。
然后，按照试剂盒说明书进行操作。
不同的试剂盒可能有不同的操作步骤，因此在使用前，务必仔细阅读试剂盒的说明书，并按照说明书的要求进行操作。
一般来说，分离线粒体的步骤包括细胞收集、细胞破碎、离心分离等。
在操作过程中，要注意操作的细节，严格控制温度和时间，以获得较好的分离效果。
要注意细胞线粒体的保存和处理。
细胞线粒体是一种易于受到氧化损伤的器官，因此在分离后，应尽快进行后续实验或储存。
常用的线粒体保存方法包括冷冻保存和低温保存。
在保存过程中，需要保持样品的完整性和纯度，避免细胞线粒体的损伤和污染。
对实验结果进行分析和解读。
细胞线粒体分离试剂盒的最终目的是获得纯净的线粒体样品，以进行后续的功能研究。
因此，在分离后，需要对线粒体样品进行质量检测和功能分析，如线粒体呼吸链活性、ATP产量等。
通过对实验结果的分析和解读，可以进一步揭示细胞线粒体的功能和机制。
细胞线粒体分离试剂盒是一种用于研究细胞线粒体的重要工具。
在使用试剂盒时，科研工作者需要选择适合的试剂盒，做好实验准备工作，按照说明书进行操作，并注意样品的保存和处理。
最后，对实验结果进行分析和解读，可以进一步深入了解细胞线粒体的功能和机制。
分离线粒体蛋白和胞质蛋白
线粒体分离试剂盒说明PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。
分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
1 准备溶液：室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后立即置于冰上并混匀。
第一次使用时，把1.5ml PMSF(溶剂)加入到PMSF(晶体)中，溶解并混匀，即得到1.5ml 100mM PMSF。
配制好的100mM PMSF溶液-20℃保存。
如果最终目的是制备线粒体蛋白样品，根据样品数量，取适量线粒体分离试剂备用，在线粒体分离试剂加入到细胞样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
取适量线粒体裂解液备用，在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用胰酶细胞消化液(Trypsin-EDTA Solution)消化细胞，离心收集细胞。
3 洗涤细胞：用冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞600g，4℃离心5分钟沉淀细胞。
弃上清。
4 预处理：加入1-2.5ml临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至2000-5000万细胞中，轻轻悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。
5.匀浆：把细胞悬液转移到一适当大小的玻璃匀浆器中，匀浆10-30下左右。
6 匀浆效果的鉴定：不同细胞不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
通常可以在匀浆10次后取约2微升细胞匀浆，加入30-50 微升台盼蓝染色液，混匀后显微镜下观察台盼蓝染色阳性( 蓝色) 细胞的比例。
如果阳性细胞比例不足50%，增加5次匀浆。
随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定。
当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步。
请勿过度匀浆，过度匀浆会导致线粒体的机械损伤。
同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。
7.把细胞匀浆在600g，4℃离心10分钟。
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体dna分离试剂盒原理全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：线粒体DNA（mtDNA）是细胞内的一种特殊DNA，主要存在于细胞的线粒体中。
它是由母亲遗传给子代的，与细胞核DNA有着不同的特征和功能。
线粒体DNA在细胞的能量产生过程中起到关键作用，因此对其进行研究对于理解细胞功能和疾病的发生具有重要意义。
为了研究线粒体DNA，需要将其从细胞中分离出来。
而线粒体DNA分离试剂盒就是为了这个目的而设计的。
它包含了借助化学试剂和特殊操作步骤将线粒体DNA从细胞中提取出来的各种试剂和工具。
线粒体DNA分离试剂盒的原理主要可以分为以下几个步骤：第一步：细胞裂解细胞裂解是线粒体DNA分离过程中的第一步。
通过加入裂解缓冲液和蛋白酶，使细胞膜和细胞核膜失去完整性，从而释放出细胞内的线粒体和线粒体DNA。
第二步：线粒体分离在细胞裂解后，线粒体需要从细胞中分离出来。
这一步通常需要使用离心过程，通过调节不同离心速度和时间来沉淀线粒体，从而与其他细胞器分离。
第三步：DNA提取在成功分离出纯净的线粒体后，就需要进行DNA提取。
通过加入相应的试剂和离心操作，将线粒体DNA从线粒体中提取出来。
这一步需要注意避免DNA的降解和污染。
第四步：DNA纯化提取出的线粒体DNA可能还含有其他杂质，需要进行纯化操作。
通过加入适当的试剂和离心操作，将线粒体DNA纯化成较纯的形式，以便后续的实验操作。
线粒体DNA分离试剂盒的原理就是通过上述步骤将线粒体DNA 从细胞中提取出来，并经过分离、提取和纯化等操作得到纯净的线粒体DNA样品，以供进一步的实验研究。
线粒体DNA在人类疾病的研究中具有重要的应用价值。
许多遗传性疾病和退行性疾病都与线粒体DNA的突变和功能异常有关，因此通过研究线粒体DNA可以更好地理解这些疾病的发生机制，并为临床诊断和治疗提供新的思路和方法。
总的来说，线粒体DNA分离试剂盒的原理是通过一系列化学试剂和操作步骤将线粒体DNA从细胞中提取出来并进行纯化，为线粒体DNA的研究提供了重要的技术支持和工具。
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体dna分离试剂盒原理全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：线粒体DNA分离试剂盒原理是通过一系列化学反应和物理方法将细胞中的线粒体成功分离出来，进而提取其中的DNA。
线粒体DNA是细胞中的一个重要组成部分，它负责细胞能量代谢的调控，对细胞的正常功能发挥起着至关重要的作用。
分离线粒体DNA对于研究细胞的功能及疾病的发生机制具有重要意义。
线粒体DNA分离试剂盒原理主要包括以下几个步骤：细胞溶解。
在进行线粒体DNA的分离之前，首先需要将细胞溶解，使得线粒体能够从细胞内部被释放出来。
通常使用含有细胞膜破裂酶的缓冲液进行细胞溶解，破坏细胞膜结构，释放出细胞内的线粒体。
线粒体富集。
在细胞溶解后，线粒体和其他细胞器混合在一起，需要通过质量差异将线粒体富集起来。
这一步可以利用超速离心对细胞提取物进行离心分离，线粒体在特定离心速度下沉降速度比较快，因此可以富集到下沉的沉淀物中。
然后，DNA提取。
在线粒体获得富集后，接下来需要进行DNA的提取。
通过添加蛋白酶、盐溶液等进行线粒体膜的破裂，释放出线粒体内的DNA。
然后使用乙醇沉淀法或硅胶柱法将DNA分离出来，并通过离心将DNA沉淀下来。
纯化和检测。
分离出的线粒体DNA往往还会存在一定程度的杂质，需要进行纯化处理。
通过特定的柱式层析或凝胶电泳等方法进行DNA 的纯化，去除掉余留的蛋白质、RNA等杂质。
通过比色法或荧光定量等方法检测DNA的浓度和纯度，以确保获得的线粒体DNA能够用于后续的实验研究或分析。
线粒体DNA分离试剂盒原理是通过一系列化学反应和物理方法将细胞中的线粒体成功分离出来，提取其中的DNA，并进行纯化和检测，为后续的研究工作提供可靠的实验材料。
通过这一技术手段，研究人员可以更加深入地了解细胞内线粒体的功能及其在疾病发生中的作用，为疾病的诊断和治疗提供更多的理论依据。
【2000字】第二篇示例：线粒体DNA（mitochondrial DNA，简称mtDNA）是线粒体内含有的一种特殊的DNA，其具有独特的特性和功能。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)
仅供科研版本号：161213 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】JC-1是一种检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) 的理想荧光探针。
在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物，产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1丌能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，产生绿色荧光。
这样就可以通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，这种转变也可作为细胞凋亡早期的一个检测指标。
JC-1单体的最大激发波长为514nm，最大发射波长为529nm。
JC-1聚合物(J-aggregates)的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的装置即可。
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一种以JC-1为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测，CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
该试剂盒仅用于科研领域，丌宜用于临床诊断或其他用途。
【使用方法】1、配制JC-1染色工作液：取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。
然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。
6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每0.5～1.0×106细胞需0.5ml JC-1染色工作液。
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体dna分离试剂盒原理
线粒体DNA（mtDNA）分离试剂盒是一种用于从细胞提取中分离纯化线粒体DNA的工具。
线粒体是细胞的能量产生中心，其DNA在许多生物学研究中具有重要作用。
分离线粒体DNA的原理基于细胞裂解、质粒DNA和细胞核DNA的去除，从而提取纯化的线粒体DNA。
该试剂盒通常包含以下主要组分：
1. 细胞裂解缓冲液：含有特殊成分，能够破坏细胞膜，释放细胞质和线粒体。
2. 离心管：用于离心样本，分离纯化的线粒体DNA。
3. 膜过滤器：对细胞裂解液进行过滤，去除细胞碎片和其他杂质。
4. 乙醇：用于沉淀线粒体DNA。
线粒体DNA分离试剂盒的操作步骤如下：
1. 将待分离线粒体DNA的细胞样本收集并进行离心，去除培养介质。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液，将样本溶解，并破坏细胞膜，释放线粒体。
3. 通过离心步骤进行细胞碎片和大颗粒物质的去除。
将细胞裂解液转移到膜过
滤器中，离心滤去杂质。
4. 丢弃上清液，保留细胞裂解液中的纯化线粒体。
5. 加入乙醇，使线粒体DNA沉淀。
6. 进行离心步骤以沉淀线粒体DNA。
7. 弃上清液并使用适量的缓冲液洗涤线粒体DNA的沉淀物。
8. 最后，将纯化的线粒体DNA溶于适当的溶剂中，以备后续分子生物学研究
使用。
线粒体DNA分离试剂盒利用细胞裂解和离心技术，可以高效地提取纯化的线
粒体DNA，且能够去除细胞核DNA和其他污染物质。
这种纯化的线粒体DNA可
以用于许多应用，包括线粒体功能研究、群体遗传学、线粒体疾病相关研究等。
线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒说明书
货号: QS3307 规格：50管/48样线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒说明书分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。
因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
测定原理：利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。
自备实验用品及仪器：超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：10mL×1瓶，-20℃保存；试剂四：1mL×1支，-20℃保存；提取步骤：①准确称取约0.1g组织或收集约500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂四，用冰浴匀浆器或研钵研磨。
② 4 ℃ 600 g离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心10min。
④上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。
⑤沉淀为完整线粒体。
含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。
可用于线粒体的生理功能等方面的研究。
⑥在沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），可用于线粒体酶活性测定。
⑦在沉淀中加入200uL试剂三和2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），可用于线粒体蛋白浓度测定。
注意事项：1、分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
2、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g。
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明
线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）使用说明产品货号：CA1310产品规格：100T产品内容：产品名称包装JC-10（200×）100μL/管，共5管超纯90mLJC-10染缓冲液（5×）80mLCCCP20μL保存条件：-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-10染色缓冲液（5×）也可4℃保存。
产品简介：线粒体膜电位检测试剂盒（JC-10）是一种以JC-10为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm△的理想荧光探针。
可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。
在线粒体膜电位较高时，JC-10聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-10不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-10为单体，可以产生绿色荧光。
这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。
常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。
通过JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的指标。
JC-10单体的最大激发波长为515nm，最大发射波长为529nm；JC-10聚合物的最大激发波长为585nm，最大发射波长为590nm。
实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
操作步骤：1、JC-10染色工作液的配制：六孔板每孔所需JC-10染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-10染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50～100万细胞需0.5mL JC-10染色工作液。
胞浆线粒体蛋白抽提
胞浆线粒体蛋白抽提
试剂：胞浆线粒体分离试剂盒，碧云天，产品编号C3601，负20°冰箱分装保持。
步骤：1.收集细胞，并用冰PBS洗1-2次。
2.预处理：每1⨯ 106个细胞加50μl（这个是最多加50，否则提出的蛋白可能会太稀）线粒体分离剂（临用前在线粒体分离剂中加入100:1的PMSF），轻轻（必须轻，以免损坏线粒体膜）悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
3.匀浆：用1ml注射器反复快速抽吸置于1.5mlEP管中的细胞，约10次。
（注：目的是刚好损坏细胞膜，而不损坏线粒体膜，可以取2μl细胞匀浆与5μl台盼蓝于玻片上，混匀后取小半片盖玻片盖住，显微镜观察刚好使大部分细胞台盼蓝染色即可，我的经验是10次的样子）
4.离心，600g，4℃，10min，弃沉淀（此沉淀为细胞核）
5.上清离心，11000g，4℃，10min
6.离心后小心吸出上清即为胞浆。
（每50μl约得到20μl的胞浆2-3μg/μL浓度）
7.沉淀再次离心吸去上清，每1⨯ 106个细胞加入10μl线粒体裂解液（临用前在线粒体裂解液中加入100:1的PMSF）即为线粒体蛋白。
我只做过胞浆细胞色素C检测，由于线粒体蛋白需要细胞量较大，没做线粒体蛋白细胞色素C检测。
线粒体提取方法
线粒体提取试剂盒产品组成：产品组成 BB-3601-1 BB-3601-2规格 50T 100T线粒体提取液A 20ml 40ml线粒体提取液B 20ml 40ml线粒体保存液 20ml 40ml产品简介：本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的线粒体提取。
不能用于冷冻样品的线粒体提取。
细胞线粒体提取：1.取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；2.用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4.用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6.在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7.在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
8.在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
9.弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
10.即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
组织线粒体提取：a)取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
b)用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
c)加入400μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
d)用Dounce匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
e)快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
f)在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
g)在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。
h)在4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
i)弃上清，沉淀用线粒体保存液重悬。
j)即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
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美天旎推出线粒体分离试剂盒
美天旎推出线粒体分离试剂盒
摘要：
美天旎的线粒体分离试剂盒是适用于人的。
它的独特之处在于，它是使用磁珠，也就是响当当的MACS技术来纯化的，纯度更高，更快速，2个小时之内就能从人的细胞或组织中分离到完整的线粒体。
说到线粒体分离，首先想到的肯定是差速离心，教科书上也是这样教的。
不过此法颇为麻烦，匀浆再加上一次又一次的离心，得率还不见得高。
要是有个试剂盒就好了，可惜现有的线粒体分离的试剂盒不多，最近，美天旎推出了一个高效分选线粒体的方法。
实验步骤：
1 裂解细胞。
2 用Anti-TOM22磁珠来标记线粒体外膜转位酶22（TOM22）。
3 将标记的细胞裂解液上样到MACS柱中，MACS柱置于MACS分选器中。
洗涤杂质，洗涤过程中磁性标记的线粒体保留在柱中。
4 将柱从分选器中移走，洗脱线粒体。
于是就得到了高纯、完整的线粒体。
此试剂盒与传统方法，比如差速离心或密度梯度离心相比，产量和纯度都更高。
纯化到的线粒体中不会带有其他细胞器的污染，如内质网或细胞核。
而且，MACS技术对细胞和细胞器特别温和，因此分离得到的线粒体保持了完整性，这样在下游的功能分析中能获得更可靠、重复性更好的数据。
Biovision线粒体DNA提取试剂盒
Biovision线粒体DNA提取试剂盒说明书一、简介线粒体是半自动细胞器，在细胞老化、凋亡、抗艾滋病毒药物及癌症过程中其作用。
线粒体DNA存在很高突变率，这些突变与与一些疾病相关，比如糖尿病、老年痴呆症和肌紊乱。
在研究线粒体DNA与疾病关系时要求线粒体DNA的提取和量化。
线粒体DNA提取试剂盒为从多种细胞及组织中提取高产量、高纯度无核DNA污染的线粒体DNA提供了一种方便的工具。
纯化的线粒体DNA可用于酶切、southern blotting、克隆、PCR分析和扩增。
二、试剂盒组成三、常规保存及试剂准备1、操作前阅读说明。
2、打开试剂盒后，酶B混合物存放于-70℃，其他试剂置于4℃。
3、用ddH2O稀释5×细胞质提取缓冲液至1×。
4、用273微升TE buffer溶解酶B冻干粉，混匀后迅速放于-70℃。
样品在-70℃条件下最多存放3个月。
5、确保所有操作一直在冰上进行。
四、线粒体DNA提取过程1、在4℃、600g条件下离心5分钟，收集细胞（5×107）。
2、用冰PBS溶液（未提供）洗涤细胞，在4℃、600g条件下离心5分钟，去上清。
3、用1ml 1×细胞质提取缓冲液重悬细胞。
4、冰上孵育10分钟。
5、用遇冷的组织匀浆机匀浆细胞。
操作过程中，使匀浆器置于冰上。
推荐50-100次的匀浆器；然而有效匀浆依赖细胞类型。
注：为检测匀浆质量，吸取2-3微升悬浮液于盖破片上，在显微镜下观察。
如果核周围有环说明仍是完整的。
如果70%-80%的核没有了环，则进行下一步。
否则，再进行30-50次匀浆，避免过度匀浆，因为会损伤线粒体膜，导致线粒体成分释放。
6、转移悬浮液至1.5ml离心管中，在4℃、700g条件下离心10分钟，该部去除了核和完整细胞。
7、吸取上清至1.5ml离心管中，在4℃、10000g条件下离心30分钟。
8、去上清。
9、用1ml 1×细胞质提取缓冲液重悬，在4℃、10000g条件下离心30分钟。
线粒体提取试剂盒说明书
线粒体提取试剂盒说明书货号：SM0020规格：50T/100T保存：四周内使用可2-8℃储存，长期保存请置于-20℃。
产品内容：组份SM0020-50T SM0020-100T Lysis Buffer50mL 100mL Mito-Wash Buffer25mL 50mL Store Buffer 5mL 10mL产品简介：线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。
适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。
其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤（仅供参考）：1.样本处理a.组织匀浆：称取100~200mg 新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS 或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。
加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer ，0℃冰浴上下研磨组织20次；b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS 洗涤，800g 离心5~10min 收集细胞，计数。
每次提取需要5×107个细胞，加入1.0mL 冰预冷的Lysis Buffer 重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5min 。
3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g 再次离心5min 。
4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。
将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5.往线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer 重悬线粒体沉淀，4℃，1000g 离心5min 。
6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000g 离心10min 。
弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7.用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。
碧云天线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123)说明书
线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123)产品简介：碧云天的线粒体膜电位检测试剂盒(Rhodamine 123) (Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with Rhodamine 123)是一种以Rhodamine 123为荧光探针对线粒体进行染色并进行膜电位检测的试剂盒。
本试剂盒可用于活细胞线粒体膜电位的检测，也用于细胞凋亡的检测。
本试剂盒可使用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测设备进行检测。
Rhodamine 123也称2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester ，中文名为罗丹明123，分子式为C 21H 17ClN 2O 3，分子量为380.82，CAS 号为62669-70-9。
Rhodamine 123是一种通透细胞膜的黄绿色阳离子荧光探针，最大激发光波长为507nm ，最大发射光波长为529nm 。
Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图参考图1。
图1. Rhodamine 123的化学结构式和激发、发射光谱图。
本试剂盒检测线粒体膜电位的原理如下。
在正常细胞中，Rhodamine 123能够依赖线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential, ΔΨm)选择性进入线粒体基质，可发出明亮的黄绿色荧光；当细胞发生凋亡或坏死时，线粒体膜电位丢失，线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, MPTP)持续开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm )的崩溃，Rhodamine 123从线粒体中释放出来，从而导致线粒体内黄绿色荧光强度的明显降低。
此外有报道，在个别特定情况下，Rhodamine 123探针在线粒体内过度聚集后可能会出现自发淬灭(self-quenching)现象，线粒体内黄绿色荧光强度降低，而在凋亡发生时，线粒体中黄绿色荧光增强。
GENMED活体细胞线粒体损伤 氧化荧光测定试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10017.1 v.A GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景心磷脂（Cardiolipin）是线粒体膜上的主要成分之一。
它对细胞氧化特别敏感。
线粒体脂类分解，致使心磷脂显著减少，最终造成线粒体的严重损害。
Nonyl-Acrydine Orange是一种可自由通过细胞膜的染色剂，特异性地染色线粒体上的心磷脂，并发出荧光。
一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化，其荧光显著减弱。
产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升GENMED保存液（Reagent D） 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析比色杯：用于细胞荧光分析的容器荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或酶标仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤一、 脱离或悬浮细胞分析实验开始前，将 ℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（Reagent C）放进 ℃恒温水槽里预热。
细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒JC-1
细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）JC-1 Apoptosis Detection Kit说明书修订日期：2018.10.24 Cat number：KGA601-KGA604Store at -20℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（△ψ）的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
本试剂盒采用JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。
JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同，但均可在流式细胞仪绿色（FL-1）通道检测出绿色荧光，JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并因浓度增高而在线粒体内形成多聚体，多聚体发射光为红色荧光；可被流式细胞仪的红色（FL-2）通道检测到，而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。
根椐这一特征检测线粒体膜电位的变化。
本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。
二、试剂盒组份组份KGA601 KGA602 KGA603 KGA604 储存条件10 assays 20 assays 50 assays 100 assaysJC-1 10µL 20µL 50µL 100µL -20℃,避光10×Incubation Buffer 2mL 4mL 10mL 20mL 2-8℃三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、高速离心机、CO2培养箱、微量移液器1.5ml Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、灭菌去离子水四、使用注意事项1. 微量试剂取用前请离心集液。
细胞线粒体分离试剂盒
细胞线粒体分离试剂盒产品简介：细胞线粒体分离试剂盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是用于快速便捷分离培养细胞线粒体的试剂盒。
本试剂盒在分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。
使用本试剂盒分离获得的线粒体纯度较高，并且绝大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。
因此本试剂盒分离得到的线粒体可以用于线粒体的生理功能等方面的研究。
例如可以使用碧云天的C2006 线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定分离得到的线粒体的膜电位。
本试剂盒分离得到的线粒体也可以被试剂盒中的线粒体裂解液或其它适当裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。
本试剂盒提供了线粒体制备过程中匀浆程度的重要判断指标，即台盼蓝染色，使分离得到的线粒体的质量更加有保证。
台盼蓝染色液为选用试剂，在实验条件成熟后可以不必使用。
本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF，使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制，这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用的去除了大量线粒体的蛋白，在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照。
如果每个样品的细胞数量为2000-5000万，本试剂盒可以处理50-100个样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
其中台盼蓝染色液也可以4℃保存，PMSF(晶体)和PMSF(溶剂)在配制成100mM PMSF溶液前可以室温保存。
注意事项：试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。
如果不是用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。
如果用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。
PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g。
碧云天 组织线粒体分离试剂盒
5. Zhang Z, Wang S, Qiu H, Duan C, Ding K, Wang Z.
Waltonitone induces human hepatocellular carcinoma cells apoptosis in vitro and in vivo.
离心速度可以采用1000g和3500g。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后立即置于冰上并混匀。第一次使用时，把1.5ml PMSF(溶剂)加入到 PMSF(晶体)中，溶解并混匀，即得到1.5ml 100mM PMSF。配制好的100mM PMSF溶液-20℃保存。如果最终目的是制备 线粒体蛋白，根据样品数量，取适量相应的线粒体分离试剂备用，在线粒体分离试剂加入到组织样品中前数分钟内加入 PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适量线粒体裂解液备用，在线粒体裂解液加入到线粒体样品中前数分钟内加入 PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
包装清单：
产品编号
产品名称
包装
C3606-1
线粒体分离试剂A
60ml
C36ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ6-2
线粒体分离试剂B
60ml
C3606-3
胰酶消化液
50ml
C3606-4
线粒体储存液
3ml
C3606-5
线粒体裂解液
15ml
—
说明书
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。其中胰酶消化液可以4℃保存。
注意事项：
¾ 试剂盒中的试剂对于不同的实验目的不必全部使用。 ¾ 如果用于制备蛋白样品，需自备PMSF，否则不必使用PMSF。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。PMSF一定要在线粒体分
PH1592 线粒体DNA提取试剂盒实验操作手册
3. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心 5 min。 4．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心 10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将 上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底； 5. 在线粒体沉淀中加入 0.5 mL Wash Buffer 重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心 5 min； 6．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心 10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底； 7. 加入 100ul DNA 酶反应液重悬线粒体，吹打均匀后，再加入 10ul DNA 酶 I 溶液（见准备工作），混匀，37 度水浴 10min。 此步为消化线粒体表面吸付的核 DNA。4℃， 12,000 × g 离心 5 min。尽可能的弃上清，再加入 200ul TE 重悬线粒体沉 淀，离心，洗去残留的 DNA 酶。 8. 得到的沉淀，用 100ul TE 重悬线粒体沉淀。加入 200ul 线粒体裂解液，轻轻混匀（不可吹打），放置 2min 左右，不超 过 5min，再加入 150ul 蛋白沉淀液，迅速混匀。4℃，12,000 × g 离心 5 min。此步骤可进一步去除核 DNA。 9．取上清，加入一新的离心管中（可选用等体积的酚氯仿异戊醇 25:24:1 抽提一次，再用氯仿抽提一次，或者直接用氯仿 抽提两次，一般来说，此步可省，并不影响后续的 PCR），加入 0.6 倍体积的异丙醇（如无异丙醇，可加入 2.5 倍体积的乙 醇沉淀 DNA）及 10ul 核酸核酸助沉剂，混匀，-20℃沉淀半小时左右（此步可省），4℃， 12,000 × g 离心 10 min。 10. 弃上清，再加入 1ml 70%乙醇，4℃， 12,000 × g 离心 10 min。重复用 70%乙醇洗一次。 11. 弃上清后再次离心 1min 吸弃上清，开盖凉干约 5-10 分钟。 12．加入 20-30ul TE 缓冲液,轻弹管底，37 度水浴 5 分钟，线粒体 DNA 溶解。 13. 进行 DNA 电泳检测及-20 度保存，进行下步的实验。
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细胞线粒体分离试剂盒
简介：
线粒体是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。
制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体。
Leagene 细胞线粒体分离试剂盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分离培养细胞中的线粒体的试剂盒，分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于分析细胞色素C 等线粒体蛋白向胞浆的释放，大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能(如检测线粒体膜电位)，获得的蛋白可用于SDS-PAGE 、Western 、双向电泳等蛋白分析。
本试剂盒提供台盼蓝染色液和PMSF ，可以分别判断线粒体质量和提取细胞浆蛋白。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 胰蛋白酶
2、 低温离心机、匀浆器
3、 PBS
操作步骤(仅供参考)：
1、清洗：用预冷的PBS 清洗细胞，离心，其上清。
2、裂解：沉淀用预冷的Mitochondria Lysis buffer 重悬细胞，冰浴放置，可用相差显微镜检测膨胀的程度。
3、匀浆：把细胞悬液转移至Dounce 匀浆器中，匀浆。
不同细胞或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
编号 名称
CS0201 50T Storage
试剂(A): Mitochondria Lysis buffer 100ml
-20℃ 试剂(B): Trypan Blue Stain 10ml 4℃ 避光 试剂(C): Wash buffer
100ml -20℃ 试剂(D): Mitochondria Stock buffer 10ml -20℃ 试剂(E): Protein Stock buffer(5×) 20ml RT 试剂(F): PMSF(100×) 1.5ml
-20℃ 使用说明书
1份
4、台盼蓝染色(可选)：取约细胞匀浆液，加入Trypan Blue Stain，混匀，显微镜观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例，如果阳性细胞比例不足50%，增加匀浆，随后再同前取样进行台盼蓝染色鉴定，当阳性比例超过50%时即可停止匀浆进入下一步，但勿过度匀浆，否则易导致线粒体的机械损伤。
同时记录对于该细胞的匀浆次数，在后续实验时不必再摸索匀浆次数。
5、立即取匀浆液，加入等量Wash buffer，轻轻颠倒混匀数次。
6、离心以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。
7、上清液转移至一干净离心管，离心，重复2次。
8、上清液转移至一干净离心管，离心，重复1次。
9、弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。
随后把收集的上清离心，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。
10、保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。
如果用于线粒体酶活性或功能的分析，线粒体沉淀应重悬于Mitochondria Stock buffer；如果用于线粒体蛋白的分析，获得的细胞浆蛋白应保存于1×Protein Stock buffer，即按细胞浆蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合；如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。
注意事项：
1、试剂(如台盼蓝染色液)对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。
2、如果不是用于制备线粒体蛋白，Mitochondria Lysis buffer和Wash buffer中不必加
入PMSF。
如果用于制备线粒体蛋白样品，Mitochondria Lysis buffer和Wash buffer 中需添加PMSF。
PMSF一定要在试剂加入到样品中前1～2min内加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。
3、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷，全部操作
时间尽量控制在1h以内。
4、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取1000g和15000g，如果希望纯度更高，
但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可用2000g和6000g。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。