灵芝多糖拮抗肿瘤对单核巨噬细胞免疫抑制作用研究

一、项目名称：灵芝多糖拮抗肿瘤对单核巨噬细胞免疫抑制作用研究

二、主要完成单位：承德医学院附属医院、河北医科大学第四医院

三、推荐单位：河北省卫生和计划生育委员会

四、项目简介：本项目所属科学技术领域为医疗卫生，是河北省卫生和计划生育委员会科学技术研究与发展计划项目，主要研究灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides, 以下简称Gl-PS）抗肿瘤作用。Gl-PS是灵芝的提取物，研究认为Gl-PS主要通过提高免疫系统的功能来抗肿瘤，是否作用于肿瘤细胞使单核巨噬细胞更易被活化或拮抗其免疫抑制分子，此前未见专门的研究报道。该研究历时6年，按照合同要求完成了所有指标，并进行了推广。对于单核巨噬细胞活性和能力的检测本实验应用巨噬细胞吞噬中性红实验、Griess检测NO含量、L929细胞抑制实验和ELISA对肿瘤患者血清和黑色素瘤细胞培养上清液对单核巨噬细胞免疫功能的抑制作用，以及灵芝多糖拮抗该“抑制”的作用进行检测。结果：肺癌患者血清和黑色素瘤细胞培养上清液对单核巨噬细胞的LPS诱导有抑制作用，吞噬中性红能力比不加肺癌患者血清和黑色素瘤细胞培养上清液LPS诱导的单核巨噬细胞降低，Griess检测NO产生量也减少，TNF-α表达经L929细胞抑制实验和ELISA检测均比不加肺癌患者血清和黑色素瘤细胞培养上清液LPS诱导的单核巨噬细胞减少；加不同浓度灵芝多糖后随着浓度的增加，吞噬中性红能力、NO 产生量、TNF-α表达较不加灵芝多糖的对照增加，趋于不加肿瘤细胞上清和肺癌患者血清的对照组，并且灵芝多糖可促进单核巨噬细胞表达TNF-α、IL-6、IL-12增多，IL-10表达减少，使其向M1方向分化。由此得出了黑素瘤细胞培养上清和肺癌患者血清对单核巨噬细胞均有免疫抑制作用，灵芝多糖可拮抗黑素瘤细胞培养上清和肺癌患者血清对单核巨噬细胞的免疫抑制作用结论。国内外已经对灵芝多糖可以活化巨噬细胞，增加巨噬细胞NO、TNF-α的分泌，增强巨噬细胞的吞噬性、趋化性、提呈抗原给T细胞的能力以及对肿瘤细胞和微生物的细胞毒作用进行了研究。尚无肺癌患者血清对人外周血巨噬细胞的免疫抑制作用研究和黑素瘤细胞培养上清对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫抑制作用研究；灵芝多糖能否拮抗肿瘤对巨噬细胞的抑制作用，尚无专题实验证实。

该课题的创新之处

1．肺癌患者血清对人外周血巨噬细胞有免疫抑制作用；

2．B16F10黑素瘤细胞培养上清对鼠腹腔巨噬细胞有免疫抑制作用。

3．灵芝多糖能拮抗肺癌患者血清及小鼠黑素瘤细胞培养上清对同种巨噬细胞的免疫抑制作用。

4．灵芝多糖可促使大和巨噬细胞向M1方向分化。

该研究包括中华医学会皮肤性病学分会皮肤病学研究基金资助项目、河北省卫生计生委科技支撑计划和承德市科技支撑计划等项目，目前已在SCI及核心期刊上发表论文多篇，并获省卫计委科学奖励和承德市科学技术奖励。现已在全国11家医院推广应用，取得了一定的社会效益。

五、全部完成人及技术贡献（公示内容包括姓名、排名、技术职称、工作单位、完成单位、

主要完成单位及创新推广贡献：承德医学院附属医院为该项目第一完成单位，为研究提供了适宜的实验场地、先进的仪器设备、较充足的实验经费和高水平科研人员的技术帮助与支持，使项目能够顺利完成。整个项目绝大部分是在承德医学院附属医院的中心实验室、病理实验室及皮肤性病学科实验室实施完成。在项目的实施过程中，承德医学院附属医院及其相关职能部门在项目的管理、经费的支持和人员配备等方面给予了大力的支持与帮助。项目的资金投入也由承德医学院附属医院皮肤性病学重点发展学科建设基金和中华医学会皮肤性病学分会皮肤病学研究基金中支出，为该项目的实施提供了经费支撑。河北医科大学第四医院作为第二完成单位主要是提供部分临床病例及部分实验研究工作。

推广应用及经济社会效益情况：自2011年开始开展肺癌患者血清及黑素瘤细胞导致免疫沉默及灵芝多糖的拮抗作用的研究，该研究首先为灵芝多糖抗肿瘤的治疗提供了新的理论依据，可以应用该理论指导对灵芝多糖临床应用和肿瘤治疗药物开发的研究。这些实验方法把基础和临床进行了有机的结合，还可用于其他研究。适用于各研究所、综合医院的各研究室、免疫室、肿瘤专科医院。已经在北京市、河北省的多所三级甲等医院包括承德医学院附属医院、北京大学第一医院、北京大学第三医院、河北医科大学第四医院、河北省人民医院、河北省胸

科医院、承德市中心医院及二级医院包括承德市第三医院、承德市中医院、围场满族自治县医院和滦平县中医院的11所医院10794例肺癌患者和36例黑素瘤患者得到推广应用,获得了很好的社会效益。

主要知识产权证明目录：

1.The improvement of M1 polarization in macrophages by glycopeptide derived from Ganoderma lucidum.《Immunol Res》. 2017，65(3): 658-665.孙立新，林志彬，陆洁，李卫东，牛艳东，孙宇，胡晨阳，张国强，段昕所论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

2.Antagonism by Ganoderma lucidum polysaccharides against the suppression by culture supernatants of B16F10 melanoma cells on macrophage.《Phytother Res》. 2014，28(2): 200-6. 陆洁，孙立新，林志彬，段昕所，葛志华，邢恩鸿论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

3.Effects of the polysaccharide nucleic acid fraction of bacillus Calmette-Guerin on the production of interleukin-2 and interleukin-10 in the peripheral blood lymphocytes of patients with chronic idiopathic urticaria. 《Biomed Rep.》2013. 1(5): 713-718.李娜，曹娜，牛艳东，白秀会，陆洁，孙宇，俞敏，孙立新，段昕所论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

4.卡介菌多糖核酸对Ⅰ型变态反应模型小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α影响的动态观察.《临床和实验医学杂志》,2016,15(8): 727-729王海飞,胡晓梅,孙宇,陆海涛,李雪飞,高阳,段昕所. 论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

5.肺癌患者血清对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用.《中国中西医结合急救杂志》, 2013,20(1):51-52. 胡云才,齐海花,孙立新,段昕所,杨宁,陆洁. 论文版权归属河北省沧州荣复军人疗养院，无争议。

6.灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌TGF-β1的影响. 《中国皮肤性病学杂志》2014,(11):1101-1103+1108. 王建坤,齐海花,陆洁,段昕所,孙立新.论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

7. B16F10黑素瘤细胞培养上清对相同基因小鼠腹腔巨噬细胞的抑制作用.《中国皮肤性病学杂志》2011;25(7):509-510,514. 兰天飞,孙立新,段听所,陆洁.论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

8. B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响. 《中国中西医结合急救杂志》2012;19（3）：169-171.齐海花,胡云才,兰天飞,孙立新,段听所,陆洁,宋有鑫,杨晓峰,杨新宏.论文版权归属承德医学院附属医院，无争议。

项目曾获科技奖励情况：2018年河北省医学科学奖一等奖，2013年承德市科技进步二等奖