总大肠菌群,粪大肠菌群试卷
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[1]
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大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍相互关系大肠菌群（总大肠菌群） >粪大肠菌群&耐热大肠菌群> 大肠杆菌一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、总大肠菌群所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。
SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。
一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。
肠道细菌考试试题及答案精选
肠道细菌考试试题及答案、名词解释1.肥达反应：利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。
2.外-斐氏反应：用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌0X19、0X2、0XK进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。
用以诊断流行性斑疹伤寒，恙虫病等急性传染病.3.S-R变异：又称菌落变异，指细菌菌落从光滑的状态转变为粗糙而皱缩的状态，称前者为S型，后者为R型。
4.H-0变异：H抗原存在于鞭毛蛋白，不耐热，60r 30分钟即被破坏。
细菌失去鞭毛后,运动随之消失，同时0抗原外露，是为H-O变异。
二、填空题5.肠道杆菌是生活在人和动物肠道中的一大群生物学性状相似的革兰阴性无芽胞杆菌。
6•肠道杆菌中，常见的有四个菌属，分别是_埃希菌属」_沙门菌属、志贺菌屈、变形杆菌屈。
7•在选择培养基上，肠道非致病菌的菌落特点是有颜色的大菌落，致病性肠道杆菌的菌落特点是无色透明、半透明&初步鉴别肠道致病菌与非致病菌的生化反应是乳糖发酵试验O9•沙门菌屈的抗原构造可分为0-抗原、H-抗原、Vi- 抗原三种。
10•肠热症患者的标本采集，第1周取血__________ ,第2周-3 周取粪便或尿液。
11・沙门菌的致病因素有内毒素、侵袭力、肠毒素。
12•志贺菌属的细菌又称痢疾杆菌，它是细菌性痢疾病的病原菌，此病临床上常见的三种类型是急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢。
13•志贺菌属中A群又称痢疾志贺菌群、B群又称福氏志贺菌群、C群又称鲍氏志贺菌群、D群又称宋内志贺菌群。
14•菌痢患者标本采集应在服药前尽早用无菌棉拭取黏液脓血便，中毒性菌痢采用肛拭，立即送检。
15.肠道杆菌仅靠形态和染色性即易区别，不需要生化反应和血清学试验进行鉴定。
(X 16 •变形杆菌为条件致病菌。
17.肠道杆菌均为肠道中致病菌。
(V)1&伤寒病出现肠壁溃疡和伤寒杆菌再次刺激肠壁淋巴组织引起IV型超敏反应有关。
粪大肠菌群的测定
15.7mg硫代硫酸钠可去除样品中1.5mg活性氯，硫代硫酸钠用量可 根据样品实际活性氯量调整。
4 .无菌水:取适量实验用水，经 高压蒸汽灭菌20min， 备用。 5. 硫代硫酸钠( Na2S2O3.5H2O)。 (去除游离氯) 6.乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2O8Na2 .2H2O)。 7.乙二胺四乙酸二钠溶液: ρ (C10H14N2O8Na2 .2H2O) =0.15 g/ml 称取15g乙二胺四乙酸二钠,溶于适量水中，定容至100ml,此溶液可保存 30d。 8.硫代硫酸钠溶液: ρ ( Na2S2O3.5H2O) =0.10 g/ml 称取15.7g硫代硫酸钠， 溶于适量水中，定容至100ml，临用现配。
2. 浓缩乳糖蛋白胨培养液： (此溶液用于检验大肠菌群) 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组分用量 增加至三倍。 (即按上述配方比例三倍 (除蒸馏水外) ，配成三倍浓 缩的乳糖蛋白胨培养液)
①在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？ 答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋 白胨培养液5ml。
• 三、肯定要加塞子的，我们用的塞子是软材料 (好像是软橡胶？ 白色的，塞子中间另有一 个可以活动的塞子，能保证加塞后的试管透气，其实用什么材料不重要的。
• 四、需要的仪器设备为：生化培养箱、无菌操作台 (空气精华级别100) 、高压灭菌锅、 冰箱、干燥箱。
五、干扰和消除
1.
,能破坏微生物细胞内的酶活性，导
若接种量过高，培养液应加倍成分。这是由于样品的量大 的情况下，培养液稀释大,各种成分的相对浓度就会不足， 就不能满足细菌的生长要求，存在实验失败的概率。因此， 合理调整样品量和营养液浓度的比例需要反复实验和多组 对照。
3、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌
↓36±1℃,48±2h
↓44.5±0.5℃,24±2h
————————
———————
↓
↓
↓
↓
浑浊，产气
不产气 浑浊，产气 不产气：粪大肠菌群阴性
查MPN表
大肠菌群阴性 查MPN表
报告大肠菌群
报告粪大肠菌群
的MPN值
的MPN值
大肠菌群计数检验的操作
MPN法
LST不产气（-） 小导管里无气泡
LST产气（+）
36℃±1 ℃ 培养24h
加入 Kovacs氏试剂
接触面红色，阳性
甲基红反应(MR)
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖 过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的 途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大 量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使 甲基红指示剂变红。
VRBA平板计数法
选择15~150平 板计数典型和
可疑菌落
36℃±1 ℃ 18h ~24h
典型菌落为紫红色 周围有红色胆盐沉
淀环，0.5mm
挑选10个菌落 接种到BGLB
结果报告
经最后证实大肠菌群阳性的BGLB试管比 例乘以VRBA菌落数再乘以稀释倍数，即为每 克（毫升）样品中大肠菌群数。 如：稀释倍数10-3 ,吸取样品稀释液1ml
大肠菌群和粪大肠菌群的检测流程图 MPN法
检样25g
↓
稀释（三个连续的稀释度，如10-1，10-2，10-3）
↓
接种（每个稀释度接种3管LST，每管1ml）
↓ 36±1℃,48±2h
——————————————
↓
↓
浑浊，产气
不产气
↓
报告大肠菌群阴性
酶底物法测定水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌综合试卷解析及答案
一、填空题1．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌(粪大肠菌群)时，需要取 ml水样，在±℃培养 h。
①②答案：100 36 1 242．采用固定底物技术酶底物法定性测定总大肠菌群，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，呈现色为阳性。
①答案：黄3．采用固定底物技术酶底物法定性测定大肠埃希氏菌，水样加入培养基后经过适当温度及时间培养后，将呈现——色的水样在暗处用波长为__ ___nm的紫外灯光照射，如果有产生则表示有大肠埃希氏菌存在。
②答案：黄 366 蓝色荧光4．采用固定底物技术酶底物法定量测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时，水样加入培养基摇匀后，需倒入51孔或97孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以，然后用封口。
①②答案:赶除孔穴内气泡程控定量封口机二、判断题1．总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生乒半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。
( )①答案：正确2．采用固定底物技术酶底物法测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌可以定性测量，也可以定量测量。
( )①②答案：正确3．采用固定底物技术酶底物法可在48h判断水样中是否含有总大肠菌群和大肠埃希氏菌及含有的总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数值。
( )①②答案：错误正确答案为：应该是24h。
三、问答题采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌时，采用正确步骤培养后的样品，怎样判断大肠埃希氏菌的数值?②答案：采用固定底物技术酶底物法定量测定大肠埃希氏菌，采用正确步骤培养后的样品，观察51孔或97孔无菌定量盘，将变成黄色的水样的定量盘在暗处用波长为366nm的紫外灯光照射，如果有蓝色荧光产生则表示该定量盘孔穴中有大肠埃希氏菌存在，计算有荧光反映的孔穴数，对照MPN表即可查出大肠埃希氏菌最大可能数(MPN)，结果以MPN／100m1表示；如所有孔未产生荧光，则可报告为大肠埃希氏菌未检出。
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[2]
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总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的从属关系及介绍相互关系总大肠菌群> 耐热大肠菌群> 大肠埃希氏菌一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、总大肠菌群所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。
SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。
一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。
公共卫生微生物考核定岗试卷
微生物试卷姓名分数一、填空题(20分)1、细菌按其形态可分为和2、灭菌效果的检验有3、配制培养基的主要程序为：调配、、调整pH 、、分装、检定等步骤。
4、对受细菌污染严重的水体样品，在进行大肠菌群检验时，如果在出发酵试验中未发现产气，则应h, 然后再进一步证实。
5、总大肠菌群的测定步骤；初发酵试验、、报告。
二、选择题(20分)1、我国生活饮用水的总大肠菌群标准是①每升水样小于等于100个②每100ml 水样检出三个以下③每升水样小于等于3个2、总大肠菌群测定过程的复发酵试验中，接种完1～3个典型菌落后，应将发酵管置于℃培养。
①44.5 24 ②37 48 ③37 243、细菌总数测定水样使用的培养基为。
①乳糖蛋白胨培养液②营养琼脂培养液③EC 培养液4、测量培养液的 pH 时，至少应精确到单位。
①0.5pH ②0. 1pH5、大肠菌群属于呼吸类型的微生物。
①兼性厌氧性②需氧及兼性厌氧性三、判断题(10分)1、在报出细菌总数计算结果时，若所有的稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数。
( )2、进行细菌学检验，一般从取样到检验不宜超过2h, 否者应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。
( )3、显微镜使用后，用擦镜纸清洁光学玻璃部分和载物台，并罩好套子。
( )4、配置好的培养基，不宜保存过久，以少量勤配制为宜。
每批应注明制作日期。
已灭菌的培养基可在4~10℃长久保存。
(5、用盐酸或氢氧化钠，调整培养基pH 时，需注意逐滴滴加，勿使过酸或过碱而破坏培养基中某些组分。
(四、名词解释(20分)1、总大肠菌群--2、粪大肠菌群--3、细菌总数--五、问答题(30分)1、生物监测的重要性?2、配制培养基注意事项有哪些?3、为什么制成的琼脂平板干燥后才能使用?生物监测试卷答案一、填空题1、答：球菌杆状菌螺旋菌。
2、答：生物法化学法和温度计法3、答：融化澄清过滤灭菌4、答：继续培养48 有无大肠菌类细菌5、答：平板分离复发酵试验根据发酵结果查表。
预防疾控微生物检验技术：肠道感染细菌考试试题(题库版)
预防疾控微生物检验技术：肠道感染细菌考试试题（题库版）1、单选霍乱弧菌有哪些抗原（）A.耐热菌体抗原与不耐热的鞭毛抗原B.不耐热菌体抗原与耐热的鞭毛抗原C.耐热菌体抗原与耐热的鞭毛抗原D.不耐热菌体抗原与不耐（江南博哥）热的鞭毛抗原E.以上都不是正确答案：A2、单选肠热症病程的第一周，检出伤寒沙门菌最高阳性率的方法是（）A.尿培养B.血培养C.粪便培养D.胆汁培养E.呕吐物培养正确答案：B3、单选迁徙生长的细菌最有可能的是（）A.大肠埃希菌B.普通变形杆菌C.伤寒沙门菌D.肺炎克雷伯菌E.弗劳地枸橼酸杆菌正确答案：B4、单选副溶血性弧菌所致疾病是（）A.霍乱B.食物中毒C.肺炎D.败血症E.肠热症正确答案：B5、多选ETEC可产生的两种肠毒素是（）A.LT肠毒素B.ST肠毒素C.RT肠毒素D.S肠毒素E.VT肠毒素正确答案：A, B6、多选患以下疾病后可获得持久免疫力的是（）A.白喉B.伤寒C.细菌性痢疾D.百日咳E.霍乱正确答案：A, B, D, E7、单选两岁幼儿在幼儿园进食后，腹痛、血便和肾功能衰竭。
同时进食儿童也有数人出现相同的症状，被诊断为出血性结肠炎。
细菌培养只有大肠埃希菌生长，可能的病原菌是（）A.肠毒素性大肠埃希菌B.肠出血性大肠埃希菌C.肠致病性大肠埃希菌D.肠侵袭性大肠埃希菌E.肠凝聚性大肠埃希菌正确答案：B8、单选能产生外毒素的志贺菌是（）A.痢疾志贺菌B.福氏志贺菌C.鲍氏志贺菌D.宋内志贺菌E.以上都不是正确答案：A9、单选下列哪种细菌可在4℃生长（）A.炭疽芽孢杆菌B.霍乱弧菌C.小肠结肠炎耶尔森菌D.产气荚膜梭菌E.鼠疫耶尔森菌正确答案：C10、单选发热2天患者肥达反应结果：TH-，TO1：40，PA-，PB1：80，1周后再次检查，TH1：80，TO1：160，PA640，PB1：80，最合理的解释是（）A.确诊为伤寒B.非特异性回忆反应C.甲型副伤寒D.乙型副伤寒E.伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌混合感染正确答案：C参考解析：肥达试验判定结果时应考虑以下几点：①因沙门菌隐性感染或预防接种，人体血清中可含有一定量的有关抗体，故一般O抗体凝集价≥1∶80，H抗体凝集价≥1∶160才有诊断意义；②若两次试验效价效价≥4倍则更有意义；③如O高H不高，可能是沙门菌早期感染或交叉反应；如H高O不高，则可能是接种疫苗后的非特异回忆反应。
粪大肠菌群测定复习试题
粪大肠菌群测定复习试题一、填空题1.地表水环境质量标准(GHZB1—1999)中，对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目作出明确规定：Ⅰ类水质标准值为；Ⅱ类水质标准值为；Ⅲ类水质标准值为；Ⅳ类水质标准值为，Ⅴ类水质标准值为。
答：≤200个/L；≤1000个/L；≤2000个/L；≤5000个/L；≤10000个/L。
2.粪大肠菌群是一部分，用粪大肠菌群作为卫生学指标比用更有。
目前，粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的。
答：总大肠菌群；总大肠菌群；代表性；指示菌。
3.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基，是由、、、等配制而成的，调节pH为，应在灭菌。
答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；氯化钠；7.2-7.4；115℃；20min。
4.农田灌溉水质标准(GB5084—92)中，根据农作物的需求状况，将灌溉水质按灌溉作物分为三类：水作、旱作和蔬菜。
其生物指标粪大肠菌群标准值定为。
答：≤10000个/L。
5.为了区别存在于中的大肠菌群和存在于的大肠菌群,可将培养_ __ _____，在此种条件下仍能_____ 并使____________ _，则称为粪大肠菌群。
答：自然环境；温血动物肠道内；温度提高到44℃；生长；发酵乳糖产酸产气。
6.进行复发酵试验时，用3mm 或灭菌棒将转接到培养液中。
在培养。
培养后观察发酵管表明确信。
答：接种环；培养物；EC；44±0.5℃水浴下，24±2h；产气；试验阳性。
7.在污水综合排放标准(GB8978—1996)中，把医院、兽医院及医疗机构含病原体污水的粪大肠菌群分为三级标准：一级标准值；二级标准值；三级标准值。
而传染病、结核病医院污水的粪大肠菌群三级标准值分别为：、、。
答：500个/L；1000个/L；5000个/L；100个/L；500个/L；1000个/L。
8.EC培养液的配比是：胰胨，乳糖，氯化钠，磷酸二氢钾，胆盐三号，磷酸氢二钾，溶解于蒸馏水中。
在 15min，灭菌后应为。
7-3第七章食品微生物检验-大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌计数
（一）大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌
1、大肠菌群
在一定培养条件下(一般是37℃24小时)能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌 氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。（GB4789.3—2010）
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与 粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌， 这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这 群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、枸橼酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌 和阴沟肠杆菌等。
2、粪大肠菌群
• 根据生长温度的差异，将能在37C生长的称为总 大肠菌群，而在44.5C仍能生长的大肠菌群称为 耐热大肠菌群(thermo-tolerant coliform group) 或 粪大肠菌群（faecal coliform Fc），在人和动物 粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。 因此，粪大肠菌群对粪便污染的指示作用更为直 接和贴切，主要就是大肠艾希氏菌，但也包括克 雷伯氏菌属，正是由于包括了克雷伯氏菌属，使 其与粪便污染的相关性受到了影响。
3)大肠艾希氏菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示 着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近 年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠艾希氏菌检测作为微生物污 染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
4)大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌这三个指标在实际工作中都在应用，但 用途有所不同，一般认为大肠菌群是水源的卫生指标和食品加工卫生状况 的通用指标，粪大肠菌群主要用于贝类和贝类养殖用水的卫生指标，大肠 杆菌用于指示食品受到近期粪便污染或不卫生加工。作为粪便污染的指示 菌，大肠埃希菌检出的意义最大，其次是耐热大肠菌群，总大肠菌群的检 出意义略差一些。
水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 多管发酵法
水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定多管发酵法1. 原理总大肠菌群和粪大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。
试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
2. 仪器(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、3mm接种环。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶、移液枪。
3. 培养基及染色剂的制备3.1 乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。
除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3.3伊红美蓝培养基：①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20g琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解。
再加2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。
根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL 水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍[2]
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大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系及介绍相互关系大肠菌群（总大肠菌群）>粪大肠菌群&耐热大肠菌群>大肠杆菌一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、总大肠菌群所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。
SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。
一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。
大肠杆菌 总大肠菌群 粪大肠菌群区别与联系
大肠杆菌总大肠菌群粪大肠菌群区别与联系相互关系大肠菌群（总大肠菌群） > 粪大肠菌群&耐热大肠菌群 > 大肠杆菌一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、总大肠菌群所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
三、耐热大肠菌群与粪大肠菌群的比较北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。
SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。
一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。
粪大肠菌群
粪大肠菌群
一、填空题
粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验，是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，在____℃培养____h，产酸、产气发酵管表明试验阳性。
二、判断题
1．对受污染严重的水体样品，如果在初发酵中未发现产气，则应将其培养到48h，然后再进一步证实有无大肠菌类细菌。
( )
2．如果粪大肠菌群测定的接种体积为10ml，则试管内应装有三倍乳糖蛋白胨培养液10m1，如接种量为1m1，则接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10m1中。
( ) 3．粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验，是将培养物转接到EC培养液中，在35℃下培养24h。
( )
4．粪大肠杆菌的延迟培养步骤类似于总大肠菌群的延迟培养法。
但是只有在不能对粪大肠杆菌进行滤膜试验时，才可使用延迟培养法。
( )
5．水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法，适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水。
( )
三、选择题
滤膜法测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群时，放置滤膜的操作应为：用已灭菌的镊子夹取灭菌滤膜的边缘，将其_______，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器。
( )
A．粗糙面向下 B．粗糙面向上
四、问答题
如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10ml、1m1和0.1ml而是较低或较高三个浓度的水样，应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数?试写出计算公式。
环境检测上岗证试题答案-9
持证上岗考核自认定理论试卷单位：姓名：日期：考核项目：气相色谱气相色谱-质谱联用挥发性有机物挥发性卤代烃六六六、滴滴涕有机磷农药氯苯类粪大肠菌群总大肠菌群细菌总数一、填空题1.气相色谱法分离过程中，一般情况下，沸点差别越小，极性越相近的组分其保留值的差别就，而保留值差别最小的一对组分就是物质对。
答案：越小难分离2.气相色谱法分离中等极性组分首先选用固定液，组分基本按沸点顺序流出色谱柱。
答案：中极性3.气相色谱分析用归一化法定量的条件是都要流出色谱柱，且在所用检测器上都能。
答案：样品中所有组分产生信号4.气相色谱法常用的浓度型检测器有和。
答案：热导检测器（TCD）电子捕获检测器（ECD）5.气相色谱法常用的质量型检测器有和。
答案：氢火焰检测器（FID）火焰光度检测器（FPD）6.顶空气体分析法是依据原理，通过分析气体样来测定中组分的方法。
答案：相平衡平衡液相7.六六六包括、、和 4种异构体。
答案：α-六六六β-六六六γ-六六六δ-六六六8.DDT包括、、和 4种异构体。
答案：PP,－DEE OP,-DDT PP-DDD PP,-DDT9.气相色谱法测定水中有机磷农药中，萃取时如出现乳化现象，可添加适量的消除干扰。
答案：氯化钠二、选择题1.气相色谱固定液的选择性可以用来衡量（）A. 保留值B. 相对保留值C. 分配系数D.分离度E.理论塔板数答案：B.2.在气相色谱分析中，色谱峰特性与被测物含量成正比的是。
A. 保留时间B. 保留体积C. 相对保留值D.峰面积E. 半峰宽答案：D3.在气相色谱分析中，色谱峰柱的柱效率可以用表示。
（）A. 分配比B. 保留体积C. 保留值D.有效塔板高度E.载气流速答案：D4.气相色变法测定水中有机磷农药时，提取有机磷农药常用的萃取剂是。
（）A. 氯甲烷B. 三氯甲烷C. 四氯化碳答案：B.5.气相色变法测定水中有机磷农药时，有机磷农药在条件下提取。
（）A. 酸性B. 中性C. 碱性答案： B6.GC-MS关机前先关闭。
大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结
大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识总结1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法（1）大肠菌群（colifoms）在36°C培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
（2）粪大肠菌群（Fecal colifoms）也称耐热大肠菌群。
指大肠菌群中能在44.5℃生长、发酵乳糖产生气体的一群细菌。
与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低。
作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。
（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。
是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。
一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。
主要有：O抗原(菌体抗原，150个)；K抗原(荚膜抗原，90个)；H抗原( 鞭毛抗原，50个)（4）致泻性大肠埃希氏菌能侵入肠粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。
产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。
致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻；肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎；(O157：H7；O104：H4；O111；O126等)侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾；粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。
2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系3、相关检验方法标准GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数GB 4789.39- -2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数GB4789.6- 2016 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏O157:H7/NM检验。
大肠菌群和粪大肠菌的检验
实验四大肠菌群和粪大肠菌的检验一、实验目的要求1、了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。
2、学习并掌握大肠菌群检验的原理和方法。
二、原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶2个制生理盐水3、250ml三角瓶1个制EMB琼脂4、18×180mm试管8支稀释及制双料乳糖胆盐发酵管5、18×150mm试管20～25支单料乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管6、13×130mm试管20支制蛋白胨水、EC肉汤7、1ml移液管 5 支8、10ml移液管 3 支9、直径为90mm平皿12套制EMB平板10、250ml量筒1支（二）应灭菌消毒的器材剪刀1把开瓶器不锈钢药匙1把滴管胶头4只称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0.85%NaCl生理盐水300ml 500ml三角瓶2、乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支5支60ml 18×180mm试管(装有导管)单料：10ml/ 8支90ml 18×150mm试管(装有导管)3、EMB琼脂：1瓶120ml 250ml三角瓶4、乳糖发酵管：3ml/支5支20ml 13×130mm试管(装有导管)5、EC肉汤：3ml/支6支20ml 13×130mm试管(装有导管)6、蛋白胨水：2ml/支10支20ml 13×130mm试管四、实验内容（第一天）样品处理及初发酵接种：所需培养基与器材：? 培养基：1. 0.85%NaCl生理盐水：300ml 1瓶2. 乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支3～5支18×180mm试管(有导管)单料：10ml/支6～8支18×150mm试管(有导管)? 灭菌器材：500ml广口瓶（内带5mm带玻璃珠）1～2个18×180mm试管3支250ml量筒1支1ml移液管 5 支10ml移液管3支当样品袋装样品时：消毒酒精、棉花、无菌剪刀、称量纸、不锈钢药匙、橡皮胶头3只；当样品瓶装样品时：石炭酸消毒纱布两块、开瓶器。
细菌+总大肠+粪大肠
细菌学监测+细菌总数+总大肠菌群+粪大肠菌群第一节细菌学监测（一）基础知识一、填空题1．用于细菌学检测的吸管上端要用普通棉花填塞，并注意松紧适度，使其快速、准确流出所用体积。
2．测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于160~170 ℃干热灭菌2 h，或用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌15 min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在O．5％过氧乙酸lO min或环氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用121℃高压蒸汽灭菌器灭菌1 5 mina3．测定自来水样中的细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水3~5 min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约3 Inin消毒水龙头或用75％酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水l min，以充分去除水管中的滞留杂质。
4．测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过2 h，否则应使用1 0℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过 6 h5．分层检测地表水中的细菌学指标时，应自上而下（方向）进行采样，以免不同层次的搅扰；与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。
6．配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。
每批应注明配置日期，已灭菌的培养基可在4～10℃存放一个月，存放时应避免阳光直射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。
二、判断题1．检测水中的细菌学指标时，每次试验要以无菌水为样品，对培养基、滤膜、玻璃器皿和冲洗用水做无菌性检验。
（√）2．新购置的用于细菌学指标测定的玻璃器皿，因含游离碱，应先在2％盐酸中浸泡数小时，用自来水冲洗干净后，再用蒸馏水冲洗1～2次沥干备用。
（√）3．培养细菌的玻璃器皿，应先经灭菌，倒出培养基，用肥皂水或洗涤剂刷洗残渍，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗l～2次，沥干备用。
（√）4．细菌学检测用的高压蒸汽灭菌器，每次使用时，在压力上升之前，必须先用蒸汽将器内的冷空气完全驱尽，并要记录温度、气压和灭菌的时间。
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一．填空题
1.总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为____________、_____________和______________。
2.粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验，是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，在____℃培养____h，产酸产气则为阳性。
二、判断题
1.总大肠菌群测定时，如果不能实现常规的检验步骤，例如水样运输途中不能保证所要求的温度，或采样后不能在允许的时间内进行检验等，都可采用延迟培养法。
（）
2.对受污染严重的水体样品，如果在初发酵中未发现产气，则应将其培养到48h，然后再进一步证实有无大肠菌类细菌。
( )
3．如果粪大肠菌群测定的接种体积为10ml，则试管内应装有三倍乳糖蛋白胨培养液10m1，如接种量为1m1，则接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10m1中。
( )
4．粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验，是将培养物转接到EC培养液中，在35℃下培养24h。
( )
5．水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法，适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水。
( )
三、选择题
1．我国目前以为总大肠菌群的报告单位，MPN值再乘即为该体积水样中的总大肠菌群数。
( )
A． 100m1， 10 B． 1 L， 1 C， 1 L， 10
四．简答题
1.简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。
2.如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10ml、1m1和0.1ml而是较低或较高三个浓度的水样，应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数?试写出计算公式。
答案
一．1.初发酵试验 平板分离 复发酵试验
2. 37 24
二．1.正确
2.正确
3.错误
4.错误
5.正确
三.1.C
四. 1.答案：(1)将水样做1∶10稀释。
(2)在各装有5m1三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入10ml 水样；在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1ml 水样；在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1m1 1∶10的稀释的水样。
(3)将各管充分混匀，置37℃恒温箱培养24h 。
2.答案：如果接种的水样量不是10m1、1m1和0.1m1，而是较低或较高的三个浓度的水样，可先查MPN 表求出MPN 指数，再经过下面的公式换算成每100m1的MPN 值。
MPN 值乘以10，即为1L 水样中的总大肠菌群数(或粪大肠菌群数)。
()()ml ml MPN MPN 接种量最大的一管
指数值10⨯=。