9种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)

9种氨基酸UPLC分析方法（异硫氰酸苯酯柱前衍生

法）

2013-09-05

方法：

HPLC

基质：

标准溶液

应用编号：

103087

化合物：

Asp（天冬氨酸） Glu(谷氨酸) Ser(丝氨酸) Gly(甘

氨酸) His(组氨酸) Arg(精氨酸) Thr(苏氨酸) Ala(丙

氨酸) Pro(脯氨酸) Tyr(酪氨酸) Val(缬氨酸) Met(蛋

氨酸) Cys(胱氨酸) IIe(异亮氨酸) Leu(亮氨酸)

Nle(正亮氨酸) Phe(苯丙氨酸) Trp(色氨酸) Lys(赖

氨酸)

固定相：

Endeavorsil C18

色谱柱/前处理小柱：

Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm

样品前处理：

1 溶液配制：氨基酸储备液：称取一定量氨基酸标准

品，用0.1 mol/l HCl水溶液溶解，配成氨基酸单标

浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液：将储备液用0.1

mol/l HCl水溶液稀释，得到浓度为0.002 mol/l的氨

基酸单标和混标，待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液：量

取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰

酸苯酯（PITC）溶液：将250 μl异硫氰酸苯酯用乙

腈定容至10 ml，得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液三

乙胺溶液：将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml，得

到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液：量

取8.3 ml浓盐酸，然后用纯水定容至1000 ml 2 标准

溶液衍生化：量取200 μl氨基酸混合使用液，置于

1.5 ml塑料离心管中，准确加100 μl 1 mol/l三乙

胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈

溶液，混匀，室温反应1小时，然后加入正己烷400 μ

l，旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s，静置分层，取200 μ

l下层溶液与800 μl水混合，0.22 μm针式过滤器过滤，待分析。

色谱条件：色谱柱：Endeavorsil C18，100×2.1 mm，1.8 μm (Cat#:87003) 流动相： A：0.05 mol/L乙酸钠水溶液（冰乙酸调节pH至6.50±0.05） B：甲醇：乙腈：水=20：60：20（V：V：V）流速：0.3 mL/min 柱温：35 ℃检测器：UV 254 nm 进样体积：2.0 μL

文章出处：天津应用实验室

关键字：天然氨基酸、Asp（天冬氨酸）、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)、UPLC、奋进、Endeavorsil C18、异硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC

谱图：