流式细胞学在血液病中的应用

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AML 分类：
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史前期：形态学 FAB分类 1976：形态学+细胞化学+分化特点 FAB分类-修订版 1985：M6， M3， M4eo WHO 2001: 遗传学 WHO 2008: 分子生物学
c-KIT D816突变
原始细胞
B-ALL
B-ALL
Markers TDT CD34 HLA-DR CD10 CD19 CD20 CD22 CyCD79 CyIgμ SmIg pro-B-ALL Common ALL pre-B-ALL ++ + ++ - ++ ++ ++ - ++ +/++ ++ ++ -/+ ++ ++ - ++ +/++ ++ ++ + ++ ++ ++ -
急性白血病（不能分型），请结合临床。
幼稚细胞
原始（母）细胞
l
l
原始细胞是由形态和功能来定义的： l AML is > 20% blasts in blood or bone marrow 原始细胞包括： l 干细胞 l 组细胞 l 早幼粒细胞 Promyelocytes l 幼稚单核细胞 Promonocytes l 原始淋巴细胞 (B and T)
CD makers
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T cell (Tiny): l CD2, CD3, CD5, CD7 l CD4, CD8 l cCD3 B cell (Big) l CD19, CD20, CD22, CD24 l CD79a Myeloid (3rd) l CD13, CD33 l MPO Monocyte (4th) l CD4, CD14, CD24, CD64 Blast l CD34 l TdT l CD117 (c-­‐kit) Mature Lymphocytes: l Kappa and lambda Plasma cells: l C-­‐kappa and c-­‐lambda l CD138 (specific) and CD38 (sensiQve)
T-ALL
T-ALL
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KIT 突变在t(8;21) AML中的负 面影响
Blood 2006, 107:1791-9
Leukemia 2006, 20:965-70
WHO 2008 新界定的突变
基因 阳性率 临床意义 预后 与其他遗传 异常相关性
t(8;21) inv(16)/t(16;16)
KIT
5%
预后因素
差
要求：
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必须是:
l l
细胞处于悬浮状态 质量稳定的单克隆抗体
l
可以是:
l
活细胞或固定后的细胞
分析能力：
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密度:
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105 – 107 细胞/ml 可以高达108
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速度:
l l
可以达到50,000 events/sec 一般是1,000 to 5,000
论坛
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NK-­‐cell lymphoblasQc leukemia/lymphoma
B-myeloid
Down综合征相关的髓系增殖症
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短暂髓系造血异常 (短暂骨髓增殖异常)
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出生后前三个月自发缓解 表达 CD34, CD117, CD13, CD33, CD41, CD61 不表达 MPO, CD15, CD14 20-30% 的病例在 1-3 年内进展为AML.
AML-M5
AML-M6
AML-M6
AML-M7
Acute leukemias of ambiguous lineage
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Acute undifferenQated leukemia Mixed phenotype acute leukemia with t(9;22)(q34;q11.2) BCR-­‐ABL1 Mixed phenotype acute leukemia with t(v;11q23) MLL rearranged Mixed phenotype acute leukemia, B/myeloid, NOS Mixed phenotype acute leukemia, T/myeloid, NOS Mixed phenotype acute leukemia, NOS-­‐rare types Other ambiguous lineage leukemias
Hairy cells
多学科的综合诊断
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诊断策略：
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综合多种诊断方法和技术 结合临床 鉴别诊断
M G
I M
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诊断方法：
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病史 形态学 流式细胞学 遗传学 分子生物学
诊
济南 2014年8月22-24日
http://www.chinablood.com.cn/main.html 1800-205-9607
l
APML 伴 RARA 变异型易位
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形态学与典型病例类似 t(11;17)(q23;q12) ZBTB12-RARA, 维甲酸治疗无效 t(11;17)(q13;q12) NUMA1-RARA (nuclear matrix associated gene) t(17;17)(q11;q12) STAT5B-RARA,维甲酸治疗无效 t(5;17)(q35;q12) NPM1-RARA,维甲酸治疗有效
PML-RARA S type
急性早幼粒细胞白血病(APML)
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急诊病人：易发DIC
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具体有效的治疗方案：维甲酸 预后良好
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典型的免疫表型：
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CD34 和 HLA-DR 阴性 CD56+ 在20%病人中阳性，预后不良
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染色体易位：
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PML-RARA 40% 病人可伴有其他遗传学异常
FLT3
20-40%
预后因素 对疾病进行临 时性的定义 对疾病进行临 时性的定义
差 良好 （如 果没有 FLT3突变） 良好
---M4, M5 CD34 -
NPM1
30%
CEBPA
10%
M1，M2 CD7+
AML-M3
AML-M3v
DDx of M3
HLA-DR CD117 CD34 CD13 CD33
CD45/SS
SS/CD45
பைடு நூலகம்
如何鉴定异常细胞群
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正常细胞
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抗原表达具有一致性和可重复性 抗原的表达方式与细胞成熟过程相关
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肿瘤细胞
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正常抗原的表达可以增加或减少 成熟性抗原的表达具有不同步性 异常抗原的表达 同一抗原在流式上表现为集中和同步的表达方式
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Down 综合征相关的髓系白血病
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表达 CD117, CD13, CD33, CD61 不表达 MPO, CD15, CD14 50% 的病例 CD34-; 30% 的病例 CD41-
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预后:
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DS AML 且无 GATA1 突变的预后良好，采用 DS 特异的治疗方法 DS AML 伴GATA1突变者预后较正常AML患儿预后差.
APML的少颗粒 (细颗粒) 变型
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独特的形态学特征
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少颗粒, 仍可见到Auer小体. 双叶核, 与单核细胞相似
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高白细胞数，倍增时间快
CD13 CD33 CD34 CD64 CD14
急性髓系单核白血病 （M4）
Myeloperoxidase Non-specific esterase
流式细胞学在血液病理中的应用
汝昆 中国医学科学院 血液病医院病理中心
血液病理
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诊断策略：
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综合多种诊断方法和技术 结合临床 鉴别诊断
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诊断方法：
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病史 形态学 流式细胞学 遗传学 分子生物学
定义
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流式细胞检查通过光学的方法对细胞的成分和 结构进行定量分析。