不同来源黄芪中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量测定_徐凌川
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式中：C 为样品溶液中葡萄糖含量（mg）；D 为样品溶液的稀释倍数；F 为换算因数；W 为样品 的重量(mg)（表 9）。
样1 品 号 吸 0.374 光 度
2 0.356
3 0.367
表 7 重现性实验结果
4
5
平均
RSD%
0.363
0.355
0.363
2.18
215
序号
1 2 3 4 5
样品加入量 （g） 1.5000 1.5002 1.5002 1.5001 1.5000
取 1 号、2 号样品中粉各三份,每份 4g，精密称定，置索式提取器中，加甲醇 40ml，冷浸过夜， 再加甲醇适量，加热回流 4h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水 10ml，微热使溶解，用水饱和 的正丁醇振摇提取 4 次，每次 40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤 2 次，每次 40ml，弃去氨液， 正丁醇液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，放冷，通过 D101 型大孔吸附树脂柱（内径 1.5cm，长 12cm）， 以水 50ml 洗脱，弃取水液，再用 40％乙醇 30ml 洗脱，弃取洗脱液，继用 70％乙醇 80ml 洗脱，收 集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至 5ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 3.3 对照品溶液的制备
结果表明，溶液在 1h 之内显色稳定，可进行测定。 (5) 精密度试验
精确吸取对照品溶液 1.5ml 定容到 50ml 容量瓶中，摇匀。分别精确吸取 2ml 于 5 个试管中，按 标准曲线下方法测定吸光度（表 6）。 结果表明，仪器的精密度良好。
显色 时间 吸光 度
10 0.684
20 0.722
表 5 稳定性实验结果
黄芪样品
多糖含量（%）
1 号样品
8.62
2 号样品
14.15
３号样品
4.01
RSD% 2.89
3．黄芪甲苷的含量测定 3.1 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（KromosilC18 5µm 150×4.6mm）；流动相：乙腈-水(32： 68)，流速：1ml/min；进样量：20µL；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为100.6℃，氮气流速为 2.7L/min。在本色谱条件下，对照品和样品色谱图见附图。 3.2 供试品溶液的制备[5]
膜荚黄芪 Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge，产自文登和新泰（分别为 1 号和 2 号样品）； 蒙古黄芪 A.membranaceus(Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao，购于药店（3 号样品）。样品经徐 凌川老师鉴定。 (2) 标准品
黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge或蒙古黄芪A. membranaceus (Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao的干燥根，是传统的补益药，具有补气升阳，益胃固表，利 水消肿，脱毒生肌等功效。研究发现，黄芪中含有黄芪皂苷、黄酮、多糖、单糖、生物碱、叶酸、 多种氨基酸、维生素、苦味素，以及硒、锌、铁等14种人体所需的微量元素，其中黄芪甲苷常作为 指标性成分用于黄芪药材的质量控制。黄芪多糖为黄芪有效成分之一,本文运用超声波技术提取黄芪 粗多糖，并用苯酚-硫酸比色法[2]对多糖进行含量测定，取得令人满意的结果；另采用HPLC-ELSD法 对黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现 性佳，回收率高，是一种良好的黄芪甲苷含量测定方法[1]。 1．仪器、试剂及样品 1.1 仪器
精密吸取 1 号、2 号样品水提液 0.1ml 分别定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。分别精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度。
精密吸取 3 号样品水提液 0.1ml 定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 2ml 与试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度。
上述各样品吸光度测定值，分别用外标两点法求出葡萄糖含量，再按下式计算各样品多糖含量： 多糖含量％=CDF/W×100％
F=W/C·D 式中：W 为多糖重量（mg）；C 为多糖液中葡萄糖的重量（mg）；D 为多糖的稀释倍数。测得 F=0.384。 (4) 稳定性试验
取“多糖的提取”项下 1 号样品的提取液，精密吸取 0.3ml 提取液定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。 分别精密吸取 2ml 于 6 个试管中，按标准曲线下方法分别在 10、20、30、40、50、1h 时测定吸光度 （表 5）。
0.8 0.6 0.4 0.2
0 0
黄芪多糖标准曲线
0.01
0.02
0.03
浓度(mg/ml)
0.04
0.05
图 1 黄芪多糖标准曲线
表 2 因素水平表
提取次数（次） （A）
溶剂用量（ml） （B）
1
10
2
15
3
20
浸渍温度(℃ ) （C） 30 45 60
表 3 正交试验结果
A
B
C
D
1
1
1
1
1
2
2
苯酚，A.R.（天津市巴斯夫化工有限公司）；硫酸，A.R. (天津市科密欧化学试剂开发中心)；95 ％乙醇，A.R. (山东济南市全福无水酒精厂)；甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；
211
乙腈为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；蒸馏水；重蒸馏水。 1.3 样品及标准品 (1) 样品
加入 20 倍量的 95％乙醇，超声提取 80min，滤过，滤渣挥干乙醇。将滤渣置于三角瓶中，加 10 倍 量的水，在 60℃下提取 40min，滤过，滤液保存，滤渣再次提取，连续提取三次。合并滤液并浓缩， 后定容于 50ml 容量瓶中，备用。 (3) 换算因素的测定[4]
取“多糖的提取”项下 2 号样品的提取液，转移至三角瓶中，加 95％乙醇至含醇量达 85％，室温 静置 36h，抽滤，滤渣置减压干燥箱内，70℃下干燥至恒重。精密称取干燥恒重的黄芪多糖 20mg， 水溶解后定容于 50ml 容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液 1.5ml 定容到 50ml 容量瓶中，摇匀。精确吸取 2ml 加入试管中，按标准曲线下方法测其吸光度。按下式计算换算因素：
2
1
3
3
3
2
1
2
3
2
2
3
1
2
3
1
2
3
1
3
2
3
2
1
3
3
3
2
1
3.42
5.15
1.34
ห้องสมุดไป่ตู้2.93
3.38
2.90
2.03
4.48
4.66
3.42
8.1
4.06
1.28
2.25
6.76
1.55
提取时间(分) （D） 20 40 60
收率（%） 1.38 1.36 7.53 3.15 5.84 1.15 10.93 1.49 1.57
表 8 回收率试验结果
标准品加入量 回收量
回收率
（mg）
(mg)
(%)
156.56
147.32
94.1
156.53
158.38
101.18
156.66
153.15
97.76
156.40
157.03
100.4
156.26
156.06
99.87
均值（%） 98.66
表 9 不同品种黄芪根中多糖含量测定结果
含量测定
不同来源黄芪中黄芪多糖和 黄芪甲苷的含量测定
徐凌川
（山东中医药大学，济南 250014）
[摘要] 目的：测定黄芪中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量。方法：用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法和紫外分光光 度法进行含量测定。结果：本省文登和新泰黄芪基地所产黄芪的黄芪多糖含量分别为8.62％和14.15％，黄芪甲苷含 量分别为0.085％和0.081％。黄芪多糖和黄芪甲苷和的平均回收率分别为：98.66％、102.36％，相对标准偏差分别 为：2.89％、1.16％。结论：本文建立的方法准确可靠、灵敏度高、重现性好，可用于黄芪多糖和黄芪甲苷的含量 测定。 [关键词] 高效液相色谱法 紫外分光光度法 黄芪甲苷 黄芪多糖 含量测定
30
40
50
60
平均 RSD%
0.683 0.725 0.727 0.713 0.709 2.87
214
表 6 精密度实验结果
试管
号
1
2
3
4
5
平均值 RSD%
吸光 0.440 0.445 0.442
0.443
0.435 0.441
0.86
度
(6) 重现性实验 取 3 号样品粗粉 5 份，精密称定。按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，
根据表 2、表 3、表 4 可知，各影响因素对试验影响大小的顺序为：浸渍温度、溶剂用量、提取 时间、提取次数。其中浸渍温度对试验有显著性影响。分析结果认为，最佳提取工艺为：10 倍量的 水，浸渍温度 60℃，提取三次，每次提取 40min。
212
标准葡萄糖溶液（ml） 浓度（mg/ml） 吸光度（A）
摇匀。精确吸取提取液 0.4ml 分别定容于 100ml 容量瓶中，再分别精确吸取 2ml 于试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度（表 7）。
结果表明，实验的重现性良好。 (7) 回收率试验
精确称取 3 号样品粗粉 1.5g，5 份，将其加入三角瓶中。每份精密加入葡萄糖标准品 156.6mg， 按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 0.2ml 分别定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。各精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度（表 8）。 (8) 含量测定及结果
取黄芪甲苷标准品 57mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为 对照品储备液。 3.4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液 0.5、1.5、2.5、5.0、7.5ml 分别置 10ml 量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇 匀，各进样 20µl 注入高效液相色谱仪，测定。并以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标， 绘制标准曲线，得回归方程为：Y=14599X-665.13；r=0.9998（表 10），图 2。结果表明，黄芪甲苷 在 0.057mg/ml～0.855mg/ml 之间呈较好的线性关系。
213
表 4 方差分析表（a=0.05）
因素
偏差平方和
自由度
F比
F 临界值 显著性
提取次数
3.186
2
1.000
19
溶剂用量
8.379
2
2.630
19
浸渍温度
83.054
2
26.068
19
※
提取时间
3.851
2
1.209
19
误差
3.19
2
(2) 多糖的提取 取 1-3 号样品的根粉碎，过 20 目筛，80℃下干燥。各称取约 3g 粉末各 3 份分别加入三角瓶中，
采用正交试验设计，对多糖提取工艺进行优选。试验选择提取次数、溶剂用量、浸渍温度、提 取时间 4 个因素为考察对象，根据初步试验，每个因素确定三个水平（表 2）。
取过 20 目筛的蒙古黄芪粗粉，用 95％乙醇去除脂溶性杂质后，根据表 2 中的条件进行超声波 提取，采用 L9（34）正交表安排试验，按标准曲线下方法测定吸收度，由回归方程计算多糖含量。 正交试验（表 3、表 4）。
表 1 线性关系测定结果（黄芪多糖）
0.6
0.9
1.2
1.5
0.012
0.018
0.024
0.03
0.219
0.307
0.383
0.472
1.8 0.036 0.559
2.1 0.042 0.630
水平
1 2 3
试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Ⅰj[平均] Ⅱj[平均] Ⅲj[平均]
R
吸光度
精密称取苯酚 5g，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 (3) 标准曲线的绘制
精密量取标准葡萄糖溶液 0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1ml 置于 50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度， 摇匀。各精密吸取上述溶液 2ml 于试管中，加入 5％苯酚溶液 1.0ml，后迅速加入浓硫酸 5.0ml，振 摇 5min，室温下放置 30min，以蒸馏水为空白对照，在 490nm 波长[3]处测定吸光度。以吸光度（y） 对浓度（x）进行线性回归，得标准曲线方程:y=13.81x+0.0555；r=0.9995（表 1，图 1）。 2.2 多糖的提取方法研究 (1) 提取工艺的优选
葡萄糖标准品为分析纯（北京益利精细化学品有限公司；批号：20030806）；黄芪甲苷标准品（中 国药品生物制品鉴定所；批号：110781-200512）。 2．多糖的含量测定 2.1 标准曲线的绘制 (1)标准葡萄糖溶液的配制
精密称取葡萄糖标准品 100mg，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成 1mg/ml 的标准葡萄糖溶液,备用。 (2)2 5％苯酚溶液的配制
UV-2800 型紫外分光光度计；KQ-250E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA1104 万分之一电子分析天平（上海天平仪器厂）；AF240 十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒公司）； FA1104 型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（Agilent 公司）；ELSD-2000 蒸发光散射检测器；ANASTAR 液相色谱工作站。 1.2 试剂
样1 品 号 吸 0.374 光 度
2 0.356
3 0.367
表 7 重现性实验结果
4
5
平均
RSD%
0.363
0.355
0.363
2.18
215
序号
1 2 3 4 5
样品加入量 （g） 1.5000 1.5002 1.5002 1.5001 1.5000
取 1 号、2 号样品中粉各三份,每份 4g，精密称定，置索式提取器中，加甲醇 40ml，冷浸过夜， 再加甲醇适量，加热回流 4h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水 10ml，微热使溶解，用水饱和 的正丁醇振摇提取 4 次，每次 40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤 2 次，每次 40ml，弃去氨液， 正丁醇液蒸干，残渣加水 5ml 使溶解，放冷，通过 D101 型大孔吸附树脂柱（内径 1.5cm，长 12cm）， 以水 50ml 洗脱，弃取水液，再用 40％乙醇 30ml 洗脱，弃取洗脱液，继用 70％乙醇 80ml 洗脱，收 集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至 5ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 3.3 对照品溶液的制备
结果表明，溶液在 1h 之内显色稳定，可进行测定。 (5) 精密度试验
精确吸取对照品溶液 1.5ml 定容到 50ml 容量瓶中，摇匀。分别精确吸取 2ml 于 5 个试管中，按 标准曲线下方法测定吸光度（表 6）。 结果表明，仪器的精密度良好。
显色 时间 吸光 度
10 0.684
20 0.722
表 5 稳定性实验结果
黄芪样品
多糖含量（%）
1 号样品
8.62
2 号样品
14.15
３号样品
4.01
RSD% 2.89
3．黄芪甲苷的含量测定 3.1 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（KromosilC18 5µm 150×4.6mm）；流动相：乙腈-水(32： 68)，流速：1ml/min；进样量：20µL；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为100.6℃，氮气流速为 2.7L/min。在本色谱条件下，对照品和样品色谱图见附图。 3.2 供试品溶液的制备[5]
膜荚黄芪 Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge，产自文登和新泰（分别为 1 号和 2 号样品）； 蒙古黄芪 A.membranaceus(Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao，购于药店（3 号样品）。样品经徐 凌川老师鉴定。 (2) 标准品
黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge或蒙古黄芪A. membranaceus (Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao的干燥根，是传统的补益药，具有补气升阳，益胃固表，利 水消肿，脱毒生肌等功效。研究发现，黄芪中含有黄芪皂苷、黄酮、多糖、单糖、生物碱、叶酸、 多种氨基酸、维生素、苦味素，以及硒、锌、铁等14种人体所需的微量元素，其中黄芪甲苷常作为 指标性成分用于黄芪药材的质量控制。黄芪多糖为黄芪有效成分之一,本文运用超声波技术提取黄芪 粗多糖，并用苯酚-硫酸比色法[2]对多糖进行含量测定，取得令人满意的结果；另采用HPLC-ELSD法 对黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现 性佳，回收率高，是一种良好的黄芪甲苷含量测定方法[1]。 1．仪器、试剂及样品 1.1 仪器
精密吸取 1 号、2 号样品水提液 0.1ml 分别定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。分别精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度。
精密吸取 3 号样品水提液 0.1ml 定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 2ml 与试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度。
上述各样品吸光度测定值，分别用外标两点法求出葡萄糖含量，再按下式计算各样品多糖含量： 多糖含量％=CDF/W×100％
F=W/C·D 式中：W 为多糖重量（mg）；C 为多糖液中葡萄糖的重量（mg）；D 为多糖的稀释倍数。测得 F=0.384。 (4) 稳定性试验
取“多糖的提取”项下 1 号样品的提取液，精密吸取 0.3ml 提取液定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。 分别精密吸取 2ml 于 6 个试管中，按标准曲线下方法分别在 10、20、30、40、50、1h 时测定吸光度 （表 5）。
0.8 0.6 0.4 0.2
0 0
黄芪多糖标准曲线
0.01
0.02
0.03
浓度(mg/ml)
0.04
0.05
图 1 黄芪多糖标准曲线
表 2 因素水平表
提取次数（次） （A）
溶剂用量（ml） （B）
1
10
2
15
3
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浸渍温度(℃ ) （C） 30 45 60
表 3 正交试验结果
A
B
C
D
1
1
1
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1
2
2
苯酚，A.R.（天津市巴斯夫化工有限公司）；硫酸，A.R. (天津市科密欧化学试剂开发中心)；95 ％乙醇，A.R. (山东济南市全福无水酒精厂)；甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；
211
乙腈为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；蒸馏水；重蒸馏水。 1.3 样品及标准品 (1) 样品
加入 20 倍量的 95％乙醇，超声提取 80min，滤过，滤渣挥干乙醇。将滤渣置于三角瓶中，加 10 倍 量的水，在 60℃下提取 40min，滤过，滤液保存，滤渣再次提取，连续提取三次。合并滤液并浓缩， 后定容于 50ml 容量瓶中，备用。 (3) 换算因素的测定[4]
取“多糖的提取”项下 2 号样品的提取液，转移至三角瓶中，加 95％乙醇至含醇量达 85％，室温 静置 36h，抽滤，滤渣置减压干燥箱内，70℃下干燥至恒重。精密称取干燥恒重的黄芪多糖 20mg， 水溶解后定容于 50ml 容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液 1.5ml 定容到 50ml 容量瓶中，摇匀。精确吸取 2ml 加入试管中，按标准曲线下方法测其吸光度。按下式计算换算因素：
2
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2
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3
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5.15
1.34
ห้องสมุดไป่ตู้2.93
3.38
2.90
2.03
4.48
4.66
3.42
8.1
4.06
1.28
2.25
6.76
1.55
提取时间(分) （D） 20 40 60
收率（%） 1.38 1.36 7.53 3.15 5.84 1.15 10.93 1.49 1.57
表 8 回收率试验结果
标准品加入量 回收量
回收率
（mg）
(mg)
(%)
156.56
147.32
94.1
156.53
158.38
101.18
156.66
153.15
97.76
156.40
157.03
100.4
156.26
156.06
99.87
均值（%） 98.66
表 9 不同品种黄芪根中多糖含量测定结果
含量测定
不同来源黄芪中黄芪多糖和 黄芪甲苷的含量测定
徐凌川
（山东中医药大学，济南 250014）
[摘要] 目的：测定黄芪中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量。方法：用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法和紫外分光光 度法进行含量测定。结果：本省文登和新泰黄芪基地所产黄芪的黄芪多糖含量分别为8.62％和14.15％，黄芪甲苷含 量分别为0.085％和0.081％。黄芪多糖和黄芪甲苷和的平均回收率分别为：98.66％、102.36％，相对标准偏差分别 为：2.89％、1.16％。结论：本文建立的方法准确可靠、灵敏度高、重现性好，可用于黄芪多糖和黄芪甲苷的含量 测定。 [关键词] 高效液相色谱法 紫外分光光度法 黄芪甲苷 黄芪多糖 含量测定
30
40
50
60
平均 RSD%
0.683 0.725 0.727 0.713 0.709 2.87
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表 6 精密度实验结果
试管
号
1
2
3
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平均值 RSD%
吸光 0.440 0.445 0.442
0.443
0.435 0.441
0.86
度
(6) 重现性实验 取 3 号样品粗粉 5 份，精密称定。按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，
根据表 2、表 3、表 4 可知，各影响因素对试验影响大小的顺序为：浸渍温度、溶剂用量、提取 时间、提取次数。其中浸渍温度对试验有显著性影响。分析结果认为，最佳提取工艺为：10 倍量的 水，浸渍温度 60℃，提取三次，每次提取 40min。
212
标准葡萄糖溶液（ml） 浓度（mg/ml） 吸光度（A）
摇匀。精确吸取提取液 0.4ml 分别定容于 100ml 容量瓶中，再分别精确吸取 2ml 于试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度（表 7）。
结果表明，实验的重现性良好。 (7) 回收率试验
精确称取 3 号样品粗粉 1.5g，5 份，将其加入三角瓶中。每份精密加入葡萄糖标准品 156.6mg， 按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 0.2ml 分别定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。各精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度（表 8）。 (8) 含量测定及结果
取黄芪甲苷标准品 57mg，精密称定，置 50ml 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为 对照品储备液。 3.4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液 0.5、1.5、2.5、5.0、7.5ml 分别置 10ml 量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇 匀，各进样 20µl 注入高效液相色谱仪，测定。并以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标， 绘制标准曲线，得回归方程为：Y=14599X-665.13；r=0.9998（表 10），图 2。结果表明，黄芪甲苷 在 0.057mg/ml～0.855mg/ml 之间呈较好的线性关系。
213
表 4 方差分析表（a=0.05）
因素
偏差平方和
自由度
F比
F 临界值 显著性
提取次数
3.186
2
1.000
19
溶剂用量
8.379
2
2.630
19
浸渍温度
83.054
2
26.068
19
※
提取时间
3.851
2
1.209
19
误差
3.19
2
(2) 多糖的提取 取 1-3 号样品的根粉碎，过 20 目筛，80℃下干燥。各称取约 3g 粉末各 3 份分别加入三角瓶中，
采用正交试验设计，对多糖提取工艺进行优选。试验选择提取次数、溶剂用量、浸渍温度、提 取时间 4 个因素为考察对象，根据初步试验，每个因素确定三个水平（表 2）。
取过 20 目筛的蒙古黄芪粗粉，用 95％乙醇去除脂溶性杂质后，根据表 2 中的条件进行超声波 提取，采用 L9（34）正交表安排试验，按标准曲线下方法测定吸收度，由回归方程计算多糖含量。 正交试验（表 3、表 4）。
表 1 线性关系测定结果（黄芪多糖）
0.6
0.9
1.2
1.5
0.012
0.018
0.024
0.03
0.219
0.307
0.383
0.472
1.8 0.036 0.559
2.1 0.042 0.630
水平
1 2 3
试验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Ⅰj[平均] Ⅱj[平均] Ⅲj[平均]
R
吸光度
精密称取苯酚 5g，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 (3) 标准曲线的绘制
精密量取标准葡萄糖溶液 0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1ml 置于 50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度， 摇匀。各精密吸取上述溶液 2ml 于试管中，加入 5％苯酚溶液 1.0ml，后迅速加入浓硫酸 5.0ml，振 摇 5min，室温下放置 30min，以蒸馏水为空白对照，在 490nm 波长[3]处测定吸光度。以吸光度（y） 对浓度（x）进行线性回归，得标准曲线方程:y=13.81x+0.0555；r=0.9995（表 1，图 1）。 2.2 多糖的提取方法研究 (1) 提取工艺的优选
葡萄糖标准品为分析纯（北京益利精细化学品有限公司；批号：20030806）；黄芪甲苷标准品（中 国药品生物制品鉴定所；批号：110781-200512）。 2．多糖的含量测定 2.1 标准曲线的绘制 (1)标准葡萄糖溶液的配制
精密称取葡萄糖标准品 100mg，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成 1mg/ml 的标准葡萄糖溶液,备用。 (2)2 5％苯酚溶液的配制
UV-2800 型紫外分光光度计；KQ-250E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA1104 万分之一电子分析天平（上海天平仪器厂）；AF240 十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒公司）； FA1104 型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（Agilent 公司）；ELSD-2000 蒸发光散射检测器；ANASTAR 液相色谱工作站。 1.2 试剂