不同来源黄芪中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量测定_徐凌川

摇匀。精确吸取提取液 0.4ml 分别定容于 100ml 容量瓶中，再分别精确吸取 2ml 于试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度（表 7）。
结果表明，实验的重现性良好。 (7) 回收率试验
精确称取 3 号样品粗粉 1.5g，5 份，将其加入三角瓶中。每份精密加入葡萄糖标准品 156.6mg， 按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 0.2ml 分别定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。各精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度（表 8）。 (8) 含量测定及结果
精密吸取 1 号、2 号样品水提液 0.1ml 分别定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。分别精密吸取 2ml 于试管中，按标准曲线下方法测定吸光度。
精密吸取 3 号样品水提液 0.1ml 定容于 50ml 容量瓶中，摇匀。精密吸取 2ml 与试管中，按标准 曲线下方法测定吸光度。
上述各样品吸光度测定值，分别用外标两点法求出葡萄糖含量，再按下式计算各样品多糖含量： 多糖含量％=CDF/W×100％
苯酚，A.R.（天津市巴斯夫化工有限公司）；硫酸，A.R. (天津市科密欧化学试剂开发中心)；95 ％乙醇，A.R. (山东济南市全福无水酒精厂)；甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；
211
乙腈为色谱纯（山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；蒸馏水；重蒸馏水。 1.3 样品及标准品 (1) 样品
黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge或蒙古黄芪A. membranaceus (Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao的干燥根，是传统的补益药，具有补气升阳，益胃固表，利 水消肿，脱毒生肌等功效。研究发现，黄芪中含有黄芪皂苷、黄酮、多糖、单糖、生物碱、叶酸、 多种氨基酸、维生素、苦味素，以及硒、锌、铁等14种人体所需的微量元素，其中黄芪甲苷常作为 指标性成分用于黄芪药材的质量控制。黄芪多糖为黄芪有效成分之一,本文运用超声波技术提取黄芪 粗多糖，并用苯酚-硫酸比色法[2]对多糖进行含量测定，取得令人满意的结果；另采用HPLC-ELSD法 对黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现 性佳，回收率高，是一种良好的黄芪甲苷含量测定方法[1]。 1．仪器、试剂及样品 1.1 仪器
213
表 4 方差分析表（a=0.05）
因素
偏差平方和
自由度
F比
F 临界值 显著性
提取次数
3.186
2
1.000
19
溶剂用量
8.379
2
2.630
19
浸渍温度
83.054
2
26.068
19
※
提取时间
3.851
2
1.209
19
误差
3.19
2
(2) 多糖的提取 取 1-3 号样品的根粉碎，过 20 目筛，80℃下干燥。各称取约 3g 粉末各 3 份分别加入三角瓶中，
式中：C 为样品溶液中葡萄糖含量（mg）；D 为样品溶液的稀释倍数；F 为换算因数；W 为样品 的重量(mg)（表 9）。
样1 品 号 吸 0.374 光 度
2 0.356
3 0.367
表 7 重现性实验结果
4
5
平均
RSD%
0.363
0.355
0.363
2.18
215
序号
1 2 3 4 5
样品加入量 （g） 1.5000 1.5002 1.5002 1.5001 1.5000
F=W/C·D 式中：W 为多糖重量（mg）；C 为多糖液中葡萄糖的重量（mg）；D 为多糖的稀释倍数。测得 F=0.384。 (4) 稳定性试验
取“多糖的提取”项下 1 号样品的提取液，精密吸取 0.3ml 提取液定容到 100ml 容量瓶中，摇匀。 分别精密吸取 2ml 于 6 个试管中，按标准曲线下方法分别在 10、20、30、40、50、1h 时测定吸光度 （表 5）。
加入 20 倍量的 95％乙醇，超声提取 80min，滤过，滤渣挥干乙醇。将滤渣置于三角瓶中，加 10 倍 量的水，在 60℃下提取 40min，滤过，滤液保存，滤渣再次提取，连续提取三次。合并滤液并浓缩， 后定容于 50ml 容量瓶中，备用。 (3) 换算因素的测定[4]
取“多糖的提取”项下 2 号样品的提取液，转移至三角瓶中，加 95％乙醇至含醇量达 85％，室温 静置 36h，抽滤，滤渣置减压干燥箱内，70℃下干燥至恒重。精密称取干燥恒重的黄芪多糖 20mg， 水溶解后定容于 50ml 容量瓶中，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液 1.5ml 定容到 50ml 容量瓶中，摇匀。精确吸取 2ml 加入试管中，按标准曲线下方法测其吸光度。按下式计算换算因素：
UV-2800 型紫外分光光度计；KQ-250E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FA1104 万分之一电子分析天平（上海天平仪器厂）；AF240 十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒公司）； FA1104 型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；高效液相色谱仪（Agilent 公司）；ELSD-2000 蒸发光散射检测器；ANASTAR 液相色谱工作站。 1.2 试剂
2
1
3
3
3
2
1
2
3
2
2
3
1
2
3
1
2
3
1
3
2
3
2
1
3
3
3
2
1
3.42
5.15
1.34
2.93
3.38
2.90
2.03
4.48
4.66
3.42
8.1
4.06
1.28
2.25
6.76
1.55
提取时间(分) （D） 20 40 60
收率（%） 1.38 1.36 7.53 3.15 5.84 1.15 10.93 1.49 1.57
膜荚黄芪 Astragalus membranaceus（Fisch）Bunge，产自文登和新泰（分别为 1 号和 2 号样品）； 蒙古黄芪 A.membranaceus(Fisch)Bunge var.mongholicus (Bge)Hsiao，购于药店（3 号样品）。样品经徐 凌川老师鉴定。 (2) 标准品
采用正交试验设计，对多糖提取工艺进行优选。试验选择提取次数、溶剂用量、浸渍温度、提 取时间 4 个因素为考察对象，根据初步试验，每个因素确定三个水平（表 2）。
取过 20 目筛的蒙古黄芪粗粉，用 95％乙醇去除脂溶性杂质后，根据表 2 中的条件进行超声波 提取，采用 L9（34）正交表安排试验，按标准曲线下方法测定吸收度，由回归方程计算多糖含量。 正交试验（表 3、表 4）。
表 8 回收率试验结果
标准品加入量 回收量
回收率
（mg）
(mg)
(%)
156.56
147.32
94.1
156.53
158.38
101.18
156.66
153.15
97.76
156.40
157.03
100.4
156.26
156.06
99.87
均值（%） 98.66
表 9 不同品种黄芪根中多糖含量测定结果
精密称取苯酚 5g，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 (3) 标准曲线的绘制
精密量取标准葡萄糖溶液 0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1ml 置于 50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度， 摇匀。各精密吸取上述溶液 2ml 于试管中，加入 5％苯酚溶液 1.0ml，后迅速加入浓硫酸 5.0ml，振 摇 5min，室温下放置 30min，以蒸馏水为空白对照，在 490nm 波长[3]处测定吸光度。以吸光度（y） 对浓度（x）进行线性回归，得标准曲线方程:y=13.81x+0.0555；r=0.9995（表 1，图 1）。 2.2 多糖的提取方法研究 (1) 提取工艺的优选
30
40
50
60
平均 RSD%
0.683 0.725 0.727 0.713 0.709 2.87
214
表 6 精密度实验结果
试管
号
1
2
3
4
5
平均值 RSD%
吸光 0.440 0.445 0.442
0.443
0.435 0.441
0.86
度
(6) 重现性实验 取 3 号样品粗粉 5 份，精密称定。按“多糖的提取”项下方法操作。水提液定容于 50ml 容量瓶中，
含量测定
不同来源黄芪中黄芪多糖和 黄芪甲苷的含量测定
徐凌川
（山东中医药大学，济南 250014）
[摘要] 目的：测定黄芪中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量。方法：用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法和紫外分光光 度法进行含量测定。结果：本省文登和新泰黄芪基地所产黄芪的黄芪多糖含量分别为8.62％和14.15％，黄芪甲苷含 量分别为0.085％和0.081％。黄芪多糖和黄芪甲苷和的平均回收率分别为：98.66％、102.36％，相对标准偏差分别 为：2.89％、1.16％。结论：本文建立的方法准确可靠、灵敏度高、重现性好，可用于黄芪多糖和黄芪甲苷的含量 测定。 [关键词] 高效液相色谱法 紫外分光光度法 黄芪甲苷 黄芪多糖 含量测定
葡萄糖标准品为分析纯（北京益利精细化学品有限公司；批号：20030806）；黄芪甲苷标准品（中 国药品生物制品鉴定所；批号：110781-200512）。 2．多糖的含量测定 2.1 标准曲线的绘制 (1)标准葡萄糖溶液的配制
精密称取葡萄糖标准品 100mg，置于干燥的 100ml 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成 1mg/ml 的标准葡萄糖溶液,备用。 (2)2 5％苯酚溶液的配制