植物组织培养期末复习资料
植物组织培养 期末复习
绪论植物组织培养（Tissue culture）：是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养或试管培养。
器官：根、茎、叶、花、果实、种子；组织：花药、胚珠、胚、胚乳、形成层等。
或指将植物的离体器官、组织、细胞以及去除细胞壁的原生质体，放在离体无菌人工控制的环境条件下培养，对其进行克隆，使其生长、分化并成长为完整植株的过程。
组织（tissue)、器官（organ)或细胞培养：指利用生物体各部分组织、器官或细胞进行离体培养，使之形成愈伤组织或完整有机体的技术。
愈伤组织（callus）：在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。
原生质体培养指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下，依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。
植物组织培养特点：①培养条件可以人为控制；②生长周期短，繁殖率高；③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制()。
1、植物组织培养的理论基础—细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。
2、植物细胞全能性的表达：①脱分化（dedifferentiation)：将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。
一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。
②再分化（redifferentiation)：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
离体的植物器官、组织、细胞→脱分化形成愈伤组织→再分化形成根、芽→再生植株。
4、组织培养植株再生的途径：1）、体细胞胚胎发生途径(胚状体发生途径)：是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程(经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期)，形成具有双极性的胚状结构，而发育成再生植株的途径。
植物组织培养复习重点
组培复习材料一、名词解释1、培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。
2、液体培养：把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培养的一种方法。
3、种子培养：是成熟种子和发育不全的未成熟种子的无菌培养。
4、叶培养：从母体植株上将叶组织（包括叶原基在内）切下，放在无菌的人工条件下使其生长发育形成植株的技术。
5、热处理脱毒：在一定范围内，用高温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒而不伤害或很少伤害植物本身的脱毒方法。
6、花药培养：是把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花粉的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成杯状体，然后再生植株，或形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。
7、连续培养：是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。
（培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积用过的培养基，或者抽取悬浮培养物，使培养物的营养物质得到不断补充，从而保持其恒定体积的培养。
——8、分批培养：指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，建立单细胞培养物的培养方式。
（细胞生长在固定体积的培养基中，当主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即停止。
）二、简答题1、MS培养基特点。
答：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，具有高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐用量大，还有一定数量的铵盐，其养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿质营养的要求，加速愈伤组织和培养物的生长，当培养物就不转移时仍可维持其生存。
目前应用最广泛。
2、植物组培生产特点。
答：①和传统的生产方式相比，具有不占耕地、生产不受季节限制而且能够整年连续进行、不受灾害性天气和病虫害影响的特点；②具有人为可控性，可采用更适合于植物生长的“培养基”代替土壤提供养分和生长调节物质；③具有很高的生产效率。
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植物组织培养复习资料一、名词解释。
（每个3分，共24分）１、植物组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或发育成完整植株的技术。
又称植物离体培养。
２、细胞的全能性：指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。
3、脱分化：离体培养条件下生长的器官、组织、细胞，经过细胞分裂或不分裂而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞过程。
4、外植体：从活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。
5、单细胞培养：对分离的到的单个细胞进行培养，诱导其分裂增殖，形成细胞团，再通过细胞分化形成芽、根等器官或胚状体，直至长成完整植株的技术。
6、胚状体：亦称体细胞胚。
指在组培过程中，由植物体细胞所形成的类似于合子胚的结构。
它具有根、茎结构，能够一次性形成再生植株。
7、平板培养：是将悬浮培养的细胞接种到未固化的薄层培养基中，使其与培养基充分配合，再倒入培养皿中进行培养的方法。
8、人工种子：指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒状。
9、次生代谢产物：指植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物，其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性。
10、再分化：细胞经过脱分化形成的愈伤组织再次分化，进行器官形成，产丛生芽或胚状体，形成完整植株的过程。
11、无病毒苗:指不含该种植物主要危害病毒的苗木。
二、不定项选择1、培养室里的湿度一般保持在____C_____.A 30~40%；B 50~60%；C 70~80%；D 80~90%2. 下列不属于生长素类的植物激素是____A D____。
A Kt；B IAA；C NAA；D ZT3. 影响培养基凝固程度因素有_______A B C D__.A 琼脂的质量好坏；B 高压灭菌的时间；C 高压灭菌的温度；D 培养基的PH4. 活性炭在组织培养中的作用有_______ABC_。
植物组织培养期末复习资料
植物组织培养期末复习资料2011.05.191、植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物得胚胎、器官、组织、细胞、原生质体等进行离体培养，使其再生发育成完整植株的过程。
又称植物离体培养。
2、外植体：用于培养的植物胚胎、器官、组织、细胞、原生质体通常称为外植体。
3 、愈伤组织：是指在植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定形的薄壁组织。
4、初代培养：将外植体进行的第一次培养，称为初代培养。
5、继代培养：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，称为继代培养。
6、植物细胞全能性：一个细胞所具有的产生一个完整植株的固有能力称做细胞的全能性。
7、细胞分化：是指细胞的结构和功能从一种类型转变为另一种的过程。
8、脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态并形成未分化的愈伤组织的现象称为脱分化也称去分化。
9、再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株，这个过程（现象）称为再分化。
10、胚状体（或体细胞胚）：在组织培养中，起源于一个非合资细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成具有双极性的胚状结构，叫胚状体或体细胞胚。
11、体细胞胚与合子胚的比较：（1）、体细胞胚是由愈伤组织或胚性细胞团的表面细胞起源的，所处的发育条件与合子胚不相同。
（2）、在自然界，不定胚早期分裂顺序与合子胚也不完全相同：即使是合子胚本身，他们的早期胚胎发育过程也常偏离正常的方式。
（3）、合子胚和不定胚一般都能发育成正常的成熟胚。
与合子胚相似，球形期后的体细胞胚呈现一种固定的极性，根极指向愈伤组织或胚性细胞团的中央，茎芽极朝外，与合子比，成熟体细胞胚的进一步发育过程及形态特征也是相当正常的。
（4）、多数情况下，体细胞胚并不具有一个明显的胚柄。
（5）、与合子胚不同的是，在培养中形成的体细胞胚常常具有两个以上的子叶。
植物组织培养期末复习题
植物组织培养期末复习题一、填空题每空0.5分1.植物组织培养按培养对象分为__组织培养__、_器官培养_、_胚胎培养_、__细胞培养_、_原生质体培养__等几种类型.2.在分离原生质体的酶溶液内,需要加入一定量的Cacl2·2H2O和葡聚糖硫酸钾_其作用是保持原生质体膜的稳定,避免破裂.3.1902年德国植物生理学家Haberlandt第一次提出植物__细胞具有全能性_____的理论概念；1943年White提出植物细胞“____全能性_____”学说,并出版了植物组织培养手册,从而使植物组织培养成为一门新兴的学科;4.用烘箱迅速干燥洗净后的玻璃器皿时温度可以设在_80_℃的温度范围内,而若用它高温干燥灭菌则需在__150__℃的温度下1-3小时；烘干植物材料的温度是_60_℃.5.细胞全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的__全部遗传信息__和___形成完整植株的潜在__的能力;6.1962年,Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了__MS_培养基,其特点是_无机盐_浓度较高,且为较稳定的__________;7. 7.6-BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向,比值低时促进_根_的生长,这时_脱分化_占主导地位；比值高促进_芽_的生长,这时_分化占主导地位.9.组织培养的特点是：__无菌_、__人工控制_、_离体_.10.1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得__单倍体植株_,这促进了花药和花粉培养的研究;11.在组织培养中,不耐热的物质用__过滤__法灭菌,而培养基常用___湿热灭菌__法灭菌.13.在组织培养中,非洲菊是靠_从生芽的方式进行繁殖的,而蝴蝶兰是以__原球茎_的方式进行快繁的;15.在通过微茎尖培养脱毒时,外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定,一般以__0.3-0.5__mm、带__1-2__个叶原基为好;16.原生质体的分离有_机械法_和__酶解法_两种方法.17.进行植物组织培养最基本的前提条件是__离体_;18.植物组织培养按培养过程中是否需要光,可分为___适光_培养和___嗜光培养;20.组织培养中有三大不易解决的问题,它们分别是__黄化污染、_褐化__、_玻璃化;21.White培养基_无机盐_浓度低,适合生根培养;22.在无毒苗的组织培养中,外植体的大小与其成活率成__正比_,而与脱毒效果成__反比__;23.一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态,并形成未分化的愈伤组织的现象称为"__脱分化___";25.茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为__普通茎尖__培养和_茎尖分生组织_培养两种类型;27.愈伤组织的形态发生有_器官发生__和__体细胞胚发生__两种情况;28.植物组织培养按培养的方式分为__液体_培养和__固体__培养;29.1960年,英国学者Cocking用__真菌纤维素酶酶解_分离原生质体成功,从而创新原生质体的培养技术;30.大多数植物组织培养的适宜温度范围是_23-25__℃,培养基的PH值是__5.8_.32.在组织培养中,ZT和GA必须用_过滤_法灭菌,而接种室空间采用_紫外线照射__或_甲醛熏蒸_法灭菌.33.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样,次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生_cl离子ClO-_来杀菌的；升汞是靠_汞离子_来达到灭菌目的;34.幼胚培养时,其发育过程有_早熟萌发___、___胚性发育__、_形成愈伤__三种方式;35.植物的胚胎培养,包括__胚胎__培养、幼胚培养、__胚乳__培养、胚珠_培养以及子房的培养.38.一个已停止分裂的成熟细胞转变为__分生_状态,并形成_愈伤组织_的现象称为"脱分化".39.由胚乳培养可以获得__单__倍体植株,经秋水仙素处理可以获得_二_倍体植株.40.去除植物病毒的主要方法是_理化法_和_组培法__两种方法,当把二者结合起来脱毒效果最好.41.花药培养是_器官__培养,花粉培养属于__细胞__培养,但二者的培养目的一样,都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞,最后发育成__单倍体植株__.43.原生质体的融合可实现_体细胞_的杂交,其融合的方式分为__自然融合_和__人工诱导_两类.二、不定选择题每小题2分1.培养室里的湿度一般保持在_C_.A30~40%；B50~60%；C70~80%；D80~90%2.下列不属于生长素类的是__AD_;AKt；BIAA；CNAA；DZT3.影响培养基凝固程度因素有_ABD_.A琼脂的质量好坏；B高压灭菌的时间；C高压灭菌的温度；D培养基的PH4..活性炭在组织培养中的作用有_ABC_;A吸附有毒物质；B减少褐变,防止玻璃化；C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长；D增加培养基中的养分；5.下列具有细胞全能性的细胞是：_ABCD_;A成熟的老细胞；B幼嫩的组织细胞；C愈伤组织细胞D番茄的受精合子6.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_B_：.A□Morel；BHaberland；C□Schleiden；D□White7.下列培养基中__C_无机盐的浓度最低;AMS培养基；BB5培养基；CWhite培养基；N6培养基8.高温易被破坏分解的植物激素是__AbD_;AIAA；BGA；CNAA；DZt9.从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织,大致经历__ACD三个时期;A诱导期；B潜伏期；C分化期；D分裂期10.下列不属于活性炭在组织培养中作用的是___D_.A吸附有毒物质；B减少褐变,防止玻璃化；C创造黑暗环境,增加培养基的通透性,利于根的生长；D增加培养基中的养分；11.下列不属于细胞分裂素的植物激素是_B_;A6-BA；BNAA；CZt；DKt12.植物组织培养的特点是_ABC_;A培养条件可人为控制；B生长周期短,繁殖率高；C管理方便；D产量大14..下列不属于大量元素的盐是_C_;ANH4NO3；BKNO3；CZnSO4.7H2O；DMgSO4.7H2O15.下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是__ABCD_;A细胞分裂加快B正在分裂的细胞体积小,内无液泡C细胞的核和核仁增至最大D细胞中的RNA含量减少,16.在原生质体的培养中,渗透稳定剂的作用是：AA稳定原生质体的形态而不使其被破坏B支持作用C提供营养D调节PH值17.能打破种子休眠,促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是：ABAGA；BIAA；CNAA；DZt3.下列实验中可能获得单倍体植株的是_BCD_;A小麦的茎尖培养；B番茄花药培养；C玉米胚乳培养；D玉米花粉培养18.在组培条件下,花粉的发育大致有下列几种途径：cdA营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径C营养细胞和生殖细胞同时发育途径D花粉的均等分裂19.同一植株下列_B_部位病毒的含量最低.A叶片细胞；B茎尖生长点细胞；C茎节细胞；D根尖生长点细胞20.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是__B_：.AMorel；BHaberland；CSchleiden；DWhite21.脱落酸ABA需要用__C__法灭菌;A灼烧灭菌；B干热灭菌；C过滤灭菌；D高压湿热灭菌；23.下列实验中可能获得三倍体植株的是__C__.A小麦的茎尖培养；B番茄花药培养；C玉米胚乳培养；D玉米花粉培养24.原生质体纯化步骤大致有如下几步：①将收集到的滤液离心,转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准,一般以500r／min离心15min;用吸管谨慎地吸去上清液;②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中除不含酶外,其他成分和酶液相同,再次离心,去上清液,如此重复三次;③将原生质体混合液经筛孔大小为40~100um的滤网过滤,以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质,收集滤液;④用培养基清洗一次,最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养;一般原生质体的培养密度为104~106／ml;正确的操作步骤是：③①②④CA①②③④B②③①④C③①②④D③②①④25.下列不属于生长素类的植物激素是_A_D_.AKtBIAACNAADABA26.玉米素ZT需要用_C_法灭菌.A灼烧灭菌B干热灭菌C过滤灭菌D高压湿热灭菌三、判断题对的画“√”；错题画“×”,并改正;每小题2分1.一个已分化的细胞若要表现其全能性,首先要经历脱分化过程;√2.由胚乳培养获得的三倍体植株,也一定要进行染色体倍数的检查.√3.一般来说,光照强度较强,幼苗容易徒长,而光照强度较弱幼苗生长的粗壮;×4.经过花药培养所获得的植株都是单倍体;×5.2,4—D可用0．1mol／L的HCl助溶,再加蒸馏水定容.×6.环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求80％-90％的相对湿度;√7.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易.√8.一般的说,PH值高于6.5时,培养基全变硬；低于5时,琼脂不能很好地凝固;√9.在配制6-BA母液时,要先加少量的1mol的HCl溶解,再加蒸馏水定容;√10.未成熟胚较小、较嫩、颜色浅,不易培养；成熟胚较大、较硬、颜色较深,易培养.√11.花器脱分化比茎叶容易；幼嫩的组织比成熟的老组织脱分化难;×12.通过子房的培养,即可能得到单倍体植株,又可能得到二倍体植株..√13.在配制NAA母液时,要先加少量的1mol的HCl溶解,再加蒸馏水定容;×15.环境的相对湿度过低会使培养基丧失大量水分,湿度过高时,易引起棉塞长霉,造成污染;√16.White培养基无机盐浓度低,适合生根培养;√17.由性细胞发育而成的胚叫做胚状体,而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚.×18.2,4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶,而后加无菌水定容;√20.二倍体细胞比单倍体细胞容易诱导愈伤组织.×21.在MS的培养基成分中,MgSO4.7H2O属于微量元素.×22.未成熟胚较小、较嫩、颜色浅,易培养；成熟胚较大、较硬、颜色较深,不易培养.×23.固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根;×24.兰花可以通过芽丛分离的组培途径快繁,非洲菊通过原球茎增殖的途径快繁.×25.用于外植体、手、超净台等的表面消毒酒精浓度越大,消毒效果越好.×四、名词解释1.植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下,利用适当的培养基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术;2.细胞全能性：指每一个植物细胞都携带有该植物的全部遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息,分化出植物有机体所有不同类型的细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整植株的潜在能力;3.脱分化：是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程;4.母液：在配制培养基之前,为了使用方便、简化操作、用量准确,减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液5.驯化：指通过改变其遗传性状以适应新环境的过程6.外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体7.愈伤组织培养：将一个细胞、一块组织或一个器官的细胞,通过去分化形成愈伤组织,并在体外培养使之再分化成植株的技术;8.单细胞培养.:亦称游离细胞培养freecellculfure;是指酵母菌、细菌等单细胞生物的培养,或取多细胞生物体上的一个细胞的无菌培养;9.灭菌：是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物,包括致病和非致病微生物以及,使之达到无菌保障水平;10.玻璃化现象：指试管苗的一种生长失调症状,当植物材料进行离体繁殖时,有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状,这种现象称为玻璃化;其苗称为玻璃化苗;11.无病毒苗：指不含该种植物主要危害病毒的苗木;12.胚状体：离体培养条件下,没有经过受精过程,但是经过了过程所形成的胚状类似物,此现象无论在培养还是生殖细胞培养中均可以看到,因而统称为胚或胚状体;在离体、组织或过程中,由一个或一些体细胞,经过和发育过程,形成与相类似的结构13.细胞全能性：指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力;14.指示植物：指示植物与被指示对象之间在全部分布区内保持联系的称为普遍指示植物；只在分布区的一定地区内保持联系的则称为地方指示植物;15.消毒：消毒是指杀死病原、但不一定能杀死细菌芽孢的方法;通常用化学的方法来达到消毒的作用;16.植物生长物质：是指一些在低浓度下能调节植物生长发育的微量有机物;植物生长物质包括五大类被公认的植物激素和其他内源植物生长调节物质;17.单倍体：只含有配子体染色体组数的植株;18.无菌操作：用于防止进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作19.脱分化：离体培养条件下生长的器官、组织、细胞,经过细胞分裂或不分裂而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞过程;21.花粉胚：花粉胚就是用花粉经过人工的组织培养而形成的幼胚,发育成的植株就只有正常胚一半的染色体组,所以由花粉胚发育成的植株不会产生种子;22.褐变：饲料在加工过程中或长期贮存于湿热环境下,其所含的氨基化合物如、氨基酸及醛、酮等与还原糖相遇,经过一系列反应生成褐色聚合物的现象称为褐变反应,简称褐变;24.指示植物法：25.再分化：离体培养的植物细胞和组织可以脱分化状态重新进行分化,形成另一种或几种类型的细胞、器官、组织、、甚至完整植株;26．平板培养：亦称平面培养;将琼脂或明胶等凝胶状固体培养基制成平面状,然后在此平面上培养微生物或多细胞生物的细胞、组织或器官,这种培养称为平板培养27．次生代谢产物：植物中一大类并排植物生长发育所需的小分子化合物,其产生和分布通常有种属、器官组织和生长发育期的特异性;次生产物在植物中的合成与分解过程称为此生代谢;28．人工种子：又称合成种子,指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽,被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中,从而形成能发芽出苗的颗粒状;五、简答题1.植物组织培养有哪些特点答：植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体的器官、组织和细胞;特点：①培养条件可人为控制②植物生长周期短,繁殖系数高③管理方便,不受季节环境条件影响,有利于工厂化生产和自动化控制;2.培养基一般包括哪些基本成分其作用是什么如何配制答：培养基的构成要素通常可分为：水分、无机盐类、有机营养成分、植物生长调节物质、天然物质、Ph、凝固剂等;水分是一切生物生命活动的物质基础,是很多生物化学反应的原料和代谢产物;无机盐类是构成植物细胞中核酸、蛋白质以及生物膜系统等必不可少的营养元素;有机营养成分为植物生命活动提供必不可少的碳源、氮源、能源等物质;植物生长调节剂可以促进植物组织的脱分化和形成愈伤组织,还可以诱导不定芽、不定胚的形成;天然有机添加剂通常富含有机营养成分或生理活性物质;pH过高时,培养基会变硬；pH过低时,则影响培养基的凝固;凝固剂是在配制固体培养基时使用,使培养基凝固;其他添加物是有时为了减少外植体的褐变,需要向培养基中加入一些防止褐化的物质;3.简述愈伤组织细胞分化;4.原生质体融合有哪几种主要方法答：植物原生质体最大特性是去掉细胞壁的裸细胞无论来源如何都具有彼此融合的能力1.自发融合2.诱发融合：a,NaNO处理b,高PH值—高浓度钙离子处理c,聚乙二醇PEG处理d,电融合3.化学融合5.组织培养中,pH值起什么作用如果pH值过高或过低会有什么后果6.植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容是什么答：1培养基配置技术：包括培养基的选择、母液配制、培养基配制、培养基灭菌;2培养材料制备灭菌技术：供体植物材料选择、外植体的选择和处理;3无菌接种技术：包括接种室的消毒、工作人员用工作服、口罩等的消毒、超净工作台的清洁与杀菌、操作工具的灭菌;4培养技术：主要是培养条件的控制,包括温度、光照、湿度等各种物理环境条件及培养基组成、PH、渗透压等各种化学环境条件;7.培养基、培养器皿和植物材料通常怎样灭菌答：1培养基一般采用湿热灭菌,如果培养基中的有些成分高温易分解,则可采用过滤灭菌;2培养器皿可采用湿热灭菌或干热灭菌;3植物材料一般采用药剂浸泡灭菌,具体操作如下：A外植体的预处理,对植物组织进行修整,去掉不需要的部分,并将外植体用流水冲洗干净;B用70%的酒精浸润材料30s左右;C用灭菌剂浸泡灭菌,灭菌时不时搅动,使植物材料与灭菌剂有良好的接触,若灭菌过程中加入数滴吐温,则灭菌效果更好;D植物材料用无菌水冲洗3--5次,以除去灭菌剂;8.由胚乳培养获得的植株,是否一定要进行染色体倍数的检查为什么9.花药培养产生的植株染色体倍性如何其产生的原因是什么10.为什么对脱毒处理后产生的植株必须进行病毒鉴定为什么已通过病毒特定病毒鉴定的无病毒苗还须重复鉴定11.使用植物生长物质应注意些什么12.为什么幼胚比成熟胚培养要求的培养基成分复杂13.胚胎培养技术在育种工作中有哪些应用14.试比较花药培养与花粉培养的异同;15.简述酶法分离原生质体的步骤.答：叶片表面消毒→去除表皮,将叶片切成小块→叶碎片放入含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→摇床保温培养→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入CPW清洗→离心→清洗基质两次→重悬浮于培养基16.影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素有哪些17．简述人工种子生产步骤答：选取目标植物→从适合的外植体上诱导愈伤组织→将愈伤组织转移到液体培养基→愈伤组织在液体培养基中增生扩大→愈伤组织转移至无激素培养基→产生体细胞胚→包裹人工种皮→炼苗→温室大棚播种→获得目标植物18．愈伤组织的形态发生有哪两种情况并比较各自由此形成完整植株的不同;1、答：愈伤组织的形态发生可通过两种途径实现,一种是根芽器官直接分化形成植株,即器官发生途径；另一种是产生具胚芽、胚根的胚状体结构再形成植株,即体细胞胚胎发生途径;在器官发生途径中,芽或芽原基起源于培养组织中比较表层的细胞,即外起源,而根原基则发生于组织较深处,呈现单向极性,所形成植株的维管组织与外植体的维管组织联在一起;而在胚状体发生途径中,绝大多数体细胞胚起源于单细胞,形成的胚状体有双极性,维管组织与外植体没有联系;19．简述幼胚和成熟胚的区别;20．无病毒原种母株的保存及繁殖中最关键的问题是什么怎样解决21．NAA的中文名称是什么有何作用和特点答：NAA的中文名称叫萘乙酸,是一种人工合成的生长素;其在植物体内有促使茎和节间伸长、向性运动、顶端优势、器官脱落和生根的作用;在组织培养中NAA被用于诱导细胞的分裂和根的分化,并能与细胞分裂素互作促进茎芽的增殖;六、论述题1.请你设计一个组培实验室,说明你设计组培实验室各分室的作用及其所需主要仪器设备;2.请论述非洲菊的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;3.某地区的一种马铃薯经多年的种植后,植株变的矮小,产量和品质都下降,怀疑是由病毒所至;请你设计一个病毒的鉴定和脱毒的技术方案;4.请阐述原生质体的分离、纯化和活力鉴定的技术过程;5.请分别列出七种仪器设备和七种玻璃器皿的名称,并说明它们的作用;6.请阐述用大蒜脱毒和快繁的程序;为什么试管苗在经过热处理和茎尖培养等方法脱毒后,还需要进行病毒的鉴定7.请论述非洲菊的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;8.请论述香石竹的无菌苗的诱导、继代快繁、生根培养及其驯化移栽过程;9.现在需要你配制3升胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养基,其配方为MS＋2.4-D2mg/L＋KT0.2mg/L＋蔗糖3%＋琼脂0.7%,请你阐述培养基的配制和分装直到灭菌的全部技术过程;。
2021植物组织培养复习资料
2021植物组织培养复习资料一、名词解释1.植物组织培养：植物组织培养是指在无菌条件下将离体的植物器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体进行培养使其再生细胞或完整植株的技术。
2.外植体：植物组织培养中，使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。
3.愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
4.异质性：是指性质上的多样性或缺乏一致性的不同成分的组合。
异质性是生物在自然界中的共同特征之一，也是生物在自然界中存活的重要保证，异质性是达尔文进化论及物种多样性的基础。
5. 褐变：是指外植体在诱导脱分化或再分化过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色的物质，以致培养基逐渐渐变成褐色，外植体也随着进一步变褐而死亡的现象。
6. 玻璃化现象：一种生理性病害，是植株在离体培养过程中出现的异常现象，包括茎叶半透明、海绿色、水浸状或玻璃化等现象。
7.胚培养：是指对胚、子房、胚珠、胚乳进行离体培养，发育成完整植株的技术。
8.体外受精：是指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术，称为体外受精。
9.种质资源的离体保存：指对离体培养的小植株、器官、组织、细胞或原生质体等材料，采用限制、延缓或停止其生长的处理使之保存，在需要时可重新恢复其生长，并再生植株的方法。
二、简单、综述题1.植物组织培养的主要特点①整个过程都是在无菌条件下进行的②在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的，因此，在组织培养中的植物材料不需依靠自身的光合作用制造养分，而是处于完全的异养状态。
③起始材料可以是植物的器官、组织，也可以是单个的细胞，它们都处于离体状态下。
④组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，形成克隆。
⑤是在封闭的容器中进行的，容器内气体和环境气体可以通过瓶塞或其他封口材料进行交换。
植物组织培养复习笔记【最新】
植物组织培养复习资料第一章绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官.组织，细胞以及原生质体. 培养在人1:培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。
外植体：在无菌条件下，离体培养于人工培养基上的，用于达到某种培养目的的原始植物材料C培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人匚配制的营养基质即为培养基。
细胞全能性：植物体每一个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在合适的条件下，具有形成完整植株的能力。
脱分化：一个成熟细胞恢复到分生状态或胚性细胞状态的现象。
再分化：是脱分化细胞重新恢复细胞分化能力，沿若正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞C二、组织培养的类型，不同分类依据（根据培养材料不同）可分为植株培养，胚胎培养，器官培养，组织或愈伤组织培养.细胞或原生质休培养5类：（根据培养目的）可分为试管嫁接，试管受精，试管加倍，试管育种等：（根据培养方法）可分为平板培养，微室培养，悬浮培养，单细胞培养等：（根据培养过程）可分为初代培养和继代培养：（根据培养基类型）可分为固体培养和液体培养。
三、三个发展阶段的关键人物1,haberlandt-一于1902年提出植物细胞全能性理论，被称为“组织培养之父”。
2,white—于1943年出版《植物组织培养手册》。
3,murashine和skoog -- 在1962年筛选出MS培养基。
四、植物全能性表达的过程培养一►脱分彳~再分化一培养五、组织培养的特点：1、植物基础学科研究的良好系统。
2、生物技术的基础。
3、经济高效.管理方便，利于自动化。
4、技术含量高，实验误差小，人工控制能力强。
5、生长周期短，生长速度快，实验重复性好。
6、实验材料经济，来源单一。
六、缺点：需要设备负复柴，投入资金多，电能消耗大：对人员技术水平要求高，对实验场所要求也高，不能代替田间试验。
第二章植物组织培养设备与培养条件一、实验室的组成及主要仪器和设备准备室：干燥箱，高压灭菌锅，电子天平，酸度计，水浴锅，冰箱。
植物组织培养复习资料
1、植物组织培养：在无菌条件下，对植物组织，器官，细胞原生质体等离体活材料进行培养促使其生长发育，并再生成完整植株的过程。
2、外植体：植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。
（如器官、组织、细胞、原生质体、种子等）3、愈伤组织：在离体培养的条件下，经过植物细胞脱分化和不断增殖所形成的无特定结构的细胞团或组织。
4、玻璃化现象：在组织培养过程中，培养物叶片或嫩梢呈透明或半透明的水渍状现象。
5、脱分化：一个成熟细胞转化为分生状态并形成为分化的愈伤组织的现象6、再分化：指脱分化形成的愈伤组织细胞在十一的培养条件下，又分化为胚状体，或直接分化出根和芽等器官形成完整植株的过程。
7、细胞的全能性：植物体的每一个生活细胞都具备母体的全套基因，在一定条件下可以发育成完整植株的能力。
8、人工种子：指通过组织培养技术，将植物的体细胞诱导在形态上和生理上均与合子胚相似的体细胞胚，然后将它包埋于有一定营养成分和保护功能的介质中，组成便于播种的类似种子的单位9、植物离体培养：利用植物细胞的全能性，在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
10、种子败育：是指由于植物自身的原因导致植物胚胎在发育过程中的任何一个阶段死亡或者即使幼胚发育为成熟种子胚、但在常规条件也不能萌发的现象。
11、双极性：表示具有双向极性电平的脉冲信号激素分类：生长素类细胞分裂素赤霉素脱落酸水杨酸植物组织培养{组织培养、器官培养？胚胎培养？细胞培养、原生质体培养}—--次生代谢物的生产、种植创新和品种选育、植物的快速繁殖、无病毒苗木的培育、人工种子的生产、种质资源的离体保存植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。
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植物组织培养期末复习资料一、名词解释1.植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
又称为植物离体培养、微型培养、试管培养。
2.愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
3.细胞全能性：指植物的每一个具有完整细胞核的活细胞，具有该植株的全部遗传信息，在一定条件下发育成完整植株的潜在能力。
4.胚状体：指在植物组织培养过程中，由细胞诱导分化形成的胚状结构，其功能类似于合子胚，可进一步再生成一个完整植株。
5.器官离体培养：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。
6.胚胎培养：指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植株的技术。
7.花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。
8.花粉培养：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。
9.细胞培养：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。
10.原生质体培养：在人工控制条件下，将原生质体进行培养，使其形成完整植株的技术11.原生质体融合：也称体细胞杂交，指通过物理化学方法使原生质体融合，经培养获得具有双亲全部或部分遗传物质的后代的方法12.植板率：已形成细胞团的百分数（即每100个铺在平板上的细胞中有多少个能长出细胞团）13.脱分化〔dedifferentiation〕:指在离体培养条件下，已分化的细胞、组织和器官在人工诱导条件下，失去原来的结构和功能而恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。
（掌握）14.再分化（redifferentiation):指在离体培养条件下，经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。
（掌握）15.初代培养：指外植体来源于母本植株的最初培养16.继代培养：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中，这种反复多次的移植培养称为继代培养。
17.胚状体发生（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构。
18.污染：植物组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象19.玻璃化：试管植物的玻璃化是指试管苗外观形态呈半透明、水渍状的生长异常现象，一旦形成玻璃苗，植株的增值系数即明显下降，既不能再用于后续的生根或继代增殖培养，移栽也难以成活。
20.褐化：又称褐变指外植体在培养过程中体内的多酚氧化物酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，醌类物质积累产生的褐化物不但扩散致使培养基逐渐变成褐色，最后外植体变褐甚至死亡的现象。
21.茎尖脱毒培养：指对植物的带有一个以上定芽或不定芽的外植体（包括块茎、球茎、鳞茎在内的幼茎切断）进行离体脱毒培养的技术。
22.微茎尖嫁接：通过将不带毒的茎尖分生组织作接穗嫁接到不带毒的幼砧上进行试管内培养，获取完整的脱毒植株技术。
二、填空题１.植物组织培养根据外植体来源和培养对象不同主要分为组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、和原生质体培养几类。
２.6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时利于根分化生长，比值低时利于愈伤组织和芽分化诱导。
３. 微量元素母液可配成100倍，配制培养基时移取_10_毫升４. 试管苗生态环境与自然环境的差异：高温且恒温、高湿、弱光、无菌、CO2少、有害气体多。
５、愈伤组织整个过程大致可分为启动期、分裂期、分化期_等三个时期６.用茎段接种进行的快繁优点是：繁殖速度快_和_变异小_等。
７.微茎尖是接种时可带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。
８.单核期包括单核中央期和单核晚期（单核靠边期）。
９. 花粉培养是指把花粉从花药中分离出来，•以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。
１０.原生质体的分离方法有机械分离法和酶分离法（崩溃酶、蜗牛酶、纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶）。
１１.原生质体的纯化方法有：离心沉降法、漂浮法和界面法。
１２.胚胎培养包括胚培养、子房培养、胚珠培养、以及胚乳培养。
１３.用机械法分离原生质体的主要缺点是：原生质体产量低，方法繁琐费力局限性大；优点是能排除酶的有害影响。
１４．常用的冷冻保护剂有甘油、脯氨酸和糖类等，一般具有降低冷冻防护素剂、提高细胞存活率和再生能力的特点。
所以，预处理需要在 0℃温度下进行，处理时间也不宜过长，一般不超过 0.5小时。
１５．悬浮培养细胞数目的增殖变化包括：滞后期（延迟期）、对数生长期、直线生长期、缓慢期、静止期。
１６.真菌污染：３－５天出现，出现霉状物、毛状物。
细菌感染：１－２天出现，出现浓状物。
三、中英文缩写１.ＩＡＡ（吲哚乙酸）、ＩＢＡ（吲哚丁酸）、ＮＡＡ（萘乙酸）、２,４—Ｄ（２,４－二氯苯氧乙酸）２.６—ＢＡ（６－苄基腺嘌呤）、２Ｔ（玉米素）、激动素（KT）、２－ｉＰ（２，（赤霉素）、ＧＧＢ（绿色球状体）、ＴＤＺ（噻重氮苯基异戊烯腺嘌呤）、ＧＡ３脲）、ＡＢＡ（脱落酸）四、简答论述题（一）．培养基母液配制１.目的：方便培养基配制时的快速移取；减少误差，保证各物质成分的准确性；节约人力物力，提高工作效率２.基本母液配制（以MS培养基为例）配制MS培养基时母液的计算（１）、无机大量母液(扩大10倍配1L )成分：硝酸钾硝酸铵硫酸镁磷酸二氢钾氯化钙在混合过程中有些离子易产生沉淀，应注意：ａ）各种化合物的组合以及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离子和硫酸根和磷酸根离子错开，以免发生沉淀。
ｂ)把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。
混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序，钙盐要最后缓慢加入进去。
（２）、无机微量母液（扩大100倍配1000ml）成分：硼酸，硫酸铜，硫酸锰，硫酸锌，氯化钴，钼酸钠，碘化钾称量工具：托盘天平和电子天平（３）铁盐（扩大100倍1000ml）成分：硫酸亚铁，Na2-EDTA注意：铁盐采用托盘天平称取。
铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。
（４）有机物（扩大50倍500ml）成分：甘氨酸VB1 VB6 烟酸肌醇注意：有机物中的物质均采用托盘天平和电子天平称取（５）激素母液（常用的）成分：生长素（NAA，IBA，2,4-D，IAA）、细胞分裂素（6-BA，KT，GA，ZT）注意：ａ)激素母液一般配成1mg/ml；ｂ)NAA、IBA、IAA一般可先用少量95%酒精助溶；ｃ)2，4-D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶；ｄ)细胞分裂素类一般先用少量1mol／L盐酸助溶；ｅ)赤霉素配制时可用少量95%酒精助溶。
（６）母液的保存Ａ．装瓶: 将配制好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，在标签上注明母液名称，配制倍数，与配制日期。
Ｂ．储藏：母液配好后放人冰箱内4℃低温保存，用时再按比例稀释。
（二）、手提式高压蒸汽灭菌锅的使用：（1）加水：往锅里加水与支架齐平或稍高出支架。
（2）装锅：往锅中放入培养基试管。
（3）封锅、接通电源：盖好锅盖，对角线拧紧螺旋。
关闭放气阀和安全阀，接通电源，加热。
（4）排冷空气：当压力达到0.5 Kg/cm2 （0.05Mpa) 时，打开放气阀放冷气。
（5）升温升压：压力回零后，关闭放气阀，继续加热加压。
（6）保温保压：当压力达到0.1Mpa时计时，使压力保持在0.1－0.15Mpa之间，维持20-30min。
（7）断电降温、出锅：灭菌完毕后，撤掉电源，压力自然降到“0”时打开锅盖，取出试管。
（三）外植体的选择与培养１．选择要求ａ、再生能力强ｂ、遗传稳定性好ｃ、外植体来源丰富ｄ、外植体灭菌容易２.外植体的灭菌与无菌接种（1）将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。
把材料切割成适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时。
易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。
（２）接种用具消毒接种前，先用紫外灭菌30min。
进入接种室，先将超净工作台用70%酒精棉擦干净，将所用的金属器械用酒精灼烧消毒，等器械冷却后进行接种。
接种过程中要注意防止染菌，手臂不能在外植体上面来回移动，而且接种速度要快。
（３）对材料的表面浸润灭菌。
要在超净台或接种箱内完成。
用70%酒精浸10～30s。
由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。
（４）用配制好的化学药剂进行消毒①次氯酸钠和次氯酸钙都是利用分解产生氯气来杀菌的，故灭菌时用广口瓶加盖较好；②过氧化氢是分解中释放原子态氧来杀菌的，这种药剂残留的影响较小，灭菌后用无菌水涮洗3—4次即可；③升汞是由重金属汞离子来达到灭菌的；由于用升汞液灭菌的材料，难以对升汞残毒较难去除，所以应当用无菌水涮洗8～10次，每次不少于3min，以尽量去除残毒。
（５）无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。
６）外植体分割（７）无菌接种接种全过程：酒精擦拭手－外植体消毒－浸泡－器械消毒－酒精灯灼烧－酒精擦拭培养皿－酒精擦拭－旋转灼烧-取外植体－修剪外植体－接种－盖好瓶塞（四）植物脱毒培养的机理（微茎尖培养的试管苗是无毒的原因）１、病毒主要通过维管组织系统长距离转移，而分生组织中不存在维管束，所以顶端分生组织无毒或含毒较低。
２、病毒可以通过胞间连丝在细胞间移动，但速度很慢，难以赶上活跃生长的茎尖。
３、在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。
４、在植物体内可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。
５、在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒的增值。
（五）植物组培实验室的设计１.原则：防止污染、控制污染、保证无菌操作；按照工艺流程科学设计，达到经济、实用和高效；结果布局合理，工作方便，节能，安全；规划设计与工作目的、规模及当地条件等相适应。
２.流程：在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。
实验室的大小取决于工作的目的和规模。
以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。
要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。