抗坏血酸检测的实验步骤

动物血清中抗坏血酸（Vc）的测定

一、实验目的

抗坏血酸（Ascorbic Acid）又叫维生素C（Vitamin C），是一种水溶性维生素.正常成人体内的抗坏血酸代谢活性池中约有1500mg抗坏血酸，最高储存峰值为3000mg抗坏血酸.抗坏血酸在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病.抗坏血酸是一种强力的抗氧化剂、抗病毒和抗炎剂.广泛存在于食品和生物样本中，是一种免疫刺激剂.因此检测抗坏血酸在上述样本内的分布和含量就显得非常重要。

二、实验原理

三、实验仪器

试管、移液枪、漩涡混匀器、水浴锅、离心机、可见分光光度计。

四、试剂的配制

1.试剂一应用液的配制（5ml）：试剂一储备液：双蒸水=1：14稀释，混匀制

备。

2.试剂二应用液的配制：用时取一支粉剂加0.36 ml的冰醋酸再加水至40 ml,

溶解，4℃保存。

3. 试剂三应用液的配制：因溶解困难，使用前2-4h加无水乙醇60 ml充分

溶解，制备，4 ℃保存。

4. 试剂四应用液的配制：用时取0.15 ml 试剂四储备液加水至25 ml制备，

避光保存。（现用现配）

5.试剂五：液体6 ml，4 ℃保存。

6.600 ug/ml标准品应用液的配制：取一支标准品粉末溶于10 ml试剂一应用

液中，充分混匀，4℃保存。

6ug/ml标准品应用液的配制：取600 ug/ml Vc标准应用液再用试剂一应用液100倍稀释备用，现用现配。

注意：维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10 min内进行检测。

五、实验步骤

1.取实验小鼠，断颈处死，摘除眼球，眼眶取血至1.5 ml EP管，取完血液，

然后静置半小时，然后3000 rpm, 离心15 min,然后取上清至新1.5 ml EP

管，3000 rpm, 离心15 min,取上清备用

2.上清液的制备：取步骤一中上清0.15 ml加试剂一应用液0.45 ml,漩涡混

匀，放置15 min分钟后离心，3500-4000转/分，离心10分钟，上层清亮

液体为上清液。

3.上清液中Vc的测定：

充分混匀，静置10分钟，波长536 nm,光径1cm,双蒸水调零，测定各管吸光光度值。

六、计算公式

七、实验结果

标品OD 样本OD 空白OD

0.201 0.186 0.036

Vc含量=（0186-0.036）/（0.201-0.036）*6*4=21.8 ug/ml