蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量

实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量

一、实验目的

掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法

二、实验原理

蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器，试剂和材料

1、仪器

（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个

（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；

（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；

（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。

（5）试管架，试管夹各2个；

2、试剂

（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；

（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。

3、材料

小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。

四、操作步骤

1、葡萄糖标准曲线的制作

取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；

管号 1 2 3 4 5 6 7

葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。

2、植物样品中可溶性糖的提取

将植物材料剪碎至2mm以下，准确称取1g，放入50ml三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10min，冷却过滤，过滤收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液5ml，置于另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀、测定。

3、样品中总糖的提取、水解和测定

准确称取植物鲜样1~2g(或干样0.5g)，加水3ml在研钵中磨成匀浆，转入三角瓶。用12ml水冲洗研钵2~3次，洗出液转入三角瓶中。再三角瓶中加入6mol/L HCL 10ml，摇匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用10% NaOH中和至pH中性。再用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液，用蒸馏水稀释1000倍的总糖水解液。

4、测定

吸取已释释的可溶性糖和总糖提取液各1ml（做平行样2份）于试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长为620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。

五、结果处理

查表所得含糖质量（%）稀释倍数

植物样品含糖量（%）=————————————— x100

样品质量（g）x106

注意事项：

（1）该显色反应非常灵敏，溶液切勿混入纸屑及尘埃。

（2）硫酸要用高纯度的。

（3）不同糖类与蒽酮的显色有异，稳定性也不同。加热比色时间应

严格掌握。

（4）实验使用的强酸注意不要洒在仪器及皮肤上。

六、思考题

1、用水提取糖类有哪些？

2、应用蒽酮法测得的糖包括哪些类型？

3、你知道还有什么方法可以测定糖类？

4、此法是否可用于测定淀粉含量，若能，请设计试验。