电转化大肠杆菌感受态细胞

电转化大肠杆菌感受态细胞

1．从-80︒C冰箱取出感受态细胞，置于冰上解冻。

2．将无菌的电击杯置于冰上预冷。

3．将解冻的感受态细胞按照100ul/管分装至预冷的1.5ml的离心管中，混匀，冰上放置。4．向装有感受态细胞的离心管中加入1-2 µl质粒或连接产物，并混匀，冰浴10min。5．打开电转仪，电压为2.0 kV，电击5ms [这些参数设置可以根据经验略作调整]。

6．将混合物转移至已预冷的电击杯中，轻轻敲击电击杯使混合物均匀进入电极杯的底部。

并用吸水纸吸干电击杯外壁的冰水。

7．将电击杯推入电转仪，按一下pulse键，听到蜂鸣声后，向电击杯中迅速加入2X 500μl 的SOC液体培养基，重悬细胞后，转移到1.5ml的离心管中。

8．37︒C，220rpm复苏1小时。

9．离心，涂板，置于37︒C，过夜培养，次日观察结果。