实验 菠菜色素的提取与分离
实验2-菠菜中色素的提取和分离
实验2■菠菜中色素的提取和分离实验2菠菜中色素的提取和分离扬州大学化学化工学院张磊091301223一.实验目的：1 •了解分离与提纯过程在科学研究和生产生活中的应用；2.掌握分离与提纯实验设计的一般思路和方法;3.掌握菠菜中色素提取的原理，步骤和影响因素；二•实验原理：1.叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂中，所以用石油醚、乙醇等能提取色素。
2.本实验选用的是吸附色谱，氧化铝作为吸附剂（极性），色素提取液为吸附液，色素提取液中各成分极性大小为：叶绿素 b （黄绿色）＞叶绿素a （蓝绿色）＞叶黄素（黄色）＞3■类胡萝卜素（橙色）。
3.柱层析法的分离原理是根据物质在氧化铝上的吸附力不同而使各组分分离。
一般情况下极性较大的物质易被吸附，极性较弱的物质不易被吸附，所以由上到下为：叶绿素 b （黄绿色），叶绿素a （蓝绿色），叶黄素（黄色），伕类胡萝卜素（橙色）。
三、实验材料：仪器：研钵、分液漏斗、层析柱（20 x 10 cm），表面皿，普通漏斗，量筒试剂：石油醚、乙醇（95%）、菠菜叶、丙酮（化学纯）、中性氧化铝，无水硫酸钠四、实验步骤与内容【探究：菠菜（或青菜）的I I处理方式】（1）小组讨论处理菠菜的各种方式，然后按照“手撕”，“划几刀，再手撕”，“剪成丁状”，“剪碎后稍加研磨”，“研磨成浆”共五种方式分为五组进行实验，最后确定控制菠菜叶取25克，加入有机溶剂15mL （9mL石油醚+6mL乙醚），浸泡时间取25min为统一条件；（2）开始分组实验，各自处理好各组的菠菜，放置在烧杯中，加入15mL有机溶剂并盖上表面皿浸泡25min。
（3）在浸泡的时间内开始装柱，首先在滴管下口装上橡皮管并夹上弹簧夹（夹紧），在管的出口处放入一小撮棉花，在棉花上放置已剪好的和滴管内径一般大小的圆形滤纸，然后用普通漏斗往里面装入中性氧化铝，最后在氧化铝上再加上和滴管内径一般大小的圆形滤纸，夹在铁架台上备用。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告
一、实验目的：
本次实验的主要目的是学习和掌握菠菜色素的提取和分离技术，了解菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
二、实验方法：
1、制备样品：将新鲜的菠菜叶片洗净晾干，切碎成小块备用；
2、提取菠菜色素：将切碎的菠菜叶片加入适量无水乙醇，研
磨成泥状物，过滤后取得浸提液；
3、进一步提取：将浸提液过滤并再次提取，过滤得到过滤液；
4、分离：将过滤液使用氯仿进行分离，水相和氯仿相层的色
素分离；
5、测定：将得到的色素溶于适量乙醇，测定菠菜色素的吸光度。
三、实验结果：
经过提取和分离，得到了深绿色的液体，与纯菠菜色素溶液比
较后发现两者颜色相似。
测定得到吸光度为0.54。
四、实验分析：
本次实验成功提取和分离了菠菜色素，并得到了较为准确的测定值。
在实验中，氯仿和无水乙醇是常用的有机溶剂，主要是因为在这些溶剂中菠菜色素的溶解度较高。
但是，在实验操作过程中需要注意保持实验环境的卫生和安全，氯仿是一种易挥发的有机物，需要注意防火和防烟。
五、实验结论：
通过本次实验，我们成功地提取和分离了菠菜色素，并且得到了较为准确的测定值。
同时，我们也了解了菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
本次实验的成功对于今后相关实验研究以及实际应用具有一定的指导意义。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言：菠菜是一种常见的绿叶蔬菜，富含多种营养物质，其中包括一种被称为菠菜色素的成分。
菠菜色素是一类天然的色素，具有良好的生物活性和抗氧化性质。
本实验旨在通过提取和分离的方法，研究菠菜色素的性质和应用。
实验材料和方法：材料：新鲜菠菜叶片、无水乙醇、丙酮、石油醚、二氯甲烷、硅胶G柱、色谱柱、色谱试纸等。
方法：1. 取适量新鲜菠菜叶片，洗净并切碎成细末状。
2. 将菠菜末置于研钵中，加入适量无水乙醇，浸泡30分钟，搅拌均匀。
3. 将菠菜浸提液过滤，收集滤液。
4. 取少量滤液，加入石油醚，振荡混合，使菠菜色素溶于石油醚中。
5. 将石油醚层收集，加入少量无水乙醇，使溶液变为淡绿色。
6. 将淡绿色溶液倒入色谱柱中，以无水乙醇为洗脱剂，收集洗脱液。
7. 将洗脱液浓缩，得到菠菜色素。
实验结果和讨论：通过以上实验步骤，我们成功地从菠菜中提取和分离出了菠菜色素。
在实验过程中，我们使用了无水乙醇作为提取剂，因为乙醇能够有效溶解菠菜中的色素成分。
同时，我们使用石油醚作为分离剂，因为石油醚能够与菠菜色素发生亲和作用，使其溶于石油醚中。
在分离过程中，我们使用了色谱柱和色谱试纸进行分离和检测。
色谱柱是一种常见的分离工具，通过其内部填充的固定相材料，能够将混合物中的成分按照其亲和性和分子大小进行分离。
我们选择了硅胶G柱作为固定相材料，因为硅胶G柱对菠菜色素具有较好的亲和性。
通过使用无水乙醇作为洗脱剂，我们成功地将菠菜色素从硅胶G柱中洗脱出来。
在实验中，我们观察到菠菜色素呈现淡绿色。
这是因为菠菜色素主要由叶绿素和类胡萝卜素等成分组成，这些成分赋予了菠菜独特的颜色。
叶绿素是一种绿色的色素，具有光合作用的功能。
类胡萝卜素则是一类黄、橙、红等颜色的色素，具有抗氧化和免疫调节等作用。
菠菜色素不仅在食品工业中有广泛应用，还在医药和化妆品等领域发挥着重要作用。
菠菜色素富含抗氧化物质，能够有效清除自由基，延缓衰老和预防疾病。
实验7菠菜色素的提取和色素分离
实验7菠菜色素的提取和色素分离 (6学时)一、实验目的了解薄层层析和柱层析的原理和操作 二、反应原理绿色植物如菠菜含有多种天然色素，其中胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a 和b 等以极性逐渐增加：CH 3CH 3CH 3OHCH 3CH 3CH 3HOCH 3CH 3CH 3CH 3-胡萝卜素叶黄素叶绿素a (R=CH 3)叶绿素b (R= )OC HCH 3CH 3CH 3HCH 3CH 3CH 3HCH 3CH 3CH 3CH 3N NNN CHCH 2CH 3CH 2C OOCH 3COOCH 3CH 2CH 2CH 3RO CH 3CH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg在薄层层析时，上述化合物的展开速度不同；在柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。
三、主要试剂与仪器 甲醇、石油醚(60~90ºC)、无水硫酸钠、丙酮、乙酸乙酯、滴管剪刀、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、量筒、三角瓶、圆底烧瓶、常压蒸馏装置、硅胶薄层层析板、薄层层析缸、150~160目中性氧化铝四、实验步骤1、菠菜色素的提取用分液漏斗洗涤时，旋荡要轻，以防乳化。
2、薄层层析点样于距离下边缘约1cm 处； 点样要轻，以免刺破硅胶层； 薄层板在展开剂展开后，测量并记录溶剂前沿和每个斑点中心与原点中心的距离。
按公式f R溶质的最高浓度中心至原点中心的距离溶剂前沿至原点中心的距离计算胡萝卜素、叶黄素、叶绿素的R f 值 3、柱层析可用滴管代替滴液漏斗滴加洗脱剂4、最好结果的薄层板、柱层析的所有单独接收组分上交。
菠菜中色素的提取分离和鉴定(有机化学实验)
菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法二、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）和叶黄素（黄色）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C 55 H 72O 5N 4Mg) 和叶绿素 b(C 55H 7O 6N 4Mg)，结构见图1。
二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素（ C 40H 56 ）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。
目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（ C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与β - 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a 和叶绿素b 的结构（叶绿素a ：R=CH 3， 叶绿素b ：R=CHO ）H 3C CH 3RCH 3H 3CH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素和叶黄素的结构（β-胡萝卜素:R =H ， 叶黄素: R = OH ） 菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇实验报告一：菠菜中提取叶绿素的方法比较1.引言叶绿素是一种重要的植物色素，它在光合作用中承担着捕获光能和转化化学能的重要角色。
菠菜是叶绿素含量较高的植物之一，因此本实验旨在比较不同方法提取菠菜中的叶绿素，探索最有效的提取方式。
2.材料与方法2.1 材料：- 新鲜菠菜叶片- 无水乙醚- 丙酮- 高速离心机- 比色皿2.2 方法：- 方法一：无水乙醚提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的无水乙醚，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于乙醚中，然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法二：丙酮提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的丙酮，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于丙酮中，然后离心10分钟收集上层液体。
- 方法三：乙醇提取法将适量的菠菜叶片放入离心管中，加入适量的乙醇，用摇床震动片刻，使叶绿素溶解于乙醇中，然后离心10分钟收集上层液体。
3.结果在三种提取方法中，通过观察可以发现，方法一和方法二提取的叶绿素溶液呈现绿色，而方法三提取的叶绿素溶液呈现黄绿色。
利用分光光度计测定三个试管中叶绿素溶液的吸光度，发现方法一和方法二提取的叶绿素吸光度较高，而方法三的吸光度较低。
4.讨论方法一使用无水乙醚作为提取溶剂，乙醚能有效溶解叶绿素，并且在离心过程中上层液体的分离效果较好。
方法二使用丙酮作为提取溶剂，丙酮也能有效溶解叶绿素，并且丙酮相对于乙醚来说更易于购买。
方法三使用乙醇作为提取溶剂，乙醇对叶绿素的溶解能力较差，导致提取的叶绿素溶液吸光度较低。
5.结论通过对菠菜中提取叶绿素的实验比较，我们发现使用无水乙醚和丙酮作为提取溶剂的方法能够较好地提取菠菜中的叶绿素，并且吸光度较高。
因此，在菠菜中提取叶绿素的实验中，建议使用无水乙醚或丙酮作为提取溶剂。
实验报告二：叶绿素在光合作用中的作用研究1.引言叶绿素是植物体内最重要的色素之一，它在光合作用中起着关键作用。
本实验旨在研究叶绿素在光合作用中的功能和重要性。
从菠菜中提取叶绿素实验报告6篇
从菠菜中提取叶绿素实验报告6篇从菠菜中提取叶绿素实验报告 (1)1.1 仪器与试剂仪器：研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱(20×10 cm)、UV-240紫外分光光度计试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、乙酸乙酯(化学纯)、无水硫酸钠、硅胶G、中性氧化铝(150目～160目)1.2 提取与分离1.2.1 浸泡法提取色素在研钵中放入20 g新鲜的菠菜叶，加入20 mL3：2(体积比)石油醚—乙醇混合液，适当研磨(不要研成糊状，否则会给分离造成困难)，用倾析法将提取液转移到分液漏斗中，每次用10ml水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇。
洗涤时要轻轻旋荡，以防乳化。
弃去水乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥，干燥后滤入小圆底烧瓶，在水浴上蒸发浓缩至大约l m L。
1.2.2 薄层层析取四块显微载玻片，硅胶G经0.5％羧甲基纤维素钠调制后制板，在室温下晾干后在110°C活化1h。
选取效果最好的一块进行点样。
展开剂：（1）石油醚—丙酮=8:2（体积比）（2）石油醚—乙酸乙酯=6:4（体积比）取活化后的层析板，点样，放入预先选定展开剂的广口瓶。
瓶的内壁贴一张高5cm，绕周长4/5的滤纸，下部浸入展开剂中，盖上瓶盖。
待展开剂上升至规定高度时，取出层析板，晾干，做出标记。
分别用两种展开剂展开，比较不同展开剂的展开效果。
观察斑点在板上的位置并排列出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素的Rf值的大小。
注意更换展开剂时，需干燥层析瓶，不允许前一种展开剂带入后一系统。
1.2.3 柱层析取少量脱脂棉在小烧杯中用石油醚浸润后，挤压除去气泡，放在层析柱底部。
在层析柱中加15cm石油醚。
加入中性氧化铝8克，打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，氧化铝在柱子中堆积。
装完后，打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面剩下1—2mm高为止（不能使氧化铝表面露出液面）。
将浓缩液用滴管加到柱顶部，打开下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm,关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，几次反复，使色素全部进入柱体。
菠菜色素的提取和分离
菠菜色素的提取和分离精化2班201024102237陈翠婷摘要：用抽滤和浸泡法从菠菜叶中提取了色素,使用薄层色谱、柱色谱对叶绿素、胡萝卜素和叶黄素进行了分离.薄层层析时使用了石油醚-乙酸乙酯=3:2展开剂，洗脱剂的选择是菠菜色素分离的优化条件。
关键词：菠菜色素、色素分离、胡萝卜素、薄层色谱、柱层色谱、叶绿素、叶黄素、洗脱剂、石油醚、抽滤菠菜含有大量的植物粗纤维、维生素C、钙铁等，还含有大量的胡萝卜素、叶绿素、叶黄素等营养色素。
叶绿素是植物进行光合作用所必须的催化剂，也是使用的绿色色素，可用于糕点、饮料水中，添加于胶姆糖中还可以消除口臭。
胡萝卜素的三种异构中β-异构体具有维生素A的生理活性，可代替维生素A使用，也可以作为食品工业中的色素使用，最新研究报道，β-胡萝卜素还有防癌功能。
叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。
由此可见，叶绿素等天然色素有广泛的用途，对于色素的提取与分类就显得很重要了。
一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2、了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理，掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术。
3、初步掌握铺板和湿法装柱及计标比移值R f。
二、实验原理1、绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。
叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 -胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
菠菜色素的提取与分离(实验方案)
菠菜色素的提取与分离(实验方案)
菠菜色素是一种天然的色素，在食品、药品和化妆品等领域得到广泛应用。
本实验旨在通过提取和分离菠菜中的色素，探索其化学结构和性质。
实验步骤：
1.新鲜的菠菜叶子切碎后加入乙醇中，浸泡过夜。
2.过滤得到菠菜浸液，加5%的NaCl，搅拌均匀，沉淀后过滤，收集菠菜蛋白，保留上清液。
3.将上清液进行浓缩，得到浓缩液。
4.将浓缩液加入正己烷中，振荡后离心，得到两层液体，上层为绿色菠菜色素，下层为无色的正己烷。
5.倒出上层菠菜色素液，用NaOH溶液调整其PH值，得到纯净的菠菜色素。
实验原理：
菠菜色素是一种叶绿素和类胡萝卜素的混合物，其中叶绿素是绿色的，未成熟的植物中含量较高，而类胡萝卜素是黄色的，成熟的植物中含量较高。
为了提取出纯净的菠菜色素，需要将其与其他杂质分离开来。
在实验中，我们选择了乙醇作为提取菠菜中色素的溶剂，乙醇对叶绿素和类胡萝卜素有较好的溶解作用。
随着浸泡时间的延长，色素的溶解度不断增加。
在分离紫胡萝卜素和叶绿素时，利用了两种色素溶解度不同的特性。
正己烷是一种非极性溶剂，对叶绿素有良好的溶解度，而对紫胡萝卜素的溶解度较差。
因此，在将浓缩菠菜色素液加入正己烷中时，不同色素会分层，方便分离纯净的菠菜色素。
实验注意事项：
1.实验中使用的器材和试剂要洁净干燥，避免杂质污染。
2.提取菠菜中的色素时，要控制乙醇的浓度和浸泡时间，避免色素的损失。
3.在调整菠菜色素液的PH值时，要逐渐加入NaOH溶液，避免PH值过高导致色素分解。
4.实验过程中如有任何异常情况，应及时停止实验并处理。
实验十二-菠菜色素的提取和分析
实验十二- 菠菜色素的提取和分析菠菜色素的提取和分离实验目的1、通过绿色植物色素的提取，学习天然物质的提取方法；2、通过薄层色谱分析，掌握有机物色谱分析的原理和方法。
二、 实验原理1 菠菜色素的提取绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿） 、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等 多种天然色素。
叶绿素 存在两种结构相似的形式即叶绿素 a （C 55H 72O 5N 4Mg ）和叶绿素 b（C 55H 70O 6N 4Mg ），其差别仅是叶绿素 a 中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶 绿素 b 。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物， 是植物进行光合作用所必需的 催化剂。
植物中叶绿素 a 的含量通常是 b 的 3 倍。
尽管叶绿素分子中含有一些 极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（ C 40H 56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 - 胡 萝卜素、β -胡萝卜素和γ - 胡萝卜素，其中β -胡萝卜素含量最多，也最重要。
在生物体内， β- 胡萝卜素受酶催化氧化形成维生素 A 。
目前β -胡萝卜素已可进 行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（ C 40H 56O 2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝 卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
叶绿素 a （R=CH ）CH 3 CH 3 CH 3OOCH 3 CH 2CH RN NMgNN H 3CCH 2CH 3 CH 3 CO 2CH 3 2 CH 3H 3C R维生素 A2 薄层色谱原理常用 TLC 表示，又称薄层层析，属于固液吸附色谱。
样品在薄层板上的吸 附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。
由于各种化合物的吸附能力 各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。
3 薄层色谱的用途：1）化合物的定性检验。
菠菜色素的提取与分离(实验方案)
菠菜色素的提取与分离组员：梁良、巫殷宣指导老师：李红缨实验目的：1、学会用有机溶剂提取菠菜中的色素并进行分离；了解从植物中提取有机化合物的一般方法。
2、学习柱色谱法、薄层色谱法的分离色素的原理和方法。
实验原理：1、叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，所以用石油醚、乙醇等能提取色素。
2、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素易溶于石油醚，叶黄素易溶于乙醇，石油醚和乙醇能混溶，因此可以选用石油醚--乙醇混合溶剂来提取菠菜中的色素。
然后用少量水洗去乙醇等易溶于水的杂质。
就可以得到色素的石油醚溶液。
3、由于各组分的溶解度不同，可用纸色谱法分离。
物理常数：色素名称颜色质量/mg 百分比/%胡萝卜素橙黄色11.4 6脱镁叶绿素灰色22.8 12叶绿素a 兰绿色58.9 31叶绿素b 绿色24.7 13叶黄素黄色17.1 9仪器和试剂：石油醚、乙醇、丙酮、无水硫酸钠、脱脂棉。
研钵、锥形瓶、漏斗、铁架台、分液漏斗。
实验步骤：一、色素的提取1、研磨：取10g菠菜切成小块，用研钵捣烂，放入锥形瓶中。
2、浸取：向锥形瓶中加入10ml石油醚--乙醇混合液（1:1），塞上橡胶塞，震荡。
3、过滤：将小团棉花放在漏斗顶部，过滤浸取液。
4、洗涤：将滤液转移到分液漏斗，用10ml水洗两次，除去杂质，静置分层，弃去下层（乙醇-水）层，将上层（石油醚层）转移至干燥的小锥形瓶中。
二、色素的分离1、裁纸：取一张滤纸剪成1.5*20cm的长方形。
2、点样：在滤纸的一端2cm处，用铅笔画一条直线为起点线，用毛细管吸取菠菜的提取液在起点线中部点样，使斑点尽可能小。
3、展开：溶剂完全挥发后，将滤纸点样一端直立于展开剂（体积比为8:1的石油醚-丙酮混合试剂）的大试管中（展开剂应低于色斑），塞紧橡胶塞，静置观察展开过程。
4、晾干：当展开剂升至距滤纸上约1cm时，取出滤纸，晾干，观察各个色斑的位置。
从上到下，依次是胡萝卜素（橙色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿色）。
菠菜中色素的提取分离和鉴定(有机化学实验)
菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法二、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）和叶黄素（黄色）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C 55 H 72O 5N 4Mg) 和叶绿素 b(C 55H 7O 6N 4Mg)，结构见图1。
二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素（ C 40H 56 ）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。
目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（ C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与β - 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a 和叶绿素b 的结构（叶绿素a ：R=CH 3， 叶绿素b ：R=CHO ）H 3C CH 3RCH 3H 3CRH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素和叶黄素的结构（β-胡萝卜素:R =H ， 叶黄素: R = OH ） 菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言：菠菜是一种常见的食材，它不仅味道鲜美，而且富含多种营养物质。
其中，菠菜叶中的色素成分具有重要的生物学和营养学意义。
本实验旨在通过提取和分离菠菜叶中的色素，探究其组成和结构。
一、实验材料与方法：1. 实验材料：菠菜叶、无水乙醇、正己烷、醋酸乙酯、石油醚、氯仿、硅胶薄层色谱板。
2. 实验步骤：（1）菠菜叶的提取：将菠菜叶洗净并切碎，加入适量的无水乙醇中，浸泡30分钟，使色素充分溶解。
然后用滤纸过滤，收集菠菜叶提取液。
（2）色素的分离：将菠菜叶提取液与正己烷进行液液分配，重复3次，使色素分配到正己烷层中。
然后将正己烷层收集，蒸发溶剂，得到色素提取物。
（3）色素的纯化：将色素提取物溶解于醋酸乙酯中，进行液液分配，重复3次，使色素分配到醋酸乙酯层中。
然后将醋酸乙酯层收集，蒸发溶剂，得到纯化后的色素。
（4）色素的分离：将纯化后的色素溶解于石油醚中，进行液液分配，重复3次，使色素分配到石油醚层中。
然后将石油醚层收集，蒸发溶剂，得到分离后的色素。
（5）色素的鉴定：将分离后的色素溶解于氯仿中，进行薄层色谱分析。
将硅胶薄层色谱板浸泡于氯仿中，然后将色素溶液滴于色谱板上，放入色谱槽中，进行上升式开发。
开发完毕后，用紫外灯照射，观察色谱板上的色素带。
二、实验结果与分析：经过提取、分离和纯化，成功地从菠菜叶中提取到了色素。
通过薄层色谱分析，我们观察到了色谱板上的色素带，根据色素带的位置和颜色，可以初步判断菠菜叶中含有叶绿素、类胡萝卜素等多种色素成分。
三、实验总结与思考：通过本次实验，我们成功地提取和分离了菠菜叶中的色素。
然而，我们只能初步判断色素成分的种类，对于具体的结构和含量还需要进一步的分析和研究。
此外，本实验采用的是传统的提取和分离方法，还可以尝试其他更先进的技术，如高效液相色谱等，以提高分离效果和准确性。
结语：菠菜色素的提取和分离实验为我们了解菠菜叶中的色素成分提供了基础。
菠菜色素的提取与分离
菠菜色素的提取与分离
实验材料：
1.菠菜叶：新鲜的菠菜叶作为原料。
2.无水乙醇：用于菠菜色素的提取。
3.正己烷：用于菠菜色素的分离。
实验步骤：
1.准备新鲜的菠菜叶，将其洗净并切碎成小段。
2.将切碎的菠菜叶放入一个绞肉机或搅拌机中，加入适量的无水乙醇。
搅拌均匀，使菠菜叶完全浸泡在乙醇中。
3.将浸泡好的菠菜浆放入玻璃烧杯中，放置在室温下浸泡一段时间
（通常为2-3小时），以充分提取菠菜色素。
4.将浸泡好的菠菜浆过滤，将提取得到的菠菜色素溶液收集起来，并
将其保存在一个干净的容器中。
5.取一定量的菠菜色素溶液，并用正己烷进行萃取。
将菠菜色素溶液
与正己烷按照1:1的比例混合，充分摇匀。
6.静置一段时间后，菠菜色素会分为两层，上层是正己烷层，下层是
菠菜色素层。
分离这两层，可以使用分液漏斗或者一些特殊的仪器设备来
完成。
7.分离得到的菠菜色素层即为所需的产品。
可以将其保存在一个干净
的容器中，或者对菠菜色素进行进一步的实验研究。
实验注意事项：
1.在实验过程中，应注意安全操作，避免乙醇和正己烷的接触和吸入。
2.密闭容器中的溶剂切勿满溢，以免发生外溢和溅出。
3.实验前应检查实验器材的完整性和密封性，确保实验过程的准确性
和安全性。
4.菠菜叶应该选择新鲜、无病虫害的叶片，并保持充分的洗净。
5.实验操作时要注意从装置的出口处向连接装置的玻璃瓶中逸出瓶道
的紫外光辐射。
6.实验后要及时清洗实验仪器和容器，避免菠菜色素的残留和污染。
实验 菠菜中色素的提取与分离
实验４菠菜中色素的提取与分离【实验目的】１．学会用有机溶剂提取菠菜中的色素并进行分离，了解从植物中提取有机化合物的一般方法；２．学会根据物质的性质选择合适的溶剂，知道选用混合溶剂是提取物质的有效途径；３．了解利用纸色谱法分离物质的原理和操作。
【实验原理】菠菜中含有多种色素，如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）等。
１．菠菜中色素的提取叶绿素a、叶绿素b和胡萝卜素易溶于石油醚，叶黄素易溶于乙醇，石油醚和乙醇可以混溶。
因此，可以选择石油醚—乙醇混合溶剂来提取菠菜中的色素，然后用水洗去乙醇和少量易溶于水的杂质，这样就可得到色素的石油醚溶液。
２．色素的分离提取菠菜色素得到的石油醚溶液可用纸色谱法分离：将少量含有几种物质的溶液涂在滤纸条的一端，并在这一端用适当的溶剂（称为展开剂）润湿，在滤纸的毛细作用下，展开剂携带待分离的物质沿滤纸纤维向上移动。
由于不同的组分的移动速度不同，一段时间后，不同的组分移动的距离不同，从而达到将这些组分分离开来的目的，如下图所示。
这种分离方法称为纸色谱法，又叫纸上层析。
【实验器具】试剂：石油醚、乙醇，丙酮、无水硫酸钠、脱脂棉。
仪器：研钵、锥形瓶、漏斗、铁架台（带铁圈）、分液漏斗、大试管。
【实验过程】一、菠菜中色素的提取１．研磨：取１0g菠菜切成小块，用研钵捣烂，装入锥形瓶中。
２．浸取：向锥形瓶中加入１0mL石油醚—乙醇混合溶剂（体积比为１：１），塞上橡胶塞，振荡。
３．过滤：将小团棉花放在漏斗颈部，过滤浸取液（如图１）。
４．洗涤：将滤液移人分液漏斗，用１0mL水洗涤两次，以除去乙醇及浸取液中的少量水溶性物质。
注意不要剧烈振荡，以防止乳化；静置分层（如图２），弃去下层（水—乙醇层），将上层（石油醚层）溶液移至干燥的小锥形瓶中。
注意：洗涤后，下层水层从下口放出，上层有机层从上口倒出。
５．干燥：加入少量无水硫酸钠，干燥，备用。
图１图２二、色素的分离１．裁纸：取一张滤纸裁成１．５cm×２0cm的长方形，注意使滤纸纤维呈竖直走向。
有机实验-菠菜中色素的提取和分析
有机实验-菠菜中色素的提取和分析
菠菜中色素的提取和分析是有机化学实验中的一个经典实验。
本实验主要是通过对菠
菜中的色素进行提取和分析，来了解天然色素的结构和性质。
实验步骤：
1.菠菜的准备
将新鲜的菠菜洗净后，去除根和水分，然后用手将菠菜叶子捏碎成小片状备用。
2.色素的提取
将捏碎的菠菜叶子放入料理机中，加入适量的酒精和石油醚，再开启料理机进行打浆，在打浆过程中注意随时观察，避免料理机出现卡顿的情况。
将打好的菠菜混合物过滤，将过滤得到的过滤液收集到干净的试管中，然后用滤纸进
行一次二次过滤，得到浅绿色的菠菜色素提取物。
3.色素的分离
4.色素的鉴定
将得到的菠菜色素溶液分别加入稀盐酸和稀碱液中，观察颜色变化，记录下来。
然后
将菠菜色素溶液加入小麦酰胺溶液中，搅拌均匀，观察颜色变化，记录下来。
实验原理：
本实验主要是利用了酒精、石油醚等有机溶剂的沸点差异，对菠菜中的色素进行了提取。
然后利用硅胶G的极性和吸附作用对菠菜色素进行了分离。
最后，通过加入稀盐酸、
稀碱液和小麦酰胺溶液来鉴定提取出来的色素种类和结构。
实验中所用到的酸和碱，可以将菠菜色素分解成不同的成分。
这些成分所表现出来的
颜色不同，可以通过色谱分析来确定其化学结构。
总结：
通过本实验，我们可以了解到菠菜中含有的天然色素，同时也可以学习到色素的分离
和分析技术。
此外，本实验还可以作为有机化学实验中的基础实验，为我们今后的学习和
研究提供了良好的基础。
菠菜色素的提取与分离实验报告
菠菜色素的提取与分离实验报告
实验目的：探究菠菜中色素的提取与分离方法，了解菠菜色素的特性和结构。
实验原理：
菠菜中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素等。
在本实验中，将采用乙醇提取法和硅胶柱层析法分别提取和分离菠菜中的色素。
实验步骤：
1. 将菠菜叶片切碎，加入适量的乙醇，用搅拌器搅拌均匀。
然后将混合液过滤，得到澄清的菠菜提取液。
2. 用无水硅胶将提取液转化为干燥的片状固体。
首先，在玻璃棒上将菠菜提取液和未熔化的硅胶混合，然后将其静置几分钟使其结块。
3. 将混合物放入适当大小的玻璃管中，并加上一层纯水使其达到玻璃管的顶端。
将其放在烘箱中干燥，直到片状固体完全干燥。
4. 将得到的片状固体碾碎成细粉末，然后使用硅胶柱层析法进行分离。
将硅胶填充到柱中，加入适量的乙醇，然后将菠菜粉末悬浮液倒入柱中。
根据色素的亲水性差异，使用适当的溶剂体系进行洗脱分离。
5. 收集分离得到的色素溶液，然后进行质量浓度测定和色谱分析。
实验结果：
通过乙醇提取法和硅胶柱层析法，成功得到了菠菜叶片中的色
素溶液。
通过质量浓度测定和色谱分析，确定了菠菜叶片中的主要色素成分和含量。
实验结论：
菠菜叶片中含有多种色素，其中叶绿素是主要组分。
通过乙醇提取法和硅胶柱层析法，可以有效地提取和分离菠菜叶片中的色素。
实验结果可为进一步研究菠菜色素的结构和功能提供基础。
菠菜色素的提取及薄层色谱和柱色谱分离
菠菜色素的提取及薄层色谱和柱色谱分离一、实验目的1.通过对菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2.了解薄层色谱和柱色谱分离的基本原理，掌握柱色谱和薄层色谱分离的操作；3.通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理1.菠菜叶中的叶绿体含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类天然色素。
这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。
2.柱色谱法又称为柱层析法，固定相装于柱内，流动相为液体，样品沿竖直方向由上而下移动而达到分离的色谱法。
本法主要用于分离，有时也起到浓缩富集作用。
柱色谱法分为吸附柱层析法和分配柱层析法，本实验仅介绍吸附柱层析法。
它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。
3.薄层色谱法（TLC），是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。
待点样、展开后，根据比移值（R f）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（R f）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术。
三、仪器与试剂1.仪器: 布氏漏斗、抽滤瓶、研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱( 20×3cm )、分液漏斗、普通漏斗、玻璃棒、锥形瓶、胶头滴管、烧杯（250ml和50ml）、食品保鲜膜、橡皮筋2.试剂和原材料: 石油醚（60℃~90℃）、甲醇( AR )、无水乙醇( AR )、乙醇( AR ) 、乙酸乙酯(AR) 、丙酮（化学纯）、苯( AR )、无水硫酸钠( AR )、硅胶G60型（青岛海洋化工厂，薄层层析用）、中性氧化铝（150目~160目）、菠菜叶、脱脂棉。
四、实验步骤1.硅胶板的制备：硅胶液配制→铺板→干燥→活化（1）硅胶液配制：称取20g硅胶G60型在研钵中，加入约50ml 4%CMC溶液，用研棒不断搅拌，直至感到液体变得较粘稠状，且用研棒蘸取硅胶液可见粘丝状即可；（2）铺板：用药勺取适量硅胶液置于玻璃片上，并用药勺均匀地摊开，然后将该玻璃片放在桌面上，做上下地颠动几次直至硅胶液均匀铺满即可；（3）干燥：自然晾干1小时左右；（4）活化：放在恒温干燥箱里于105-110℃干燥2~3h，然后冷却室温，取出存放在干燥器保存，待用。
菠菜色素的提取和分离
菠菜色素的提取和分离【摘要】：本实验用浸泡和抽滤法对菠菜色素进行了提取，介绍了薄层层析和柱层析的原理及通过薄层层析鉴定不同色素和通过柱层析进行叶绿素、胡萝卜素、叶黄素的分离。
【关键词】：菠菜色素；薄层层析；柱层析；石油醚；乙醇前言：菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素和叶黄素等多种天然色素。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等，添加于胶姆糖中海可消除口臭。
胡萝卜素的三种异构体中β-异构体具有维生素A的生理活性，可代替维生素A使用，也可作为食品工业中的色素使用，最新研究报道，β-胡萝卜素还有防癌功能。
也黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。
由此可见，叶绿素等天然色素有着十分重要的作用，而绿色植物中色素的分离和提取也显得非常重要。
一、实验目的1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2、了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理，掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术；3、学习柱色谱和薄层色谱分离操作，掌握菠菜色素的提取和分离操作技术及化合物R f值的测定方法，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理1、绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。
叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 -胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
在薄层层析时，上述化合物的展开速度不同；在柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。
实验菠菜中色素的提取和分离
实验2菠菜中色素的提取和分离扬州大学化学化工学院张磊一．实验目的：1．了解分离与提纯过程在科学研究和生产生活中的应用；2．掌握分离与提纯实验设计的一般思路和方法；3. 掌握菠菜中色素提取的原理，步骤和影响因素；二．实验原理：1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂中，所以用石油醚、乙醇等能提取色素。
2．本实验选用的是吸附色谱，氧化铝作为吸附剂（极性），色素提取液为吸附液，色素提取液中各成分极性大小为：叶绿素b（黄绿色）>叶绿素a（蓝绿色）>叶黄素（黄色）> β-类胡萝卜素（橙色）。
3. 柱层析法的分离原理是根据物质在氧化铝上的吸附力不同而使各组分分离。
一般情况下极性较大的物质易被吸附，极性较弱的物质不易被吸附，所以由上到下为：叶绿素b（黄绿色），叶绿素a（蓝绿色），叶黄素（黄色），β-类胡萝卜素（橙色）。
三、实验材料：仪器：研钵、分液漏斗、层析柱(20×10 cm)，表面皿，普通漏斗，量筒试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、中性氧化铝，无水硫酸钠四、实验步骤与内容【探究：菠菜（或青菜）的处理方式】（1）小组讨论处理菠菜的各种方式，然后按照“手撕”，“划几刀，再手撕”，“剪成丁状”，“剪碎后稍加研磨”，“研磨成浆”共五种方式分为五组进行实验，最后确定控制菠菜叶取25克，加入有机溶剂15mL（9mL石油醚+6mL乙醚），浸泡时间取25min为统一条件；（2）开始分组实验，各自处理好各组的菠菜，放置在烧杯中，加入15mL有机溶剂并盖上表面皿浸泡25min。
（3）在浸泡的时间内开始装柱，首先在滴管下口装上橡皮管并夹上弹簧夹（夹紧），在管的出口处放入一小撮棉花，在棉花上放置已剪好的和滴管内径一般大小的圆形滤纸，然后用普通漏斗往里面装入中性氧化铝，最后在氧化铝上再加上和滴管内径一般大小的圆形滤纸，夹在铁架台上备用。
（4）25min后，把浸取液用纱布过滤，滤液转移至分液漏斗中，加等体积的水洗一次，弃去下层的水-乙醇层。
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实验菠菜色素的提取与分离
实验概要
通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理，掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术。
通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
实验原理
层析法是一种物理分离方法。
柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。
本实验仅介绍吸附柱层析法。
吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。
它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。
吸附柱层析法通常是在玻璃层析柱中装入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等）。
当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物吸附能力不同，从而随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带。
在洗脱过程中，柱中连续不断地发生吸附和溶解的交替现象。
被吸附的组分被溶解吸出来，随着溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒，把组分从溶液中吸附出来，而继续流下的新溶剂又使组分溶解而向下移动，这样经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，再继续加溶剂直至各组分依次全部由柱中洗出为止，分别收集各组分。
绿色植物如菠菜叶中的叶绿体含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类天然色素。
这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素
b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需
的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3 倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即a-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。
在生物体内，β-胡萝卜素受酶催化氧化形成维生素A。
目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇，而在石油醚中溶解度较小。
石油醚是一种脂溶性很强的有机溶剂。
叶绿体中的四种色素在石油醚中的溶解度是不同的：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。
溶解度最高的是胡萝卜素，它随石油醚在滤纸上扩散得最快，叶黄素和叶绿素a的溶解度次之；叶绿素b的溶解度最低，扩散得最慢。
这样，四种色素就在扩散过程中分离开来。
同样，提取液可用色层分析的原理加以分离。
因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。
本实验是用活性氧化铝作吸附剂，分离菠菜中胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a 和叶绿素b。
主要试剂
1. 硅胶G
2. 中性氧化铝
3. 甲醇
4. 石油醚（60-90 ℃）
5. 丙酮
6. 乙酸乙酯
主要设备
1. 研钵
2. 布氏漏斗
3. 圆底烧瓶
4. 直形冷凝管
5. 色谱柱
6. 抽滤瓶
7. 烧杯
8. 铁架台
9. 脱脂棉
实验材料菠菜叶
1. 菠菜色素的提取
取10g 新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎后，与10mL 甲醇拌匀，在研钵中研磨5 分钟，用布氏漏斗抽滤，弃去滤液。
残渣放回研钵中，每次用10mL石油醚-甲醇（体积比3:2）混合液进行提取，每次需加以研磨且抽滤，共提取两次。
合并液每次用10mL水洗后除去去甲醇，洗涤时轻轻旋荡，以防止乳化，弃去水-甲醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥后进行蒸馏浓缩至体积约为1mL为止。
2. 薄层层析
将上述的浓缩液点在硅胶G 的预制板上，分别用石油醚-丙酮（8:2）和石油醚-乙酸乙酯（6:4）两种溶剂系统展开，经过显色后，进行观察并计算比移值。
3. 柱层析
在20*1.0cm的层析柱中，加入15cm高的石油醚，另取少量脱脂棉，先在小烧杯内用石油醚浸湿，挤压以去除气泡，然后放在层析柱底部，在它上面加一片直径比柱略小的圆形滤纸。
将15g层析用的中性氧化铝，从玻璃漏斗中缓缓加入，小心打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，流下的氧化铝在柱子中堆积。
必要时用装在玻璃棒上的橡胶塞轻轻在层析柱的周围敲击，使吸附剂装得平稳致密。
柱中溶剂面，由下端旋转控制，不使满溢，更不能让干。
装完后，上面再加一片圆形滤纸，打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面剩下1-2mm高为止。
将上述菠菜色素的浓缩液，用滴管小心地加到层析柱顶部。
加完后，打开下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞，用滴管滴加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，经几次反复，使色素全部进入柱体。
待色素全部进入柱体后，在柱顶小心加入约1.5cm高度的洗脱剂----石油醚-丙酮（9:1）、然后在层析柱上面装一滴液漏斗，内装15mL洗脱剂，打开上下两个活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析即开始进行，用锥形瓶收集，当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶收集，得橙色溶液，即胡萝卜素，约用洗脱剂50mL。
如时间和条件允许，可用体积比7：3的石油醚-丙酮做洗脱剂，分出第二个黄色带，即叶黄素；再用体积比3:1:1的丁醇-乙醇-水洗脱叶绿素a和叶绿素b。
1. 选材时要注意选取新鲜、颜色深的叶片。
2. 用丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨时要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，减少有机溶剂的挥发。
3. 在研磨时加入少许SiO2，目的是为了研磨得充分；加入少许CaCO3的目的是为了防止研磨时叶绿体中色素受到破坏；加入丙酮的目的是作为叶绿体中色素的溶剂。
4. 研磨过程中丙酮要少量多次加入，以免研磨时四处飞溅。
5. 过滤时不要使用滤纸而使用棉花，棉花塞在漏斗基部要松紧适当。
6. 叶绿素要避光保存。
叶黄素易溶于醇而在石油醚中溶解度较小，从嫩绿菠菜得到的提取液中，叶黄素含量很少，柱色谱中不易分出黄色带。
7. 萃取时不要剧烈振荡，以防止发生乳化现象。
8. 为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。
因此要保证整个装样过程中溶剂要高于三氧化二铝的表面。
9. 在吸附剂上端加入脱脂棉（或滤纸）是使加样品时不致把吸附剂冲起；在吸附柱下端加脱脂棉（或沙子）可以防止吸附剂细粒流出。
10. 层析柱填装紧密与否，对分离效果很有影响，若各部分松紧不匀，会影响渗透速度和显色的均匀。
11. 洗脱流速不宜过快，避免因此压紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降，色素洗脱很慢。
因此应控制洗脱流速，以每分钟60~80滴为宜。
12. 样品一定要足够浓缩，加样量不要过大或过小。
思考题：
1.试比较叶绿素、叶黄素和胡萝卜素三种色素的极性，为什么菠萝卜素在层析柱中移动最快？。