生物化学与分子生物学-第十一章第五节 多氯联苯类

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生物转化：形成甲磺基多氯联苯；形成羟基多氯联苯
• PCBs取代氯原子多于6个和对位氯取代的同系物难 羟基化，长半衰期；
• 羟基多氯联苯持留性，部分长期存在血液中，部分 与葡萄糖醛酸或硫酸盐结合，结合物水溶性增加， 随胆汁排泄；部分与血浆蛋白质结合或分布在脂肪 组织中。
• 单羟基多氯联苯或环氧化中间产物→多羟基多氯联 苯，动物实验，双羟基多氯联苯占整个多氯联苯代 谢产物80%以上。
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(二)血液中羟基多氯联苯的 气相色谱-质谱法测定
1. 原理
• 提取和净化：血样经正己烷-乙酸乙酯（1:1，v/v） 提取，H2SO4去脂类，KOH反萃取法
• 衍生化：以双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺-三甲 基氯硅烷（BSTFA-TMCS，99:1，v/v）为衍生剂 对羟基多氯联苯进行硅烷化衍生
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去蛋白剂的比例对7种PCBs回收率的影响
方法一:1ｍL5%Na2SO4、500μL乙腈和500μL1-丙醇/水(85∶15) 方法二:1ｍL5%Na2SO4、500μＬ乙腈和1ｍL1-丙醇/水(85∶15) 方法三:1ｍL5%Na2SO4、1ｍL乙腈和500μL1-丙醇/水(85∶15) 方法四:总1ｍ目L录5%Na2S下O页4、1ｍL乙退腈出和返1回ｍ一L1种-丙人醇血/水浆(中85多∶氯15联) 苯测定方法的建立
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监测指标: • 血液中多氯联苯原型 • 多氯联苯的羟基化代谢产物 • 生物机体内暴露生物标志物，用于评价多氯 联苯所产生毒理学效应
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三、样品收集及保存 • 采集静脉血1mL，肝素抗凝，混匀。若非肝素抗
凝，则静置后分离出血浆，置于冰箱内保存。 – 采血前避免污染：工人脱离生产场所，换下工
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4. 仪器参考条件 色谱条件：
作服，洗净手，臂，面部
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四、多氯联苯及羟基多氯联苯的测定
(一)血浆中多氯联苯的气相色谱法测定
1. 原理 5%Na2SO4，乙腈和1-丙醇-水（85:15，v/v）超声
提取人血浆中的PCBs，固相萃取后，86%二甲基聚 硅氧烷气相色谱柱分离，电子捕获器检测，标准曲 线法定量。
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一、理化特性
• 状态：随着氯化程度加大，从无色油状液体逐 渐转变成黑色膏状物
• 沸点：340~375℃ • 气味：特殊浓烈气味 • 溶解性：难溶于水，在水中溶解度随氯化程度
增加而减小；易溶于油脂。 • 稳定性：化学惰性，抗热性，不可燃性
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二、代谢和生物监测指标
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去脂类：加3mL浓H2SO4，振摇充分，2000r/min离 心10min，正己烷层移至分液漏斗中，向H2SO4 层加5mL正己烷，重复操作一次，合并正己烷 层于分液漏斗中。
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反萃取：加10mL0.5mol/LKOH溶液，振荡，静置 分层后，水层转移至分液漏斗中，向正己烷层
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2. 样品处理和测定
去蛋白：1mL血浆加入带聚四氟乙烯盖的玻璃瓶 中，依次加1mL5% Na2SO4，1mL乙腈和1mL1丙醇-水（85:15， v/v ），超声20min后， 3000r/min离心10min
• 去蛋白剂的比例选择很关键：干扰蛋白和被分 析物之间的相互作用，影响回收率
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活化SPE柱：1mL二氯甲烷2次，1mL甲醇、1mL超 纯水2次润洗C18柱
萃取：样品过SPE柱，超纯水冲洗，真空干燥20min， 再用1mL正己烷洗脱3次，1mL二氯甲烷-正己烷 混合液（20:80，v/v）洗脱，洗脱液经无水 Na2SO4 干燥，再经C18柱，收集洗脱液。
浓缩：40 ℃下氮气浓缩至100 µL
用途：绝缘介质、增塑剂、石蜡扩充剂，黏合剂等 广泛应用于电力工业，塑料加工业，化工和印刷等 吸收途径: 以气溶胶和蒸气态存在PCBs，经胃肠道， 呼吸系统和皮肤等吸收。 分布：持久稳固的环境毒物，各组织，以脂肪和肝 脏中含量最多。脂肪组织中PCBs含量反映环境持 久性污染物机体内暴露水平。
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第五节 多氯联苯
多氯联苯(polychlorinated biphenyls, PCBs)：又称氯
化联苯，以联苯为核心，连有1~10个氯原子组成，
其通式是C12H10-nCln。
分类（按氯取代的个数）：
PCB3，PCB4
PCB5，PCB6
Bibenzene 联苯
PCB7，PCB8 PCB9，PCB10
加10mL0.5mol/LKOH溶液，重复操作一次，合 并KOH层
正己烷萃取，干燥：KOH层加4mL5.0mol/LHCl，
调至酸性，加5mL正己烷，充分振荡，静置分
层，正己烷层过无水Na2SO4柱，再加入5mL正 己烷，重复干燥。
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浓缩：氮气浓吹干
衍生化：残留物中加100µL衍生试剂（BSTFATMCS），60℃下衍生40min，于氮气流下吹干， 加1mL正己烷溶解后上机分析。
净化：浓缩液加浓硫酸去除酯类，离心后，取正己 烷层进样分析。
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3. 仪器参考条件 – 氰丙基（14%）-二甲基聚硅氧烷（86%）色谱柱： (60m×0.32mm, 0.25m) 中等极性 – 进样口温度：280℃；检测器温度：300 ℃ – 柱温升温程序：50℃ ，以10℃ /min升至200 ℃ ； 以2℃ /min升至240 ℃； 以5 ℃ /min升至250 ℃， 保持4min ，以10 ℃ /min升至270 ℃，保持10min 。 – N2：2mL/min – 进样量：1µL
• 测定：SIM模式下进行GC-MS分析
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2. 样品处理和测定
提取：1±0.05g样品中，加15mL正己烷-乙酸乙酯 （1:1，v:v），漩涡30s，超声10min，4000r/min， 取上层有机相，重复萃取1次，合并有机相。提 取液旋转蒸发至干，用2mL正己烷洗涤鸡心瓶， 重复操作2次，洗涤液转入具塞玻璃离心管中